PLoS One: tumorba hipoxia Elősegíti Immune Tolerance indukálva szabályozó T-sejtek révén TGF-β1 a gyomor Cancer

absztrakt katalógusa

A regulációs T-sejt (Treg) által közvetített immunszuppresszió jelenti az egyik leglényegesebb tumor immun adócsalás mechanizmusokat és a fő akadálya a sikeres tumor immunterápia. Hipoxia, egy közös jellemzője, szolid tumorok, kapcsolatba hozták a potencírozott immunszuppresszió, csökkent a terápiás válasz, a malignus progresszió és a helyi invázió. Sajnos, a kapcsolat hipoxia és Treg közvetítette immuntolerancia gyomorrák is kevéssé ismertek. Vizsgálatunkban Treg és hipoxiaindukálható faktor-1α megállapították, hogy pozitívan korrelál egymással és száma nőtt a tumor progresszióját. Egy ezt követő in vitro
tanulmány kimutatta, hogy a felülúszókat származó gyomor rákos sejtek hipoxiás állapotban, képes indukálni a Foxp3 expressziója révén TGF-β1. Ezek az eredmények megerősítik a döntő szerepet a Treg mint terápiás célpont a gyomorrák terápia és amennyiben hasznos gondolatok a design immunterápia gyomorrák a jövőben. Katalógusa

Citation: Deng B, Zhu JM, Wang Y, Liu TT, Ding YB, Xiao WM, et al. (2013) tumorba hipoxia Elősegíti Immune Tolerance indukálva szabályozó T-sejtek révén TGF-β1 gyomorrákban. PLoS ONE 8 (5): e63777. doi: 10,1371 /journal.pone.0063777 katalógusa

Szerkesztő: Nupur Gangopadhyay, University of Pittsburgh, Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: január 10, 2013; Elfogadva: április 6, 2013; Megjelent: május 27, 2013 katalógusa

Copyright: © 2013 Deng és mtsai. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a tanulmány támogatta a Shanghai Tudományos és Technológiai Bizottság (10410709400, 10411950100), a Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (81000968, 81101540, 81101637 és 81172273) és a Nemzeti Klinikai Key Special tárgya Kínában. A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák jelenti az egyik leggyakoribb oka a rák összefüggő halálesetek világszerte [1]. Annak ellenére, hogy jelentős előrehaladást diagnosztikai és terápiás megközelítések az elmúlt évtizedekben, a gyomorrák prognózisa is lehangoló, mert a magas kiújulás és áttétek [2]. Immunociták már régóta ismerik, mint egy tényező, amely elősegíti a tumor növekedését a tumor mikrokörnyezetében [3], azonban az alapul szolgáló molekuláris alapját nagyrészt rejtélyes. Jobb megértése a mechanizmusok gyomorrák hasznos lesz, hogy dolgozzon ki hatékony terápiás rendszereket. Katalógusa

tumorba hypoxia van egy közös vonása a szolid tumorok, amelyek befolyásolhatják a progresszió tumor aktiválásával kulcsfontosságú biokémiai és celluláris utak [4 ], [5], [6]. A vizsgálatok azt is kimutatták, hogy a hipoxia kulcsfontosságú szerepet játszik a tumor által közvetített immun szuppresszió, ami hozzájárul, hogy fenntartsák a immunológiai menekülési tumorok [7], [8]. Nemrégiben egy megerősített kapcsolatot tumor hypoxia és az immunrendszer tolerancia felvételét szabályozó T-sejtek (Treg) jött létre petefészekrák [9]. Így egy hipotézis került bemutatásra, hogy a hipoxia rendelkezhetnek akadályokat terápiás immunválasz beavatkozások.

Fokozott Treg számoltak be a keringés és a tumorszövetekben betegek különféle rákok, beleértve a gyomor-, kolorektális rák, hepatocelluláris karcinóma és hasnyálmirigyrák [10]. A halmozódó adatok azt is jelezte, hogy a jelenléte a Treg sejtek eredményezett fokozott kockázatot a progresszió a rák [11], [12], [13]. Sőt, Treg-mediált immunszuppresszió kell tekinteni az egyik leglényegesebb immunrendszer kijátszása mechanizmusok tumor miáltal képesek leküzdeni a tumorellenes aktivitását CD8 citotoxikus sejt, dendritikus sejt és a természetes killer sejt [14]. Így felderítése mögöttes mechanizmusának Treg dúsítás gyomorrákban lesz érték célzás Treg a klinikai eredmény. Bár a mechanizmusok nem teljesen ismertek, néhány vizsgálatok azt mutatták, hogy a TGF-β1 részt benne. [15] katalógusa

Ebben a tanulmányban azt feltételeztük, hogy a gyomorrák szerezhet szelektív előnyt indukció Treg alatt hypoxia via TGF-β1 jelátviteli ezáltal elkerülve immunfelderítésére. Bemutatására hipotézis, elemeztük a kifejezés a hipoxia indukálható faktor-1α (HIF-1α), és Foxp3 gyomorrákban szövetekben, értékelte a hatását hipoxia TGF-β1 termelés a rákos sejtvonalak, és végül tisztázták a szerepe a hypoxia közvetítő Treg dúsítás a gyomorrák. katalógusa

anyagok és módszerek katalógusa

a betegeket és mintákat katalógusa

paraffinba ágyazott, formalin-fixált tumor metszeteket nyert 99 gyomorrákos betegeknél átesett sebészeti reszekció 2006 decembere és 2008 februárja a második klinikai orvosi iskola Yangzhou Egyetem. A nyomon követés adatokat összegeztük az október 2012. medián követési idő 53 hónap (4-70 hónap). A teljes túlélés (OS) a meghatározás szerint a műtét idején az utolsó nyomon követése, illetve a halál időpontját. Katalógusa

A perifériás vérmintákat gyűjtöttünk 20 gyomorrákos betegeknél előtt egy nappal és 10 nappal a műtét után a július 2012 2012. október szérumokat -80 ° C-on azonnal centrifugálás után későbbi használatra. Perifériás vér mononukleáris sejteket (PBMC-k) izoláltunk azonnal egy Ficoll sűrűség gradiens.

Egyik beteg kapott immunszuppresszív gyógyszerek vagy kemoterápia előtt sebészi eltávolítását. A tanulmány által jóváhagyott etikai bizottság (Etikai Bizottságának második klinikai Medical School Yangzhou Egyetem Yangzhou), és írásos hozzájárulást szereztünk minden vizsgálatban résztvevők. Katalógusa

immunhisztokémiai festéssel katalógusa

Serial szakaszok (5 um) formalinnal fixált, paraffinba ágyazott minták készültek. A metszeteket paraffint és rehydráltuk felszálló alkohol. Antigén-visszanyerés végeztük úgy, hogy a lemezeket EDTA pufferben a mikrohullámú 10 percig. Nyúl anti-humán HIF-1α primer antitesttel (bioworld, USA), az egér anti-humán TGF-β1 antitesttel (Santa Cruz, USA) és egér anti-humán Foxp3 antitest (ABCAM, USA) alkalmaztunk az elsődleges ellenanyag. Diaminobenzidinnel (DAB) használtunk szubsztrátum következő counterstaining hematoxilinnel egyszeri festéssel. Dupla festést végeztünk 2 különböző kromogé: DAB kromogén (barna színű), a HIF-1α és gyorsan piros kromogén (piros színű) a TGF-β1 vagy Foxp3. Katalógusa

immunreaktivitása pontozás katalógusa

HIF -1α nucleus festés értékelték a következő a jelentett módszer [16], festődés pontszám = intenzitása immunreaktivitást (IR) × aránya pozitívan festődött sejteket. IR intenzitása rétegződése négy kategóriában: 0, nincs IR; 1, gyenge IR; 2, közepesen erős IR; és 3, erős IR. A pozitív sejtek arányát sorolták öt csoportba sorolhatók: 0, nincs festés; 1, < 2% festődés; 2, 2-10% festés; 3, 11-29% festés; és a 4., > 30% festéssel.

Egy módosított pontozási rendszert használtuk Foxp3 ^{+ sejtek [17]. Tíz mezők megszámoljuk nagy teljesítmény Foxp3. Az abszolút limfociták száma per nagy látótér (HPF 400) volt szánva. Az átlagos száma festett pozitív sejt per nagy teljesítményű területeken számoltuk.}

Sejttenyészet és hypoxia Indukciós

Emberi gyomor rákos sejtvonalak, AGS és BGC823, kaptuk a Shanghai Institute Cell Biológia, a kínai Tudományos Akadémia (Sanghaj, Kína). Minden sejtet szaporítjuk 5% CO _{2 37 ° C-on DMEM-ben vagy RPMI 1640 (Hyclone Tianjin, Kína), kiegészítve 10% FBS-sel (Gibco, Ausztrália), 100 U /ml penicillint és 100 mg /ml sztreptomicint ( HyCIone Tianjin, Kína). A hipoxia kísérletekhez a sejteket oltottunk 6 mérőhelyes lemezeken, kétszer mossuk PBS-sel, amikor nőtt 60-80% -os összefolyásig, tartott szérummentes AMV tápközegben (Invitrogen, USA) egy éjszakán át inkubáljuk, majd helyezzük egy moduláris inkubátor kamra (Ruskinn Works, YK) 24 órán hipoxiás (1,0% O 2) vagy normoxiás (21% O 2) körülmények között, mindkettő 5% CO 2 37 ° C-on. A felülúszókat összegyűjtöttük, és -80 ° C-on későbbi koncentrációinak meghatározására TGF-β1 és a CO-kultúra vizsgálattal. Minden in vitro katalógusa érvényesítés kísérleteket legalább három példányban. Katalógusa}

Immunfluoreszcenciás katalógusa

A sejteket (1 × 10 ^{5 /lyuk) vittük fedőlemezeket egy 24 lyukú lemez egy 24 h kultúra. Ezt követően ezeket fixáltuk hideg metanollal 30 percig, hogy permeabilizált 0,5% Triton X-100 további 30 percig. A sejteket háromszor mostuk, blokkolta 10% kecske szérummal PBS-ben, 30 percig, és inkubáltuk anti-humán TGF-β1 antitesttel (Santa Cruz, USA) és az anti-humán HIF-1α antitest (Epitomics, USA) egy fagyasztóba 4 ° C-on egy éjszakán át. Az elsődleges antitestet keresztül Alexa488-konjugált második antitesttel (Invitrogen, USA) és Alexa Fluor 594-konjugált második antitesttel (Invitrogen, USA) volt. A fedőlemezeket alatt vizsgáltuk OLYMPUS virágzás mikroszkópia. Katalógusa}

RNS kivonása és kvantitatív valós idejű PCR (qPCR) hotelben

A két sejtvonal fentebb leírt tenyésztett három példányban kutak normoxiás vagy hipoxiás körülmények , a fent leírtak szerint. Teljes RNS-t azonnal izoláljuk normoxiás vagy hipoxiás sejteket végén a kísérlet, Trizol reagens (Invitrogen, USA). Teljes RNS (5 ng) reverz transzkripcióval cDNS alkalmazásával reverz transzkripciós reagenskészletek (TaKaRa, Dalian, Kína), a gyártó utasításai szerint. qPCR végezték, SYBR Green PCR Master Mix (TaKaRa, Dalian, Kína). Fold változások a kifejezés minden TGF-β1 mRNS képest GAPDH alapján számítottuk a küszöb ciklus (Ct) a 2 ^{-Δ (ΔCt), ahol ΔCt = Ct _{cél - Ct GAPDH és Δ (ΔCt) = ΔCt hipoxia - ΔCt normoxia. A TGF-β1 primerek a következők voltak: előre, 5'-GCCAG AGTGG TTATC TTTTG ATG-3 '; fordított, 5'AGTGT GTTAT CCCTG CTGTC AC-3 ', és a GAPDH primerek: előre, 5'GGACC TGACC TGCCG TCTAG AA-3'; fordított, 5'-GGTGT CGCTG TT GAAGT CAGAG-3 '. qPCR három ismétléssel végeztük.}}

enzimmel kapcsolt immunoszorbens vizsgálattal (ELISA)

A koncentráció a TGF-β1 a tenyészet felülúszójában és a szérumokat alkalmazásával határoztuk meg egy ELISA kit (eBioscience, San Diego, CA) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint.

izolálása és tenyésztése T-sejtek

származó PBMC donorból közvetve biotinnal jelölt antitest bocktail és anti-biotin mikrogyöngyök. CD4 ^{+ T-sejtek voltak elválasztva negatív szelekcióval, a gyártó utasításai szerint (Miltenyi Biotec, Németország). CD4 + T-sejteket közvetlenül megjelölhetjük CD25 mikro-gyöngyök és CD4 + CD25 - T-sejteket izoláljuk negatív szelekcióval, a gyártó utasításai szerint (tisztaság 95%; Miltenyi Biotec, Németország) . A felülúszókat összegyűjtöttük a tenyésztett AGS sejteket normoxiás vagy hipoxiás körülmények hígítottuk friss AMV közeg (01:03), az úgynevezett normoxiás közepes és hipoxiás közegben, ill. Összesen 1,0 × 10 6 /ml-CD4 + CD25 - T-sejteket stimuláltunk anti-CD3 /CD28-bevont gyöngyöket (01:05; Invitrogen, USA) ± IL-2 (200 U /ml; Peprotech) 72 órán át AIM-V szérummentes tápközeg (kontroll közepes), normoxiás közepes vagy hipoxiás közegben. Bizonyos kísérletekben rekombináns humán TGF-β1 (2 ng /ml; R &D Systems, USA) és a TGF-β1-receptor kináz inhibitor LY-364947 (5 | iM; Merck, Németország) adunk a tenyészetekhez.}

áramlási citometria

Fenotípus elemzés Treg végeztük BD FACS AriaII áramlási citométer (BD, USA). Röviden, a sejteket jelzett CD4-FITC és Foxp3-PE (eBioscience, San Diego, CA), a gyártó utasításai szerint. Ahhoz, hogy elemezni a gyakorisága a Treg sejtek, CD4 ^{+ Foxp3 + T-sejtek után értékeltük kapuzását CD4 + T-sejtek és arra százalékában kifejezve a teljes CD4 + T-sejteket.}

Statisztikai elemzés katalógusa

a statisztikai elemzéseket végeztünk SPSS 17.0 for Windows. Csoportok közötti különbségeket elemeztük egy egyirányú ANOVA, Mann-Whitney U teszt vagy χ ^{2 vizsgálat, adott esetben. Az összefüggést vizsgálta a Pearson korreláció. Kumulatív túlélési időt kiszámítva Kaplan-Meier és analizáljuk a log-rank teszt. Az adatokat átlag ± SEM. Statisztikai szignifikancia meg P katalógusa < 0,05. Katalógusa}

Eredmények katalógusa

HIF-1α és Foxp3 expressziója gyomorrákban szövetek katalógusa

Miután szövettani megerősítés gyomor- rák (1A., bal felső és le-balra), megvizsgáltuk expresszióját HIF-1α és Foxp3 immunhisztokémiai 99 betegnél. HIF-1α alacsony expresszió (1A., Felső) és a magas expressziót (1A., Le) találtak túlnyomórészt a citoplazmában és a sejtmagban a rákos sejtek a tumor árrés, és csak a nukleáris HIF-1α festéssel pontoztuk. Érdekes megjegyezni, hogy bizonyos esetekben, limfociták is mutatott erős expresszióját HIF-1α. Foxp3 alacsony expresszió (1A., Jobb felső) és a magas expressziót (1A., Le-jobbra) volt látható a sejtmagban a limfociták, amelyek többségét található a tumor árrés.

Következő , a kifejezések HIF-1α és Foxp3 a tumor szövetekben hasonlítottuk össze betegeknél nem áttétes (n = 52), és metasztatikus (n = 47) gyomorrák. Mind az átlagos pontszám HIF-1α és a szám a Foxp3 ^{+ sejtek metasztatikus betegek esetében magasabb volt, mint a nem áttétes betegeknél (HIF-1α, 7,69 ± 0,45 vs 5,41 ± 0,40, P
< 0,001 ábra. 1B, balra Foxp3 14,61 ± 1,01 vs. 8,07 ± 0,95, P katalógusa < 0,001, Fig. 1B, jobbra). katalógusa}

közötti kapcsolat az operációs rendszer és a HIF-1α vagy Foxp3 gyomorkarcinómában szövetek katalógusa

Ahogy a múlt nyomon követése, 50, 99 (50,5%) beteg volt életben, a medián követési idő 64 hónap (57-70), míg a 49 halt meg a betegség , a medián idő a halál 28 hónap (4-64). Ahhoz, hogy vizsgálhassuk a kapcsolat a expressziója HIF-1α vagy Foxp3 és az OS, HIF-1α sorolták negatív (n = 34; pontszámok ≤4), illetve pozitív (n = 65; pontszámok kitermeléssel 4), míg a Foxp3 sorolták alacsony (n = 51F) vagy magas (n = 48) a medián száma (8,6 sejt /HPF), mint a cutoff. Vizsgálatunkban OS Foxp3 alacsony csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a Foxp3-nagy csoport ( P katalógusa = 0,017, Fig. 1C, balra), míg a HIF-1α-negatív csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a HIF -1α-pozitív csoportban ( P katalógusa = 0,009, Fig.1C, jobbra). katalógusa

közötti társulás HIF-1α vagy Foxp3 klinikopatológiai jellemzők katalógusa

A korreláció klinikopatológiai jellemzők és expressziója HIF-1α vagy Foxp3 később értékeltük (1. táblázat). Nem találtunk összefüggést a HIF-1α vagy Foxp3 expressziója és az életkor vagy nemi betegek, valamint a tumor mérete. Volt azonban nőtt a pozitív ráta HIF-1α mélység tumor invázió ( P = katalógusa 0,013). Hasonló tendencia is találtam a kifejezése HIF-1α ( P katalógusa < 0,001), illetve Foxp3 ( P katalógusa = 0,008) és a daganat stádiuma. Emellett jelentős korrelációt találtunk nyirokcsomó-metasztázis és kifejezése HIF-1α ( P katalógusa = 0,029), illetve Foxp3 ( P katalógusa < 0,001). Katalógusa

közötti kapcsolat HIF-1α és Foxp3 vagy TGF-β1 gyomorrákban szövetek katalógusa

a fent említett immunhisztokémiai eredmények azt mutatták, hogy a szám a Foxp3 ^{+ sejtek erős pozitív korrelációt a pontszám HIF-1α betegeknél áttétek (r = 0,772 katalógusa, P &katalógusa 0,001; 2A., balra), de nem olyan betegeknél, akiknek a metasztázis ( r = 0,461 katalógusa, P katalógusa = 0,001; 2A. ábra, jobbra). Ezután végezzük immunhisztokémiai kettős festéssel, hogy értékelje a jelenléte koexpresszió között a HIF-1α és Foxp3 vagy TGF-β1. Az eredmények azt mutatták, hogy Foxp3 + sejtek főleg össze a helyszínek közel hipoxiás tumor régió nagy HIF-1α expresszió (ábra. 2b). Továbbá, a legtöbb nagy HIF-1α tumorsejtek magas TGF-β1 (ábra. 2C). Katalógusa}

A keringő Treg és a TGF-β1 a műtét előtti és műtét utáni betegeket katalógusa

megvilágítani közötti kapcsolat Treg sejtek és a koncentráció a TGF-β1 a szérumban, a CD4 ^{+ Foxp3 + T-sejteket analizáltunk betegeknél gyomorrákos keresztül áramlási citometriás (ábra. 3A). A frekvencia Treg műtét előtt magasabb volt, mint a műtét után (9,84 ± 0,40% vs. 8,47 ± 0,33%, P katalógusa < 0,001, Fig. 3B). A TGF-β1-koncentrációk műtét után jelentősen csökkent, ha összehasonlítjuk azokkal a műtét előtt (6431,95 ± 629,24 vs 7581,56 ± 556,45 pg /ml, P
= 0,005, 3C.). A pozitív korreláció Treg frekvencia és a TGF-β1 koncentrációt találtak a szérum műtét előtt ( r katalógusa = 0,454, P katalógusa = 0,044, ábra. 3D). Katalógusa}

TGF -β1 erősen túlszabályozott a gyomor rákos sejtvonalakban alatt hypoxia

annak azonosítására, hogy a hipoxia indukálja a váladék a TGF-β1 gyomor rákos sejtekben, a TGF-β1 szinteket vizsgáltuk két gyomor rákos sejtvonalban, a AGS és BGC823, hipoxiás vagy normoxiás körülmények között. A mRNS expressziója a TGF-β1 alatt hypoxia növelték összehasonlítva normoxiás körülmények között (4A.). Összhangban qPCR, a TGF-β1 szintek kultúra felülúszó hasonló eredményeket mutatott (ábra. 4B). Továbbá, a kifejezéseket a TGF-β1 és a HIF-1α is detektáltuk immunfluoreszcenciával, és az eredmények azt mutatták, fokozott TGF-β1 és a HIF-1α expresszió hipoxiás körülmények között, amikor összehasonlítottuk a normoxiás körülmények között (ábra. 4, C).

a hypoxia gyarapítja a képesség indukálni Treg keresztül TGF-β1 a gyomor rákos sejtvonalakban

a teszt a hipotézist, hogy a hipoxia-indukált TGF-β1 hozzájárul a növekedés Treg sejtek, keringő CD4 ^{+ CD25 - a T-sejtek egészséges egyének kezeltük felülúszókat sejtekből különböző körülmények között. A pontdiagramok megmutatta különböző médiumok indukáló Foxp3 expressziója CD4 + T-sejtek (ábra. 5A). A Foxp3 expressziója T-sejtek normoxiás közegben, hipoxiás közegben és a rekombináns humán TGF-β1 közeg mind növekedett, összehasonlítva a kontroll közegben ( P
< 0,001). Ezen túlmenően, a Foxp3 expressziója a hipoxiás közegben szignifikánsan magasabb volt, mint a normoxiás közegben (13,04 ± 0,74% vs. 6,76 ± 0,35%, p
< 0,001, Fig. 5B). Továbbá, a LY-364947 adtunk minden fajta közeg, a Foxp3 expressziója csökkent nyíltan ( P katalógusa < 0,001, Fig. 5C). Katalógusa}

Vita katalógusa

Több mint az elmúlt évtizedben a feltörekvő bizonyítékok alapján feltételezhető, hogy a Treg hozzájárulnak a tumorok gyengítésével tumorellenes immunválasz, vagy akár stimuláló áttét közvetlenül [18], [19]. Szerzett bizonyítékok utóbbi években mutatott megnövekedett frekvenciái intratumorális Treg sejtek a gyomorrák, amely már kapcsolódik kedvezőtlen klinikopatológiai jellemzők és rossz prognózissal [20], [21], [22]. Egybehangzóak a közölt eredmények a vizsgálat alátámasztotta, hogy a frekvencia a tumort infiltráló Treg nőtt előrehaladtával tumor szakaszaiban. Továbbá Treg is biztosított prognózis tényező műtét utáni gyomorrák. Ezen túlmenően, azt megerősítette, hogy a számok a Treg sejtek áttétes gyomorrák lényegesen magasabb, mint a nem áttétes gyomorrák. A fenti eredmények támogatást nyújt az elképzelést, hogy Treg hozzájárulhat a tumor progresszióját és lehet egy potenciális terápiás célpontot gyomorrák. Mi tehát a következő kísérletet, hogy vizsgálja meg a mechanizmus közvetítő Treg dúsítás gyomorrákban. Katalógusa

A tumor hypoxia jól ismerik, amely kulcsfontosságú tényező okozhat A kezelés és a rossz prognózis gyomorrák [6], [16], [ ,,,0],23]. HIF-1α, mint a fő molekuláris aláírás hypoxia, a fő downstream szabályozó a hipoxiás válasz a tumorsejtekben [24]. Eredmények a mi tanulmány kimutatta, hogy a HIF-1α korrelál a rosszindulatú viselkedés kategóriába, beleértve a mélysége invázió, nyirokcsomó-metasztázis és előre tumorstádium. Meglepő, gyomorrák betegek magas HIF-1α volt rosszabb túlélési mint az alacsony HIF-1α, ami tovább erősítette javaslatot, hogy a HIF-1α, vagy inkább hypoxia, kapcsolódik a progresszió gyomorrák.

régóta felismerték, hogy a tumorsejtek védve vannak az immunrendszer károsodás hipoxiás tumor mikrokörnyezetet; azonban a mögöttes mechanizmusok továbbra is ellenőrzés alatt [25]. Mint az már kevéssé ismert, hogy van-e kapcsolat között hipoxia és Treg közvetített immunszuppresszió tumorokban. A közelmúltban számos tanulmány tanult hipoxiás szabályozása Treg, ellentmondó eredményeket. Ben-Shoshan et al.
[26] beszámolt arról, hogy a hipoxia növeli a számát és szuppresszív tulajdonságai Treg diktálja gyulladásgátló programot. Wei et al.
[7] is megerősítette, hogy a hipoxia növeli a képességét, glioblastoma multiforme indukáló Treg sejtek, és ezáltal kulcsszerepet játszik a tumor által közvetített immun szuppresszió. Azonban Dang és mtsai. [27] megállapította, hogy a HIF-1α gátolja Treg differenciálódás megcélozva Foxp3 fehérje lebomlását. Tanulmányunkban bemutattuk egy erősen pozitív korrelációt Treg szám és a HIF-1α kifejezés, ami arra utal, hogy a hipoxia hozzájárulhat Treg beszivárgás a gyomorrák. Érdemes megjegyezni, hogy a tanulmányok, a legtöbb Treg voltak abban a régióban, közel a rákos sejteket kifejező HIF-1α. Így további tisztázása, hogy vajon a hipoxia-asszociált molekulák felszabaduló rákos sejtek hozzájárulnak a dúsítási Treg gyomorrákban van szükség.

Míg a mechanizmusok részt vesz a gazdagodását Treg sejtek tumorokban még mindig nem tisztázott, Mi és más kutatók nemrégiben kimutatták, hogy a tumorsejtek szolgálhat forrásul a TGF-β1, amely szükséges az indukciós és karbantartása Treg in vitro
és a in vivo katalógusa [28], [29], [30]. A jelenlegi vizsgálatban a gyakorisága Treg sejtek és a TGF-β1 forgalomban műtét előtt magasabb volt, mint a műtét után, és a két paraméter pozitív korrelációt mutatott, ami arra utal, hogy a tumor-eredetű TGF-β1 hozzájárulhat a növekedés a Treg sejtek a gyomor rák.

hipoxia, egy közös jellemzője, rák, indukálhat ráksejtek titkos immunszuppresszív citokinek, beleértve a TGF-β1 [7], [31]. Eredmények a mi tanulmány kimutatta, a legtöbb nagy TGF-β1 sejtek rákos sejtek kifejező HIF-1α tumorokban. in vitro katalógusa vizsgálat kimutatta, a TGF-β1 nőtt nagyobb mértékben a gyomorrák sejtek hipoxiás kultúra, ami szintén összhangban van a fent említett tanulmányok. Eredményeink alapján azt feltételeztük, hogy a rákos sejtek a TGF-β1, hogy fokozzák az Treg gyomorrákban. Annak tesztelésére Hipotézisünkkel izolált CD4 ^{+ CD25 - T-sejtek egészséges egyének tenyésztünk hígított felülúszóiban tumorsejtek a különböző tenyésztési körülmények között. Az eredmények azt mutatták, hogy a Foxp3 expressziója T tenyésztett sejtek hipoxiás közegben szignifikánsan magasabb volt, mint a tenyésztett sejtek normoxiás közegben. Továbbá extra rekombináns humán TGF-β1 jelentősen megnövekedett Foxp3 expressziója, míg hozzátéve LY-364947, a TGF-β1-receptor-gátló, csökkent Foxp3 kifejezést. Ezek az eredmények tehát közvetlen kapcsolatot között hipoxia, TGF-β1 és Treg gyomorrákban. Katalógusa}

Azonban az előzetes vizsgálat azt is kimutatta, hogy a TGF-β1 változatlan maradt HIF-1α stabilizátor, kobalt-klorid (CoCl _{2), vagy a HIF-1α inhibitor, 2-methoxyestradiol (2ME2) ​​az AGS és BGC823, bár a HIF-1α növeltük hypoxia (adatokat nem mutatjuk). Ezek az eredmények azt javasolta, hogy a HIF-1α lehet nem társul az indukciós TGF-β1 a gyomorrák-sejtek mellett a hipoxia, ami összhangban van a korábbi tanulmány [32]. Továbbá, a termelés a Treg sejtek nem lehetett teljesen abláció útján blokkolásával TGF-β1, jelezve, hogy más citokinek vagy utak is be kell vonni. Ezen túlmenően, a rák sejtek nem az egyetlen forrása a citokinek belül a tumor mikrokörnyezetében. Így további vizsgálatokra van szükség, hogy erősítse meg a mögöttes mechanizmusának Treg felhalmozódása a gyomorrák. Katalógusa}

Összefoglalva, a jelen tanulmány kimutatta, hogy a hipoxia fokozza a képességét, gyomorrák, hogy elkerüljék immunfelügyelet up-expresszióját szabályozó TGF-β1, ezáltal indukálva Treg tumorokban. Továbbá, az adataink is bizonyítékai létezésére intercelluláris közötti áthallás tumorsejtek és Treg sejtek, amelyek szabályozzák a tumorellenes immunválaszt.

• PLoS One: A miR-184 Binding-Site rs8126 T > C polimorfizmusa TNFAIP2 társul Risk gyomorrák
• PLoS One: a rövid távú klinikai vonatkozása tartozék bal artéria hepatica áteső betegek radikális gastrectomián gyomorrák