PLOS ONE: L'importance pronostique de Apoptose-connexes marqueurs biologiques en chinois cancer gastrique Patients

Résumé

Contexte et objectif

Le
pronostic varie parmi les patients atteints de la même stade, donc il y avait un besoin pour de nouveaux facteurs pronostiques et prédictifs. Le but de cette étude était d'évaluer la relation entre les marqueurs biologiques liés à l'apoptose tels que p53, bcl-2, bax, et c-myc, et les caractéristiques clinico et leur valeur pronostique.

Méthodes

de 1996 à 2007, 4426 patients avaient subi une gastrectomie curative D2 pour le cancer gastrique à l'Université Fudan de Shanghai cancer Center. Parmi les 501 patients, les niveaux d'expression de p53, bcl-2, Bax, et c-myc ont été examinés par immunohistochimie. La valeur pronostique de marqueurs biologiques et la corrélation entre les marqueurs biologiques et d'autres facteurs clinicopathologiques ont été étudiés.

Résultats

Il y avait 339 hommes et 162 femmes avec un âge moyen de 57. Les pourcentages de positif l'expression de p53, bcl-2, Bax, et c-myc était de 65%, 22%, 43% et 58%, respectivement. Il y avait une forte corrélation entre p53, bax, et l'expression de c-myc ( P
= 0.00). Il y avait une association significative entre bcl-2, et l'expression de Bax ( P
< 0,05). l'expression de p53 en corrélation avec le grade histologique ( P
= 0,01); bcl-2 expression avec le stade pathologique ( P
= 0.00); expression bax avec des hommes ( P
= 0,02), le grade histologique ( P
= 0,01), le type Borrmann ( P
= 0,01), l'emplacement de la tumeur ( P
= 0.00), métastase ganglionnaire ( P
= 0,03), et le stade pathologique ( P
= 0,03); expression de c-myc avec le type Borrmann ( P
= 0.00). bcl-2 expression est liée à une bonne survie en analyse univariée ( P
= 0,01). L'analyse multivariée a montré que bcl-2 expression et le stade pathologique ont été définis comme des facteurs pronostiques indépendants. Il y avait des différences significatives de taux de survie globale à 5 ans en fonction de bcl-2 expression ou non au stade IIB ( P
= 0,03).

Conclusion

L'expression de bcl-2 était un facteur pronostique indépendant pour les patients atteints de cancer gastrique; il pourrait être un candidat pour le système de stadification du cancer gastrique

Citation:. Liu X, Cai H, Huang H, Long Z, Shi Y, Wang Y (2011) L'importance pronostique de Apoptose-connexes marqueurs biologiques dans chinois gastriques patients atteints de cancer. PLoS ONE 6 (12): e29670. doi: 10.1371 /journal.pone.0029670

Editeur: Masaru Katoh, National Cancer Center, le Japon

Reçu: Juin 29, 2011; Accepté 2 Décembre 2011; Publié le 28 Décembre, 2011

Droit d'auteur: © 2011 Liu et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, à condition que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement:. Les auteurs ont pas de soutien ou de financement pour signaler

intérêts concurrents:. les auteurs ont déclaré qu'il n'y a pas des intérêts divergents existent

introduction

Bien que l'incidence du cancer gastrique a été considérablement diminué. depuis plusieurs décennies, il était encore le quatrième cancer le plus fréquent et la deuxième cause la plus fréquente de décès par cancer [1], [2]. Il est très important de prédire avec précision le risque de mauvais pronostic afin de maximiser l'effet thérapeutique et réduire au minimum les effets indésirables dans le traitement des patients atteints de cancer. Parmi les facteurs pronostiques maintenant disponibles pour le cancer gastrique, le facteur pronostique le plus précis et important a été la scène UICC TNM. En raison de la variabilité du pronostic au sein du même stade de cancer de l'estomac, il est impossible de prédire avec précision le pronostic par les procédures conventionnelles de mise en scène. Par conséquent, il est essentiel de rechercher les autres facteurs spécifiques pour identifier les sous-groupes de patients avec bien sûr plus agressive de la maladie. Récemment, certaines études ont montré que d'autres facteurs pathologiques, tels que le nombre de ganglions lymphatiques positifs, la présence d'une atteinte des ganglions lymphatiques extracapsulaire, et la taille de la tumeur avait une valeur pronostique supplémentaire [3] - [5]. Étant donné que certains marqueurs biologiques, tels que des oncogènes, des gènes suppresseurs de tumeur, les régulateurs du cycle cellulaire, et les gènes de réparation d'ADN, ont été liés à la genèse de la tumeur, la croissance, l'invasion et les métastases, de nombreux scientifiques ont été consacrés à la recherche de nouveaux facteurs pronostiques avec ces des marqueurs moléculaires. En dépit du fait qu'un petit nombre d'études ont évalué la signification pronostique des marqueurs, tels que p53, bcl-2, Bax, et c-myc dans les cancers gastriques, les résultats sont controversés [6] - [11]. De plus, ces études précédentes ont été menées à la recherche de la valeur pronostique des marqueurs à la 6ème étape UICC TNM, il était urgent d'élucider la relation entre ces décideurs et la 7ème étape UICC TNM. Enfin, il n'y avait pas d'études évaluant l'expression de ces signification pronostique moléculaire chez les patients atteints de cancer gastrique en Chine. Par conséquent, nous avons évalué l'expression des marqueurs biologiques tels que le p53, la protéine Bcl-2, Bax, et c-myc dans cette étude.

protéines p53 sont les produits de gènes suppresseurs de tumeur, qui ont agi par la modulation de la prolifération cellulaire via le contrôle du point de contrôle G1 d'arrêt du cycle cellulaire [12], [13]. bcl-2 et bax appartenaient à la famille bcl-2, et celui-ci était l'une des classes les plus pertinentes des molécules régulatrices de l'apoptose. La famille Bcl-2 ont été classés en deux sous-familles: les protéines anti-apoptose (bcl-2, bcl-XL, bcl-w, BFL-1, brag-1, et MCL-1) et des protéines pro-apoptose (bax, bak , bcl-Xs, mauvais, offre, et hrk) [14]. Il a été démontré que le bax à Bcl-2 peut affecter la sensibilité relative ou de la résistance des cellules à simulies [15] apoptotiques. la protéine c-myc était un type de facteur de transcription. Une étude antérieure a montré l'expression de c-myc a été liée à la prolifération cellulaire [16].

Dans cette étude, nous avons évalué l'expression de marqueurs biologiques tels que p53, bcl-2, bax, et c-myc, corrélée leur expression aux caractéristiques clinicopathologiques et évalué leur valeur pronostique.

les Matériaux et méthodes

au cours de Janvier 1996 et Décembre 2007, 4426 patients avec histologiquement confirmé primaire gastrique adénocarcinome subi
patients curative gastrectomie D2 au Département de cancer gastrique et des tissus mous sarcome à l'Université Fudan de Shanghai Cancer Center. Parmi ces patients, 501 cas ont été sélectionnés, comme leurs spécimens ont été colorées par immunohistochimie après l'opération avec l'examen histologique de routine. Les données ont été extraites de rapports opérationnels et pathologiques des patients, et les données de suivi ont été obtenus par téléphone, courrier, et la base de données clinique ambulatoire. Cette étude comprenait 339 hommes et 162 femmes âgés de 22 à 82 ans, l'âge moyen était de 57 ans. Staging a été réalisée selon la Classification Staging UICC TNM pour Carcinome de l'estomac (septième édition, 2010). Un suivi de tous les patients a été réalisée selon notre protocole standard (tous les trois mois pendant au moins 2 ans, tous les six mois pour les 3 prochaines années, et après 5 ans tous les 12 mois pour la vie). Les éléments de check-up inclus un examen physique, examen marqueur tumoral, l'échographie, la radiographie thoracique, tomodensitométrie, et l'examen endoscopique. La durée médiane de suivi était de 44,6 mois au moment de l'analyse. Le consentement éclairé a été obtenu à partir de tous les patients, et cette étude a été approuvée par le Comité d'éthique du Cancer Center de l'Université Fudan de Shanghai. L'étude était rétrospective.

coloration immunohistochimique

p53, bcl-2, bax, et c-myc ont été détectées par la méthode immunohistochimique. Tous les anticorps primaires et les anticorps monoclonaux de souris ont été achetés auprès de Dako (Hambourg. Allemagne). La coloration immunohistochimique a été réalisée par le système polymère marqué d'améliorer la méthode (ELPS), avec 10%, les matières incluses dans la paraffine fixés au formol. 5 um sections de paraffine en série ont été déparaffinées avec du xylène et hydratés avec ehanol /eau déminéralisée. Les coupes ont été ensuite mises en incubation avec du méthanol /0,3% de H _{2 O 2 pendant 10 minutes et bloquées avec une coloration non spécifique, réactif de blocage. Après incubation pendant une nuit à 4 ° C avec des anticorps anti-p53, la protéine Bcl-2, Bax et l'anticorps c-myc (dilué 1:100, 1:100, 1:100, 1:100, respectivement), les sections ont été traitées selon la norme immunoperoxydase méthodes utilisant une biotine streptavidine peroxydase kit complexe (LSAB + kit /HRP; Dako). La réaction de peroxydase a ensuite été développée avec de la diaminobenzidine (Dako). les sections de contrôle négatif ont été soumis à la même procédure, sauf que le premier anticorps a été remplacé par du PBS. Aucune coloration positive a été observée chez les témoins. La position de la coloration est principalement dans le cytoplasme des cellules pour Bax et c-myc, cytoplasme et cytomembranaire pour bcl-2, le noyau pour p53.}

La coloration immunohistochimique score

Toutes les tranches ont été évaluées par deux pathologistes sans connaissance des résultats cliniques. Le pourcentage de cellules et l'intensité de coloration immunoréactifs ont été évaluées dans chaque échantillon. Le pourcentage de cellules immunoréactives a été notée sur une échelle de 0 à 4: aucune coloration est notée 0, 1 à 10% des cellules colorées marqué par 1, 11 à 50% en 2, 51 à 80% en 3 et 81- 100% par 4. Les intensités de coloration ont été notées de 0 à 3: 0 est définie comme étant négative, 1 comme faible, modéré en 2 et 3 en tant que solide, respectivement. Les données brutes ont été converties au score immunohistochimique (IHS) en multipliant la quantité et l'intensité des scores. Un score de 9-12 IHS a été considéré comme une forte immunoréactivité (+++), 5-8 modérée (++), 1-4 aussi faible (+), et 0 comme négatif (-). Sur l'analyse finale, les cas avaient un score inférieur à 1 ont été considérés comme négatifs, et ≥1 a été considéré comme positif.

L'analyse statistique

L'association entre les facteurs clinicopathologiques et les marqueurs biologiques a été évaluée par le test du chi carré. taux de survie à cinq ans a été calculé par la méthode de Kaplan-Meier, et les différences entre les courbes de survie ont été examinés avec le test du log-rank. Toutes les variables significatives observées dans l'analyse univariée ont été inclus dans l'analyse de survie multivariée utilisant Cox modèle des risques proportionnels. Le niveau accepté d'importance était P
< 0,05. Les analyses statistiques et graphiques ont été effectuées en utilisant le SPSS 13.0 logiciel statistique (SPSS, Inc., Chicago, IL).
de

Résultats caractéristiques clinicopathologiques

Il y avait 339 hommes et 162 femelles (2.09: 1) avec un âge moyen de 57 ans. Il y avait 57 (11,4%) des cancers gastriques précoces et 444 (88,6%), les cancers gastriques avancés. Selon le type histologique, les tumeurs bien différenciées ont été observées chez 9 (1,8%) patients, modérément différencié dans 164 (32,7%) patients, et les tumeurs mal différenciées dans 328 (65,5%) patients restants. Selon le type Borrmann, 57 (10,4%) étaient de type 0, 36 (7,2%) de type I, 15 (3,0%) de type II, 371 (74,0%) de type III, 22 (4,4%) de type IV. De 501 patients, 159 (31,7%) avaient des tumeurs situées dans le tiers supérieur, 72 (14,4%) avaient des tumeurs dans le tiers médian, 244 (48,7%) avaient des tumeurs dans le tiers inférieur de l'estomac, et 26 (5,2%) les tumeurs avaient occupé les deux tiers ou plus de l'estomac. Métastases ganglionnaires a été observée chez 356 patients, le taux de métastases était de 71,1%. La distribution de stade pathologique était la suivante: 35 (7,0%) patients appartenaient au stade IA, 52 (10,4%) IB, 60 (12,0%) IIA, 83 (16,5%) IIB, 88 (17,6%) IIIA, 83 ( 16,5%) IIIB, et 100 (20,0%) IIIC

expression de p53

expression. p53 était positif dans 64,9% de tous les tissus de cancer gastrique. p53 coloration a été observée dans le noyau des cellules de carcinome (figure 1). l'expression de p53 a été associée à Bax et c-myc (voir le tableau 1). histologie en corrélation avec l'expression de p53 bien différencié. Il n'y avait pas de corrélation avec le sexe, l'âge, le type Borrmann, localisation de la tumeur, métastase ganglionnaire et le stade pathologique (tableau 2).

bcl-2 expression

bcl-2 expression a été positive dans 22,2% de tous les tissus du cancer de l'estomac. bcl-2 coloration a été observée dans le cytoplasme et cytomembranaire des cellules de carcinome (figure 1). bcl-2 a été associée à l'expression de Bax (voir le tableau 1). Il y avait une corrélation avec le stade pathologique, mais aucune corrélation avec le sexe, l'âge, le type histologique, le type Borrmann, localisation de la tumeur, métastase ganglionnaire, et (tableau 2).

expression bax

expression bax était positif dans 42,9% de tous les tissus de cancer gastrique. bax coloration a été observée dans le cytoplasme des cellules de carcinome (figure 1). l'expression de Bax était associée à p53, bcl-2 et c-myc (voir le tableau 1). Le sexe féminin, modérément différencié, Borrmann II, troisième emplacement supérieur et métastase ganglionnaire corrélés avec l'expression de Bax. Comme le stade pathologique a augmenté, l'expression de Bax est devenue plus fréquente. Il n'y avait pas de corrélation avec l'âge (tableau 2).

c-myc expression

c-myc expression a été positive dans 58,1% de tous les tissus de cancer gastrique. coloration c-myc a été observée dans le cytoplasme des cellules de carcinome (figure 1). c-myc a été associée à l'expression de p53 et de Bax (voir le tableau 1). Borrmann III corrélée avec c-myc expression. Il n'y avait pas de corrélation avec le sexe, l'âge, le type histologique, la localisation de la tumeur, métastase ganglionnaire et le stade pathologique (tableau 2). En outre, les données brutes sur les caractéristiques clinicopathologiques et les évaluations de immunoréactivité pour 501 cas de cancer de l'estomac a été montré comme un tableau supplémentaire dans un format Excel (tableau S1).

univariée analyse

La sur-tous les cinq le taux de survie était de 53,7% -Année pour tous les 501 patients. taux de survie à cinq ans était de 64,9% et 50,5% en bcl-2 positifs et bcl-2 patients négatifs respectivement, et cette différence était statistiquement significative (Fig. 2). À l'exception de bcl-2 expression, les facteurs pronostiques significatifs inclus: site de la tumeur, le type Borrmann, le statut des ganglions lymphatiques, et le stade pathologique. Le tableau 3 montre les résultats de l'analyse univariée des facteurs pronostiques.

Analyse multivariée

multivariée analyse de survie, y compris tous les facteurs pronostiques significatifs mentionnés dans l'analyse univariée, a été réalisée pour déterminer les facteurs pronostiques indépendants pour le cancer gastrique . L'analyse multivariée utilisant Cox modèle des risques proportionnels a montré que bcl-2 expression et le stade pathologique étaient des facteurs pronostiques indépendants (tableau 4).

Comparatif de survie en fonction de marqueurs biologiques au même stade

Selon 7e UICC TNM système de stadification, le cancer gastrique a été divisé en 7 étapes: stade IA, stade IB, IIA stade, IIB, IIIA, IIIB, IIIC. Baser sur l'expression de bcl-2, chaque étape a été divisé en groupe négatif bcl-2 bcl-2 positif et. Il y avait des différences significatives de plus-all survie à 5 ans entre le groupe négatif bcl-2 positif et bcl-2 selon le stade IIB ( P
= 0,003). De plus, nous avons constaté qu'il y avait des différences significatives de plus-all survie à 5 ans entre bcl-2 groupe négatif bcl-2 positif et selon Borrmann III ( P
= 0,002); aucune différence significative selon le stade II et le stade III (Figure 3).

Discussion

L'identification des facteurs pronostiques dans le cancer gastrique était essentiel pour prédire la survie des patients et déterminer des stratégies thérapeutiques optimales. De nombreuses études ont montré que la profondeur de l'invasion et les métastases ganglionnaires étaient des facteurs pronostiques les plus importants dans le cancer gastrique [17], [18]. En raison de la variabilité du pronostic au sein même stade pathologique du cancer gastrique, il y a eu beaucoup de recherches pour les marqueurs biologiques spécifiques pour identifier les patients à un mauvais pronostic [19] - [21]. Pendant ce temps, l'expression de p53, bcl-2, bax, et c-myc ont été connus pour être associés au tumorogénèse. Par conséquent, le but de cette étude était de déterminer si ces marqueurs biologiques peuvent être utilisés comme facteurs pronostiques supplémentaires à l'étape traditionnelle TNM dans le cancer gastrique. Dans cette étude, l'expression de ces protéines a été étudiée dans 501 cas de cancers gastriques humains primaires réséquées.

Les taux d'expression immunohistochimique de p53, bcl-2, bax, et c-myc ont été de 64,9%, 22,2% , 42,9%, 58,1%, respectivement, et ces résultats étaient cohérents avec les taux d'expression d'autres études rapportées comme 17 à 84,1%, de 12,7 à 67%, de 42,4 à 58,0%, de 23,5 à 72,9%, respectivement [9], [12 ], [22] - [26]. p53 a joué un rôle important dans l'apoptose. Il a modifié le plus souvent dans le cancer humain. De type sauvage, la protéine p53 induit un arrêt de croissance en phase G1 /S du cycle cellulaire en réponse à des dommages à l'ADN, empêchant ainsi la prolifération des cellules. Type Muted p53 a perdu la fonction, et a permis à des cellules avec l'ADN endommagé de proliférer. Dans cette étude, une corrélation inverse entre le p53 et le type histologique n'a été trouvé, ce qui a démontré que la dérégulation de p53 pourrait se traduire par une prolifération incontrôlée dans le cancer gastrique. Il est compatible avec une étude antérieure [22]. Il avait une controverse quant à la valeur pronostique de la p53, certaines études ont rapporté que p53 était associée à un mauvais pronostic [27], [28], tandis que d'autres a rapporté que p53 n'a pas d'influence sur le pronostic [29], [30]. Notre recherche a montré que p53 n'a pas été lié au pronostic du cancer gastrique. bax a agi comme un accélérateur de l'apoptose sur la vie cellulaire. Une étude antérieure a proposé que le rapport de Bax à Bcl-2 joue un rôle critique dans la régulation de la propension à l'apoptose [31]. Dans la présente étude, l'expression de Bax a été associé à celui de bcl-2 et bax surexpression significativement corrélée avec certaines caractéristiques clinico tels que le sexe, le type histologique, le type Borrmann, l'emplacement de la tumeur et des métastases ganglionnaires. Nous avons constaté que les patients avec une expression positive de bax étaient enclins à présenter des métastases ganglionnaires et bax était pas un facteur pronostique indépendant. Ce résultat était différent d'une recherche précédente. Anagnostopoulos et al. [24] ont rapporté que l'expression de Bax négative gastrique a été associée à des métastases des ganglions lymphatiques et de mauvais pronostic clinique. Les raisons des résultats contradictoires ne sont pas claires. Il est possible que les différences génétiques entre les populations occidentales et les gens de l'Est ont contribué à cela. Le c-myc proto-oncogène était un maître régulateur de la prolifération cellulaire et la transformation par des moyens de transcription et de nontranscriptional, et a souvent été déréglementé dans les tumeurs malignes humaines. Ninomiya et al. [26] ont rapporté que l'excès de réactivité au produit c-myc produit plus fréquemment dans les cancers invasifs que dans les cancers localisés, et c-myc expression de production dans les tissus cancéreux bien corrélée avec la diffusion péritonéale, et les patients atteints de c-myc expression positive avait plus mauvais pronostic que ceux avec c-myc expression négative. Dans cette étude, on n'a pas trouvé de relation entre l'expression de c-myc et le comportement invasif et le pronostic autre que le type Borrmann. Nous avons constaté que l'expression de c-myc a été associée à une plus Borrmann III.

Le gène bcl-2 a d'abord été décrit comme un oncogene dans le lymphome folliculaire. Il était bien connu pour inhiber l'apoptose [32], mais certaines études ont rapporté que la surexpression de bcl-2 supprime la prolifération cellulaire et a été associée à un comportement moins agressif biologique [33], [34]. bcl-2 a été rapportée dans une variété de tumeurs malignes epitheliales humaines, y compris le carcinome gastrique. Cependant, le rôle exact et la signification clinique de bcl-2 restent à élucider. Des études antérieures ont montré que l'expression de bcl-2 a été associée à un meilleur pronostic dans le cancer du poumon non à petites cellules et le cancer gastrique [35], [36]. Pietenpol et al. [37] ont rapporté que la surexpression de Bcl-2 a inhibé la croissance de plusieurs lignées de cellules tumorales solides. Saegusa et al. [33] ont démontré que la majorité des 2 bcl-cellules cancéreuses + était dans un état non proliférante, et l'expression moyenne de Ki-67 l'indice de marquage et de l'indice de marquage apoptotique dans Bcl-2 + foyers étaient significativement plus faible que dans bcl-2- foyers. Aizawa et al. [36] ont montré que l'expression de bcl-2 dans le cancer gastrique avancé a été associé à un indice apoptotique inférieur et un meilleur pronostic. Toutes ces études ont suggéré que l'activité proliférative cellulaire bcl-2 non seulement l'apoptose inhibée, mais aussi supprimée. Dans cette étude, nous avons caractérisé pour la première fois l'expression de bcl 2 protéines chez les patients atteints de cancer gastrique chinois. Nos données ont montré que bcl-2 était significativement corrélée à une meilleure survie
.

L'identification des facteurs pronostiques dans le cancer gastrique était essentiel pour prédire la survie des patients et déterminer des stratégies thérapeutiques optimales. Il était bien connu que la profondeur de l'invasion et de la présence ou l'absence de métastases ganglionnaires étaient des facteurs pronostiques les plus importants dans le cancer gastrique. Cependant, il était impossible de prédire avec précision le pronostic par les procédures classiques d'arrêt en raison de la variabilité du pronostic au sein du même stade du cancer gastrique. Liu et al. [5] ont constaté qu'il y avait des différences significatives entre le groupe de la tumeur de plus grande taille et un groupe de tumeur de petite taille selon l'étape IIIb et IV. Par conséquent, il est essentiel de rechercher les autres facteurs spécifiques pour identifier les sous-groupes de patients avec bien sûr plus agressive de la maladie en particulier dans les éditions 7e du système de stadification UICC TNM. Selon le 7e classement UICC TNM, chaque stade du cancer gastrique a été divisée en groupe négatif bcl-2 bcl-2 positif et. Nos données montrent que l'expression de bcl-2 a grandement influencé le pronostic dans le stade IIB. Les résultats indiquent que l'expression de bcl-2 pourrait fournir une information pronostique supplémentaire chez les patients atteints de cancer gastrique.

Certaines limites de cette étude devraient être reconnus. En premier lieu, l'état de Helicobacter pylori n'a pas été décrite. Comme cancérogène crucial de cancer gastrique, Helicobacter pylori pourrait être liée à d'autres paramètres tels que bcl-2. D'autre part, la relation entre la récidive tumorale et Bcl-2 n'a pas été étudiée.

En conclusion, l'expression de bcl-2 peut servir comme une indication utile pour prédire le pronostic des patients atteints d'un cancer gastrique. Par conséquent, il pourrait être un candidat pour le système de mise en scène en plus des facteurs classiques.

Informations complémentaires
Tableau S1. données
premières sur les caractéristiques clinicopathologiques et les évaluations de immunoréactivité pour 501 cas de cancer de l'estomac
doi: 10.1371. /journal.pone.0029670.s001
(XLS)

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