Plos ONE: The prognostični pomen apoptoze povezani biološke označevalce v kitajskih Rak želodca bolnikov

Povzetek

Ozadje in cilj

The ABB prognoza spreminjala med bolniki z isti stopnji, zato se je pojavila potreba po novih prognostičnih in napovednih dejavnikov. Cilj te raziskave je bil ugotoviti odnos, povezanih z apoptoze biološke označevalce, kot p53, bcl-2, Bax, in c-myc in clinicopathological značilnosti in njegovo prognostično vrednost.

Metode

Od leta 1996 do 2007, je 4426 bolnikov doživela kurativno D2 želodca zaradi raka želodca na Fudan University Shanghai Cancer Center. Med 501 bolniki so ekspresijski nivoji p53, bcl-2, BAX, in c-myc so bile pregledane z imunohistokemijo. Napovednih vrednosti bioloških označevalcev in korelacija med biološke označevalce in drugih clinicopathological dejavniki so raziskovali.

Rezultati

je bilo 339 moških in 162 ženske s povprečno starostjo 57. odstotek pozitivnih izraz p53, bcl-2, BAX, in c-myc bilo 65%, 22%, 43% in 58%, v tem zaporedju. Obstaja močna korelacija med p53, BAX, in c-myc izražanja ( P
= 0,00). Ni bilo pomembno povezavo med bcl-2, in BAX izraz ( P
< 0,05). p53 izraz povezana z histološke ( P
= 0,01); bcl-2 izraz z bolezensko fazi ( P
= 0,00); BAX izražanje pri moških ( P
= 0,02), histološke razred ( P
= 0,01), tip BORRMANN ( P
= 0,01), lokacija tumorja ( P
= 0,00), bezgavko metastaze ( P
= 0,03), in patološko faza ( P
= 0,03); c-myc izraz s tipom BORRMANN ( P
= 0,00). bcl-2 izraz je povezan z dobro preživetje v univariantne analizo ( P
= 0,01). Multivariatna analiza je pokazala, da so bile bcl-2 izražanja in patološko oder kot neodvisni prognostičnih dejavnikov. So bile razlike v splošnih stopnjah preživetja 5 let po bcl-2 izražanja ali ni v fazi IIB ( P
= 0,03).

Zaključek

Izražanje bcl-2 je neodvisen napovedni dejavnik pri bolnikih z rakom želodca; to bi lahko bil kandidat za želodčne sistem raka počivališču

Navedba. Liu X, Cai H, Huang H, Long Z, Shi Y, Wang Y (2011) napovednih Pomen apoptoze, povezanih bioloških označevalcev v kitajski želodca bolnikih z rakom. PLoS ONE 6 (12): e29670. doi: 10,1371 /journal.pone.0029670

Urednik: Masaru Katoh, National Cancer Center, Japonska

Prejeto: 29. junij 2011; Sprejeto: 2. december 2011; Objavljeno: 28. december 2011

Copyright: © 2011 Liu et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Avtorji nimajo podpore ali sredstva za sporočanje

konkurenčni interesi:. avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

Čeprav se je incidenca raka želodca je bila bistveno zmanjšuje. že več desetletij, je bil še četrti najpogostejši rak in drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka [1], [2]. To je bilo zelo pomembno, da natančno napovedati tveganje za slabo prognozo, da bi povečali terapevtski učinek in bi čim bolj zmanjšali škodljive učinke pri zdravljenju bolnikov z rakom. Med prognostičnih dejavnikov, sedaj na voljo za raka na želodcu, je bila najbolj natančna in pomemben napovedni dejavnik oder UICC TNM. Kot posledica variabilnosti prognozo v isti stopnji raka želodca, je bilo nemogoče natančno napovedati prognozo po običajnih postopkih odrnih. Zato je bilo nujno poiskati druge posebne dejavnike za identifikacijo podskupine bolnikov z bolj agresivnim potek bolezni. V zadnjem času so nekatere študije pokazale, da tudi druge bolezenske dejavnike, kot je število pozitivnih bezgavk, prisotnost ekstrakapsularne prizadetostjo bezgavk in velikost tumorja imeli dodatno napovedno vrednost [3] - [5]. Glede na to, da so nekateri bioloških označevalcev, kot so onkogeni, tumor-zaviralnih genov, regulatorji celičnega cikla in popravljanja DNA geni, so bile povezane s tumorjem nastanku, rasti, invazije in metastaze, mnogi znanstveniki so namenjena iskanju novih prognostičnih dejavnikov z njimi molekularni markerji. Kljub temu, da so nekatere študije ocenili napovedni pomen markerjev, kot je p53, bcl-2, Bax, in c-myc v raka želodca, so bili rezultati kontroverzna [6] - [11]. Poleg tega so bile izvedene te prejšnje študije raziskati dodatno napovedno vrednost markerjev na 6. stopnji UICC TNM, da je nujno treba opredeliti odnos med temi nosilci in 7. stopnji UICC TNM. Končno ni bilo študije, vrednotenje izražanje teh molekularne prognostično pomembna pri bolnikih želodca z rakom na Kitajskem. Zato smo ocenili izražanje bioloških markerjev, kot p53, bcl-2, Bax, in c-myc v tej študiji.

p53 proteini so bili proizvodi tumor-supresorskih genov, ki so delovale z moduliranjem celične proliferacije z nadzorom G1 prijetje kontrolno točko na celičnega cikla [12], [13]. bcl-2 in BAX pripadala družini bcl-2, in ta je eden izmed najbolj pomembnih razredov apoptoze regulatornih molekul. Družina bcl-2 so bile razvrščene v dve poddružini: anti-apoptoze beljakovine (bcl-2, Bcl-XL, bcl-w, BFL-1, hvalil-1, in MCL-1) in pro-apoptosis proteini (BAX, bak , bcl-Xs, slabo, ponudba in HRK) [14]. Dokazano je, da BAX za bcl-2 lahko vplivajo na relativno občutljivost ali odpornost celic simuli [15] apoptotskih. c-myc protein je vrsta transkripcijskega faktorja. Predhodna raziskava je pokazala c-myc ekspresija je povezana z celično proliferacijo [16].

V tej študiji smo ocenili izražanje bioloških markerjev, kot p53, bcl-2, BAX, in c-myc, povezana svoj izraz clinicopathological lastnosti in ocenili njihovo napovedno vrednost.

materiali in metode

bolnikov

Med januarjem 1996 in decembrom 2007, 4426 bolnikov s histološko potrjena primarni želodca adenokarcinom doživela kurativno D2 želodca na Oddelku želodčnega raka in Soft Tissue sarkom v Fudan University Šanghaju Cancer Center. Od teh bolnikov je bilo izbranih 501 primerov, kot so bili njihovi vzorci imunohistokemično obarvali po operaciji z rutinsko histološko preiskavo. Podatki so bili pridobljeni iz operativnih in patoloških poročil pacientov in nadaljnji podatki so bili pridobljeni po telefonu, pošti in klinične baze podatkov ambulantno. Ta študija je obsegala 339 moških in 162 žensk, starih od stare od 22 do 82 let, povprečna starost je bila 57 let. Uprizoritev je bila izvedena v skladu z UICC TNM izvajalno klasifikacije za raka želodca (sedmi izdaja, 2010). Spremljanje vseh bolnikov je bila izvedena v skladu z našim standardnim protokolom (vsake tri mesece za vsaj 2 leti, vsakih šest mesecev v naslednjih 3 letih, in po 5 letih vsakih 12 mesecev za življenje). Postavke check-up vključeni fizični pregled, pregled tumor marker, ultrazvok, prsih slikanje, izračunan tomografsko skeniranje in endoskopsko preiskavo. Mediana spremljanja, ko je bil 44,6 meseca v času analize. Privoljenjem napisano je bilo pridobljeno iz vseh bolnikih, in ta študija je odobrila etični odbor Shanghai Cancer Center Fudan University. Raziskava je bila retrospektivna.

Imunohistokemijsko

p53, bcl-2, BAX, in c-myc so odkrile imunohistokemičnim metodo. Vsa primarna protitelesa in miška monoklonska protitelesa so bile kupljene od Dako (Hamburg. Nemčija). Imunohistokemijsko je opravila okrepiti z oznako sistema polimera (ELPS) metoda, s 10%,-parafin vgrajenih materialov formalin določen. Serijski 5 mikrometrov parafinske odseki so deparaffinised z ksilena in hidrirani s ehanol /deionizirano vodo. Odseki smo nato inkubirali z metanolom /0,3%, H _{2O 2 za 10 min in blokirano z nespecifično obarvanje blokiranje reagent. Po inkubaciji preko noči pri 4 ° C z anti-p53, bcl-2, BAX, in c-myc protitelo (razredčimo 1:100, 1:100, 1:100, 1:100 oz) so odseki obdelamo v skladu s standardom imunoperoksidazni metode z uporabo streptavidina biotin peroxidise kompleksne komplet (LSAB + Kit /HRP, Dako). Reakcija peroxidise smo nato razvili s diaminobenzidine (Dako). Negativne kontrole odseki podvržemo enakem postopku, razen da je prvo protitelo nadomesti s PBS. Ne pozitiven obarvanje opazili pri kontrolni skupini. Položaj obarvanja je pretežno v celični citoplazmi za BAX in c-myc, citoplazmo in cytomembrane za bcl-2, jedro, p53.}

Imunohistokemijsko sedaj

Vse rezine so bile ocenjene z dvema patologi brez vednosti klinični izid. Odstotek imunoreaktivnega celic in intenzivnosti obarvanje smo ocenili v vsakem vzorcu. Odstotek imunoreaktivnih celic smo ocenili na lestvici od 0 do 4: no obarvanje je dosegel kot 0, 1-10% celic, obarvanih dosegel kot 1, 11-50%, kot 2, 51-80% kot 3, in 81- 100% so 4. intenzivnosti barvanje bila ocenjena z 0 do 3: 0 je definirana kot negativni, 1, ko je šibka, 2, ko je umirila, in 3 tako močan, oz. Neobdelani podatki so bili preračunani na imunohistokemičnim točk (IHS) z množenjem količine in intenzivnosti rezultate. Ocena IHS od 9-12 je zdelo kot močan radioinkorporacijo (+++), 5-8 zmerna (++), 1-4 kot šibko (+) in 0, kot je negativna (-). V končni fazi so imeli primere, rezultat manj kot 1, so bile obravnavane kot negativno, ≥1 bil obravnavati kot pozitiven.

Statistična analiza

Povezava med clinicopathological dejavnikov in bioloških označevalcev je ocenil hi-kvadrat test. Petletno preživetje je bilo izračunano po metodi Kaplan-Meier, in razlike med krivuljami preživetja so bile pregledane s testom log-ranga. Vse pomembne spremenljivke opazili v univariatno analizo so bili vključeni v analizo multivariatno preživetja z uporabo Cox sorazmernih tveganj modela. Sprejeta Stopnja pomembnosti je P
< 0,05. Statistične analize in grafike so bile izvedene s pomočjo SPSS 13.0 statistični paket (SPSS, Inc., Chicago, IL).

Rezultati

Clinicopathological značilnosti

je bilo 339 moških in 162 ženske (2,09: 1), s povprečno starostjo 57 let. Tam je bilo 57 (11,4%), zgodnje želodca raka in 444 (88,6%), napredne želodčni rak. Glede na histološki tip, so bili v 9 (1,8%) bolnikih, ki so dobro diferencirana-tumorji, zmerno diferenciran v 164 (32,7%) bolnikov, in slabo diferencirane tumorje v preostalih 328 (65,5%) bolnikov. Glede na tip BORRMANN je bilo 57 (10,4%) tipa 0, 36 (7,2%) tip I, 15 (3,0%) tipa II, 371 (74,0%) tipa III, 22 (4,4%) tip IV. 501 bolnikov je imelo 159 (31,7%), tumorjev, ki se nahajajo v zgornji tretjini imelo 72 (14,4%) tumorje v srednjem tretji, 244 (48,7%) je imelo tumorje v spodnji tretjini želodca in 26 (5,2%) imeli tumorji zaseda dve tretjini ali več želodec. Bezgavka metastaze so opazili pri 356 bolnikih, stopnja metastaze je bila 71,1%. Porazdelitev patološkega fazi je bila naslednja: 35 (7,0%) bolnikov je pripadal oder IA, 52 (10,4%) IB, 60 (12,0%) IIA, 83 (16,5%) IIB, 88 (17,6%) IIIA, 83 ( 16,5%), IIIB, in 100 (20,0%) IIIC.

p53 izraz

p53 izraz je bil pozitiven v 64,9% vseh želodčnega tkiva raka. p53 obarvanje opazili v jedru celic karcinoma (slika 1). p53 izraz je bila povezana z BAX in c-myc (tabela 1). Dobro diferencirani histologijo korelaciji s p53 izražanja. Ni bilo nobene povezave s spol, starost, vrsto BORRMANN, lokacija tumorja, bezgavk metastaz in patološko stopnji (tabela 2).

bcl-2 izraz

bcl-2 je bil izraz pozitiven 22,2% vseh želodca tkiv rakom. bcl-2 obarvanje opazili v citoplazmi in cytomembrane karcinom celic (slika 1). bcl-2 izraz je bila povezana z BAX (tabela 1). Prišlo je korelacija z bolezensko stopnji, vendar nobene povezave s spolom, starostjo, histološki tip, vrsto BORRMANN, lokacija tumorja, bezgavkah metastaze, in (tabela 2).

BAX izražanja

Bax izražanja je bil pozitiven v 42,9% vseh želodčnega tkiva raka. BAX obarvanje opazili v citoplazmi celic karcinoma (slika 1). BAX izraz je bila povezana z p53, bcl-2, c-myc (tabela 1). Ženski spol, zmerno razlikujejo, BORRMANN II, zgornja tretjina lokacijo, in bezgavko metastaze v korelaciji s BAX izražanja. Kot povečala patološko stopnja, izraz BAX postala bolj pogosta. Ni bilo nobene povezave s starostjo (tabela 2).

c-myc izraz

c-myc je izraz pozitiven 58,1% vseh želodčnega tkiva raka. c-myc obarvanje opazili v citoplazmi celic karcinoma (slika 1). c-myc ekspresija je bila povezana z p53 in BAX (tabela 1). BORRMANN III povezana s c-myc izražanja. Ni bilo nobene povezave s spolom, starostjo, histološki tip, lokacija tumorja, bezgavk metastaz in patološko stopnji (tabela 2). Poleg tega je bilo surove podatke o clinicopathological funkcij in radioinkorporacijo ocen za 501 primerov raka želodca pokazala kot dodatno tabelo v formatu Excel (tabela S1).

Univariatna analiza

Pretirano vseh pet -Leto stopnja preživetja je bila 53,7% vseh 501 bolnikov. Petletno preživetje pri Bcl-2 pozitivnim in Bcl-2 negativnih bolnikov je bila 64,9% in 50,5% v tem zaporedju, in ta razlika je bila statistično signifikantna (sl. 2). Razen bcl-2 izražanja, pomembni napovedni dejavniki so bili: mesto tumorja, tip BORRMANN, status bezgavk in patološko oder. Tabela 3 pokazala rezultate na univariantne analiz za prognostičnih dejavnikov.

Multivariatna analiza

Multivariatna analiza preživetje, vključno z vsemi pomembnimi prognostičnih dejavnikov, navedenih v univariatno analizo, je bila izvedena za določitev neodvisnih napovednih dejavnikov za rakom želodca . Multivariatna analiza z uporabo Cox sorazmernih tveganj model, je pokazala, da so bile bcl-2 izražanja in patološko oder neodvisni napovedni dejavniki (preglednica 4).

Primerjava preživetja glede na biološke označevalce na isti stopnji

V skladu s 7. UICC TNM sistem odrov, je rak želodca razdeljen v 7 stopnjah: odrskih IA, oder IB faza IIA, IIB, IIIA, IIIB, IIIC. Opira na ekspresijo bcl-2 je bila vsaka faza razdeljena na bcl-2 pozitivnim in bcl-2 negativno skupino. So bile razlike preživetja nad-vse 5-letno med bcl-2 pozitivni in bcl-2 negativno skupine po fazi IIB ( P
= 0,003). Poleg tega smo ugotovili, da obstajajo pomembne razlike prevelike vseh 5-letno preživetje med bcl-2 pozitivno in bcl-2 negativno skupine po BORRMANN III ( P
= 0,002); no pomembne razlike glede na fazo II in faze III (slika 3).

Pogovor

je Identifikacija napovednih dejavnikov pri raku želodca bistvenega pomena za napovedovanje preživetje bolnikov in določitev optimalnih terapevtskih strategij. Številne študije so pokazale, da je bila globina invazije in bezgavkah metastaze najpomembnejši napovedni dejavniki pri raku želodca [17], [18]. Kot posledica variabilnosti prognoze znotraj istega patološkega stopnji raka želodca, je bilo veliko raziskav za posebne biološke markerje za identifikacijo bolnikov s slabšo prognozo [19] - [21]. Medtem pa so izraz p53, bcl-2, BAX, in c-myc znano za to, da v zvezi z tumorogenesis. Zato je bil cilj te študije, da razišče, ali se ti biološki označevalci lahko uporablja kot dodatna prognostičnih dejavnikov na tradicionalnem prizorišču TNM raka želodca. V tej študiji so izraz teh proteinov raziskovali v 501 primerih odstranjenimi primarnih želodčnega raka pri ljudeh.

imunohistokemičnim stopnje izraz za p53, bcl-2, BAX, in c-myc bilo 64,9%, 22,2% je bilo 42,9%, 58,1%, v tem zaporedju, in ti rezultati v skladu s stopnjami izražanja drugih študij, o katerih so poročali kot 17-84.1% 12.7-67%, 42.4-58.0%, 23.5-72.9% oz [9], [12 ], [22] - [26]. p53 je igral pomembno vlogo v apoptozi. V rakom pri ljudeh je najbolj pogosto spreminjajo. Divjega tipa protein p53 inducira aretacijo rasti v G1 /S fazi celičnega cikla v odgovor na poškodbo DNA, tako da se prepreči proliferacijo celic. Izključen tipa p53 izgubila funkcijo, in pustimo celice s poškodovano DNK razmnožujejo. V tej študiji so povratne korelacija med p53 in histološki tip našel, ki je pokazala, da bi deregulacija p53 posledico nenadzorovanega širjenja raka želodca. To je bilo v skladu s prejšnjo raziskavo [22]. To je bilo polemik za prognostično vrednost p53, so nekatere študije so poročali, da je p53 povezana s slabo prognozo [27], [28], drugi pa so poročali, da p53 nima vpliv na napovedi [29], [30]. Naša raziskava je pokazala, da je p53 ni bila povezana z prognozo raka želodca. BAX deloval kot pospeševalec apoptoze na celični življenja. Prejšnja študija predlaga, da je razmerje med BAX za bcl-2, igral ključno vlogo pri urejanju nagnjenost k apoptoze [31]. V tej študiji je bila izraz BAX povezana s tisto BCL-2 in BAX čezmernim pomembno povezana z nekaterimi clinicopathological funkcije, kot so spol, histološki tip, vrsto BORRMANN, lokacije tumorja in bezgavk metastaz. Ugotovili smo, da so bolniki s pozitivnim izražanja BAX nagnjeni k predstavi limfnega vozla metastaze in BAX ni bil neodvisen napovedni dejavnik. Ta rezultat je drugačen od predhodnih raziskavah. Anagnostopoulos sod. [24] je poročal, da je bil negativen BAX izraz v želodcu, povezane z bezgavkah metastaz in slabo klinično prognozo. Razlogi za nasprotujočimi si rezultati niso bili jasni. Je bilo mogoče, da so genske razlike med zahodnimi ljudi in vzhodnih ljudi, prispevali k temu. Proto-onkogena c-myc je bil mojster regulator celično proliferacijo in preobrazbe skozi obe transkripcijskih in nontranscriptional sredstvi, in je bil pogosto deregulacije na področju človekovih malignih bolezni. Ninomiya sod. [26] so poročali, da presežek reaktivnost na c-myc proizvoda invazivnih rakov, pogostejše kot v lokaliziranih raka, in c-myc proizvodnja izraz v tkivu raka korelaciji tudi s peritonealno razširjanje in bolniki s c-myc pozitivnega izražanja imeli slabšo prognozo kot tistih s c-myc negativno izražanja. V tej raziskavi, nismo našli nobenega odnosa med c-myc izražanja in invazivne vedenje in razen vrste BORRMANN prognozo. Ugotovili smo, da je c-myc izraz je bolj povezana z BORRMANN III.

bcl-2 gen je bil prvič opisan kot onkogen v folikularnega limfoma. To je dobro znano, da zavirajo apoptozo [32], vendar so nekatere študije so poročali, da čezmernim bcl-2 zatreti celično proliferacijo in je bila povezana z manj agresivnim biološkega vedenja [33], [34]. bcl-2, so poročali v različnih človeških epitelijskih malignih tumorjev, vključno karcinoma želodca. Vendar natančna vloga in klinični pomen bcl-2 še vedno treba pojasniti. Predhodne študije so pokazale, da je bila ekspresija Bcl-2, povezan z boljšo prognozo v ne-malih celic pljučnega raka in raka želodca [35], [36]. Pietenpol sod. [37] poročal, da čezmernim bcl-2 inhibira rast več trdnih tumorskih celic. Saegusa sod. [33] je pokazala, da je bila večina izraženost bcl 2-+ rakavih celic v nonproliferative stanju, povprečna izraz Ki-67 indeksa označevanja in apoptoze indeksa označevanja v BCL-2 + žarišč so bistveno nižje kot v bcl-2- žarišča. Aizawa sod. [36] pokazala, da je bila ekspresija Bcl-2, pri napredovalem raku želodca povezana z nižjim apoptotske indeksa in boljšo prognozo. Vse te študije kažejo, da je bcl-2, ne samo zaviral apoptozo, ampak tudi zatreti celične proliferacije dejavnost. V tej raziskavi smo značilno prvič izražanje Bcl 2 beljakovine v kitajskih bolnikih z rakom želodca. Naši podatki so pokazali, da je bcl-2 močno povezana z boljšim preživetjem.

Identifikacija napovednih dejavnikov pri raku želodca je bistvenega pomena za napovedovanje preživetje bolnikov in določitev optimalnih terapevtskih strategij. Bilo je dobro znano, da je bila globina invazije in prisotnosti ali odsotnosti bezgavkah metastaze najpomembnejši napovedni dejavniki pri raku želodca. Vendar pa je bilo nemogoče natančno napovedati prognozo po običajnih postopkih odrnih kot posledica variabilnosti prognozo v isti stopnji raka želodca. Liu et al. [5] je pokazala, da so bile razlike med skupino tumorja večji velikosti in tumorjev skupini majhnih velikosti glede na stadij IIIB in IV. Zato je bilo nujno poiskati druge posebne dejavnike za identifikacijo podskupine bolnikov z bolj agresivnim potek bolezni, zlasti v okviru 7. izdajah izvajalno sistema UICC TNM. V skladu s 7. klasifikaciji UICC TNM, je bila vsaka faza raka želodca nadalje delijo na bcl-2 pozitivno in bcl-2 negativno skupino. Naši podatki so pokazali, da je izraz bcl-2 močno vpliva prognozo v fazi IIB. Rezultati so pokazali, da bi lahko izraz bcl-2 zagotovi dodatne napovedni informacije pri bolnikih z rakom želodca.

Nekateri omejitve te študije je treba priznati. Prvič, status Helicobacter pylori ni bila opisana. Kot ključni rakotvorna raka želodca, lahko Helicobacter pylori vezana na nekaterih drugih parametrov, kot bcl-2. Drugič, odnos med tumorja ponovitve in bcl-2 ni bil raziskan.

Na koncu, lahko izraz bcl-2 služi kot en uporaben kazalnik za napovedovanje prognozo bolnikov z rakom želodca. Zato je morda kandidat za sistem počivališču poleg običajnih dejavnikov.

Podpora Informacije
Tabela S1. Podatki
Surove o clinicopathological funkcij in radioinkorporacijo ocen za 501 primerov raka želodca
doi:. 10,1371 /journal.pone.0029670.s001
(XLS)

• Plos ONE: Stathmin1 Igra onkogeni Vloga in da je cilj MicroRNA-223 v želodca Cancer
• Plos ONE: Gene Expression Podpis Analiza opredeljuje vorinostat kot kandidatka terapijo za Rak želodca