PLOS ONE: Aberrant Expression CCR4 est impliqué dans l'invasion tumorale des ganglions lymphatiques-Negative gastrique humaine Cancer

Résumé

chimiotaxie cellulaire est la fonction la plus connue des récepteurs de chimiokines qui sont étroitement liés à la métastase de la tumeur. En fait, l'expression positive de récepteurs de chimiokines pourrait également être identifié, même chez certains patients sans tumeurs métastatiques, tandis que la pertinence clinique de ces données n'a pas été entièrement mis en place. Nos études ont été conçues pour clarifier les profils d'expression des CCR4 et d'explorer son rôle potentiel dans histologiquement ganglionnaire (pN0) cancer gastrique (GC). Immunohistochimie (IHC) ou immunohistofluorescence (IHF) l'analyse a été réalisée sur des échantillons obtenus à partir de 108 patients avec pN0 GC. Nous avons constaté que la CCR4 est aberrante surexprimés tissus inpN0 GC, avec différents motifs d'expression sur les cellules tumorales et étant associée à stade T ( P
= 0,002). Le matrigel in vitro
invasion essai in a montré que la surexpression de CCR4 dans des lignées cellulaires GC a considérablement amélioré la capacité invasive de ces cellules. Les résultats en temps réel à partir de la RT-PCR et gelatinzymography ont montré une augmentation significative de la métalloprotéinase matricielle (MMP) -9 production induite par l'expression forcée de CCR4 dans les lignées cellulaires du GC. Nos données suggèrent que l'expression de CCR4 aberrante est impliquée dans l'invasion tumorale de pN0 GC et, en théorie, les antagonistes de CCR4 pourrait être candidats utiles pour contrôler les événements précoces dans la progression tumorale

Citation:. Yang Y, Du L, Yang X Qu A, Zhang X, Zhou C, et al. (2015) Aberrant Expression CCR4 est impliqué dans l'invasion tumorale des ganglions lymphatiques négatif cancer gastrique humain. PLoS ONE 10 (3): e0120059. doi: 10.1371 /journal.pone.0120059

Academic Editor: Chih-Hsin Tang, China Medical University, TAIWAN

Reçu: Septembre 29, 2014; Accepté 3 Février 2015; Publié: 19 Mars, 2015

Droit d'auteur: © 2015 Yang et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Données disponibles: Les auteurs confirment que leurs données sont dans le manuscrit et son fichier en cours d'information à l'appui

financement:. Cette étude a été soutenue par le national Natural science Foundation de Chine (Grant n ° 81271916 et 81301506), le Fonds de recherche pour le programme de doctorat de Enseignement supérieur de la Chine (n ° 20120131110055), Fondation de l'innovation indépendante de l'Université du Shandong (IIFSDU, 2012TS174), le projet de développement technologique Shandong (STDP, 2013GSF11859), la Fondation des sciences naturelles du Shandong (Grant No. ZR2013HM104) et la clé nationale clinique Fondation Spécialités médicales

intérêts concurrents:. Les auteurs ont déclaré qu'il n'y a pas des intérêts divergents existent

introduction

Comme pour la plupart des cancers, le cancer gastrique (GC) est un très. une tumeur maligne agressive qui tend à envahir les tissus environnants et métastaser à des organes éloignés. Bien que les patients atteints de cancer gastrique ganglionnaire ont de meilleurs résultats que ceux qui ont des métastases ganglionnaires [1, 2], dont certains souffraient encore de récidives locales ou des métastases à distance après résection curative [3-5]. L'identification des facteurs efficaces ou des molécules clés associant à la progression de la maladie chez les patients atteints de cancer gastrique ganglionnaire par étapes est nécessaire, étant donné que ces patients pourraient bénéficier de traitements adjuvants.

chimiotaxie joue un rôle clé dans la métastase de la tumeur, de diriger la motilité les cellules métastatiques à travers des gradients de chemoattractants. En particulier, les récepteurs de chimiokines médient les métastases organes spécifiques de tumeurs par interaction avec les chimiokines correspondant aux organes cibles [6]. les cellules cancéreuses gastriques peuvent exprimer divers récepteurs de chimiokines, tels que récepteurs de chimiokines 4 (CXCR4) et le récepteur de chimiokine 7 (CCR7) et co-opt ces molécules de métastases [7-12]. D'autres rôles de récepteurs de chimiokines dans la progression du cancer, sauf pour la chimiotaxie ont rarement été découvert. CCR4, un récepteur de type chimiokine C-C, a été précédemment mis l'accent sur sa fonction biologique dans immunopathogenèse des tumeurs hématologiques [13]. À ce jour, relativement peu d'attention a été accordée au rôle de CCR4 dans la promotion de la métastase de certaines tumeurs solides, dont le cancer gastrique [14-17]. Notre groupe a montré que les glucocorticoïdes __gVirt_NP_NN_NNPS<__ lymphocytaires riches ont tendance à être plus souvent positif pour CCR4, et a trouvé un nouveau rôle de CCR4 dans l'immunosuppression induite par la tumeur [18], indiquant les différents profils d'expression de CCR4 dans les tissus du GC et des rôles multifonctionnels de cette molécule dans la progression du GC.

Il est bien connu que l'invasion est la première étape menant à des métastases cancéreuses. Preuves ont montré que certains récepteurs de chimiokines, tels que CXCR4 [19] et CCR7 [20], de promouvoir la cellule B invasion des cellules de leucémie lymphoïde chronique à travers une régulation de la MMP-9. Récemment, Yu et al. a montré que le CXCR4 pourrait favoriser la migration et l'invasion cellulaire par induction de l'expression de MMP-9 et MMP-13 dans le carcinome à cellules squameuses buccal [21]. Li et ses collègues ont constaté que CCR7 a été impliqué dans l'invasion du cancer du côlon humain par l'intermédiaire d'une régulation positive de MMP-9 [22]. On ne sait pas, cependant, si CCR4 pourrait aussi favoriser l'invasion des cellules cancéreuses.

Compte tenu de la large distribution des récepteurs de chimiokines au sein des tumeurs ETLEURS rôles potentiels dans l'invasion tumorale et les métastases, nous avons supposé que pN0 patients atteints de cancer gastrique transportant certaines chimiokines récepteurs peuvent être plus susceptibles d'éprouver la progression. Pour tester notre hypothèse, nous avons étudié les profils d'expression de CCR4 dans les cellules cancéreuses gastriques des patients pN0 et son rôle dans l'estomac invasion des cellules cancéreuses.

Matériel et méthodes

Patients et spécimens

des échantillons de tissus ont été obtenus à partir de 108 patients (75 hommes et 33 femmes, âgés de 35-71 ans, âge moyen 62 ans) atteints de cancer gastrique pN0 subissant une résection curative de la tumeur primaire à l'hôpital Qilu de l'Université du Shandong (Jinan, Chine). Nous avons utilisé ci-dessus apparié tissus de l'estomac normaux adjacents et les tissus de 56 patients gastriques de dysplasie (36 mâles et 20 femelles, âgés de 35-68 ans, âge moyen 48 ans) en tant que témoins. Tous les diagnostics histopathologiques et classifications malignes ont été déterminées par des pathologistes supérieurs au moment du diagnostic, selon l'Organisation mondiale de la Santé Classification histologique internationale des tumeurs [23], et la mise en scène pathologique post-opératoire a été déterminée selon l'International Cancer Union Against (UICC) [24 ]. L'étude a été approuvée par le Comité d'éthique de l'hôpital Qilu, et le consentement éclairé de tous les patients a également été obtenu.

immunohistochimie et immunohistofluorescence

IHC ou IHF a été réalisée sur des coupes en paraffine en utilisant des anticorps contre l'homme CCR4 (LS-A351; LifeSpanBioSciences, Seattle, WA, USA) et Anti-pan Cytokeratin (CK) anticorps (ab80826; Abcam, Cambridge, MA, USA), en suivant les instructions fournies par chaque fabricant. anticorps fluorescents comprennent des anticorps de chèvre anti-lapin TRITC-conjugué (E031320; Amyjet Scientific, Inc. Wuhan, Chine), de chèvre anti-souris des anticorps conjugués au FITC (E0312400; Amyjet Scientific, Inc. Wuhan, Chine). Les échantillons ont été visualisées et observées sous un microscope à fluorescence (IX81, Olympus, Tokyo, Japon), et les résultats IHC ont été analysés comme indiqué précédemment [18]

culture
Cell

La gastrique humaine. des lignées cellulaires de cancer SGC-7901 et BGC-823 ont été achetés de la collection Culture de l'Académie chinoise des sciences (Shanghai, Chine) et maintenu dans RPMI-1640 (Hyclone, Logan, UT, USA) additionné de 10% de FBS (Gibco, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) à 37 ℃ dans une atmosphère humidifiée de 5% de CO _2.

Transient sur-expression de CCR4 dans SGC-7901 et BGC-823 cellules

transitoirement transfection du plasmide EGFP-CCR4 (CCR4) ou un vecteur d'expression de EGFP (MOCK) dans des lignées cellulaires gastriques a été effectuée en utilisant Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) tel que rapporté précédemment [18]. Et les efficacités de transfection ont été déterminées par un microscope à fluorescence, en temps réel, la réaction en chaîne par transcription inverse-polymérase (RT-PCR) et la cytométrie de flux (FCM), respectivement.

Quantification de l'ARNm par RT-PCR et en temps réel RT -PCR

l'ARN total a été isolé à partir de cellules, en utilisant le réactif de TRIzol (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) et inverser les réactions de la transcriptase ont été réalisées avec le kit selon le protocole du fabricant (Fermentas, St. Leon-Rot, Allemagne ). Pour la RT-PCR, les amorces et les conditions de PCR pour l'amplification de CCR4 ont été utilisés comme décrit précédemment [25]. Et glycéraldéhyde-3-phosphate déshydrogénase humaine (GAPDH) (amorce sens, 5'-GGTGGTCTC-CTCTGACTTCAACAG-3 '; amorce inverse, 5'-GTTGTTGTAGCCA-AATTCGTTGT-3') était usedas une norme interne. Pour le temps réel RT-PCR, des amorces pour CCR4, MMP-9 et de GAPDH et les conditions d'amplification ont été utilisés comme rapporté précédemment [18, 25, 26].

FCM analyse

cellules ont été récoltées incube avec la phycoérythrine (PE) conjugué à un anticorps anti-CCR4 monoclonal (FAB1567P, R & D Systems) ou avec une IgG2b-PE témoin isotype de souris (IC0041P, R & D Systems) selon les instructions du fabricant. analyse FCM a ensuite été réalisée à l'aide d'un FACSCalibur (Becton Dickinson, Heidelberg, Allemagne) pour analyser l'expression de CCR4 sur les cellules SGC-7901 et BGC-823, respectivement.

Matrigel essais d'invasion

Le vitro
invasion test in a été effectuée en utilisant les inserts de culture cellulaire contenant 24 membranes de 8 um (BD Biosciences, San Jose, CA). Chaque membrane a été revêtue de Matrigel (30 ug, Becton Dickinson, San Jose, CA) et mis à incuber pendant 30 min. Ensuite, 0,2 ml transfectées ou des cellules GC parentales ont été remises en suspension dans exempt de sérum RPMI 1640 à une concentration de 1,5 x 10 ^{5 /ml et placé dans la chambre supérieure, et 0,6 milieu contenant ml de RPMI-1640 10% de FBS était ajouté à la chambre basolatérale. Après 24 h d'incubation à 37 ℃ avec 5% de CO _{2, les cellules ont été fixées et colorées avec 0,2% d'éosine Y. Le nombre de cellules qui avaient migré vers la partie basale de la membrane a été quantifiée sous un microscope optique à 200 × grossissement.}}

la viabilité des cellules test

les cellules ont été ensemencées dans des plaques à 96 puits à 5 x 10 ^{3 cellules /puits et cultivées pour les points de temps indiqués. La viabilité cellulaire a été évaluée en utilisant CCK8 (Beyotime, Haimen, Chine) suivant les instructions du fabricant. L'absorbance a été mesurée à 450 nm de longueur d'onde. Chaque point de temps a été répété dans trois puits et l'essai a été independentlyperformed trois fois.}

Gélatine zymographie

Les surnageants ont été collectés par centrifugation après 24 h post-transfection et résolu sur un gel SDS-PAGE contenant 0,1% (p /v) de gélatine. Après électrophorèse, les protéines ont été renaturées par lavage du gel deux fois pendant 40 minutes dans 2,5% de Triton X-100, suivie d'une incubation pendant 18 heures à 37 ° C dans un mélange contenant du Tris-HCl 50 mM (pH 7,6), CaCl _{2 5mMm et NaCl 200 mM. Ensuite, le gel a été rincé brièvement dans de l'eau distillée et colorés avec 0,25% de Coomassie /45% de méthanol /10% d'acide acétique bleu brillant R250 pendant 4 heures, puis décoloré dans 45% de methanol, d'acide acétique à 8%. Gels ont ensuite été analysés et photographiés avec des systèmes Kodark.}

L'analyse statistique

Les données provenant d'au moins trois expériences indépendantes ont été analysés et exprimés par la moyenne ± écart-type. La relation entre l'expression de CCR4 et T-étape a été analysée par le test du chi carré. D'autres données ont été analysées par le test t ou étudiant ANOVA le cas échéant. A P
valeur inférieure à 0,05 a été considérée comme statistiquement significative. Toutes les analyses ont été effectuées à l'aide de logiciels statistiques (versions 13.0, SPSS, Inc., Chicago, IL).

Résultats

Over-expression de CCR4 avec des motifs d'expression distincts dans le tissu de cancer gastrique pN0

expression de CCR4 dans les cellules cancéreuses a été détecté à des niveaux variables. Parmi 108 tissus de paraffine, 29 cas (26,9%) ont présenté une expression négative (-), 30 cas (27,8%) ont présenté une expression faible (+), 35 cas (32,4%) ont présenté une expression modérée (++), et 14 cas (13,0%) ont montré une forte expression (+++) (Fig. 1A-D). Tous les tissus normaux adjacents de l'estomac ont présenté une coloration négative pour CCR4, et seulement 2 (3,6%) cas de dysplasie gastrique ont montré une faible expression de CCR4 de membrane (Fig. 1E et F).

Les deux membranes et d'expression cytoplasme de CCR4 étaient observée le plus souvent dans les nids de tumeurs bien différenciées de type intestinal, tandis que les cellules moins différenciées ont tendance à afficher un motif cytoplasmique d'expression de CCR4 dans le type diffus cancer gastrique (Fig. 2). Un phénomène intéressant est que les cellules avec un potentiel très envahissante, comme l'invasion musculaire, la pénétration invasion vasculaire et nerveux, affichent également un modèle d'expression de CCR4 cytoplasmique (Fig. 3).

CCR4 sur-expression favorise cellule cancer gastrique invasion

Sur les sections typiques, il a également été montré que le niveau de CCR4 d'expression tend à augmenter avec la profondeur de l'invasion tumorale (Fig. 3). L'analyse IHC a clairement montré que la surexpression de CCR4 était associée positivement à l'étape de T ( P
= 0,002), l'invasion vasculaire ( P
= 0,001) et de l'invasion périneural (P = 0,002) en pN0 GC (tableau 1).

Nous avons signalé que les taux de protéine CCR4 étaient très faibles dans certaines lignées de cellules gastriques [18], et donc d'obtenir de nouvelles informations dans l'invasion tumorale CCR4-médiée, sur- l'expression de CCR4 dans des lignées de cellules gastriques a été effectuée comme nous l'avons décrit précédemment [18]. hautes efficacités de transfection ont été déterminées en temps réel, RT-PCR, la FCM et la microscopie de fluorescence, respectivement (fig. 4A-C). EGFP a été exprimé dans le noyau, le cytoplasme et de la membrane des cellules de contrôle des vecteurs, qui ont été transfectées avec le plasmide FICTIF; et la protéine de fusion fluorescente était localisée sur la membrane et le cytoplasme des cellules transfectées avec le plasmide CCR4. Matrigel essai d'invasion a montré que le nombre de cellules de cancer gastrique EGFP-CCR4 transfectée passant à travers le Matrigel ont été significativement plus élevées que celles des cellules transfectées de manière factice cancer gastrique (Fig. 4D). Le dosage de la CCK8 indiqué que la surexpression de CCR4 n'a eu aucun effet sur l'estomac prolifération des cellules cancéreuses (S1 figure).

CCR4 régulé MMP-9 production dans des cellules de cancer gastrique

Pour tester les éventuels mécanismes sous-jacents l'invasion tumorale CCR4-médiée, nous avons évalué l'effet de CCR4 sur MMP-9 expression et l'activité. en temps réel une analyse par RT-PCR (Fig. 5A) a montré que les cellules cancéreuses gastriques EGFP-CCR4 transfectées ont exprimé des niveaux élevés de MMP-9 par rapport à l'ARNm des cellules transfectées de manière factice à 24 h après la transfection. Analyse gelatin zymographie (Fig. 5B) a montré que la sécrétion et l'activité de MMP-9 étaient significativement régulée à la hausse dans les surnageants de cellules EGFP-CCR4 transfectées par rapport aux cellules transfectées de manière factice à 48 heures après la transfection, avec ou sans l'addition de CCL22 exogène.

Discussion

Les interactions entre les récepteurs de chimiokine de cellules cancéreuses et leurs chimiokines correspondants représentent des étapes cruciales dans les métastases tumorales. Cependant, les résultats de notre actuelle studyshowed qu'un certain nombre de patients atteints de cancer gastrique sans métastases lymphatiques étaient également positifs pour CCR4 coloration. Contrairement à la plupart des études antérieures sur les fonctions de la chimiotaxie médiée par certains récepteurs de chimiokines, cette recherche a révélé un roman, le comportement invasif de CCR4.

récepteurs chimiokines appartiennent à une famille de sept-transmembranaires G-récepteurs couplés aux protéines qui sont membrane les protéines et les conséquences fonctionnelles de l'activité des récepteurs de chimiokines sont généralement considérés dépendre de la stimulation par des ligands extracellulaires [27]. Cependant, les échantillons histologiques de la présente étude a montré qu'il y avait des motifs d'expression distincts pour CCR4. CCR4 dans les cellules non-néoplasiques a montré une coloration négative, avec seulement une coloration membranaire faible dans les lésions de dysplasie gastrique. Membrane et d'expression cytoplasmique de CCR4 plus fréquemment apparu dans modéré à des nids de tumeurs bien différenciées, alors que l'expression dans des cellules moins différenciées ont tendance à se limiter principalement dans le cytoplasme. Et plus curieusement, comme indiqué sur les sections typiques, les cellules tumorales présentant des capacités invasives élevées, tels que l'invasion musculaire, la pénétration invasion vasculaire et nerveuse, souvent montré une expression cytoplasmique accrue de CCR4. Nos données indiquent un lien étroit entre modèle d'expression de CCR4 cytoplasmique et les comportements agressifs de cellules de cancer gastrique. Cette découverte est contraire à l'hypothèse communément admise que le domaine extracellulaire d'un récepteur de chimiokine est nécessairement requise dans les métastases tumorales par l'interaction avec son ligand. Des phénomènes similaires ont été observés avec le récepteur de chimiokine CXCR4, dont la localisation nucléaire a été associée à la progression de diverses tumeurs [28-30]. Ces données indictate que les cellules de cancer de l'estomac peuvent envahir les tissus voisins par l'intermédiaire CCR4 de manière indépendante du ligand. L'autre hypothèse est que l'internalisation CCR4 provoquée par son ligand peut représenter un mécanisme qui a évolué dans le motif d'expression de CCR4 cytoplasmique. CCL22, le ligand CCR4 produit par les tissus de cancer gastrique humain [31], est également connu de causeCCR4 intériorisation de membrane cytoplasmique [32, 33], ce qui suggère une coloration cytoplasmique pourrait montrer la signalisation activée suivant CCR4 CCL22 ligature. D'autres études sont nécessaires pour révéler les mécanismes exacts qui sous-tendent ces tendances anormales de l'expression du récepteur de chimiokine impliqués dans la progression tumorale. En outre, l'expression lente intensification de CCR4 dans les tissus précancéreux, bien que statistiquement non significative plus élevée que dans les tissus normaux tumeur adjacente, a suggéré que CCR4 pourrait également participer aux étapes prénéoplasiques du développement tumoral précoce.

Dans notre précédente étude, nous avons constaté que CCR4 était surexprimé dans les tissus du GC, mais on n'a pas trouvé de différences significatives entre les patients avec et sans métastase ganglionnaire [18]. Par conséquent, nous avons supposé que les récepteurs de chimiokines pourraient également jouer un rôle important dans le développement du cancer des patients pN0. Dans la présente étude, nos résultats ont montré une corrélation positive entre l'expression de CCR4 et T-étape, qui étaient en accord avec nos résultats d'immunohistochimie que l'expression de CCR4 tendait à augmenter la profondeur de l'invasion tumorale a progressé. L'effet de CCR4 sur gastrique invasion des cellules cancéreuses a été partiellement confirmée par des dosages transwell d'invasion cellulaire. Ces essais ont été effectués dans des conditions où l'on n'a pas ajouté le ligand du récepteur CCR4 exogène. Il est possible qu'il peut exister des mécanismes différents pour réguler l'invasion des cellules tumorales à médiation par CCR4 de manière indépendante du ligand, conformément au phénomène de motif cytoplasmique de CCR4, qui a été lié au comportement hautement invasif des cellules tumorales dans le tissu GC. Nous avons confirmé que la sur-expression de CCR4 a été étroitement associée à un plus haut degré d'invasivité des tumeurs, ce qui indique que CCR4 surexpression pourrait conférer un potentiel métastatique dans les cellules de GC et de promouvoir davantage la progression tumorale. Nous avons également émis l'hypothèse que les ligands de CCR4 autocrine ont également été impliqués dans la motilité cellulaire in vitro
. Les concentrations de CCL22 dans les lignées cellulaires surnageant de culture transfectées GC avec ou sans CCR4 étaient très faibles comme nous l'avons évalué (données non présentées). Cependant, la possibilité ne pouvait être exclu que la production autocrine ou paracrine de CCL22 pourrait contribuer à l'invasion de la tumeur via CCL22 /axe CCR4 in vivo
. CCL17 et CCL22, les ligands d'affinité CCR4 élevé, sont produits par GC et d'autres tissus cancéreux. En particulier, CCL22, qui est produite soit par des cellules cancéreuses ou des macrophages associés à une tumeur, a été rapportée pour être impliquée dans les métastases de certains cancers [15-17]. Ceci suggère une autocrine /paracrine possible impliquant CCL22 et CCR4 entre différents types de cellules.

MMP-2 et MMP-9 sont les MMP les plus concernés et bien caractérisés avec une forte activité protéolytique dans la matrice extracellulaire (ECM). La cohérence entre les tests en temps réel RT-PCR et des expériences de gélatine zymographie a clairement démontré que la surexpression de CCR4 dans les cellules de cancer gastrique améliorée de manière significative l'expression de MMP-9 et l'activité. Ces expériences ont également souligné et indiqué son rôle réel dans l'invasion tumorale sous certaines conditions, avec ou sans stimulation par CCL22 exogène. On croit que la matrice MMP-9 dégrade le collagène de type IV, qui est un constituant majeur de la membrane basale et est lié à l'invasion des cellules cancéreuses et les métastases chez des patients atteints d'un cancer gastrique [34]. Ici, nous avons fourni de nouveaux indices sur le mécanisme sous-jacent qui CCR4 pourrait favoriser gastrique invasion des cellules cancéreuses par surexpression de MMP-9. Des observations similaires ont également été réalisés en ce qui concerne l'invasion de la tumeur par l'intermédiaire des récepteurs de chimiokines tels que CXCR4 et CCR7 [19, 20, 22]. Et MMP-2, dont la structure était similaire à la MMP-9, a également été rapportée pour être associée à un cancer gastrique [35]. Cependant, nous avons trouvé la MMP-9, mais pas MMP-2, était une molécule clé impliquée dans l'invasion tumorale CCR4 médiation, qui peut être dû à différents co-régulateurs qui interagissent avec CCR4 dans divers microenvironnements. Bien que l'expression de MMP-2 dans les cellules cancéreuses gastriques CCR4 transfectées a également semblé être plus élevée que dans les cellules transfectées de manière factice, la différence était statistiquement significative (données non présentées). test de viabilité cellulaire a montré que la surexpression de CCR4 n'a eu aucun effet sur la croissance des cellules du cancer de l'estomac in vitro
, ce qui était cohérent avec des études antérieures qui ont montré les ligands CCR4 n'a pas pu induire la prolifération cellulaire [14], ce qui évite éventuellement qui peuvent influer sur l'indice d'invasion ou MMP-9 montant. Ces essais ont été réalisés avec ou sans CCL22 exogène, avec des différences significatives dans la MMP-9 expression entre CCR4 et cellules transfectées MOCK. Nous spéculons les mécanismes possibles de renforcement de la MMP-9 expression par CCR4-surexpression pourrait être partiellement due à l'expression autocrine ou paracrine de CCL22 in vivo
. Encore d'autres MMP qui pourraient être impliqués dans ce processus et les voies de signalisation précises restaient à être étudiées plus à l'avenir.

En conclusion, nous avons signalé pour la première fois que CCR4 était aberrantly surexprimé dans le cancer gastrique pN0 et pourrait favoriser l'invasion tumorale. En outre, nos données indiquent que induite CCR4-MMP-9 production pourrait au moins partiellement sous-tendent le nouveau mécanisme d'invasion tumorale CCR4-médiée. Ainsi, les antagonistes de CCR4 pourraient être candidats utiles pour contrôler les événements précoces dans la progression tumorale.

Informations complémentaires
S1 Fig. La surexpression de CCR4 n'a eu aucun effet sur la croissance des cellules du cancer gastrique in vitro
.
Après transfection avec CCR4 ou plasmide MOCK et la stimulation avec ou sans CCL22 exogène, les cellules SGC-7901 et BGC-823 ont été ensemencés dans plaque de 96 puits. La viabilité des cellules a été évaluée par un test de CCK8 à des points de temps indiqués
doi:. 10.1371 /journal.pone.0120059.s001
(TIF)

• PLOS ONE: surexpression de eucaryote Traduction Initiation Factor 5A2 (EIF5A2) corrèle avec cellule Agressivité and Poor survie dans le cancer gastrique
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