PLoS ONE: Afwijkende CCR4 Expression is betrokken bij Tumor Invasie van lymfkliertest-Negative Human Gastric Cancer

Abstract

Cellular chemotaxis is de meest bekende functie van chemokine-receptoren die nauw verbonden zijn met de tumor metastase. In feite zou positieve uitdrukking van chemokine receptoren ook worden vermeld, bij sommige patiënten zonder metastatische tumoren, terwijl de klinische relevantie van deze gegevens niet nauwkeurig bepaald. Onze studies werden ontworpen om de CCR4 expressie profielen te verduidelijken en de mogelijke rol in histologisch kliernegatieve (pN0) maagkanker (GC) te verkennen. Immunohistochemie (IHC) of immunohistofluorescence analyse (IHF) werd uitgevoerd op monsters afkomstig van 108 patiënten met pN0 GC. We vonden dat CCR4 was afwijkend tot overexpressie gebracht inpN0 GC weefsels, met verschillende expressie patronen op tumorcellen en wordt geassocieerd met T-stadium ( P
= 0,002). De Matrigel in vitro
invasie assay bleek dat overexpressie van CCR4 GC cellijnen aanzienlijk verbeterd het invasieve vermogen van deze cellen. Resultaten van real-time RT-PCR en gelatinzymography toonden een significante stijging van matrix metalloproteïnase (MMP) -9 productie geïnduceerd door geforceerde expressie van CCR4 GC cellijnen. Onze gegevens suggereren dat de afwijkende CCR4 expressie betrokken is bij tumorinvasie van pN0 GC en, mogelijkerwijs, antagonisten van CCR4 zou nuttig kandidaten voor het regelen vroege gebeurtenissen bij tumorprogressie

Citation:. Yang Y, Du L, Yang X, Qu A, Zhang X, Zhou C, et al. (2015) Afwijkende CCR4 Expression is betrokken bij Tumor Invasie van lymfkliertest-Negative Human maagkanker. PLoS ONE 10 (3): e0120059. doi: 10.1371 /journal.pone.0120059

Academic Editor: Chih-Hsin Tang, China Medical University, TAIWAN

Ontvangen: 29 september 2014; Aanvaard: 3 februari 2015; Gepubliceerd: 19 maart 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. Dit is een open toegang Artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Data Availability: De auteurs bevestigen dat hun gegevens zijn binnen het manuscript en de huidige Ondersteunende informatie bestand

Financiering:. Dit onderzoek werd gesteund door de National Natural Science Foundation of China (Grant nrs 81271916 en 81301506), het Fonds voor onderzoek de Doctoral Programma van hoger Onderwijs van China (No. 20120131110055), onafhankelijke innovatie Stichting van Shandong University (IIFSDU, 2012TS174), de Shandong technologische Ontwikkeling Project (STDP, 2013GSF11859), de Natural Science Foundation van Shandong (Grant No. ZR2013HM104) en de National Key Clinical Medical Specialties Foundation

Competing belangen. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Net als bij de meeste vormen van kanker, maagkanker (GC) is een zeer. agressieve maligniteit die de neiging heeft om binnenvallen omliggende weefsel en uitzaaien naar verre organen. Hoewel patiënten met kliernegatieve maagkanker hebben betere resultaten dan die met knooppunten metastase [1, 2], van wie sommigen nog steeds last van lokale recidieven of metastasen op afstand na curatieve resectie [3-5]. Voor doeltreffende factoren of sleutelmoleculen associëren met ziekteprogressie opgevoerd kliernegatieve maagkankerpatienten noodzakelijk, aangezien deze patiënten kunnen profiteren van adjuvante therapieën.

Chemotaxis speelt een sleutelrol in tumormetastase, de leiding van de beweeglijkheid van metastatische cellen door gradiënten van chemoattractants. Met name de chemokinereceptoren mediëren orgaanspecifieke metastase van tumoren door interactie met hun bijpassende chemokines op doelorganen [6]. Maagkanker cellen kunnen verschillende chemokinereceptoren, zoals chemokine receptor 4 (CXCR4) en chemokine receptor 7 (CCR7) en co-opteren deze moleculen voor metastase [7-12] drukken. Andere rollen van chemokine-receptoren in de progressie van kanker, behalve voor chemotaxis zijn zelden blootgelegd. CCR4, een C-C chemokine receptor soort, is eerder gericht op de biologische functie in immunopathogenese van hematologische tumoren [13]. Tot op heden is betrekkelijk weinig aandacht besteed aan de rol van CCR4 het bevorderen metastase van bepaalde solide tumoren, waaronder maagkanker [14-17]. Onze onderzoeksgroep aantonen dat de lymfocyt-rijke GC neiging vaker positief voor CCR4 en vonden een nieuwe rol van CCR4 bij tumor-geïnduceerde immuunsuppressie [18], wat aangeeft verschillende expressieprofielen van CCR4 in GC weefsels en multifunctionele rol van dit molecuul GC progressie.

het is algemeen bekend dat invasie is de eerste stap leidt tot kanker metastase. Bewijzen hebben aangetoond dat sommige chemokinereceptoren, zoals CXCR4 [19] en CCR7 [20], bevordering chronische lymfatische leukemie celinvasie door middel opregulatie van MMP-9. Onlangs, Yu et al. bleek dat CXCR4 celmigratie en invasie kunnen bevorderen door het induceren van expressie van MMP-9 en MMP-13 in orale plaveiselcelcarcinoom [21]. Li en collega's vonden dat CCR7 betrokken bij menselijke colonkanker invasie via opregulatie van MMP-9 [22]. Het is echter niet duidelijk of CCR4 ook zou kunnen bevorderen kankercel invasie.

Gezien de brede distributie van chemokine-receptoren binnen tumoren andtheir potentiële rol in de tumor invasie en metastase, we de hypothese dat pN0 maagkanker patiënten die bepaalde chemokine receptoren kunnen meer kans op verdere progressie ervaren. Om onze hypothese te testen, onderzochten we de expressie profielen van CCR4 bij maagkanker cellen van pN0 patiënten en haar rol in de maag kankercel invasie.

Materialen en methoden

Patiënten en monsters

Tissue monsters werden verkregen van 108 patiënten (75 mannen en 33 vrouwen, in de leeftijd 35-71 jaar, gemiddelde leeftijd 62 jaar) met pN0 maagkanker curatieve resectie van de primaire tumor in Qilu ziekenhuis van Shandong University (Jinan, China) ondergaan. We gebruikten hiervoor aangepast aangrenzend normaal maag weefsels en weefsels van 56 maag dysplasie patiënten (36 mannen en 20 vrouwen, in de leeftijd 35-68 jaar, gemiddelde leeftijd 48 jaar) als controles. Alle histopathologische diagnoses en kwaadaardige classificaties werden bepaald door senior pathologen op het moment van de diagnose, volgens de World Health Organization International histologische classificatie van tumoren [23], en de postoperatieve pathologische staging werd bepaald op basis van de International Union Against Cancer (UICC) [24 ]. De studie werd goedgekeurd door de ethische commissie van Qilu Hospital, en schriftelijke toestemming van alle patiënten werd ook verkregen.

Immunohistochemie en immunohistofluorescence

IHC of IHF werd uitgevoerd op paraffine secties met behulp van antilichamen tegen menselijke CCR4 (LS-A351; LifeSpanBioSciences, Seattle, WA, USA) en Anti-pan Cytokeratin (CK) antilichaam (ab80826; Abcam, Cambridge, MA, USA), volgens de instructies van elke fabrikant. Fluorescente antilichamen omvatten geit anti-konijn TRITC-geconjugeerde antilichamen (E031320, Amyjet Scientific, Inc. Wuhan, China), geit anti-muis FITC-geconjugeerde antilichamen (E0312400, Amyjet Scientific, Inc. Wuhan, China). De monsters werden zichtbaar en waargenomen onder een fluorescentiemicroscoop (IX81, Olympus, Tokyo, Japan) en de IHC resultaten werden geanalyseerd zoals eerder beschreven [18]

Celkweek

De menselijke maag. kanker cellijnen SGC-7901 en BGC-823 werden aangekocht van de Culture Collection van de Chinese Academie van Wetenschappen (Shanghai, China) en onderhouden in RPMI-1640 (HyClone, Logan, UT, USA) aangevuld met 10% FBS (Gibco, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) bij 37 ℃ in een vochtige atmosfeer van 5% CO _2.

Transient overexpressie van CCR4 in SGC-7901 en BGC-823 cellen

transiënte transfectie van het plasmide EGFP-CCR4 (CCR4) of een EGFP expressievector (MOCK) gastrische cellijnen werd uitgevoerd met Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) zoals eerder beschreven [18]. De transfectie efficiënties werden bepaald door fluorescentie microscoop, real-time reverse transcriptie-polymerase ketenreactie (RT-PCR) en flowcytometrie (FCM), respectievelijk.

Kwantificering van mRNA door RT-PCR en real time RT -PCR

Totaal RNA werd geïsoleerd uit cellen, met behulp van TRIzol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) en reverse transcriptase reacties werden uitgevoerd met kit volgens het protocol van de fabrikant (Fermentas, St. Leon-Rot, Duitsland ). Voor RT-PCR werden de primers en PCR-omstandigheden voor amplificatie van CCR4 gebruikt zoals hiervoor [25] beschreven. En humaan glyceraldehyde-3-fosfaat dehydrogenase (GAPDH) (voorwaartse primer, 5'-GGTGGTCTC-CTCTGACTTCAACAG-3 ', achterwaartse primer, 5'- GTTGTTGTAGCCA-AATTCGTTGT-3') werd usedas interne standaard. Voor real time RT-PCR werden primers voor CCR4, MMP-9 en GAPDH en amplificatie gebruikte omstandigheden zoals eerder beschreven [18, 25, 26].

FCM-analyse

De cellen werden geoogst geïncubeerd met fycoerytrine (PE) geconjugeerd anti-CCR4 monoklonaal antilichaam (FAB1567P, R &D Systems) of een muis IgG2b-isotype controle PE (IC0041P, R &D Systems) volgens de instructies van de fabrikant. FCM-analyse werd vervolgens uitgevoerd met behulp van een FACSCalibur (Becton Dickinson, Heidelberg, Duitsland) naar CCR4 uitdrukking op SGC-7901 en BGC-823 cellen te analyseren, respectievelijk.

Matrigel invasie assays

De in vitro
invasie assay werd uitgevoerd met de 24 celkweek inserts die 8-um membranen (BD Biosciences, San Jose, CA). Elk membraan werd bekleed met Matrigel (30 ug, Becton Dickinson, San Jose, CA) en geïncubeerd gedurende 30 minuten. Vervolgens 0,2 ml getransfecteerde of ouderlijke GC cellen werden opnieuw gesuspendeerd in serumvrij RPMI-1640 met een concentratie van 1,5 x 10 ^{5 /ml en in de bovenste kamer, en 0,6 ml RPMI-1640 medium dat 10% FBS was toegevoegd aan de basolaterale kamer. Na 24 uur incubatie bij 37 ℃ met 5% CO _{2 werden de cellen gefixeerd en gekleurd met 0,2% eosine Y. Het aantal cellen dat aan de basale zijde van het membraan waren gemigreerd werd onder een lichtmicroscoop gekwantificeerd bij 200 × vergroting.}}

Cellevensvatbaarheid assay

De cellen werden gezaaid in 96-well platen bij 5 x 10 ^{3 cellen /putje en gedurende aangegeven tijdstippen. Cellevensvatbaarheid werd beoordeeld volgens CCK8 (Beyotime, Haimen, China) volgens de instructies van de fabrikant. De absorptie werd gemeten bij 450 nm golflengte. Elk tijdstip werd herhaald in drie waterputten en de test werd independentlyperformed driemaal.}

Gelatine zymografie

Bovenstaande vloeistoffen werden verzameld door centrifugeren na 24 uur na transfectie en opgelost op een SDS-PAGE gel die 0,1% (w /v) gelatine. Na elektroforese werden de eiwitten gerenatureerd door het wassen van de gel tweemaal gedurende 40 min in 2,5% Triton X-100, gevolgd door een incubatie gedurende 18 uur bij 37 ° C in een mengsel dat Tris-HCl 50 mM (pH 7,6), CaCl _{2 5mMm en NaCl 200 mm. Vervolgens werd de gel kort gespoeld in gedestilleerd water en gekleurd met 0,25% Coomassie Brilliant Blue R250 /45% methanol /10% azijnzuur gedurende 4 uur en vervolgens ontkleurd in 45% methanol, 8% azijnzuur. Gels werden gescand en gefotografeerd met Kodark systemen.}

Statistische analyse

De gegevens van ten minste drie onafhankelijke experimenten werden geanalyseerd en uitgedrukt als het gemiddelde ± SD. De relatie tussen CCR4 expressie en T-fase werd geanalyseerd door chi-kwadraat-test. Andere gegevens werden geanalyseerd door Student t-test of ANOVA waar nodig. A P
waarde van minder dan 0,05 werd beschouwd als statistisch significant. Alle analyses werden uitgevoerd met behulp van statistische software (versie 13.0, SPSS, Inc., Chicago, IL).

Resultaten

Over-expressie van CCR4 met verschillende expressie patronen in pN0 vroege maagkanker weefsel

CCR4 expressie in kankercellen werd ontdekt op verschillende niveaus. Onder de 108 in paraffine ingebedde weefsels, 29 gevallen (26,9%) vertoonden een negatieve expressie (-), 30 gevallen (27,8%) toonde zwakke expressie (+), 35 gevallen (32,4%) vertoonden een matige expressie (++), en 14 gevallen (13,0%) vertoonde sterke expressie (+++) (Fig. 1 A-D). Alle aangrenzende normale maag weefsels toonde negatieve kleuring voor CCR4, en slechts 2 (3,6%) gevallen van maag-dysplasie vertoonde zwakke expressie van membraan CCR4 (Fig. 1E en F).

Zowel membraan en cytoplasma uitdrukking van CCR4 waren waargenomen meest in goed gedifferentieerde tumor nesten van intestinale type terwijl de minder gedifferentieerde cellen de neiging om een ​​cytoplasmatisch patroon van CCR4 expressie in diffuse soort maagkanker (fig. 2) weergegeven. Een interessant verschijnsel dat de cellen met zeer invasieve potentieel, zoals spier invasie, vasculaire invasie penetratie en zenuwen, getoond een cytoplasmatisch CCR4 expressiepatroon (fig. 3).

CCR4 overexpressie bevordert maagkanker cel inval

op typische gedeelten, werd ook aangetoond dat het expressieniveau van CCR4 neiging toe te nemen met de diepte van tumorinvasie (fig. 3). De IHC-analyse toonde duidelijk aan dat overexpressie van CCR4 was positief geassocieerd met T-stadium ( P
= 0,002), vasculaire invasie ( P
= 0,001) en perineurale invasie (P = 0,002) in pN0 GC (tabel 1).

We hebben gerapporteerd dat de niveaus van CCR4 eiwit waren vrij laag bij sommige maag cellijnen [18], en zo verder inzicht in CCR4 gemedieerde tumorinvasie krijgen, over- expressie van CCR4 gastrische cellijnen werd uitgevoerd zoals we eerder beschreven [18]. Hoge transfectie-efficiënties werden bepaald door real time RT-PCR, FCM en fluorescentiemicroscopie (Fig. 4A-C). EGFP werd tot expressie gebracht in de kern, cytoplasma membraan van de vector controle cellen, die zijn getransfecteerd met het plasmide MOCK; en het fluorescerende fusie-eiwit werd gelokaliseerd op de cytoplasma membraan van de CCR4 plasmide-getransfecteerde cellen. Matrigel invasie assay bleek dat de aantal-EGFP-CCR4 getransfecteerde maagkanker cellen die door de Matrigel aanzienlijk hoger dan die van mock-getransfecteerde maagkanker cellen (Fig. 4D) waren. De CCK8 test gaf aan dat overexpressie van CCR4 geen effect op de maag proliferatie van kankercellen (S1 figuur).

-CCR4 gereguleerd MMP-9 productie bij maagkanker cellen hadden

Om de mogelijke mechanismen die ten grondslag liggen te testen CCR4 gemedieerde tumorinvasie, onderzochten we het effect van CCR4 op MMP-9 expressie en activiteit. Real time RT-PCR-analyse (Fig. 5A) aan dat EGFP-getransfecteerde CCR4 maagkanker cellen brachten hogere niveaus van MMP-9 mRNA vergeleken met schijn-getransfecteerde cellen bij 24u na transfectie. Gelatine zymografie analyse (Fig. 5B) bleek dat de afscheiding en de activiteit van MMP-9 significant opwaarts gereguleerd in de supernatanten van EGFP-CCR4 getransfecteerde cellen vergeleken met schijn-getransfecteerde cellen bij 48u na transfectie met of zonder toevoeging van exogene CCL22.

Discussie

De interacties tussen chemokine-receptoren van kankercellen en hun bijpassende chemokines vertegenwoordigen kritische stappen in tumor metastase. Echter, de bevindingen van onze huidige studyshowed dat een aantal van maagkanker patiënten zonder lymfatische metastase waren ook positief voor CCR4 kleuring. Anders dan de meeste eerdere studies over de functies van chemotaxis gemedieerd door sommige chemokinereceptoren dit onderzoek onthulde een nieuw, invasief gedrag van CCR4.

chemokine receptoren behoren tot een familie van zeven-transmembraan G-proteïne gekoppelde receptoren die membraan eiwitten, en de functionele gevolgen van chemokinereceptoractiviteit algemeen aangenomen afhankelijk stimulatie door extracellulaire liganden [27]. Echter, de histologische monsters van de huidige studie is gebleken dat er verschillende expressie patronen voor CCR4. CCR4 in non-neoplastische cellen vertoonden negatieve kleuring, met slechts vage membraan kleuring in de maag dysplasie laesies. Membraan en cytoplasmatische expressie van CCR4 meest verschenen matig goed gedifferentieerde tumor nesten, terwijl expressie in minder gedifferentieerde cellen verzorgen voornamelijk beperkt tot het cytoplasma. En nog veel meer intrigerend, zoals op typische secties, tumorcellen vertonen hoge invasieve capaciteiten, zoals spier invasie, vasculaire penetratie en zenuw invasie, vaak toonden een verhoogde cytoplasmatische expressie van CCR4. Onze gegevens blijkt een nauwe band tussen cytoplasma CCR4 expressie patroon en agressief gedrag van maagkanker cellen. Deze bevinding is in tegenstelling tot wat aangenomen dat het extracellulaire domein van een chemokinereceptor noodzakelijkerwijs tumormetastase zouden via de interactie met zijn ligand. Soortgelijke verschijnselen werden waargenomen met de chemokinereceptor CXCR4, waarvan nucleair lokalisatiesignaal werd geassocieerd met de progressie van diverse tumoren [28-30]. Deze gegevens indictate dat de maagkanker cellen nabijgelegen weefsels kan binnenvallen via CCR4 in een ligand-onafhankelijke manier. De andere hypothese dat de CCR4 internalisatie veroorzaakt door zijn ligand een mechanisme dat is geëvolueerd in de cytoplasmatische CCR4 expressiepatroon kunnen vertegenwoordigen. CCL22, wordt de CCR4 ligand geproduceerd door menselijke maagkanker weefsels [31], ook bekend causeCCR4 internalisatie van cytoplasma membraan [32, 33], wat suggereert cytoplasmatische kleuring kan geactiveerde signaaltransductie na CCR4-CCL22 ligatie tonen. Meer studies zijn nodig om de exacte mechanismen die ten grondslag liggen aan deze abnormale patronen van chemokine-receptor expressie betrokken bij progressie van de tumor te onthullen. Bovendien, het langzaam bevorderende expressie van CCR4 in premaligne weefsels, maar statistisch onbeduidend hoger dan in tumor-aangrenzende normale weefsels, suggereerde dat CCR4 ook kunnen deelnemen aan de preneoplastische vroege stadia van tumorontwikkeling.

In onze eerdere studie, vonden we dat CCR4 werd overexpressie in GC weefsel, maar we hebben geen significante verschillen tussen patiënten met en zonder lymfekliermetastasen [18] te vinden. Daarom de hypothese dat de chemokine receptoren een belangrijke rol bij de ontwikkeling van kanker van pN0 patiënten zou kunnen spelen. In deze studie, onze resultaten tonen een positieve correlatie tussen CCR4 expressie en T-fase, die in overeenstemming met onze bevindingen dat immunohistochemie CCR4 expressie neiging toenemen met de diepte van tumorinvasie gevorderd was. Het effect van CCR4 op maagkanker invasie werd gedeeltelijk bevestigd door transwell celinvasie assays. Deze bepalingen werden uitgevoerd onder omstandigheden waarbij geen exogeen CCR4 receptor ligand toegevoegd. Het was mogelijk dat verschillende mechanismen kunnen worden genomen om tumorcel invasie gemedieerd door CCR4 in een ligand-onafhankelijke wijze, in overeenstemming met het fenomeen van cytoplasmatische patroon van CCR4 die was gerelateerd aan de zeer invasieve gedrag van tumorcellen in GC weefsel reguleren. We bevestigden dat overexpressie van CCR4 was nauw verbonden met een hogere mate van tumor invasiviteit, daarmee aangevend dat CCR4 overexpressie metastatisch potentieel zou kunnen verlenen in GC cellen en vergroting van tumorprogressie. We hebben ook de hypothese dat de autocriene CCR4 liganden ook betrokken waren bij de cel beweeglijkheid In vitro
. De concentraties van CCL22 in de cultuur supernatant GC cellijnen getransfecteerd met of zonder CCR4 waren vrij vanaf we geëvalueerd (gegevens niet getoond). Echter, kon de mogelijkheid niet worden uitgesloten dat de autocriene of paracriene productie van CCL22 kan bijdragen aan tumor invasie via CCL22 /CCR4 as In vivo
. CCL17 en CCL22, zoals hoge affiniteit CCR4 liganden, worden geproduceerd door GC en andere kankerweefsels. Vooral CCL22, dat ofwel door kankercellen of tumor geassocieerde macrofagen, is beschreven dat betrokken is bij de metastase van verschillende kankers [15-17]. Dit suggereert een mogelijke autocriene /paracriene lus waarbij CCL22 en CCR4 tussen verschillende celtypen.

MMP-2 en MMP-9 zijn de meest betrokken en goed gekarakteriseerde MMPs met sterke proteolytische activiteit in de extracellulaire matrix (ECM). De samenhang tussen real time RT-PCR tests en gelatine zymografie experimenten duidelijk aangetoond dat overexpressie van CCR4 bij maagkanker cellen significant verhoogd MMP-9 expressie en activiteit. Deze experimenten verder benadrukt en aangegeven de werkelijke rol in tumorinvasie onder bepaalde voorwaarden, met of zonder stimulatie door exogeen CCL22. Er wordt aangenomen dat matrix MMP-9 afbreekt type IV collageen die een belangrijk bestanddeel van het fundament membraan en is gerelateerd aan kankercel invasie en metastase bij patiënten met maagkanker [34]. Hier hebben we voorzien van nieuwe aanwijzingen over het onderliggende mechanisme dat CCR4 maagkanker cel invasie zou kunnen bevorderen door opregulatie van MMP-9. Soortgelijke opmerkingen zijn ook gemaakt met betrekking tot tumor invasie via sommige chemokinereceptoren zoals CXCR4 en CCR7 [19, 20, 22]. En MMP-2, waarvan de structuur vergelijkbaar MMP-9 was, werd ook in verband gebracht met maagkanker [35]. Echter, we vonden MMP-9, maar niet MMP-2 was een belangrijke molecule die deze CCR4 gemedieerde tumorinvasie, die kan worden veroorzaakt door verschillende coregulatoren die interageren met CCR4 in verschillende micro-omgevingen. Hoewel MMP-2 expressie in getransfecteerde CCR4 maagkanker cellen leek ook hoger dan die in mock-getransfecteerde cellen, het verschil was statistisch significant (gegevens niet getoond). Cellevensvatbaarheid assay toonde dat overexpressie van CCR4 geen effect op de gastrische kanker celgroei hadden in vitro
, die in overeenstemming met eerdere studies die de CCR4 liganden toonden kon celproliferatie [14] opwekken was, waardoor het mogelijk vermeden die kunnen invasie index of MMP-9 bedrag beïnvloeden. Deze bepalingen werden uitgevoerd met of zonder exogeen CCL22, met aanzienlijke verschillen in MMP-9 expressie tussen CCR4 en schijn-getransfecteerde cellen. We speculeren de mogelijke mechanismen van verbeterde MMP-9 expressie door CCR4-overexpressie zou kunnen zijn deels te wijten aan de autocriene of paracriene expressie van CCL22 In vivo
. Nog andere MMP's die betrokken kunnen worden bij dit proces en de precieze signaalwegen bleef verder worden onderzocht in de toekomst.

Tot slot, we gemeld voor de eerste keer dat CCR4 was afwijkend over-uitgedrukt in pN0 maagkanker en kon tumor invasie te promoten. Bovendien zijn onze gegevens blijkt dat CCR4 geïnduceerde MMP-9 productie althans gedeeltelijk nieuw mechanisme voor CCR4 gemedieerde tumorinvasie kunnen ten grondslag liggen. Zo zou antagonisten van CCR4 nuttig zijn kandidaten voor het regelen van vroege gebeurtenissen in de progressie van de tumor.

Ondersteunende informatie
S1 Fig. Overexpressie van CCR4 geen effect op de gastrische kanker celgroei hadden in vitro
.
Na transfectie met CCR4 of MOCK plasmide en stimulatie met of zonder exogeen CCL22, SGC-7901 en BGC-823 cellen werden opnieuw uitgezet in 96-well plaat. Cellen levensvatbaarheid werd bepaald door CCK8 assay op aangegeven tijdstippen
doi:. 10.1371 /journal.pone.0120059.s001
(TIF)

• PLoS ONE: Overexpressie van eukaryote translatie initiatie Factor 5A2 (EIF5A2) correleert met de Cel Agressiviteit en slechte overleving in Gastric Cancer
• PLoS ONE: Overleving van Proper leverslagader lymfekliermetastasen bij patiënten met maagkanker: Gevolgen voor D2 Lymfadenectomie