Ploche ONE: Aberrant CCR4 Expression je zapojený do invázie tumoru lymfatických uzlín negatívny rakovina žalúdka u ľudí

abstraktné

Cellular chemotaxie je najznámejšia funkcia chemokinových receptorov, ktoré sú úzko späté s nádorových metastáz. V skutočnosti, pozitívne expresia chemokinových receptorov by tiež mohla byť identifikované dokonca v niektorých pacientov bez metastazujúcich tumorov, zatiaľ čo klinický význam týchto údajov nebola úplne stanovená. Naše štúdie boli navrhnuté tak, aby objasnila CCR4 profilov expresie a preskúmať jej potenciálnu úlohu v rakovine histologicky s negatívnymi uzlinami (pN0) žalúdočné (GC). Imunohistochémia (IHC), alebo immunohistofluorescence analýza (IHF) bola vykonaná na vzorkách získaných od 108 pacientov s PN0 GC. Zistili sme, že CCR4 je aberantne nadmerne exprimované inpN0 GC tkaniva, s rôznymi expresnými vzormi na nádorové bunky, a je spojená s T-fázy ( P
= 0,002). Matrigel in vitro
invázie test ukázal, že zvýšená expresia CCR4 v bunkových líniách GC významne zvyšuje invazívna schopnosť týchto buniek. Výsledky z real-time RT-PCR a gelatinzymography vykazovali významné zvýšenie matrix metaloproteinázy (MMP) -9 indukovaného s núteným expresiu CCR4 v bunkových línií GC. Naše údaje naznačujú, že aberantne CCR4 expresie sa podieľa na nádorové inváziu PN0 GC a, teoreticky, antagonisti CCR4 by mohli byť užitočné kandidátmi na kontrolu skoré v progresii nádoru

Citácia :. Yang Y, Du L, Yang X, Qu A, Zhang X, Zhou C, et al. (2015) Aberrant CCR4 Expression je zapojený do invázie tumoru lymfatických uzlín negatívny rakovina žalúdka u ľudí. PLoS ONE 10 (3): e0120059. doi: 10,1371 /journal.pone.0120059

Akademický Editor: Chih-Hsin Tang, Čína lekárska univerzita, Taiwan

prijatá: 29. septembra 2014; Prijaté: 03.02.2015; Uverejnené: 19.března 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. Toto je článok o otvorenej distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Data Dostupnosť: Autori potvrdzujú že ich dáta sú v rukopisu a jeho súčasné podporné informácie súboru

Financovanie :. Táto štúdia bola podporovaná národná prírodná Science Foundation Číny (Grant č 81271916 a 81301506), Výskumného fondu doktorandské Programu vysokoškolské vzdelanie v Číne (č 20120131110055), nezávislé inovácie Foundation Shandong University (IIFSDU, 2012TS174), Shandong technologický rozvoj Project (STDP, 2013GSF11859), Natural Science Foundation Shandong (Grant č ZR2013HM104) a Národný Key Clinical lekárske špeciality Foundation

Konflikt záujmov :. autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

Podobne ako u väčšiny nádorov, karcinómu žalúdka (GC) je vysoko. agresívny zhubný nádor, ktorý inklinuje k invázii do okolitého tkaniva a metastázovať do vzdialených orgánov. Aj keď pacienti s rakovinou žalúdka s negatívnymi uzlinami majú lepšie výsledky ako tie, ktoré sa metastáz v lymfatických uzlinách [1, 2], z ktorých niektorí stále trpel lokálnej recidívy alebo vzdialených metastáz po kuratívny resekcii [3-5]. Určenie účinných faktorov alebo kľúčových molekúl združujúcich s progresiou ochorenia predstaveným pacientov s rakovinou žalúdka s negatívnymi uzlinami je to nutné, za to, že títo pacienti môžu mať prospech z adjuvantnej terapiou.

chemotaxie hrá kľúčovú úlohu v nádorových metastáz, réžia motilitu metastatické bunky cez gradienty chemoatraktantů. Pozoruhodne, receptor chemokínu sprostredkovávajú orgánovo špecifických metastázy nádorov interakcií s ich zodpovedajúcich chemokiny u cieľových orgánov [6]. Žalúdočné rakovinové bunky by mohli vyjadriť rôzne receptor chemokínu, ako je receptor chemokínu CXCR4 (4) a receptor chemokínu 7 (CCR7), a čo-zvoliť tieto molekuly pre metastázy [7-12]. Ostatné role chemokinových receptorov v progresii rakoviny s výnimkou chemotaxie boli zriedka odkryté. CCR4, C-C chemokiny typ receptoru, bola predtým zameraná na jeho biologickú funkciu v imunopatogenezi hematologických nádorov [13]. K dnešnému dňu, pomerne malá pozornosť bola venovaná úlohe CCR4 pri podpore metastáz niektorých solídnych nádorov, vrátane rakoviny žalúdka [14-17]. Naša skupina ukázala, že lymfocyty bohaté na GC bývajú častejšie pozitívne na CCR4, a našli novú úlohu CCR4 v imunosupresie vyvolanej nádorom [18], čo naznačuje rôzne profilov expresie CCR4 v GC tkanivách a multifunkčné role tejto molekuly progresiu GC.

je dobre známe, že invázia je prvý krok vedúci k nádorových metastáz. Dôkazy ukázali, že niektoré receptory chemokiny, ako je CXCR4 [19] a [20] CCR7, podporujú B-bunkovou chronickou lymfocytárnej leukémiou invázie buniek prostredníctvom up-regulácia MMP-9. V poslednej dobe, Yu et al. ukázal, že CXCR4 by mohli podporovať migráciu a inváziu buniek pomocou indukcie expresie MMP-9 a MMP-13 v ústnej spinocelulárneho karcinómu [21]. Li a jeho kolegovia zistili, že CCR7 bol zapojený do ľudskej invázii rakoviny hrubého čreva cez up-reguláciu MMP-9 [22]. Nie je však jasné, či CCR4 by tiež podporovať rakovinových buniek inváziu.

Vzhľadom k veľkému rozloženie chemokinových receptorov v nádoroch andtheir potenciálnej role v nádorovej invázie a metastáz, my sme predpokladali, že PN0 pacienti s rakovinou žalúdka niesť určité chemokiny receptory môžu byť vyššia pravdepodobnosť výskytu ďalšej progresii. Ak chcete vyskúšať našu hypotézu, sme skúmali expresné profily CCR4 v žalúdočných rakovinových bunkách PN0 pacientov a jeho úloha v žalúdku rakovinových buniek inváziu.

Materiály a metódy

Pacienti a vzorky

vzorky tkaniva boli získané od 108 pacientov (75 mužov a 33 žien vo veku 35-71 rokov, priemerný vek 62 rokov) s pN0 rakoviny žalúdka, ktorí podstúpili kuratívne resekcii primárneho nádoru v Qilu nemocnici Shandong University (Jinan, Čína). Použili sme hore uzavreté priľahlej normálne žalúdočné tkaniva a tkaniva z 56 dysplázia pacientov žalúdočných (36 mužov a 20 žien vo veku 35-68 rokov, priemerný vek 48 rokov), ako kontrolná skupina. Všetky histopatologické diagnózy a malígne klasifikácia bola stanovená nadriadeného patológov v čase stanovenia diagnózy, podľa Svetovej zdravotníckej organizácie Medzinárodná histologického klasifikácie nádorov [23], a pooperačné patologický staging bola stanovená na základe Medzinárodnej únie proti rakovine (UICC) [24 ]. Štúdia bola schválená etickou komisiou z Qilu nemocnice, a bol tiež získaný písomný informovaný súhlas od všetkých pacientov.

Imunohistochémia a immunohistofluorescence

IHC alebo IHF bolo vykonané na parafínových rezoch s použitím protilátok proti ľudskému CCR4 (LS-A351, LifeSpanBioSciences, Seattle, WA, USA) a anti-pán cytokeratin (CK) protilátka (ab80826; abca, Cambridge, MA, USA) podľa inštrukcií poskytnutých každého výrobcu. Fluorescenčné protilátky zahŕňajú kozí anti-králičie protilátky TRITC konjugovanú (E031320; Amyjet Scientific, Inc. Wuhan, Čína), kozie anti-myšou FITC-konjugované protilátky (E0312400; Amyjet vedecký, Inc. Wuhan, Čína). Vzorky boli vizualizované a pozorovaná pod fluorescenčným mikroskopom (IX81, Olympus, Tokyo, Japonsko), a výsledky boli analyzované IHC, ako bolo oznámené predtým [18]

Bunková kultúra

v žalúdku človeka. rakovina bunkové línie SGC-7901 a BGC-823 boli zakúpené od Culture Collection čínskej akadémie vied (Shanghai, Čína) a udržiavané v RPMI-1640 (HyClone, Logan, UT, USA), doplnenom 10% FBS (Gibco, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) pri 37 ° C ℃ vo zvlhčenej atmosfére 5% CO _2.

prechodné nadmernej expresii CCR4 v SGC-7901 a BGC-823 buniek

prechodne transfekcia plazmidu EGFP-CCR4 (CCR4) alebo expresného vektora EGFP (MOCK) v bunkových líniách žalúdku bola vykonaná za použitia Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), ako bolo predtým oznámenú [18]. A účinnosti transfekcia boli stanovené pomocou fluorescenčného mikroskopu, v reálnom čase, reverzné transkripcie-polymerázovej reťazovej reakcie (RT-PCR) a prietokovou cytometriou (FCM), v danom poradí.

Kvantifikácia mRNA pomocou RT-PCR v reálnom čase a RT -PCR

Celková RNA bola izolovaná z buniek za použitia TRIzolu činidla (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) a reverznej transkriptázy reakcie boli vykonané pomocou súpravy podľa protokolu výrobcu (Fermentas, St. Leon-Rot, Nemecko ). Pre RT-PCR primery a podmienky PCR pre amplifikáciu CCR4 boli použité, ako bolo opísané skôr [25]. A ľudský glyceraldehyd-3-fosfát dehydrogenázy (GAPDH) (dopredný primer 5'-GGTGGTCTC-CTCTGACTTCAACAG-3 ', reverzný primer, 5'-GTTGTTGTAGCCA-AATTCGTTGT-3') bola usedas vnútorného štandardu. V reálnom čase RT-PCR priméry pre CCR4, MMP-9 a GAPDH a Podmienky amplifikácie boli použité ako bolo oznámené predtým [18, 25, 26].

FCM analýza

Bunky boli zozbierané inkubovali s fykoerytrín (PE) konjugovaným anti-CCR4 s monoklonálnu protilátku (FAB1567P, R &D Systems) alebo pomocou ovládania myšou IgG2b-PE izotypov (IC0041P, R &D Systems) podľa inštrukcií výrobcu. FCM analýza potom bola vykonávaná s použitím FACSCalibur (Becton Dickinson, Heidelberg, Nemecko) analyzovať CCR4 výraz SGC-7901 a BGC-823 buniek, resp.

Matrigelové invázie testy

in vitro
invázie test bol vykonaný s použitím 24 bunkových kultúr vložiek, ktoré obsahujú 8 um membrány (BD Biosciences, San Jose, CA). Každá membrána bola potiahnutá Matrigelu (30 ug, Becton Dickinson, San Jose, CA) a inkubované po dobu 30 minút. Potom sa 0,2 ml transfekovány alebo rodičovskej GC bunky boli resuspendované v bezsérovém RPMI-1640 s koncentráciou 1,5 x 10 ^{5 /ml a umiestni sa do hornej komory, a 0,6 ml RPMI-1640 obsahujúcom 10% FBS bol pridaný do bazolaterální komory. Po 24 hodinách inkubácie pri 37 ℃ s 5% CO _{2, boli bunky fixované a zafarbené 0,2% eosínu Y. počet buniek, ktoré migrovali na bazálnej strane membrány bolo vyčíslené pod svetelným mikroskopom pri 200 × zväčšenie.}}

životaschopnosť buniek test

bunky boli schovať do 96-jamkových doštičiek v množstve 5 x 10 ^{3 buniek /jamka a kultivované po dobu uvedenú dobu bodov. Životaschopnosť buniek bola hodnotená pomocou CCK8 (Beyotime, Haimen, Čína) podľa inštrukcií výrobcu. Absorbancia bola meraná pri 450 nm vlnovej dĺžky. Každý časový bod bol opakovaný v troch jamkách a skúška bola independentlyperformed trikrát.}

Želatína zymografie

Supernatanty boli zhromaždené odstreďovaním po 24 h po transfekciu a rozdelené na SDS-PAGE gélu, ktorý obsahuje 0,1% (w /v) želatíny. Po elektroforéze boli proteíny renaturovány premytím gél dvakrát počas 40 minút v 2,5% Triton X-100 s následnou inkubáciou počas 18 hodín pri teplote 37 ° C v zmesi s obsahom Tris-HCl 50 mM (pH 7,6), CaCl _{2 5mMm a NaCl 200 mM. Potom sa gél krátko opláchnuté destilovanou vodou a zafarbené 0,25% Coomassie Brilliant Blue R250 /45% metanol /10% kyseliny octovej po dobu 4 hodín a potom sa odfarbuje v 45% metanolu, 8% kyseliny octovej. Gély potom boli skenované a fotografované s Kodark systémami.}

Štatistická analýza

Dáta z aspoň troch nezávislých experimentov boli analyzované a vyjadrené ako priemer ± SD. Vzťah medzi CCR4 expresiou a T-fáza bola analyzovaná pomocou testu chí-kvadrát. Ďalšie údaje boli analyzované pomocou t-testu študent alebo ANOVA keď to bude vhodné. A P
hodnota je nižšia ako 0,05 bola považovaná za štatisticky významnú. Všetky analýzy boli vykonané pomocou štatistického softvéru (verzia 13.0, SPSS Inc., Chicago, IL).

Výsledky

Nadmerná expresia CCR4 s výraznými vzormi expresie v ranom PN0 tkanive rakoviny žalúdka

CCR4 expresiu v rakovinových bunkách bola detekovaná v rôznych úrovniach. Medzi 108 parafínových tkanív, 29 prípadoch (26,9%) bolo dosiahnuté negatívne expresiu (-), 30 prípadov (27,8%) ukázala, oslabené (+), 35 prípadoch (32,4%) mali za následok mierne expresiu (++), a 14 prípadov (13,0%), vykazovali silnú expresiu (+++) (obr. 1 A-D). Všetky susedné normálne žalúdočné tkaniva ukázali negatívny farbenie pre CCR4, a len 2 (3,6%) prípadov žalúdočnej dysplázia ukázali oslabené membránového CCR4 (obr. 1E a F).

Obe membrány a cytoplazmy expresie boli CCR4 pozorovaná najčastejšie v dobre diferencovaných nádorových hniezd črevného typu, zatiaľ čo menej diferencované bunky tendenciu k zobrazenie cytoplazmatickú vzor CCR4 expresie v rozptyľovať typ rakoviny žalúdka (obr. 2). Zaujímavý jav, že bunky s vysoko invazívne potenciálom, ako je napríklad svalová invázia, cievne penetrácia a nervové invázie, tiež zobraziť cytoplazmatickú CCR4 exprimovaného vzorca (obr. 3).

CCR4 nadmernej expresie podporuje žalúdočné rakovina bunky invázie

v typickej úsekoch, bolo tiež preukázané, že hladina expresie CCR4 tendenciu zvyšovať s hĺbkou invázie tumoru (obr. 3). Analýza IHC jasne ukázalo, že nadmerná expresia CCR4 pozitívne spojená s T fáze ( P
= 0,002), vaskulárne invázie ( P
= 0,001) a perineurální invázie (P = 0,002) v pN0 GC (tabuľka 1).

sme uviedli, že úroveň CCR4 proteínu boli pomerne nízke v niektorých žalúdočných bunkových líniách [18], a tak získať ďalšie poznatky v CCR4 sprostredkované invázie tumoru, pre- expresie CCR4 v bunkových líniách žalúdku bola vykonaná ako bolo opísané skôr [18]. Vysoká účinnosť transfekcia boli stanovené v reálnom čase RT-PCR, FCM a fluorescenčné mikroskopia, v danom poradí (Obr. 4A-C). EGFP bol exprimovaný v jadre, cytoplazme a membrány vektor kontrolných bunkách, ktoré boli prenesené s modelovou plazmidu; a fluorescenčné fúzny proteín bol lokalizovaný v cytoplazme a membrány plasmidových transfekované bunky CCR4. Matrigel invázie skúška ukázala, že počet buniek karcinómu žalúdka EGFP CCR4 transfekované prechádzajúcich Matrigelu boli významne vyššie ako u falošne transfekované buniek karcinómu žalúdka (obr. 4D). Test CCK8 je uvedené, že nadmerná expresia CCR4 nemal žiadny účinok na žalúdočné proliferáciu nádorových buniek (obr S1).

CCR4 regulované MMP-9 produkcie buniek karcinómu žalúdka

K otestovaniu možné mechanizmy základné CCR4 sprostredkovaná nádorová invázia, sme hodnotili účinok CCR4 na MMP-9, expresiu a aktivitu. V reálnom čase RT-PCR analýza (obr. 5A), ukázala, že EGFP-CCR4 transfekciou buniek karcinómu žalúdka vyjadrené vyššie hladiny MMP-9 mRNA v porovnaní s falošne transfekované bunky na 24 hodín po transfekciu. Želatína zymografie analýza (obr. 5B), sa zistilo, že sekrécia a aktivita MMP-9 boli významne up-regulované v supernatante buniek EGFP CCR4 transfekciou v porovnaní s falošne transfekované bunky na 48 hodín po transfekciu, s alebo bez pridania exogénny CCL22.

Diskusia

interakcie medzi chemokinových receptorov nádorových buniek a ich zodpovedajúcich chemokiny predstavujú dôležité kroky v nádorových metastáz. Avšak zistenie náš súčasný studyshowed, že určitý počet pacientov s karcinómom žalúdka bez lymfatické metastázy boli tiež pozitívne na CCR4 farbenie. Na rozdiel od väčšiny predchádzajúcich štúdií o funkciách chemotaxie sprostredkovanej niektorými chemokinových receptorov, tento výskum odhalil nový, invazívne správanie CCR4.

Receptory chemokiny patrí do skupiny siedmich transmembránových receptorov-G-proteínom, ktoré sú membrány proteíny a funkčné následky aktivity receptoru chemokínu sa všeobecne predpokladá, že sú závislé na stimuláciu extracelulárnych ligandov, [27]. Avšak, histologické vzorky tejto štúdie ukázali, že existujú rôzne expresné vzory pre CCR4. CCR4 v non-neoplastických buniek ukázali negatívne farbenie, len slabým farbením membrány v žalúdočných lézií dysplázia. Membrána a cytoplazmatická expresie CCR4 najčastejšie objavil v mierniť k dobre diferencovaných nádorových hniezd, zatiaľ čo expresia v menej diferencovaných buniek tendenciu byť obmedzená predovšetkým do cytoplazmy. A ďalšie zaujímavé, že ako je znázornené na typických častí, nádorové bunky, ktoré vykazujú vysoké kapacity invazívne, ako je napríklad svalová invázia, cievne penetrácia a nervové invázie, často ukázala zvýšený cytoplazmatickú expresiu CCR4. Naše dáta naznačujú úzku väzbu medzi cytoplazmatickú CCR4 expresného profilu a agresívne správanie nádorových buniek žalúdka. Toto zistenie je v rozpore so spoločným predpokladu, že extracelulárna doména receptoru chemokiny je nutne potrebné k metastázovaniu nádorov prostredníctvom interakcie s jeho ligandom. Podobné javy boli pozorované na receptor chemokínu CXCR4, ktorého jadrový lokalizačný bola spojená s progresiou rôznych nádorov [28-30]. Tieto dáta indictate, že žalúdočné rakovinové bunky by mohli napádať okolité tkanivá prostredníctvom CCR4 na ligandu nezávislú cestou. Druhá hypotéza bola, že CCR4 internalizácia spôsobená jeho ligandom môže predstavovať mechanizmus, ktorá sa vyvinula v cytoplazmatickej CCR4 expresného profilu. CCL22 sa CCR4 ligand produkovaný ľudskými rakovinové tkanive žalúdka [31], je tiež známe, že causeCCR4 internalizáciu z membrány do cytoplazmy [32, 33], čo naznačuje, cytoplazmatickú škvŕn môže zobrazovať aktivovanú signalizáciu nasledujúce CCR4-CCL22 ligácia. Ďalšie štúdie sú potrebné k odhaliť presný mechanizmus vyplývajúcich z týchto abnormálne vzory expresie receptoru chemokínu podieľajú na progresiu nádoru. Okrem toho sa pomaly zosilňovacie expresie CCR4 v premalígnych tkanív, hoci štatisticky nevýznamne vyššia ako v nádorových-priľahlej normálne tkanivá, navrhol, že CCR4 môže tiež podieľať na preneoplastických fázach vývoja ranej nádoru.

v našej predchádzajúcej štúdie, sme zistili, že CCR4 bol nadmerne vystavený u GC tkanive, ale my sme nenašli významné rozdiely medzi pacientmi s a bez lymfatických uzlín [18]. Preto sme predpokladali, že receptory chemokiny môže tiež hrať dôležitú úlohu vo vývoji rakoviny PN0 pacientov. V tejto štúdii, naše výsledky ukazujú pozitívnu koreláciu medzi expresiou CCR4 a T-fázy, ktoré boli v súlade s našich zistení, že imunohistochemické CCR4 výraz tendenciu narastať hĺbka invázie tumoru postupoval. Účinok CCR4 na žalúdočné rakovina invázia buniek bola čiastočne potvrdená transwell invázie buniek testoch. Tieto testy boli vykonané za podmienok, keď nebol pridaný žiadny exogénny CCR4 receptor ligand. Je možné, že môžu existovať rôzne mechanizmy pre reguláciu inváziu nádorových buniek sprostredkovanú CCR4 na ligandu nezávislú cestou, v súlade s fenoménom cytoplazmatickej vzoru CCR4, ktorý bol v súvislosti s vysoko invazívne správanie nádorových buniek v GC tkanive. Potvrdilo sa, že nadmerná expresia CCR4 úzko spojená s vyšším stupňom nádorové invazívnosti, čo ukazuje, že CCR4 nadmerná expresia môže udeliť metastatické potenciál GC buniek a ďalej podporovať progresiu nádoru. Tiež sme predpokladali, že autocrine CCR4 ligandy boli zapojené aj do bunkovej pohyblivosti in vitro
. Koncentrácia CCL22 v kultúrnych bunkových línií supernatant GC transfektovaných s alebo bez CCR4 sú pomerne nízke, ako sme vyhodnotili (dáta nie sú uvedené). Avšak možnosť nemožno vylúčiť, že autokrinný alebo parakrinný produkcie CCL22 by mohli prispieť k nádorovej invázii cez CCL22 /os CCR4 in vivo
. CCL17 a CCL22, ako s vysokou afinitou CCR4 ligandy, sú vyrábané pomocou GC a ďalších rakovinových tkanív. Najmä, CCL22, ktorá sa vyrába buď rakovinových buniek alebo makrofágov, ktoré sprevádzajú tumor, bolo popísané, že sa podieľajú na metastázy niekoľkých druhov rakoviny [15-17]. To naznačuje možný autokrinný /parakrinný slučky zahŕňajúce CCL22 a CCR4 medzi rôznymi typmi buniek.

MMP-2 a MMP-9 sú tie dotknuté a dobre charakterizované MMPs so silným proteolytické aktivity v extracelulárnej matrix (ECM). Súlad medzi v reálnom čase RT-PCR testy a želatína zymografií pokusy jasne ukázali, že zvýšená expresia CCR4 v nádorových bunkách žalúdku významne zvýšená MMP-9 expresiu a aktivitu. Tieto experimenty ďalej zdôraznil, a vyjadrila skutočnú úlohu v nádorovej invázii za určitých podmienok, s alebo bez stimulácie exogénnym CCL22. Predpokladá sa, že matrica MMP-9 degraduje kolagén typu IV, ktorý je hlavnou zložkou bazálnej membrány a je spojený s nádorových buniek invázie a metastáz u pacientov s rakovinou žalúdka [34]. Tu sme poskytli nové stopy na podkladové mechanizmus, ktorý by mohol podporiť CCR4 žalúdočné rakovina invázie buniek upregulací MMP-9. Podobné pozorovania bola tiež vykonaná s ohľadom na nádorovú inváziu cez niektoré chemokinových receptorov, ako je CXCR4 a CCR7 [19, 20, 22]. A MMP-2, ktorého štruktúra bola podobná ako MMP-9, bolo tiež popísané, že sú spojené s rakovinou žalúdka [35]. Avšak sme zistili, že MMP-9, ale nie MMP-2, bola kľúčová molekula podieľa CCR4 sprostredkované invázie tumoru, ktoré môžu byť v dôsledku rôznych ko-regulátory, ktoré interagujú s CCR4 v rôznych mikroprostredie. Aj keď MMP-2 expresie v nádorových bunkách transfekciou CCR4 žalúdku sa tiež zdá, že je vyššia, než u falošne transfekované bunky, rozdiel bol štatisticky nevýznamný (dáta nie sú uvedené). Životaschopnosť buniek Test ukázal, že nadmerná expresia CCR4 nemala žiadny vplyv na rast nádorových buniek žalúdočnej in vitro
, čo bolo v súlade s predchádzajúcimi štúdiami, ktoré ukázali na CCR4 ligandy nemôže indukovať proliferáciu buniek [14], čím sa zabráni možná , ktoré môžu mať vplyv na index invázie alebo MMP-9 vyššie. Tieto testy boli vykonané s alebo bez vonkajšej CCL22, s významnými rozdielmi v expresiu MMP-9 medzi CCR4 a Mock transfekované bunky. Domnievame sa, možné mechanizmy zvýšenie MMP-9 expresiu CCR4-nadmernej expresii môže byť čiastočne vzhľadom k autokrinný alebo parakrinný expresiou CCL22 in vivo
. Ešte ďalšie MMP, ktoré by mohli byť zapojené do tohto procesu a presné signálne dráhy ešte potrebné ďalej preskúmať v budúcnosti.

Na záver, sme popísali prvýkrát, že CCR4 je aberantne nadmerne exprimovaný v PN0 karcinómu žalúdka a môže podporovať invázie tumoru. Okrem toho, naše dáta ukázali, že CCR4 vyvolané MMP-9 Výroba môže aspoň čiastočne tvorí základ nového mechanizmu pre CCR4 sprostredkované invázie tumoru. Tak antagonisti CCR4 by mohli byť užitočné kandidátmi pre kontrolu skoré udalosti v progresii nádoru.

Podporné informácie
S1 Obr. Nadmerná expresia CCR4 nemala žiadny vplyv na rast nádorových buniek žalúdočnej in vitro
.
Po transfekciu s CCR4 alebo MOCK plazmidu a stimuláciu s alebo bez exogénneho CCL22, SGC-7901 a BGC-823 bunky boli v reseeded 96-jamkové doštičky. Životaschopnosť buniek bola hodnotená CCK8 testu na uvedených časových bodoch
doi :. 10,1371 /journal.pone.0120059.s001
(TIF)

• Ploche ONE: Zvýšená expresia eukaryotických translačný iniciačný faktor 5A2 (EIF5A2) koreluje s Cell agresivitou a nízke dosahované prežitie v žalúdočnej Cancer
• Ploche ONE: Survival of Správne pečeňových artérií metastáz do lymfatických uzlín u pacientov s karcinómom žalúdka: Dôsledky pre D2 Lymphadenectomy