PLoS ONE: Aberrant CCR4 išraiška dalyvauja naviko invazija limfmazgių neigiamas žmogaus skrandžio Cancer

Anotacija

Mobilieji chemotaksio yra geriausiai žinomas funkcija chemokino receptorių, kurie glaudžiai susiję su naviko metastazių. Iš tiesų, teigiamas išraiška chemokino receptorių taip pat gali būti nurodyti, netgi kai kuriais be metastazinių navikų pacientams, o klinikinė reikšmė šių duomenų nebuvo visiškai nustatytas. Mūsų tyrimai buvo skirtos paaiškinti CCR4 raiškos profilius ir išsiaiškinti galimą vaidmenį histologiškai mazgas neigiamas (pN0) skrandžio vėžys (GC). Imunohistocheminis (IHC) arba immunohistofluorescence (IHF) analizė buvo atliekama mėginių, gautų iš 108 pacientų, sergančių pN0 GC. Mes nustatėme, kad CCR4 buvo nenormaliai over-išreikšta inpN0 GC audiniai, su skirtingų išraiškos būdus naviko ląstelių ir yra susijęs su T-etape ( P
= 0,002). Matrigel in vitro
invazija tyrimas atskleidė, kad per išraiška CCR4 GC ląstelių linijų gerokai sustiprinti invazinių šių ląstelių gebėjimus. Rezultatai nuo realaus laiko AT-PGR ir gelatinzymography parodė gerokai padidinti matricos metaloproteinazės (MMP) -9 gamybos sukeltos priverstinio išraiška CCR4 GC ląstelių linijų. Mūsų duomenys rodo, kad netipinė CCR4 išraiška dalyvauja naviko invazijos į pN0 GC ir tikimasi,, antagonistai CCR4 gali būti naudinga kandidatus kontroliuoti anksti įvykius naviko progresavimo

nurodomoji dalis:. Jonas Y Du L Yang X, Qu A, Zhang X, Zhou C, ir kt. (2015) Aberrant CCR4 išraiška dalyvauja naviko invazija limfmazgio neigiamas žmogaus skrandžio vėžio. PLoS ONE 10 (3): e0120059. Doi: 10,1371 /journal.pone.0120059

Akademinė redaktorius: Chih-Hsin Tango, Kinijos medicinos universitetas, Taivanas

Įstojo rugsėjo 29, 2014 m Priėmė: Vasario 3, 2015 m Paskelbta: Kovo 19, 2015

Visos teisės saugomos: © 2015 Yang et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų Prieinamumas: Autoriai patvirtinti kad jų duomenys yra per rankraščio ir dabartinė jo Pagalbinė informacija failą

finansavimas:. Šis tyrimas parėmė Nacionalinės Gamtos mokslo fondo Kinijos (dotacijos Nr 81271916 ir 81301506), mokslinių tyrimų fondo doktorantūros programos aukštojo mokslo Kinijos (Nr 20120131110055), Nepriklausoma inovacijų fondas Shandong University (IIFSDU, 2012TS174), Shandong technologinės plėtros projektas (STDP, 2013GSF11859), Gamtos mokslo fondas Shandong (dotacijos Nr ZR2013HM104) ir nacionalinių pagrindinių klinikinių medicinos specialybių fondas

konkuruojančių interesų. autoriai paskelbė, kad konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

kaip ir dauguma vėžio, skrandžio vėžys (GC) yra labai. agresyvus piktybinis navikas, kuris linkęs į įsiveržti aplinkinių audinių ir metastazuoti į tolimus organus. Nors sergantys pacientai limfmazgius neigiamas skrandžio vėžiu yra geresnių rezultatų nei su mazgo metastazių [1, 2], kai kurie iš jų vis dar kenčia nuo vietos pasikartojimo ar tolimų metastazių po radikalių rezekcija [3-5]. Nustatyti veiksmingus veiksnius arba pagrindinius molekulių Bendraudami su ligos progresavimo ruošiamų limfmazgius neigiamas skrandžio vėžiu sergantiems pacientams būtina, manydama, kad šie pacientai gali pasinaudoti adjuvanto terapija.

chemotaksi vaidina svarbų vaidmenį navikų metastazių, nukreipiantis motoriką metastaziniai ląsteles per nuolydžiai chemoattractants. Pažymėtina, chemokinas receptoriai tarpininkauti organų konkrečių metastazių auglių, sąveikaudamas su savo atitikimo chemokinus į taikinį organų [6]. Skrandžio vėžio ląstelės gali išreikšti įvairias chemokino receptorius, pavyzdžiui, chemokino receptorių 4 (CXCR4) ir chemokino receptorių 7 (CCR7), ir bendro pasirinkti šių molekulių už metastazių [7-12]. Kiti vaidmenys chemokino receptorius vėžio progresavimą, išskyrus chemotaksio buvo retai atidengta. CCR4, C-C tipo chemokino receptorius, anksčiau buvo sutelktas į jo biologinę funkciją immunopathogenesis Hematotoksinio navikų [13]. Iki šiol gana mažai dėmesio buvo skiriama CCR4 vaidmuo skatinant metastazių kai kurių solidinių navikų, įskaitant skrandžio vėžio [14-17]. Mūsų grupė parodė, kad limfocitų turtingas GCS linkę būti dažniau teigiamas CCR4, ir rado romaną vaidmenį CCR4 navikų sukeltos imunosupresija [18], nurodant įvairias raiškos profilius CCR4 GC audinių ir daugiafunkciniams vaidmenis šioje molekulėje GC progresavimo.

Jis yra gerai žinoma, kad invazija yra pirmas žingsnis kurių išsivysto vėžys, metastazių. Įrodymai rodo, kad kai kurie chemokino receptorius, pavyzdžiui, CXCR4 [19] ir CCR7 [20], skatinti lėtinė limfoleukemija ląstelių invaziją per naujausią reguliavimo MMP-9. Neseniai, J. et al. parodė, kad CXCR4 galėtų skatinti ląstelių migraciją ir invazija per skatinančius išraišką MMP-9 ir MMP-13 burnos suragėjusių ląstelių karcinoma [21]. Li ir jo kolegos nustatė, kad CCR7 dalyvavo žmogaus storosios žarnos vėžio invazijos per ląstelę MMP-9 [22]. Tai nėra aišku, ar CCR4 taip pat galėtų skatinti vėžinių ląstelių invaziją.

Atsižvelgiant į platų paskirstymo chemokino receptorių per navikų andtheir potencialūs vaidmenis naviko invazija ir metastazių, mes iškėlė hipotezę, kad pN0 skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, vežančių tam tikrus chemokino receptorių gali būti labiau tikėtina, kad patirti toliau progresavimą. Norėdami išbandyti mūsų hipotezę, mes ištirti raiškos profilius CCR4 skrandžio vėžio ląstelių pN0 pacientų ir jos vaidmuo skrandžio vėžio ląstelių invaziją.

Medžiagos ir metodai

Pacientai ir jų pavyzdžiai

Audinių mėginiai buvo imami iš 108 pacientų (75 vyrai ir 33 moterys, kurių amžius 35-71 metų, amžiaus vidurkis 62 metai) sergančiais pN0 skrandžio vėžio mokosi pagal gydomasis rezekcija pirminio naviko Qilu ligoninės Shandong University (Jinan, Kinija). Mes naudotą atitiko gretimuose normaliuose skrandžio audinius ir audinius nuo 56 skrandžio displazija pacientų (36 vyrų ir 20 moterų, kurių amžius 35-68 metų, amžiaus vidurkis 48 metų), kontrolę. Visi histopatologinis diagnozės ir piktybinių klasifikacijos lėmė vyresniųjų patologai diagnozės metu, atsižvelgiant į Pasaulio sveikatos organizacijos Tarptautinės histologinis klasifikacijos navikų [23], o pooperacinis patologinė stadija buvo nustatyta, remiantis Tarptautinio Sąjunga su vėžiu (UICC) [24 ]. Tyrimas patvirtino Etikos komiteto Qilu ligoninės, ir raštu informuoti sutikimą iš visų pacientų taip pat buvo gauta.

imunohistocheminis ir immunohistofluorescence

IHC arba IHF buvo atliktas parafino skyriuose naudojant antikūnus prieš žmogaus CCR4 (LS-A351; LifeSpanBioSciences, Sietlas, WA, JAV) ir anti-visos citokeratino (KK) antikūnas (ab80826; abcam, Cambridge, MA, JAV), po pateiktų kiekvieno gamintojo instrukcijas. Liuminescencinės antikūnai yra ožkos anti-triušio TRITC konjuguoto antikūnų (E031320; Amyjet mokslo, Inc Wuhan, Kinija), ožkų anti-pelės FITC konjuguotų antikūnų (E0312400; Amyjet mokslo, Inc. Wuhan, Kinija). Bandiniai buvo ryškinamos ir stebima fluorescencija mikroskopu (IX81; Olympus, Tokijas, Japonija) ir IHC rezultatai buvo analizuojami kaip buvo pranešta anksčiau [18]

Mobilaus kultūros

žmogaus skrandžio. vėžio ląstelių linijas SGC-7901 ir BGC-823 buvo įsigytos iš kultūros kolekcijos Kinijos mokslų akademijos (Šanchajus, Kinija) ir prižiūrimi RPMI-1640 (HyClone, Logan, UT, USA) papildytas 10% FBS (Gibco, Invitrogen, Karlovi Varai, CA, JAV) esant 37 ℃ drėgnoje atmosferoje 5% CO _2.

Laikina per išraiška CCR4 į SGC-7901 ir BGC-823 ląstelių

laikinai transfekavimas plazmidės EGFP-CCR4 (CCR4) arba EGFP ekspresijos vektoriumi (MOCK) skrandžio ląstelių linijų buvo atliekama naudojant Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) kaip buvo pranešta anksčiau [18]. Ir transfekciją efektyvumas buvo nustatomas pagal fluorescencijos mikroskopu, realaus laiko atvirkštinės transkripcijos-polimerazės grandininės reakcijos (PGR) ir tėkmės citometrijos (FCM), atitinkamai.

kiekybinis mRNR RT-PGR ir realiu laiku RT -PCR

viso RNR buvo išskirta iš ląstelių, naudojant TRIzol reagento (INVITROGEN, Karlovi Varai, CA, JAV) ir atvirkštinės transkriptazės reakcijos buvo atliekami su rinkinio pagal gamintojo protokolą (Fermentas, Sankt Leon-Rot, Vokietijoje ). Už RT-PCR, pradmenys ir PGR sąlygos amplifikavimui CCR4 buvo naudojamas kaip aprašyta anksčiau [25]. Ir žmogaus gliceraldehido-3-fosfato dehidrogenazės (GAPDH) (pirmyn gruntas, 5'-GGTGGTCTC-CTCTGACTTCAACAG-3 "; pakeisti gruntą, 5'-GTTGTTGTAGCCA-AATTCGTTGT-3") buvo usedas vidinio standarto. Realaus laiko AT-PGR, gruntai CCR4, MMP-9 ir GAPDH ir stiprinimo sąlygų buvo naudojami kaip buvo pranešta anksčiau [18, 25, 26].

FCM analizė

Ląstelės buvo nuimta inkubuojami su fikoeritrinas (PE), konjuguoto anti-CCR4 monokloninis antikūnas (FAB1567P, R & D Systems) arba pelės IgG2b-PE izotipo kontrolės (IC0041P, R & D sistemos), pagal gamintojo instrukcijas. tada FCM analizė buvo atlikta naudojant FACSCalibur (Becton Dickinson, Heidelbergas, Vokietija) analizuoti CCR4 išraiška SGC-7901 ir BGC-823 ląstelių, atitinkamai.

Matrigel invazija tyrimai

in vitro
invazija tyrimas buvo atliktas naudojant 24 ląstelių kultūrų įdėklai, kurių sudėtyje yra 8-mkm membranas (BD biomokslų, San Chosė, CA). Kiekvienas membrana buvo padengtas Matrigel (30 g, "Becton Dickinson, San Chosė, CA) ir inkubuojami 30 min. Tada, 0,2 ml, transfekuota arba motininis GC ląstelės buvo resuspenduotos RPMI-1640 serumo neturinčioje su 1,5 × 10 ^{5 /ml ir atitinkamai viršutinėje kameroje, ir 0,6 ml RPMI-1640 terpėje, turinčioje 10% FBS buvo koncentraciją įtraukta į basolateral kameroje. Po to, kai 24h inkubuojamos 37 ℃ su 5% CO _{2, ląstelės buvo nustatyti ir nudažomi su 0,2% eozino Y. iš ląstelių, kurios buvo perkeltos į bazinio pusės į membranos buvo įvertintas pagal šviesos mikroskopu, 200 × skaičius didinimas.}}

Mobilusis gyvybingumo tyrimą

ląstelės buvo pasėjamos į 96 duobučių plokšteles nuo 5 × 10 ^{3 ląstelių /taip ir kultivuojamos nurodytu laiku taškų. Ląstelių gyvybingumas buvo įvertintas naudojant CCK8 (Beyotime, Haimen, Kinija) po gamintojo instrukcijas. Absorbcija buvo matuojamas esant 450 nm bangos ilgiui. Kiekvieną kartą, kai klausimas buvo pakartotas tris šulinius ir tyrimas buvo independentlyperformed tris kartus.}

Želatina zymography

supernatantus buvo nucentrifuguojamos po 24h po transfekciją ir išspręsti ant SDS-PAGE gelyje, kuriame 0,1% (m /t) želatina. Po to, kai elektroforezės baltymai buvo renatured, plaunant gelio du kartus 40 min greičiu 2,5% Triton X-100, po kurio 18 valandų inkubacijos 37 ° C temperatūroje, mišiniu, kuriame Tris-HCl 50 mm (pH 7,6), CaCl _{2 5mMm ir NaCl, 200 mm. Po to šis gelis buvo trumpai skalaujami distiliuotu vandeniu, ir nudažomi su 0,25% Coomassie briliantinis mėlynasis R250 /45% metanolio /10% acto rūgštimi tam, kad 4h ir tada destained į 45% metanolio, 8% acto rūgšties. tada geliai buvo nuskaitomi ir fotografuotas su Kodark sistemas.}

Statistinė analizė

Duomenų bent iš trijų nepriklausomų eksperimentų buvo analizuojami ir išreiškiamas kaip vidurkis ± SD. Tarp CCR4 saviraiškos ir T stadijos santykiai buvo analizuojami chi-kvadrato testas. Kiti duomenys ANOVA, kur tinkama buvo analizuojami studentų t testas ar. P
vertė mažesnė negu 0,05 buvo laikomas statistiškai reikšmingas. Visi tyrimai buvo atlikti naudojant statistinės programinės įrangos versijas (13,0 SPSS Inc., Čikaga, IL).

Rezultatai

Per išraiška CCR4 su skirtingų raiškos modelių pN0 pradžioje skrandžio vėžio audinio

CCR4 išraiška vėžinių ląstelių buvo aptikta skirtingų lygių. Tarp 108 parafino įterptųjų audinių, 29 atvejais (26,9%) parodė neigiamą išraišką (-), 30 atvejų (27,8%) parodė silpną išraišką (+), 35 atvejais (32,4%) parodė, vidutinio išraišką (++), ir 14 atvejai (13,0%) parodė, stiprią išraišką (+++) (pav. 1A-D). Visi gretimuose normaliuose audiniuose skrandžio parodė neigiamą dažymas, CCR4, ir tik 2 (3,6%) atvejai skrandžio displazija parodė silpną išraišką membranos CCR4 (1E pav. F).

Ir membrana ir citoplazma išraiška CCR4 buvo pastebėtas dažniausiai gerai diferencijuotų naviko lizdų žarnyno tipo, o mažiau-diferencijuotos ląstelės linkusios rodyti citoplazminio modelio CCR4 išraiškos išsklaidytoje tipo skrandžio vėžio (2 pav.). Įdomus reiškinys buvo tai, kad ląstelės su labai invazinio potencialą, kaip antai raumenų invazijos, kraujagyslių įsiskverbimo ir nervų invazijos, taip pat rodomas citoplazminio CCR4 ekspresijos modelį (3 pav.).

CCR4 per-išraiškos skatina skrandžio vėžio ląstelių invazija

apie tipiškų sekcijų, ji taip pat buvo parodyta, kad išraiška lygis CCR4 didėjo su naviko invazijos (3 pav.) gylio. IHC analizė aiškiai parodė, kad per išraiška CCR4 teigiamai susijęs su T etape ( P
= 0,002), kraujagyslių invazija ( P
= 0,001) ir perineurinis invazija (p = 0,002) į pN0 GC (1 lentelė).

Mes pranešė, kad CCR4 baltymų kiekis buvo gana žemas kai skrandžio ląstelių linijų [18], ir tokiu būdu gauti papildomų įžvalgų CCR4 sąlygotas auglys invazijos, per daug išraiška CCR4 skrandžio ląstelių linijų buvo atlikta kaip mes buvo aprašyta anksčiau [18]. Aukštos transfekciją efektyvumas buvo nustatomas pagal realaus laiko AT-PGR, FCM ir fluorescencijos mikroskopijos, atitinkamai (pav. 4A-C). EGFP buvo išreikštas branduolio citoplazmoje ir membranos vektoriaus valdymo ląstelių, kurios buvo perkeltų su Mock plazmidžių; ir fluorescencinis sulietas baltymas buvo lokalizuotas ant citoplazmoje ir membranos CCR4 plazmidžių transfekuota ląstelių. Matrigel invazija tyrimas parodė, kad EGFP-CCR4 perkeltų skrandžio vėžio ląstelių pravažiuojančių per Matrigel numeriai buvo žymiai didesnis nei maketas perkeltų skrandžio vėžio ląstelių (pav. 4d). CCK8 tyrimas parodė, kad padidėjusią CCR4 neturėjo įtakos skrandžio vėžio ląstelių proliferaciją (S1 pav).

CCR4 reglamentuoja MMP-9 produkcija skrandžio vėžio ląstelių

Norėdami išbandyti galimus mechanizmus, sukeliančius CCR4 sąlygotas auglys invazija, mes įvertino CCR4 poveikį MMP-9 raiškos ir veiklos. Realaus laiko AT-PGR analizė (5A pav.) Parodė, kad EGFP-CCR4 transfekuota skrandžio vėžio ląstelės išreikštas didesnį MMP-9 mRNR, palyginti su MOCK transfekuota ląsteles 24h po transfekciją. Želatina zymography analizė (5B pav.) Parodė, kad sekrecijos ir veiklos MMP-9 buvo gerokai iki reguliuojama į EGFP-CCR4 perkeltų ląstelių nuopile palyginti su maketas perkeltų ląsteles 48h po transfekciją, su arba be jo to egzogeninė CCL22.

Diskusijos

tarp chemokino receptorių vėžinių ląstelių ir jų atitikimo chemokinus sąveika atstovauti kritiškiems žingsniams naviko metastazių. Tačiau mūsų dabartinės išvados studyshowed, kad tam tikras skaičius skrandžio vėžiu sergantiems pacientams be limfinės metastazių taip pat buvo teigiamas CCR4 dažymo. Skirtingai nuo daugumos ankstesnių tyrimų funkcijų chemotaksio tarpininkaujant kai kurių chemokino receptorių, šis tyrimas atskleidė romaną, invazinės elgesys CCR4.

chemokino receptoriai priklauso nuo septynių transmembranines G-baltymu sujungto receptorių šeimai, kuri yra membrana baltymai, ir funkciniai pasekmės chemokino receptoriaus aktyvumo paprastai yra manoma, kad priklauso nuo stimuliacijos ekstraceliulinio ligandų [27]. Tačiau histologiniai pavyzdžiai Šio tyrimo paaiškėjo, kad ten buvo skirtingi raiškos modelius CCR4. CCR4 ne navikinių ląstelių parodė neigiamą dažymo, tik silpną membranos nusidažo skrandžio displazija pažeidimų. Membrana ir citoplazmos išraiška CCR4 dažniausiai atsirado vidutinio sunkumo gerai diferencijuotais navikais lizdus, ​​o išraiška mažiau diferencijuotų ląstelių linkę apsiriboti daugiausia į citoplazmą. Ir dar keisčiau, kaip parodyta tipiškų skyriuose, vėžinių ląstelių, pasižymintys aukštos invazinių gebėjimus, pavyzdžiui, raumenų invazijos, kraujagyslių skverbtis ir nervų invazija, dažnai parodė padidėjusį citoplazmos išraišką CCR4. Mūsų duomenys rodo glaudų ryšį tarp citoplazmos CCR4 išraiška modelio ir agresyvios elgsenos skrandžio vėžio ląsteles. Ši išvada yra priešingai bendrąja prielaida, kad ekstraląstelinio domeno chemokinų receptoriaus yra būtinai reikalingas auglio metastazių per sąveiką su jo ligandu. Panašūs reiškiniai buvo pastebėtas gydymo chemokino receptoriaus CXCR4, kurio branduolinės lokalizacijos buvo susijęs su įvairių navikų [28-30] progresavimo. Šie duomenys indictate kad skrandžio vėžio ląstelės gali įsiveržti netoliese audinių per CCR4 į ligando nepriklausomą būdu. Kitas hipotezė buvo ta, kad CCR4 internalizacijos sukelia jo ligando gali atstovauti mechanizmą, kuris vystėsi citoplazmos CCR4 išraiška modelio. CCL22, CCR4 ligandas gaminamas žmogaus skrandžio vėžio audinių [31], taip pat žinoma, kad causeCCR4 internalizacijos iš membraną citoplazmoje [32, 33], o tai rodo citoplazminio dažymo gali parodyti aktyvuotą signalizacijos šių CCR4 CCL22 ligavimo. Daugiau tyrimai siekiant atskleisti tikslius mechanizmus, sukeliančius šiuos neįprastais chemokino receptorių ekspresijos dalyvauja naviko progresavimo. Be to, lėtai stiprėja išraiška CCR4 į ikivėžinių audiniuose, nors statistiškai nereikšmingai didesnis nei naviko greta įprastų audinių, pasiūlė, kad CCR4 taip pat gali dalyvauti priešvėžine etapų pradžioje auglių vystymuisi.

Mūsų Ankstesnis tyrimas, mes nustatėme, kad CCR4 buvo ekspresija GC audinio, bet neradome reikšmingų skirtumų tarp pacientų su ir be limfmazgių metastazių [18]. Todėl mes iškėlė hipotezę, kad chemokinas receptoriai taip pat gali vaidinti svarbų vaidmenį vėžio vystymosi pN0 pacientams. Šioje studijoje, mūsų rezultatai parodė teigiamą koreliaciją tarp CCR4 saviraiškos ir T-etape, kuris atitiko mūsų imunohistocheminis išvados, kad CCR4 išraiška didėjo kiek naviko invazijos gylis progresavo. Iš CCR4 poveikis skrandžio vėžio ląstelių invaziją buvo iš dalies patvirtina transwell ląstelių invazija tyrimai. Šie tyrimai buvo atliekami tokiomis sąlygomis, kur buvo įdėta ne egzogeninė CCR4 receptorių ligando. Tai buvo įmanoma, kad gali egzistuoti skirtingi mechanizmai reguliuoti naviko ląstelių invaziją procesų, kuriuose CCR4 į ligando-nepriklausomas būdu, atitinkantis citoplazminio modelio CCR4, kad buvo susijęs su naviko ląstelių GC audinio labai invazinio elgesio reiškinio. Mes patvirtino, kad per išraiška CCR4 buvo glaudžiai susijęs su aukštesnio lygio naviko invazijos, taip nurodant, kad CCR4 per išraiška gali suteikti metastazavusiu potencialą GC ląsteles ir toliau skatinti naviko progresavimą. Mes taip pat iškėlė hipotezę, kad autokrining CCR4 ligandų taip pat buvo įtraukti į mobilųjį judrumas in vitro
. Į CCL22 į kultūros paviršinis GC ląstelių linijas perkeltų su arba be CCR4 koncentracijos buvo gana žemas, kaip mes įvertintas (duomenys neparodyti). Tačiau galimybė negali būti atmesta galimybė, kad autokrining arba paracrine gamyba CCL22 gali prisidėti prie naviko invazijos per CCL22 /CCR4 ašis in vivo
. CCL17 ir CCL22, kaip didelio giminingumo CCR4 ligandų, yra gaminami pagal GC ir kitų vėžio audiniuose. Visų pirma, CCL22, kuris gaminamas arba vėžinių ląstelių arba naviko susijęs makrofagų, buvo pranešta, kad dalyvauja keli vėžio [15-17] metastazių. Tai rodo galimą autokrining /paracrine kilpa dalyvauja CCL22 ir CCR4 tarp skirtingų ląstelių tipų.

MMP-2 ir MMP-9 yra labiausiai suinteresuota ir gerai charakterizuojamas MMPs su stipriu proteolitus veiklos tarpląsteliniame užpilde (ECM). Tarp realaus laiko AT-PGR ir želatina zymography eksperimentų nuoseklumas aiškiai parodė, kad per išraiška CCR4 skrandžio vėžio ląsteles žymiai tvirtesnis MMP-9 raiška ir veikla. Šie eksperimentai taip pat pabrėžė ir pranešė apie savo tikrąjį vaidmenį naviko invazijos tam tikromis sąlygomis, su arba be stimuliacijos iki egzogeninės CCL22. Manoma, kad matrica MMP-9 skyla IV tipo kolageno, kurie yra pagrindinė sudedamoji dalis pamatinės membranos ir yra susijęs su vėžio ląstelių invaziją ir metastazių pacientams, sergantiems skrandžio vėžio [34]. Čia mes su sąlyga, naujų užuominų apie pagrindinius mechanizmą, kuris CCR4 gali skatinti skrandžio vėžio ląstelių invazija ląstelę MMP-9. Panašūs pastebėjimai taip pat buvo atlikti atsižvelgiant į naviko invazijos per kai chemokino receptorių antagonistų, tokių kaip CXCR4 ir CCR7 [19, 20, 22]. Ir MMP-2, kurios struktūra buvo panašus į MMP-9, taip pat buvo odurzeń su skrandžio vėžio [35]. Tačiau, mes nustatėme, MMP-9, bet ne MMP-2, buvo pagrindinis molekulė dalyvauja CCR4-sąlygotas auglys invazijos, kuris gali būti dėl skirtingų bendrai procesų reguliatoriai, kurie sąveikauja su CCR4 įvairiose mikroaplinkos. Nors MMP-2 raiška CCR4 perkeltų skrandžio vėžio ląsteles, taip pat atrodė, kad būti didesnis nei, kad maketas perkeltų ląstelių, skirtumas buvo statistiškai nereikšmingas (duomenys neparodyti). Ląstelių gyvybingumas tyrimas parodė, kad padidėjusią CCR4 neturėjo įtakos skrandžio vėžio ląstelių augimą poveikį in vitro
, kuris buvo suderintas su ankstesniais tyrimais, kad parodė CCR4 ligandų negalėjo sukelti ląstelių proliferaciją [14], taip išvengiant galimai kurie gali turėti įtakos invazija indeksas arba MMP-9 sumą. Šie tyrimai buvo atliekami su arba be egzogeninės CCL22, su dideliais skirtumais MMP-9 raiškos tarp CCR4 ir Mock perkeltų ląstelių. Mes spėlioti galimus mechanizmus glaudesnio MMP-9 raiškos iki CCR4 raiškos gali būti iš dalies dėl to, kad autokrino arba paracrine išraiška CCL22 in vivo
. Dar kitos MMPs, kurie gali būti įtraukti į šį procesą ir tikslių signalizacijos keliai dar reikia toliau nagrinėti ateityje.

Taigi, mes pranešė pirmą kartą, kad CCR4 buvo nenormaliai per išreikštas pN0 skrandžio vėžio ir gali skatinti navikų invazijos. Be to, mūsų duomenys rodo, kad CCR4 sukeltas MMP-9 gamyba gali bent iš dalies džiajai naują mechanizmą, skirtą CCR4-sąlygotas auglys invazijos. Taigi antagonistai CCR4 gali būti naudinga kandidatus kontroliuoti anksti įvykius naviko progresavimo.

Pagalbinė informacija
S1 pav. Padidėjusi CCR4 neturėjo įtakos skrandžio vėžio ląstelių augimą poveikį in vitro
.
Po transfekciją su CCR4 ar Mock plazmidžių ir stimuliacijos arba nesant egzogeninės CCL22, SGC-7901 ir BGC-823 ląstelės buvo išpikuojami į 96 šulinėlių plokštelė. Ląstelės gyvybingumas buvo įvertintas CCK8 tyrimo metu nustatytu laiku kiekis
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0120059.s001
(TIF)

• PLoS ONE: Padidėjusi eukariotinių Vertimas inicijavimas faktorius 5A2 (EIF5A2) koreliuoja su ląstelių agresyvumas ir vargšų Išgyvenimo skrandžio vėžio
• PLoS ONE: Išgyvenimo Tinkamas Kepenų arterijų limfmazgių metastazių pacientams, sergantiems skrandžio vėžiu: Pasekmės D2 limfadenektomija