PLOS NËMMEN: Aberrant CCR4 Expression zu entholl Missiounen Lymph Node-Negativ Mënscherechter Gastric Cancer

Wat VerfÜgung

bewosst chemotaxis interesséiert Ass et déi bescht-bekannt Funktioun vun chemokine kenne déi mat entholl Metastasen enk verbonne sinn. An Tatsaach, positiven Ausdrock vun chemokine kenne och souguer ouni metastatic erhéijen zu e puer Patienten identifizéiert ginn hätt, iwwerdeems de Medeziner Relevanz vun dësem Donnéeën huet net komplett ageriicht ginn. Eis Studien huet entworf CCR4 Ausdrock Profiler ze klären an den potenziellen Roll an histologically Node-negativ (pN0) gastric Kriibs (GC) ze entdecken. Immunohistochemistry (IHC) oder immunohistofluorescence (IHF) Analyse gouf op uplanzen vu 108 Patienten mat pN0 GC kritt gesuergt. Mir hu fonnt, datt CCR4 war aberrantly iwwer-ausgedréckt inpN0 GC Stoffer, mat verschiddene Ausdrock Musteren op entholl Zellen a mam T-Etapp ( P VerfÜgung = 0.002) verbonnen ass. D'matrigel kënschtlech VerfÜgung Invasioun assay Teamchef iwwer-Ausdrock vun CCR4 am GC Zell Linnen bedeitend der invasiv Kapazitéit vun deenen Zellen gestäerkt. Resultater vun real-Zäit RT-Hinnen alleguer an gelatinzymography zougedréckt engem groussen Zouhuele Matrixentgasung metalloproteinase (MMP) -9 Produktioun vun de Batti Ausdrock vun CCR4 am GC Zell Linnen entschlof. Eis Daten hindeit, datt d'aberrant CCR4 Ausdrock vun entholl Invasioun vun pN0 GC Équipe ass an, conceivably, antagonists vun CCR4 kéint nëtzlech Kandidate ginn fir fréi Evenementer zu entholl Werdegang kontroléieren VerfÜgung

Fro:. Yang Y, Du L, Yang X, Qu A, Zhang X, Zhou C, et al. (2015) Aberrant CCR4 Ausdrock vun entholl Missiounen Lymph Node-Negativ Mënscherechter Gastric Cancer interesséiert. PLoS NËMMEN 10 (3): e0120059. Doi: 10.1371 /journal.pone.0120059 VerfÜgung

Akademesch Redakter: Chih-Hsin Tang, China Medical University, Taiwan VerfÜgung

Arnaque: 29. September 2014; Akzeptéiert: 3 Februar 2015; Publizéiert: 19. Mäerz 2015 VerfÜgung

Copyright: © 2015 Yang et al. Dëst ass eng oppen Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz CC BY verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an Quell Kaiser VerfÜgung

Data Disponibilitéit: D'Auteuren confirméieren dass hir Daten sinn bannent de mëttelalterlech Handschrëft an hir aktuell Ennerstëtzung Informatiounen Fichier VerfÜgung

Funding:. Dës Etude gouf vun der National Natural Science Foundation of China (Grant Nos 81271916 an 81301506), d'Research Fund fir d'Promotioun plangen ënnerstëtzt vun Héichschoulgesetz vun China (Nr 20120131110055), Onofhängeg Innovation Foundation vun Shandong University (IIFSDU, 2012TS174), de Shandong technologesch Development Project (STDP, 2013GSF11859), d'Natural Science Foundation vun Shandong (Grant Nr ZR2013HM104) an der National Key Séminairen Medical Spezialitéiten Foundation VerfÜgung

Wettsträit Interessen:. D'Auteuren erkläert hunn, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

Ähnlech zu Meeschter Cancers, gastric Kriibs (GC) ass eng héich. aggressiv malignancy deem Ëmfeld Otemschwieregkeeten ze violéieren trëtt éischter a bis wäit Organer metastasize. Obwuel Patienten mat Node-negativ gastric Kriibs hu besser Resultater wéi déi mat nodal Metastasen [1, 2], e puer vun deenen nach leit aus lokal recurrences oder wäiter Investitiounen der curative resection [3-5]. Identifikatioun effikass Faktoren oder Schlëssel Molekülle mat Krankheet Werdegang associating zu Darmstadt Node-negativ gastric Kriibs Patienten ass néideg que, datt dës Patienten aus adjuvant Therapien profitéiere kéint. VerfÜgung

Chemotaxis spillt eng wichteg Roll an entholl Metastasen, Dréi der motility vun metastatic Zellen duerch Iwwergäng vun chemoattractants. Gëlt, Mediate der chemokine kenne Uergel-spezifesch Metastasen vun erhéijen vun der Zil- Organer mat passend chemokines proposéiert [6]. Gastric Kriibs Zellen konnt verschidde chemokine kenne, wéi chemokine receptor 4 (CXCR4) an chemokine receptor 7 (CCR7) auszedrécken, a Co-Opt dës Molekülle fir Metastasen [7-12]. Aner Rollen vun chemokine kenne zu Kriibs Werdegang ausser chemotaxis gewiescht selten sënnlech. CCR4, engem C-C Typ chemokine receptor, huet virdrun op seng biologesch Funktioun vun immunopathogenesis vun hematological erhéijen do ginn [13]. Fir Datum, relativ wéineg Opmierksamkeet gouf doran Metastasen vun e puer staark erhéijen, inklusiv gastric Kriibs [14-17] zu der Roll vun CCR4 bezuelt. Eis Grupp huet gewisen datt d'lymphocyte-räiche GCs éischter méi oft positiv fir CCR4 ze ginn, an hunn eng Verfilmung Roll vun CCR4 zu entholl-entschlof immunosuppression [18], déi besot verschidde Ausdrock Profiler vun CCR4 am GC Stoffer an Salle Rollen vun dëser Protein am GC Werdegang. VerfÜgung

ass Et bekannt datt Invasioun déi éischt Schrëtt amgaang ze Kriibs Metastasen ass. Dofir hu gewisen, datt e puer chemokine kenne, wéi CXCR4 [19] an CCR7 [20], B-Zell chronescher Rezepter Leukämie Zell Invasioun duerch up-Regulatioun vun MMP-9 förderen. Kuerzem, Yu et al. gewisen, datt CXCR4 squamous Zell carcinoma Promotioun kéint [21] Zell Wanderung an Invasioun duerch Pinguin Ausdrock vun MMP-9 an MMP-13 am Elysée. Li a Kollegen fonnt dass CCR7 zu Mënsch Colon Kriibs Invasioun via upregulation vun MMP-9 [22] Équipe war. Et ass net kloer, awer, ob CCR4 och Kriibs Zell Invasioun Promotioun konnt. VerfÜgung

der breeder Verdeelung vun chemokine kenne bannent erhéijen andtheir Potential Rollen an entholl Invasioun an Metastasen Tatsaach, mir Hypothes, datt pN0 gastric Kriibs Patienten Droen bestëmmte chemokine kenne vläicht méi wahrscheinlech ginn weider Werdegang un Erfahrung. Fir eis Hypothes Test, ze propagéieren mir den Ausdrock Profiler vun CCR4 zu gastric Kriibs Zellen vun pN0 Patienten an hir Roll an gastric Kriibs Zell Invasioun. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

kennen an uplanzen VerfÜgung

Ray Echantillon sech aus 108 Patiente kritt (75 Männercher an 33 Weibercher, am Alter vun 35-71 Joer, Alter 62 Joer heeschen) mat pN0 gastric Kriibs amgaang curative resection vun der Primärschoul entholl zu Qilu Hospital vun Shandong University (Jinan, China). Mir benotzt uewen bascht normal Mo. Stoffer an Stoffer aus 56 gastric dysplasia Patienten (36 Männercher an 20 Weibercher, am Alter vun 35-68 Joer, mengen Alter 48 Joer) stemmt sou Kontrollen. All histopathologic Diagnosen an malignant Klassifikatiounen sech duerch Profiséquipe pathologists der Zäit vun Diagnos sech, no Weltgesondheetsorganisatioun International Histological Course vu Saachen [23], an der Thes agebousst Pheidippides sech baséiert op der International Union Géint Cancer (UICC) [24 ]. D'Etude gouf vun der Ethik Comité vun Qilu Hospital guttgeheescht, a schrëftlech informéiert Zoustëmmung vun all Patienten war och kritt. VerfÜgung

Immunohistochemistry an immunohistofluorescence VerfÜgung

IHC oder IHF war op paraffin Rubriken standing antibodies géint Mënschheet benotzt CCR4 (LS-A351; LifeSpanBioSciences, Seattle, jeeweils, USA) an Anti-Pan Cytokeratin (CK) antibody (ab80826; abcam, Cambridge, MA, USA), den duerch all Fabrikant gëtt Uweisungen. Unisse antibodies och Geess anti-Kanéngchen TRITC-conjugated antibodies (E031320; Amyjet Wëssenschaftlech Galaxy Wuhan, China), Geess anti-Maus FITC-conjugated antibodies (E0312400; Amyjet Wëssenschaftlech Galaxy Wuhan, China). D'Echantillon waren ënnert engem fluorescence microscope visualized an observéiert (IX81; Olympus, Tokyo, Japan), an der IHC Resultater ware wéi virdrun Rapport analyséiert [18] VerfÜgung

Zell Kultur VerfÜgung

De Mënsch gastric. Kriibs Zell Linnen SGC-7901 an BGC-823 goufen aus der Kultur Collection vun der chinesescher Akademie vun de Wëssenschaften (Shanghai, China) an haten an RPMI-1640 (HyClone, Logan, féier, USA) mat 10% FBS (Gibco nà kaaft, Invitrogen, Karlsbad CA, USA) um 37 ℃ zu engem humidified Atmosphär vu 5% CO _{2. VerfÜgung}

flüchteg iwwer-Ausdrock vun CCR4 zu SGC-7901 an BGC-823 Zellen VerfÜgung

Transiently transfection vun der plasmid EGFP-CCR4 (CCR4) oder eng EGFP Ausdrock Vecteure (mierkt) an gastric Zell Linnen war mat Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) wéi virdrun gemellt [18] gesuergt. An der transfection efficiencies sech duerch fluorescence microscope alles, real-Zäit ëmgedréint Transkriptiouns-polymerase Kette Reaktioun (RT-Hinnen alleguer) an Flux cytometry (FCM), bzw.. VerfÜgung

Quantification vun mRNA vun RT-Hinnen alleguer an Echtzäit RT -PCR VerfÜgung

Total RNS war vun Zellen isoléiert, TRIzol reagent benotzt (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) an transcriptase Reaktioune ëmgedréint sech mat Kit standing no de Protokoll d'Hiersteller (Fermentas, St. Leon-Schimmel, Däitschland ). Fir RT-Hinnen alleguer, goufen d'primers an Hinnen alleguer Konditioune fir amplification vun CCR4 benotzt virdrun ëmschriwwen [25]. A mënschlech glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) (no primer, 5'-GGTGGTCTC-CTCTGACTTCAACAG-3 "; ëmgedréint primer, 5'-GTTGTTGTAGCCA-AATTCGTTGT-3) usedas eng intern Norm gouf. Fir real Zäit RT-Hinnen alleguer, primers fir CCR4, MMP-9 an GAPDH an amplification Konditiounen benotzt goufen wéi virdrun gemellt [18, 25, 26]. VerfÜgung

FCM Analyse VerfÜgung

BTS sech recoltéiert incubated mat engem phycoerythrin (PE) -conjugated anti-CCR4 monoclonal antibody (FAB1567P, R & d Quelltext) oder mat enger Maus IgG2b-PE isotype Kontroll (IC0041P, R & d Quelltext) no der Taktik vum Produzent. FCM Analyse huet dann eng FACSCalibur Hëllef duerchgefouert (Becton Dickinson, Heidelberg, Däitschland) CCR4 Ausdrock op SGC-7901 an BGC-823 Zellen ze analyséieren, bzw.. VerfÜgung

Matrigel Invasioun assays VerfÜgung

Den kënschtlech VerfÜgung Invasioun assay war mat der 24. Zell Kultur Text mat 8-μm Schläimhait (BD Biosciences, San Jose, CA) gesuergt. All Membran war mat Matrigel Beschichtete (30 μg, Becton Dickinson, San Jose, CA) a fir 30min incubated. Dunn, 0,2 ml transfected oder Elteren GC Zellen sech am serum-gratis RPMI-1640 mat enger Konzentratioun vun 1,5 × 10 resuspended 5 /ml an an der ieweschter Chambre gesat, an 0.6 ml RPMI-1640 mëttelfristeg wouvun 10% FBS war zu der basolateral Chambre notéiert. No 24h vu incubation um 37 ℃ mat 5% CO _{2, goufen Zellen fix a mat 0,2% eosin Y. D'Zuel vun Zellen Kierchefënster déi zu der basal Säit vun der Membran migrated Équipe war op 200 × ënnert engem Liicht microscope laachen Vergréisserung. VerfÜgung}

Zell Nuetsvolen assay VerfÜgung

BTS an 96-gutt Placken um 5 × 10 3 Zellen /gutt an cultured fir uginn Zäit Punkten géint goufen. Zell Nuetsvolen war mat CCK8 (Beyotime, Haimen, China) folgenden Fabrikant d'Instruktioune bewäert. D'absorbance war um 450 nm Schwéngung Längt gemooss. All Zäit Punkt war an dräi Wells widderholl an der assay huet fir dräimol independentlyperformed. VerfÜgung

gelatin zymography VerfÜgung

Supernatants vun centrifugation gesammelt goufen no 24h Post-transfection an op engem SDS-PAGE gelies geléist mat 0,1% (w /v) gelatin. No electrophoresis, goufen d'Proteinen vun wäschen der gelies zweemol fir 40 min an 2,5% Triton X-100, gefollegt vun engem incubation fir 18 Stonnen op 37 ° C an enger Mëschung wouvun Tris-HCl 50 mm (pH 7.6), CaCl _{2 5mMm an NaCl 200 mm. Dunn huet d'gelies kuerz zu destilléiert Waasser an Kierchefënster mat 0,25% Coomassie Brilliant Blue R250 /45% methanol /10% acetic Seier fir 4h rinsed an dann zu 45% methanol, 8% acetic Seier destained. Gels sech dann mat Kodark Systemer gescannt an fotografeschen. VerfÜgung}

statistique Analyse VerfÜgung

Data aus op d'mannst dräi onofhängeg Experiment analyséiert a wéi déi heeschen ± Fils ausgedréckt. Der Relatioun tëscht CCR4 Ausdrock an T-Etapp gouf vun Chi-wäissfeldreg Test analyséiert. Aner Date goufen duerch Student t Test oder ANOVA wou passenden analyséiert. A P VerfÜgung Wäert vu manner wéi 0,05 war den statistesch relevant considéréiert. All analyséiert goufen mat statisteschen Software (Versiounen 13,0, SPSS Galaxy, Chicago, IL) gemaach. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

Während-Ausdrock vun CCR4 mat z'ënnerscheedde Ausdrock Musteren an pN0 fréi gastric Kriibs Otemschwieregkeeten

CCR4 Ausdrock zu Kriibs Zellen war bei eis Niveauen fonnt. Vun 108 paraffin-Ënnerbewosstsinn Stoffer, 29 Fäll (26.9%) zougedréckt negativ Ausdrock (-), 30 Fäll (27.8%) zougedréckt schwaach Ausdrock (+), 35 Fäll (32.4%) zougedréckt moderéiert Ausdrock (++), an 14 Fäll (13.0%) zougedréckt staark Ausdrock (+++) (Figebam. 1A-D). All bascht normal Mo. Stoffer zougedréckt negativ staining fir CCR4, a just 2 (3.6%) Fäll vun gastric dysplasia zougedréckt schwaach Ausdrock vun Membran CCR4 (Figebam. 1E an F). VerfÜgung

Béid Membran an Zytoplasma Ausdrock vun CCR4 sech observéiert Meeschter dacks an d'gutt-ënnerscheet entholl Näschter vun intestinal Typ, iwwerdeems den manner-ënnerscheet Zellen e cytoplasmic Muster vun CCR4 Ausdrock vun diffusen Typ gastric Kriibs (Figebam. 2) ze affichéieren Lien. Eng interessant Phänomen war, datt d'Zellen mat héich invasiv Potential, wéi Fleesch Invasioun, wiere Pénétratioun an Nerve Invasioun, och e cytoplasmic CCR4 Ausdrock Muster ugewisen (Figebam. 3). VerfÜgung

CCR4 iwwer-Ausdrock ënnerstëtzt gastric Kriibs Zell Invasioun VerfÜgung

op typesch Rubriken, et huet och gewisen, dass den Ausdrock Niveau vun CCR4 mat der Déift vun entholl Invasioun (Figebam. 3) zu Erhéijung Lien. D'IHC Analyse weisen kloer dass iwwer-Ausdrock vun CCR4 positiv mat T Etapp verbonne war ( P VerfÜgung = 0.002), wiere Invasioun ( P VerfÜgung = 0.001) an perineural Invasioun (P = 0.002) zu pN0 GC (Table 1). VerfÜgung

Mir gemellt hunn, datt de Niveau vun CCR4 FAQ zu puer gastric Zell Linnen relativ niddreg waren [18], a sou weider Abléck an CCR4-mediated entholl Invasioun ze kréien, eropgeluede Ausdrock vun CCR4 zu gastric Zell Linnen Leeschtung war wéi mer virdrun [18] beschriwwen. Héich transfection efficiencies sech duerch temps RT-Hinnen alleguer, FCM an fluorescence microscopy bestëmmt, bzw. (Figebam. 4A-C). D'EGFP war an der Keimzell, Zytoplasma an Membran vun der Vecteure Kontroll Zellen ausgedréckt, dat mat der mierkt plasmid transfected gewiescht; an der unisse Fusioun FAQ war op der Zytoplasma an Membran vun der CCR4 plasmid transfected Zellen en der. Matrigel Invasioun assay gewisen, datt d'Zuel vun EGFP-CCR4-transfected Zellen gastric Kriibs duerch d'matrigel Virowend sech vill méi héich wéi déi vun mierkt-transfected gastric Kriibs Zellen (Figebam. 4D). D'CCK8 assay uginn dass overexpression vun CCR4 keng Wierkung haten op gastric Kriibs Zell Prolifératioun (S1 Lalumi). VerfÜgung

CCR4-reegelen MMP-9 Produktioun vun gastric Kriibs Zellen VerfÜgung

méiglech Mechanismen Fir Test Basisdaten CCR4-mediated entholl Invasioun, évaluéieren mir den Effet vun CCR4 op MMP-9 Ausdrock an Aktivitéit. Real Zäit RT-Hinnen alleguer Analyse (Figebam. 5A) gewisen, datt EGFP-CCR4-transfected gastric Kriibs Zellen ausgedréckt héichen Niveau vun MMP-9 mRNA Verglach zu mierkt-transfected Zellen um 24h an der transfection. Gelatin zymography Analyse (Figebam. 5B) bekannt, datt de secretion an Aktivitéit vun MMP-9 mein weider-reglementéiert an d'supernatants vun EGFP-CCR4-transfected Zellen am Verglach mat mierkt-transfected Zellen um 48h an der transfection, mat oder ouni d'Aféierung vun exogenous CCL22. VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

D'Interaktiounen tëschent chemokine kenne vu Kriibs Zellen a passend chemokines vertrieden kritescher Schrëtt an entholl Metastasen. Allerdéngs, studyshowed de Conclusiounen vun eiser aktueller datt eng gewëssen Zuel vu gastric Kriibs Patienten ouni lymphatic Metastasen fir CCR4 staining och positiv waren. Anescht wéi am leschte Studien op Funktiounen vun déi puer chemokine kenne mediated chemotaxis, datt dës Fuerschung e Roman, invasiv Behuele vun CCR4. VerfÜgung

Chemokine kenne gehéiert zu enger Famill vu siwen-transmembrane G-FAQ-Koppel kenne déi Membran ginn Proteinen, an déi funktionell Konsequenze vun chemokine receptor Aktivitéit sidd allgemeng vun extracellular ligands [27] zu hänkt op Stimulatioun gegleeft. Allerdéngs huet de histological Echantillon vun den haitegen studéieren, datt et fir CCR4 z'ënnerscheedde Ausdrock Musteren goufen. CCR4 an Net-neoplastic Zellen zougedréckt negativ staining, mat nëmmen liichtschwaache Membran staining zu gastric dysplasia lesions. Membran an cytoplasmic Ausdrock vun CCR4 Meeschter dacks zu moderéiert wossten fir gutt-ënnerscheet entholl Näschter, iwwerdeems Ausdrock an manner-ënnerscheet Zellen Lien zu der Zytoplasma allem agespaart ginn. A méi intriguingly, wéi op typesch Rubriken gewisen, entholl Zellen héich invasiv Pouvoiren, wéi Fleesch Invasioun, wiere Pénétratioun an Nerve Invasioun suer-, awer oft eng fräi cytoplasmic Ausdrock vun CCR4. Eis Donnéen uginn enger enker Lien tëscht cytoplasmic CCR4 Ausdrock Muster an aggressive Behuelen vun gastric Kriibs Zellen. Dat fannen ass contrairement zu gemeinsam Virgab datt d'extracellular Domän vun engem chemokine receptor onbedéngt zu entholl Metastasen duerch d'Gespréich mat senger ligand néideg ass. Ähnlech Phänomener gewiescht mat der chemokine receptor CXCR4, hir nuklear Lokalisatioun observéiert mat de Werdegang vun verschiddenen erhéijen verbonne war [28-30]. Dës Donnéeë indictate datt d'gastric Kriibs Zellen kéint Emgéigend Stoffer via CCR4 zu engem ligand-onofhängeg Manéier violéieren. Déi aner ugesi gouf, datt de CCR4 internalization duerch seng ligand ëmmer kéinten e Mechanismus bedeiten dass am cytoplasmic CCR4 Ausdrock Muster Perséinlechkeeten huet. CCL22, déi CCR4 ligand duerch mënschlech gastric Kriibs Stoffer produzéiert [31], ass och ze causeCCR4 internalization aus Membran un Zytoplasma bekannt [32, 33], cytoplasmic staining suggeréiert kéint Show ageschalt sécher folgenden CCR4-CCL22 ligation. Méi Studien sinn waren déi genee Mechanismen opgedeckt dëse Manque Musteren vun chemokine receptor Ausdrock vun entholl Werdegang Équipe Basisdaten. Zousätzlech, proposéiert de lues-handelt Ausdrock vun CCR4 zu premalignant Stoffer, obwuel statistesch insignificantly héich wéi zu entholl-bascht normal Stoffer, datt CCR4 och am preneoplastic Etappe vun fréi entholl Entwécklung matmaachen kéint. VerfÜgung

An eiser leschter studéieren, hunn mir dass CCR4 war am GC Otemschwieregkeeten overexpressed, mee mir hu keng grouss Ënnerscheeder tëscht Patienten mat an ouni lymph Node Metastasen [18] fannen. Dofir Hypothes mir datt de chemokine kenne vläicht och eng wichteg Roll an Kriibs Entwécklung vun pN0 Patienten Leeschtung. Am Moment studéieren, awer eis Resultater engem positive Korrelatioun tëscht CCR4 Ausdrock an T-Etapp, déi mat eiser immunohistochemistry Conclusiounen konsequent waren déi CCR4 Ausdrock wéi d'Déift vun entholl Invasioun lues ze klammen Lien. Den Effet vun CCR4 op gastric Kriibs Zell Invasioun war vun transwell Zell Invasioun assays deelweis confirméiert. Dës assays goufen ënner Konditiounen standing wou keen exogenous CCR4 receptor ligand derbäi war. Et ass méiglech, datt verschidde Mechanismen existéieren kann duerch CCR4 zu engem ligand-onofhängeg Manéier, konsequent mat de Phänomen vun cytoplasmic Muster vun CCR4 mediated entholl Zell Invasioun ze regléieren, datt zu der héichgradeg invasiv Behuele vun entholl Zellen am GC Otemschwieregkeeten dinn huet. Mir confirméiert datt iwwer-Ausdrock vun CCR4 enk mat enger méi héijer Mooss vun entholl invasiveness verbonne war, also soen dass CCR4 iwwer-Ausdrock kéint metastatic Potential am GC Zellen eegens a weider entholl Werdegang förderen. Mir Hypothes och, datt d'autocrine CCR4 ligands och zu Zell motility Équipe huet kënschtlech VerfÜgung. D'Konzentratioun vun CCL22 am kulturelle supernatant GC Zell Linnen transfected mat oder ouni CCR4 sech relativ niddreg wéi mir (Donnéeën net gewisen) bewäert. Allerdéngs konnt d'Méiglechkeet net, datt d'autocrine oder paracrine Produktioun vun CCL22 ze entholl Invasioun via CCL22 /CCR4 Achs zu VIVO VerfÜgung bäidroen kënnen ausgeschloss ginn. CCL17 an CCL22, wéi héich Affinitéit CCR4 ligands, si vun GC an aner Kriibs Stoffer produzéiert. Besonnesch, CCL22, déi entweder duerch Kriibs Zellen oder entholl verbonne macrophages produzéiert gëtt, gemellt gouf an der Metastasen vun e puer Cancers [15-17] Équipe ze ginn. Dat seet en méiglech autocrine /paracrine Glück sensibiliséieren CCL22 an CCR4 tëscht verschiddene Zell Typen. VerfÜgung

MMP-2 an MMP-9 sinn déi meeschte besuergt a gutt Zeeche MMPs mat staarke proteolytic Aktivitéit an der extracellular Matrixentgasung (ECM). D'Konsequenz tëscht real Zäit RT-Hinnen alleguer Tester an gelatin zymography Experimenter kloer bewisen, dass iwwer-Ausdrock vun CCR4 zu gastric Kriibs Zellen vill MMP-9 Ausdrock an Aktivitéit gestäerkt. Dës Experimenter weider ënnersträicht an annoncéiert seng aktuell Roll vun entholl Invasioun ënner gewësse Conditiounen, mat oder ouni Stimulatioun vun exogenous CCL22. Et gëtt ugeholl, datt Matrixentgasung MMP-9 Typ IV collagen degrades déi eng grouss integral vun de Keller Membran ass an ass zu Kriibs Zell Invasioun an Metastasen zu Patiente mat gastric Kriibs [34] dinn. Hei, mir gëtt nei Hiweiser op d'Basisdaten Mechanismus datt CCR4 gastric Kriibs Zell Invasioun vun upregulation vun MMP-9 Promotioun kéint. Ähnlech Observatioune mat Respekt ze entholl Invasioun via puer chemokine kenne wéi CXCR4 an CCR7 [19, 20, 22] huet och schonn. An MMP-2, d'Struktur vun deem ze MMP-9 ähnlech war, war och mat gastric Kriibs [35] verbonne gemellt ginn. Allerdéngs fonnt mir MMP-9, mä net MMP-2, war e Schlëssel Protein CCR4-mediated entholl Invasioun Équipe an, déi wéinst verschiddenen Co-Reglementatioun kënnen dat mat CCR4 zu verschiddenen microenvironments zesummekomm. Obwuel MMP-2 Ausdrock an och gastric Kriibs Zellen CCR4-transfected war an mierkt-transfected Zellen wéi déi héich ze ginn, war d'Differenz statistesch gesäit (Donnéeën net gewisen). Zell Nuetsvolen assay zougedréckt datt overexpression vun CCR4 op der gastric Kriibs Zell Wuesstem keng Wierkung haten kënschtlech VerfÜgung, déi mat virdrun Studien konsequent war, datt d'CCR4 ligands zougedréckt a konnt Zell Prolifératioun net induce [14], bestinn also der eventueller datt vläicht Invasioun index oder MMP-9 Betrag betreffen. Dës assays sech mat oder ouni exogenous CCL22, mat Differenze zu MMP-9 Ausdrock tëscht CCR4 an mierkt transfected Zellen gesuergt. Mir spekuléieren de méiglech Mechanisme vun verstäerkte MMP-9 Ausdrock vun CCR4-overexpression kéint zu der autocrine oder paracrine Ausdrock vun CCL22 deelweis wéinst gin zu VIVO VerfÜgung. Nach aner MMPs dass an dësem Prozess bedeelegt sinn kéinten an der preziser sécher Weeër ëmmer weider an d'Zukunft lant gin. VerfÜgung

An Conclusioun, gemellt mir fir d'éischte Kéier, datt CCR4 aberrantly war zu pN0 gastric Kriibs iwwer-ausgedréckt a konnt entholl Invasioun förderen. Ausserdeem, uginn eis Daten datt CCR4-entschlof MMP-9 Produktioun kéinten op d'mannst deelweis déi nei Mechanismus fir CCR4-mediated entholl Invasioun underlie. Sou, antagonists vun CCR4 kéint nëtzlech Kandidate ginn fir fréi Evenementer zu entholl Werdegang kontroléieren. VerfÜgung

Informatiounen Ennerstëtzung VerfÜgung S1 Figebam. Overexpression vun CCR4 hu keen Effet op d'gastric Kriibs Zell Wuesstem kënschtlech VerfÜgung. VerfÜgung No transfection mat CCR4 oder mierkt plasmid an Stimulatioun mat oder ouni exogenous CCL22, SGC-7901 an BGC-823 Zellen sech reseeded zu 96-gutt zappen. Zellen Nuetsvolen war vun CCK8 assay um uginn Zäit Punkten évaluéieren VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0120059.s001 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung

• PLOS NËMMEN: Overexpression vun Eukaryotic Iwwersetzung Initiatioun Factor 5A2 (EIF5A2) deemolegt Weltbild mat Zell Aggressiveness an Poor traureg an Gastric Cancer
• PLOS NËMMEN: Iwwerliewe vun adäquate Hepatic verstoppten Lymph Node Metastasen zu kennen mat Gastric Cancer: Implikatioune fir D2 Lymphadenectomy