PLoS ONE: Poikkeava CCR4 Expression osallistuu Kasvain Invasion of imusolmukemääritysmenetelmä-Negative Human mahasyövän

tiivistelmä

Cellular kemotaksista on tunnetuimpia toiminto kemokiinireseptoreiden jotka läheisesti liittyvät kasvaimen etäpesäkkeitä. Itse asiassa positiivinen ilmaus kemokiinireseptoreiden voitaisiin myös tunnistaa jopa joidenkin potilaiden ilman etäpesäkkeitä, mutta kliinistä merkitystä tietoja ei ole täysin selvitetty. Tutkimuksemme suunniteltiin selvittämään CCR4 ekspressioprofiileja ja tutkia sen mahdollisen roolin histologisesti solmu-negatiivinen (pN0) mahasyöpä (GC). Immunohistokemia (IHC) tai immunohistofluorescence (IHF) analyysi suoritettiin näytteistä saadaan 108 potilailla, joilla on pN0 GC. Olemme havainneet, että CCR4 oli poikkeavasti yliekspressoitujen inpN0 GC kudoksissa, eri ilme kuvioita kasvainsoluihin ja liittyessä T-vaiheessa ( P
= 0,002). Matrigel in vitro
invaasiomääritys paljasti, että yli-ilmentyminen CCR4 GC solulinjoissa paransi merkittävästi invasiivisen kapasiteetti näissä soluissa. Tulokset reaaliaikainen RT-PCR: llä ja gelatinzymography osoitti merkittävää kasvua matriisimetalloproteinaasi (MMP) -9 tuotanto indusoi pakotettu ilmentyminen CCR4 GC solulinjoissa. Tuloksemme viittaavat siihen, että poikkeava CCR4 ilmentyminen on osallisena kasvaimen invaasion pN0 GC ja, mahdollisesti, antagonistit CCR4 voisi olla hyödyllistä ehdokkaita ohjaukseen aikaisin tapahtumien syövän etenemiseen.

Citation: Yang Y, Du L, Yang X, Qu A, Zhang X, Zhou C, et al. (2015) Poikkeava CCR4 Expression osallistuu Kasvain Invasion of imusolmukemääritysmenetelmä-Negative Human Mahalaukun syöpä. PLoS ONE 10 (3): e0120059. doi: 10,1371 /journal.pone.0120059

Academic Editor: Chih-Xin Tang, Kiina Medical University, Taiwan

vastaanotettu: 29 syyskuu 2014; Hyväksytty: 03 helmikuu 2015; Julkaistu: 19 maaliskuu 2015

Copyright: © 2015 Yang et al. Tämä on avoin pääsy artikkeli jaettu ehdoilla Creative Commons Nimeä lisenssi, joka sallii rajoittamattoman käytön, jakelun ja lisääntymiselle millä tahansa välineellä edellyttäen, että alkuperäinen kirjoittaja ja lähde hyvitetään

Data Saatavuus: Kirjoittajat vahvistaa että heidän tietonsa ovat käsikirjoituksen ja sen nykyinen tukeminen Tietopaketti.

Rahoitus: Tämä tutkimus tukivat National Natural Science Foundation of China (Grant nro 81271916 ja 81301506), Research Fund tohtorikoulutuskeskukseen of Higher Education of China (nro 20120131110055), Independent innovaatio Foundation Shandongin yliopistossa (IIFSDU, 2012TS174), Shandong teknologista kehittämistä Project (STDP, 2013GSF11859), Natural Science Foundation of Shandong (Grant nro ZR2013HM104) ja National Key Clinical Medical Specialties Foundation.

kilpailevat edut: kirjoittajat ovat ilmoittaneet, etteivät ole kilpailevia intressejä ole.

Johdanto

Kuten useimmat syövät, mahasyöpä (GC) on erittäin aggressiivinen pahanlaatuisen jolla on taipumus hyökätä ympäröivään kudokseen ja etäpesäkkeitä kaukaisiin elimiin. Vaikka potilaille, joilla on imusolmukkeisiin negatiivinen mahasyövän olla parempia tuloksia kuin ne, joilla solmukohtien etäpesäkkeitä [1, 2], joista osa kärsi edelleen paikallista uusiutumista eikä etäispesäkkeitä jälkeen parantava resektio [3-5]. Kartoittamaan tehokkaita tekijöitä tai avainmolekyylejä kanssaan taudin etenemistä järjestetään imusolmukkeisiin negatiivinen mahasyöpäpotilaista on välttämätöntä, ottaen huomioon, että nämä potilaat saattavat hyötyä adjuvanttia hoitoja.

Kemotaksia avainasemassa tuumorimetastaasissa, ohjaa motiliteettia metastaattinen soluihin kaltevuudet kemoattraktantit. On huomattava, että kemokiinireseptorit välittävät elinspesifiseen syöpäkasvainten etäpesäkkeiden vuorovaikutuksessa niiden vastaavia kemokiinien kohde-elinten [6]. Mahalaukun syöpäsolut voivat ilmaista erilaisia ​​kemokiinireseptoreita, kuten kemokiinireseptori 4 (CXCR4) ja kemokiinireseptori 7 (CCR7-), ja yhteistyö valitsevat nämä molekyylit etäpesäke [7-12]. Muut roolit kemokiinireseptoreiden syövän etenemisen paitsi kemotaksista on harvoin paljastunut. CCR4, C-C-tyypin kemokiinireseptori, on aikaisemmin keskittynyt sen biologista tehtävää immunopatogeneesi hematologisten kasvaimia [13]. Tähän mennessä suhteellisen vähän huomiota on kiinnitettävä siihen, CCR4 edistämisessä etäpesäke joidenkin kiinteiden kasvainten, mukaan lukien mahasyöpä [14-17]. Ryhmämme on osoittanut, että lymfosyyttien-rikas GC yleensä useammin positiivinen CCR4, ja löytäneet uuden roolin CCR4 kasvainten aiheuttaman immunosuppressio [18], mikä osoittaa eri ekspressioprofiilit CCR4 GC kudoksissa ja monitoiminen rooleja tämän molekyylin GC etenemiseen.

on hyvin tiedossa, että hyökkäys on ensimmäinen askel, joka johtaa syövän etäpesäkkeiden. Todisteita ovat osoittaneet, että jotkut kemokiinireseptoreita, kuten CXCR4 [19] ja CCR7 [20], edistää krooninen lymfaattinen leukemia soluinvaasiota kautta ylössäätöä MMP-9. Äskettäin, Yu et ai. osoittivat, että CXCR4 voisi edistää solujen vaeltamiseen ja invaasion kautta asiakkuutta MMP-9 ja MMP-13 suun okasolusyöpä [21]. Li ja työtovereiden totesi, että CCR7- oli mukana ihmisen paksusuolen syövän invaasio kautta ylössäätely MMP-9 [22]. Ei ole kuitenkaan selvää, onko CCR4 voisi myös edistää syöpäsolujen invaasiota.

Koska laaja levinneisyys kemokiinireseptoreiden kasvaimiin andtheir mahdollisia rooleja kasvaimen invaasio ja etäpesäkkeiden, me arveltu, että pN0 mahasyöpäpotilaista kuljetetaan tiettyjä kemokiinin reseptorit voivat olla herkemmin etenemisen. Testata hypoteesia, tutkimme ilmaus profiilit CCR4 mahasyövän soluissa pN0 potilaille, ja sen merkitys mahalaukun syöpäsoluinvaasiota.

Materiaalit ja menetelmät

Potilaat ja näytteet

Tissue näytettä otettiin 108 potilasta (75 miestä ja 33 naista, joiden ikä 35-71 vuotta, keski-ikä 62 vuotta) ja pN0 mahasyöpä joille parantava resektio primaarikasvaimen Qilu sairaalan Shandong University (Jinan, Kiina). Käytimme edellä sovitettu viereisten normaali mahan kudoksissa ja kudoksia 56 mahalaukun dysplasia potilasta (36 miestä ja 20 naista, joiden ikä 35-68 vuotta, keski-ikä 48 vuotta) kontrolleina. Kaikki histopatologinen diagnoosi ja pahanlaatuiset luokituksia määritettiin vanhempi patologit aikaan diagnoosin mukaan Maailman terveysjärjestö WHO International histologinen luokitus kasvaimia [23], ja leikkauksen jälkeisen patologinen lavastus määritettiin perustuen International Union Against Cancer (UICC) [24 ]. Tutkimuksen hyväksyi eettisen komitean Qilu sairaalan ja kirjallinen suostumus kaikilta potilailta saatiin myös.

immunohistokemia ja immunohistofluorescence

IHC tai IHF suoritettiin parafiinileikkeillä käyttäen vasta-aineita ihmisen CCR4 (LS-A351; LifeSpanBioSciences, Seattle, WA, USA) ja anti-pan sytokeratiinivasta (CK) vasta-aineella (ab80826; Abcam, Cambridge, MA, USA) ohjeiden kuin kunkin valmistajan. Fluoresoiva vasta-aineita ovat vuohen anti-kani-TRITC-konjugoiduilla vasta-aineilla (E031320, Amyjet Scientific, Inc. Wuhan, Kiina), vuohen anti-hiiri-FITC-konjugoiduilla vasta-aineilla (E0312400; Amyjet Scientific, Inc. Wuhan, Kiina). Näytteet visualisoitiin ja tarkkailtiin fluoresenssimikroskoopilla (IX81, Olympus, Tokio, Japani), ja IHC tulokset analysoitiin, kuten aiemmin on raportoitu [18].

Soluviljely

Ihmisen mahalaukun syöpäsolulinjoja SGC-7901 ja BGC-823 ostettiin Culture Collection Kiinan Academy of Sciences (Shanghai, Kiina) ja RPMI-1640 (HyClone, Logan, UT, USA) täydennettynä 10% FBS (Gibco, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 37 ℃ kostutetussa ilmakehässä 5% CO _2.

Ohimenevä yli-ilmentyminen CCR4 in SGC-7901 ja BGC-823 solut

Väliaikaisesti transfektoimalla plasmidin EGFP-CCR4 (CCR4) tai EGFP ekspressiovektoriin (mock) mahalaukun solulinjoissa suoritettiin käyttäen Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), kuten aiemmin on raportoitu [18]. Ja transfektiotehokkuudet määritettiin fluoresenssimikroskooppi, reaaliaikainen käänteistranskriptio-polymeraasiketjureaktio (RT-PCR) ja virtaussytometria (FCM), vastaavasti.

kvantifiointi mRNA: RT-PCR ja reaaliaikainen RT -PCR

Kokonais-RNA eristettiin soluista käyttämällä TRIzol-reagenssia (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ja käänteistranskriptaasia reaktiot suoritettiin mukainen pakkaus valmistajan protokollan (Fermentas, St. Leon-Rot, Saksa ). RT-PCR-alukkeet ja PCR-olosuhteet monistamiseen CCR4 käytettiin kuten aiemmin on kuvattu [25]. Ja ihmisen glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH) (forward-aluke, 5'-GGTGGTCTC-CTCTGACTTCAACAG-3 '; taaksepäin-aluketta, 5'-GTTGTTGTAGCCA-AATTCGTTGT-3'), oli usedas sisäisenä standardina. Reaaliaikaisen RT-PCR-alukkeet CCR4, MMP-9 ja GAPDH ja monistamisen olosuhteita käytettiin, kuten aiemmin on raportoitu [18, 25, 26].

FCM analyysi

Solut kerättiin inkuboitiin jossa on fykoerytriini (PE) konjugoidulla anti-CCR4-monoklonaalinen vasta-aine (FAB1567P, R &D Systems) tai hiiren IgG2b-PE isotyyppikontrollilla (IC0041P, R &D Systems) mukaisesti valmistajan ohjeiden mukaisesti. FCM analyysi suoritettiin sitten käyttäen FACSCalibur (Becton Dickinson, Heidelberg, Saksa) analysoida CCR4 ilmaisun SGC-7901 ja BGC-823-soluissa, vastaavasti.

matrigeelin invaasio määrityksissä

in vitro
invaasiomääritys suoritettiin käyttäen 24 soluviljelmän insertit sisältävät 8 um kalvot (BD Biosciences, San Jose, CA). Kukin kalvo päällystettiin matrigeelin (30 ug, Becton Dickinson, San Jose, CA) ja inkuboitiin 30 min. Sitten 0,2 ml transfektoitu tai vanhempien GC solut suspendoitiin uudelleen seerumittomaan RPMI-1640, jonka pitoisuus oli 1,5 x 10 ^{5 /ml ja sijoitetaan ylempään kammioon, ja 0,6 ml RPMI-1640-väliaineessa, joka sisälsi 10% FBS: ää oli lisätään basolateraalisessa kammioon. 24 tunnin kuluttua inkubaation 37 ℃ 5% CO _{2, solut kiinnitettiin ja värjättiin 0,2% eosiinilla Y. solujen lukumäärä, jotka olivat siirtyneet pohjapinta membraanin kvantifioitiin valomikroskoopilla 200 x suurennus.}}

solunelinkykyisyysmääritys

solut ympättiin 96-kuoppalevyille 5 x 10 ^{3 solua /kuoppa ja viljeltiin ilmoitettuina ajankohtina. Solujen elinkelpoisuus arvioitiin käyttämällä CCK8 (Beyotime, Haimen, Kiina) valmistajan ohjeiden mukaisesti. Absorbanssi mitattiin 450 nm: ssä aallonpituudella. Kunakin ajankohtana toistettiin kolme kuoppiin ja määritys independentlyperformed kolme kertaa.}

gelatiinitsymografialla

Supernatantit otettiin talteen sentrifugoimalla 24 tunnin kuluttua transfektion jälkeen, ja eroteltiin SDS-PAGE-geelillä, joka sisälsi 0,1% (w /v) gelatiinia. Elektroforeesin jälkeen, proteiinit renaturoitiin pesemällä geeliä kahdesti 40 min 2,5% Triton X-100, jota seuraa inkubointi 18 tuntia 37 ° C: ssa seoksessa, joka sisältää Tris-HCI 50 mM (pH 7,6), CaCI _{2 5mMm ja NaCl 200 mM. Sitten geeli huuhdotaan nopeasti tislatulla vedellä ja värjättiin 0,25% Coomassie Brilliant Blue R250 /45% metanoli /10% etikkahappo: ssa 4 tuntia ja sitten väri poistettiin 45% metanolia, 8% etikkahappoa. Sitten geelit skannattu ja valokuvattiin Kodark järjestelmiin.}

Tilastollinen

Tiedot vähintään kolmen erillisen kokeen analysoitiin ja ilmaistiin keskiarvona ± SD. Suhde CCR4 ilmaisun ja T-vaiheen analysoitiin khiin neliö testi. Muut tiedot analysoitiin Student t-testillä tai ANOVA tarpeen mukaan. P
arvo on vähemmän kuin 0,05 katsottiin tilastollisesti merkitsevä. Kaikki analyysit tehtiin käyttäen tilasto-ohjelmalla (versiot 13,0, SPSS, Inc., Chicago, IL).

Tulokset

Yli-ilmentyminen CCR4 kanssa erilaisia ​​ekspressiomalleja pN0 alussa mahasyövän kudoksen

CCR4 ilmentymistä syöpäsoluissa havaittiin vaihtelevia määriä. Niistä 108 parafinoidut kudoksia, 29 tapauksessa (26,9%) osoitti negatiivinen ilmaus (-), 30 tapausta (27,8%) osoitti heikkoa lauseke (+), 35 tapausta (32,4%) osoitti kohtalaista lauseke (++), ja 14 tapausta (13,0%) osoitti voimakasta ekspressiota (+++) (Fig. 1A-D). Kaikki vierekkäiset normaaleissa mahan kudoksissa oli negatiivinen värjäytyminen CCR4: ää, ja vain 2 (3,6%) tapauksista mahalaukun dysplasian osoitti heikkoa ilmentymistä kalvon CCR4 (Fig. 1 E ja F).

Sekä kalvo ja solulimassa ilmentymistä CCR4 oli yleisimmin havaittava hyvin erilaistunut kasvain pesiä suolen tyyppiä, kun taas vähemmän erilaistuneita soluja taipumus näyttää soluliman kuvio CCR4 ilmaisun hajanainen tyyppi mahasyövän (Fig. 2). Mielenkiintoinen ilmiö oli, että solut erittäin invasiivisia potentiaalia, kuten lihas invaasio, verisuonten tunkeutuminen ja hermo invaasio, näytetään myös sytoplasmisen CCR4 ilme kuvio (Fig. 3).

CCR4 yli-ilmentyminen edistää mahalaukun syöpäsolun invaasio

tyypillinen kohdat, se oli myös osoittanut, että ilmaisu taso CCR4 taipumus lisätä syvyyttä kasvaimen invaasion (Fig. 3). IHC-analyysi osoitti selvästi, että yli-ilmentyminen CCR4 positiivisesti liittyvät T vaiheessa ( P
= 0,002), verisuonten invaasio ( P
= 0,001) ja hermoa invaasio (P = 0,002) in pN0 GC (taulukko 1).

Olemme raportoineet, että tasot CCR4-proteiinin olivat melko alhainen joissakin mahalaukun solulinjoissa [18], ja siten saada lisää oivalluksia CCR4 välittämän kasvain invaasio, yli- ilmentyminen CCR4 mahalaukun solulinjoissa suoritettiin kuten aiemmin on kuvattu [18]. Korkea transfektiotehokkuudet määritettiin reaaliaikaisella RT-PCR, FCM ja fluoresenssimikroskopia, vastaavasti (Fig. 4A-C). EGFP on ilmaistu tumassa, sytoplasmassa ja kalvo vektorin kontrolli-solut, jotka on transfektoitu mock plasmidi; ja fluoresoiva fuusioproteiini paikallistettiin päälle sytoplasmassa ja kalvo CCR4 plasmidin transfektoiduista soluista. Matrigel invaasiomääritys osoitti, että numerot EGFP-CCR4-transfektoitujen mahalaukun syöpäsolujen kulkee matrigeeliä olivat merkittävästi korkeammat kuin mock-transfektoitujen mahalaukun syöpäsolujen (Fig. 4D). CCK8 määritys osoitti, että yli-ilmentyminen CCR4 ollut vaikutusta mahalaukun syövän solujen lisääntymistä (S1 Kuva).

CCR4-säännelty MMP-9 tuotanto mahalaukun syöpäsoluissa

Voit testata mahdollisimman mekanismeista CCR4 välittämä kasvaimen invaasio, arvioimme vaikutus CCR4 on MMP-9 ilmaisun ja toimintaa. Reaaliaikainen RT-PCR-analyysi (Fig. 5A), osoitti, että EGFP-CCR4-transfektoitujen mahasyövän solut ilmensivät korkeampia MMP-9: n mRNA: n verrattuna mock-transfektoituja soluja 24 tunnin kohdalla transfektion jälkeen. Gelatiinitsymografialla analyysi (kuvio. 5B) paljasti, että eritystä ja MMP-9 olivat merkittävästi säädelty supernatanteissa EGFP-CCR4-transfektoiduissa soluissa verrattuna mock-transfektoituja soluja 48 tuntia transfektion jälkeen, tai ilman lisäystä eksogeenista CCL22.

keskustelu

vuorovaikutukset kemokiinireseptoreita syöpäsolujen ja niiden vastaavia kemokiinien edustavat kriittiset vaiheet tuumorimetastaasissa. Havainnot kuitenkin nykyiseen studyshowed että tietty määrä mahasyöpäpotilaista ilman imusuonten etäpesäke olivat myös positiivisia CCR4 värjäystä. Toisin kuin useimmat aikaisemmat tutkimukset toimintoja kemotaksiksen välittävät joitakin kemokiinireseptoreita, tämä tutkimus paljasti uusi, invasiivisen käyttäytymisen CCR4.

Kemokiinireseptorit kuuluvat perheen seitsemän transmembraanisen G-proteiiniin kytkettyjen reseptorien, jotka ovat kalvon proteiineja, ja funktionaalinen seuraukset kemokiinireseptoriaktiivisuuden uskotaan yleisesti riippuu stimulaation ekstrasellulaarinen ligandeja [27]. Kuitenkin histologinen näytteitä nykyisen tutkimus osoitti, että oli olemassa selvä ilmaus kaavoja CCR4. CCR4 ei-neoplastiset solut osoittivat negatiivista värjäystä, jossa vain heikko solukalvojen värjäytymistä mahalaukun dysplasia vaurioita. Ja sytoplasman ilmaus CCR4 useimmin esiintyi kohtalaisesta hyvin erilaistunut kasvain pesiä, kun taas ilmaisu heikommassa erilaistuneita soluja oli taipumus rajoittua ensisijaisesti sytoplasmaan. Ja enemmän kiehtovan, kuten on esitetty tyypillinen osissa, kasvainsolut, joilla korkea invasiivisia valmiuksia, kuten lihas invaasio, verisuonten tunkeutuminen ja hermo invaasio, usein osoitti lisääntynyttä soluliman ilmaus CCR4. Meidän data osoitti läheisen yhteyden sytoplasmista CCR4 ekspressiokuviota ja aggressiivista käyttäytymistä mahalaukun syöpäsoluja. Tämä havainto on vastoin Yleinen olettamus, että solunulkoinen domeeni kemokiinireseptorin tarvitaan välttämättä tuumorimetastaasissa kautta vuorovaikutuksessa sen ligandin. Samanlaisia ​​ilmiöitä on havaittu kemokiinireseptori CXCR4, jonka ydinvoiman lokalisointi liittyi etenemiseen eri kasvainten [28-30]. Nämä tiedot indictate että mahalaukun syöpäsolut voi hyökätä lähellä kudosten kautta CCR4 ligandista riippumattomalla tavalla. Toinen hypoteesi oli, että CCR4 sisäistämisen aiheuttanut sen ligandi voi edustaa mekanismia, joka on kehittynyt sytoplasmisen CCR4 ekspressiokuvio. CCL22, CCR4-ligandin tuottaman ihmisen mahasyövän kudoksissa [31], on myös tunnettua causeCCR4 sisäistämisen välillä kalvo sytoplasmaan [32, 33], mikä viittaa siihen, sytoplasminen värjäys voi näyttää aktivoitu signalointia seuraavat CCR4-CCL22 ligaatiolla. Lisää tutkimuksia tarvitaan paljastaa tarkkaa mekanismia taustalla epänormaalien malleja Kemokiinireseptorin ilmaisun osallisena syövän etenemiseen. Lisäksi hitaasti tehostaa ilmentymistä CCR4 on premalignien kudoksissa, vaikka tilastollisesti merkityksetön suurempi kuin kasvaimen vieressä normaaleissa kudoksissa, ehdotti, että CCR4 voi osallistua esineoplastiset vaiheissa varhaisen kasvaimen kehittymisen.

Edellisessä tutkimuksessa havaittiin, että CCR4 yliekspressoitui GC kudoksessa, mutta emme löytäneet merkittäviä eroja potilaiden ja ilman imusolmuke etäpesäke [18]. Tämän vuoksi teimme olettamuk- että kemokiinireseptoreita, voi myös olla tärkeä rooli syövän kehittymisessä ja pN0 potilailla. Esillä olevassa tutkimuksessa tuloksemme osoitti positiivisen korrelaation CCR4 ilmaisun ja T-vaiheen, joka olivat yhdenmukaisia ​​meidän immunohistokemia havaintoja, CCR4 ilmaisu taipumus lisätä syvyyden kasvaimen invaasio eteni. Vaikutus CCR4 mahalaukun syöpäsoluinvaasiota oli osittain vahvistettu siirtokuoppaan soluinvaasiota määrityksissä. Nämä määritykset suoritettiin olosuhteissa, joissa ei ole eksogeenisiä CCR4-reseptorin ligandi lisättiin. Oli mahdollista, että erilaiset mekanismit saattavat olla säätelemään kasvainsolun invaasiota välittyy CCR4 ligandista riippumattomalla tavalla yhdenmukainen ilmiö sytoplasman rakenteen CCR4 joka liittyi erittäin invasiivisia käyttäytymistä kasvainsolujen GC kudoksessa. Olemme vahvistaneet, että yli-ilmentyminen CCR4 oli tiiviisti korkeampi kasvaimen invasiivisuus, mikä osoittaa, että CCR4 yli-ilmentyminen voi siirtää metastaattista potentiaalia GC soluissa ja edistää syövän etenemiseen. Olemme myös arveltu, että autokriininen CCR4 ligandit olivat myös mukana soluliikkuvuus in vitro
. Pitoisuudet CCL22 kulttuurin supernatantissa GC jotka transfek- tai ilman CCR4 olivat melko alhaiset arvioimme (tuloksia ei ole esitetty). Kuitenkin mahdollisuus ei voida sulkea pois, että autokriinistä tai parakriiniseen tuotantoa CCL22 voisi vaikuttaa kasvaimen invaasio kautta CCL22 /CCR4 akseli in vivo
. CCL17 ja CCL22, kuten korkea affiniteetti CCR4 ligandit, tuotetaan GC ja muiden syövän kudoksissa. Erityisesti, CCL22, joka on valmistettu joko syöpäsolut tai kasvaimeen liittyvien makrofagien, on raportoitu olevan mukana etäpesäkkeiden useiden syöpien [15-17]. Tämä viittaa mahdolliseen autokriinisen /parakriininen silmukka joihin CCL22 ja CCR4 eri solutyyppejä.

MMP-2 ja MMP-9 ovat eniten huolissaan ja hyvin tunnettu MMP vahvojen proteolyyttinen aktiivisuus soluväliaineen (ECM). Johdonmukaisuuden reaaliaikainen RT-PCR testejä ja gelatiinitsymografialla kokeet osoittivat selvästi, että yli-ilmentyminen CCR4 mahalaukun syöpäsoluissa huomattavasti korkeampia MMP-9 ilmaisun ja toimintaa. Nämä kokeet korostuu ja ilmoitti sen todellinen merkitys syövän leviämisen tietyin edellytyksin tai ilman stimulaatiota eksogeeniset CCL22. Uskotaan, että matriisi MMP-9 hajottaa tyypin IV kollageenia, joka on pääainesosa tyvikalvon ja liittyy syöpäsolujen invaasiota ja etäpesäkkeiden potilailla, joilla on mahalaukun syöpä [34]. Täällä tarjotaan uusia vihjeitä taustalla olevaa mekanismia että CCR4 voitaisiin edistää mahalaukun syöpäsoluinvaasiota sää- telyllä MMP-9. Samanlaisia ​​havaintoja on tehty myös suhteessa kasvaimen invaasion välityksellä joidenkin kemo- reseptoreihin, kuten CXCR4 ja CCR7 [19, 20, 22]. Ja MMP-2, jonka rakenne oli samankaltainen MMP-9, on myös raportoitu liittyvän mahalaukun syöpä [35]. Kuitenkin olemme huomanneet, MMP-9, mutta ei MMP-2, on keskeinen molekyyli osallistuu CCR4-välitteisen tuumori-invaasio, joka voi johtua eri co-säätimiä, jotka ovat vuorovaikutuksessa CCR4 eri mikroympäristöihin. Vaikka MMP-2: n ilmentymisen in CCR4-transfektoiduissa mahalaukun syöpäsolujen myös näytti olevan korkeampi kuin mock-transfektoiduissa soluissa, ero oli tilastollisesti merkityksetön (tuloksia ei ole esitetty). Solunelinkykyisyysmääritys osoitti, että yli-ilmentyminen CCR4 ei ollut vaikutusta mahalaukun syöpäsolujen kasvua in vitro
, joka oli yhdenmukainen aikaisempien tutkimusten, jotka osoittivat CCR4 ligandit eivät voi indusoida soluproliferaatiota [14], jolloin vältetään mahdollisesti jotka voivat vaikuttaa invaasio indeksi tai MMP-9 summa. Nämä määritykset suoritettiin tai ilman eksogeenista CCL22, on merkittäviä eroja eri MMP-9 ilmaisun välillä CCR4 ja valetransfektoiduilla soluja. Me spekuloida mahdollisia mekanismeja tehostetun MMP-9 ilmentyminen CCR4-yli-ilmentyminen saattaa olla osittain johtuu autokriinistä tai parakriiniseen ilmaus CCL22 in vivo
. Vielä muita MMP jotka saattavat olla mukana tässä prosessissa ja tarkka signalointireittejä jäi tutkitaan edelleen tulevaisuudessa.

Yhteenvetona raportoimme ensimmäistä kertaa, että CCR4 oli poikkeavasti yliekspressoitu pN0 mahasyövän ja voisi edistää kasvaimen invaasio. Lisäksi meidän tulokset osoittivat, että CCR4 aiheuttama MMP-9 tuotanto saattaisi ainakin osittain pohjana uuden mekanismin CCR4-välitteistä kasvaimen invaasio. Siten antagonistit CCR4 voisi olla hyödyllistä ehdokkaita ohjaukseen aikaisin tapahtumien syövän etenemiseen.

tukeminen Information
S1 Kuva. Yliekspressio CCR4 ei ollut vaikutusta mahalaukun syöpäsolujen kasvua in vitro
.
Jälkeen transfektio CCR4 tai MOCK plasmidia ja stimulaation tai ilman eksogeenista CCL22, SGC-7901 ja BGC-823-soluja siirrostettiin uudelleen 96-kuoppalevylle. Solut elinkelpoisuus arvioitiin CCK8 koetta ilmoitettuina ajankohtina.
Doi: 10,1371 /journal.pone.0120059.s001
(TIF) B

• PLoS ONE: n yli-ilmentyminen eukaryoottitranslaatioon initiaatiofaktoria 5A2 (EIF5A2) korreloi Cell aggressiivisuus ja huono Survival in Mahalaukun Cancer
• PLoS ONE: Survival of Oikea Maksan Valtimo imusolmukemääritysmenetelmä Etäpesäke potilailla, joilla on mahasyövän: Implications for D2 imusolmukkeiden