Pozadina pregled
Metilirani DNA u tekućinu može biti pogodna biomarker za rak pacijenata. XAF1 pregled je pokazala da se često podregulirani u ljudskoj raka želuca (GC). Ovdje smo istraživali ako XAF1 pregled metilacije u GC mogao biti koristan biomarkera. Pregled Metode pregled Real-time RT-PCR koristi za otkrivanje XAF1 Rezultati potvrdio česta XAF1 pregled smanjivanje se u oba mRNA i proteina u GC tkiva u usporedbi s kontrolnom skupinom i PCHNTs. XAF1 pregled Hipermetilacija se pokazalo u 83,2% (168/202) GC tkiva i 27,2% (55/202) u PCHNTs, a ne metilacije je otkriven u 88 normalnih kontrola. Razina metilacije na GC tkiva bila je značajno viša nego u PCHNTs ( p < 0.05 pregled). Hipermetilacija od XAF1 Zaključci pregled 1) disfunkcija XAF1 pregled je česta i reguliran kroz XAF1 pregled promotora Hipermetilacija; 2) otkrivanje cirkulirajućih metilira XAF1 pregled DNA u serumu može biti koristan biomarker u dijagnostici, procjenu pacijentovog ishod (prognozu i ponavljanje) za GC pacijenata pregled Izvor:. Ling ZQ, Lv P Lu XX, Yu JL, Han J, Ying LS, et al. (2013) Cirkulacija metilira XAF1 pregled, DNA Označava slabim prognozama za rak želuca. PLoS ONE 8 (6): e67195. doi: 10,1371 /journal.pone.0067195 pregled Urednik: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, Sjedinjene Američke Države pregled Primljeno: 12. ožujka 2013. godine; Prihvaćeno: 16. svibnja 2013; Objavljeno: 27. lipnja 2013 pregled Copyright: © 2013 Ling i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan financiranja. Ovo istraživanje je podržan od strane grant od Science and Technology General Project provincije Zhejiang (br. 2009C33143), a dijelom grant od okosnica talent Zhejiang Provincial medicinu i higijenu Platform programa (br. 2011RCA009). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled Uvod pregled rak želuca je jedan od najčešćih oblika raka u Kini, s visokim učestalosti i smrtnosti, oko otpada 10% svih malignih bolesti [1]. Želučani tumorigenezi je kompliciran, više-korak proces koji uključuje izmjene mnogih gena [2]. Netipična promotor metilacije je jedan od glavnih mehanizama za tišini neke tumor supresor gena i gena uzrokuje tumor i igra vrlo važnu ulogu u patogenezi i progresiji u ljudskim tumorima [3], [4] - [6], uključujući rak želuca [7] [8]. U međuvremenu, gomilaju podaci snažno sugerirao da metilacije DNA može biti koristan i moćan biomarkera u procjeni rizika od raka [5], [7], rana dijagnoza [7], predviđa prognozu bolesnika [7], [8], kao i ocjene osjetljivosti na kemoterapeutika [9]. Naša nedavna studija i druga istraživanja pokazala da otkrivanje cirkulirajućih metilirani DNA u krvi je moćan i praktičan pristup za pacijente s rakom [7], [10], [11]. Pregled X-vezanog inhibitor apoptoze ( XIAP pregled) -associated faktor 1 ( XAF1 pregled) je novi negativni regulator XIAP pregled, koji se obrće zaštitu uloge XIAP o tumorskim stanicama [12] - [14]. Gubitak XAF1 pregled, izraz će donijeti tumorske stanice otpornost na apoptozu i promicanje preživljavanja stanica tumora [14] - [17]. Disfunkcija XAF1 pregled je bio prijavljen u nekoliko oblika raka kod ljudi, vjerojatno preko promotora metilacije [15] - [19], što ukazuje na njegovu važnost u nastanku tumora. U ljudskom raka želuca, XAF1 pregled je izvijestila da se često i znatno dolje regulirano i to dolje regulacija XAF1 pregled vjerojatno kroz DNK Hipermetilacija specifičnih CpG stranicama [15], [16 ], [18]. Međutim, bez Izvješće je dostupno o XAF1 pregled metilacije u krvi i njegov potencijal kao biomarkera. U ovom istraživanju ispitali smo XAF1 pregled promotor metilacije u uparenih tkiva, a uzorci seruma iz velikog ploči bolesnika s rakom želuca, i vrednovati kruženje metilira XAF1 pregled kao potencijalnog biomarkera raka želuca . pregled Materijal i metode pregled Etika Izjava pregled De-identificiranih uzoraka ljudskih tkiva i serume dobivene su iz provincije Zhejiang ljudski uzorak tkiva banke. Korištenje primjeraka odobrio je Institutional Review Board na Zhejiang Province Cancer Hospital. Pismeni informirani pristanak dobiven je od svakog pacijenta u skladu sa zahtjevima iz odbora naše institucije etike. 88 ne-raka volonteri pod uvjetom pismeni informirani pristanak. Dio uzoraka bili su iz provincije Zhejiang narodne bolnice, a prvi narodne bolnice u Chunan županije. Institucionalni pregled odbor na medicinsku etiku provincije Zhejiang Narodne bolnice i prvi ljudi bolnice u Chunan županije odobrila je način prikupljanja uzoraka, uključujući pismeni informirani pristanak od svih pacijenata, respektivno. Pregled uzorak tkiva pregled uparenih tumor i para-kancerogen histološka normalna tkiva (PCHNT) uzorci su prikupljeni u vrijeme operacije od 202 bolesnika s primarnim želučanog adenokarcinoma u Zhejiang Province Cancer Hospital, Zhejiang Province Narodne bolnice i prvi ljudi bolnice u Chunan županije od siječnja 2008. do prosinca 2009. PCHNT se ocjenjivati mikroskopski za prisustvu normalnih stanica i odsutnosti displazije stanica. Niti jedan od tih slučajeva nije podvrgnuta nikakvim medicinski tretman prije operacije. Demografske, kliničke i patohistološke Parametri tih slučajeva su prikazani u tablici 1. uzorak rasta tumorskih stanica određena je prema Ming klasifikaciji [20]. Svi regrutirani bolesnici su bili praćeni-up povremeno do datuma dospijeća. Sekundarnom sluznica Bioptati od 88 volontera koji nisu raka, gastroskopija su nasumično prikupljaju kao kontrole u istom roku, uključujući 54 muškaraca i 34 žena, s prosječnom dobi od 52,9 godina. Među tim volontera, 48 bolesnika s kroničnim non-atrofični gastritis dijagnoze. U međuvremenu, Spareni uzorci seruma prikupljeni su prije operacije ili endoskopije. Pregled Analiza Helicobacter pylori ( H. Pylori pregled) Infection pregled biopsije su dobiveni od svih pacijenata koji su endoskopskom ispita , H pregled. pylori pregled status određen je brzim testom ureaze i Giemsa metoda bojanja [21], [22]. Smatralo se kao H Netlogu. pylori pregled infekcije kada su oba testovi su pozitivni, a uzorci s jednim pozitivnim isključene su za statističku analizu [22]. Pregled Real-time RT-PCR pregled ekspresije mRNA od XAF1 pregled je analizirana u realnom vremenu RT-PCR [23]. Ukupni RNA su ekstrahirani pomoću Trizola (Gibco). Ukupno 3 ug ukupne RNA bio je podvrgnut reverzna transkripcija pomoću m-MLV reverzne transkriptaze (Promega). Gliceraldehid fosfat dehidrogenaze ( GAPDH pregled) odabran je kao unutarnju referencu. Sekvence XAF1 pregled prajmeri su kao što slijedi: (F) 5'-TGGGTGTAGGATTCTCCAGG-3 ', (R) 5'GGTTTGCCCAAG GACTACAA-3'. GAPDH pregled nizovi primera su kao što slijedi: (F) 5'-CATGA GAAGTATGACAACAGCCT-3 ', (R) 5'-TAATTTTAGGTTAGAGGGTTATTGT- 3'. 2 -ΔΔCt postupak se koristi za izračunavanje relativnih promjena ekspresije gena. Pregled Imunohistokemijska Bojenje pregled izraz XAF1 proteina određena je imunohistokemijsku analizu s XAF1 monoklonsko antitijelo (Santa Cruz Biotechnology ). Imunohistokemijsko bojanje XAF1 provodi se primjenom reprezentativnih parafin uklopljenih uzoraka iz GC pacijenata 202. Nakon deparaffinization, dohvat antigen u 0.01 M citratnom puferu i inaktivacija Aktivnost endogene peroksidaze u 3% 'H sub> 2O 2 /metanol, inkubirane smo slajdove s antitijelom za XAF1 na 4 ° C preko noći, i imunohistokemijsko bojanje, prema standardnom avidinbiotin-peroksidaza tehnike, izvodi se pomoću 3,3'-diaminobenzidinu (DAB) kao kromogen. Jezgre su prebrojane s hematoksilinom. Imunohistokemijske bojenje ocjena (ISS) određuje se tri neovisna patologa koji kombiniraju frekvencije za bojanje i intenzitet kako slijedi [24], [25]: nema obojenost zabio kao 0, 1~10% stanica obojenih postigao kao 1, 11~50% kao 2, 51~80% što je 3, a 81~100% u 4 bojenje intenzitet se ocjenjuju na skali od 0 do 3, kod 0 ° C, negativni; 1, slab; 2, umjerena; i 3, jak. Kada je multifokalne imunoreaktivnost i postoje značajne razlike u bojanja intenziteta između žarišta, zabilježen je prosjek najmanje intenzivne i najintenzivnije bojenja. Sirovi podaci su pretvoreni u ISS množenjem rezultat frekvencije i ocjenu intenziteta obojenosti. Teoretski, ISS može biti u rasponu od 0 do 12. ISS od 9~12 se smatra jakom imunološkom reakcijom, 5~8 se smatra umjerenim, 1~4 se smatra slabim i 0 je postigao što je negativno. Sekcije u kojem je bojenje ne može biti dobro karakterizirani su smatrani dvosmisleni. Pregled Western blot analiza pregled U paru tumora i PCHNT primjerci 20 slučajeva slučajno odabrano 202 pacijenata s rakom želuca za Western blot analizom. Ukupni protein je ekstrahirana i kvantificirati uporabom Lowry [26]. Western blot analiza provedena je pomoću anti-XAF1 monoklonska protutijela (Santa Cruz, CA) prema prethodnom izvješću [6]. β-tubulin je služio kao interna kontrola. pregled DNA ekstrakcija, bisulfit Izmjena i real-time Metilacija Specific-PCR (MSP) pregled serijske dijelove 5 mm koje su sadržavale karcinoma i ne-neoplastičnim tkiva su postavljene na neobložene staklenim pločicama i osušeni na 37 ° C preko noći. Nakon deparaffinization i bojenje s hematoksilinom i eozinom (H &E), prikupili smo 5.000 jezgre od 5 do 10 serijske dijelove pomoću 27g iglu. Prikupljeni jezgre pomiješa se s 40 ml 200 mg /ml proteinaze K (Sigma-Aldrich Co., St. Louis, MO) na 42 ° C, tijekom 72 sata. Paramagnetnih kuglica tehnika (AxyPrep Mag Blood gDNA kit, Axygen Scientific, Inc., Union City, CA) se rabi za izolaciju genomske DNA iz svježe krvi u skladu s protokolom Kit-a. Protokol sadrži sljedeće korake: lizu, vezanje, pranja i eluiranja. Onečišćenja su uklonjeni tijekom obvezujućih i pranje koraka. Kvaliteta DNK procijenjena je na 280 omjer A260 /na NanoDrop ND-1000 spektrofotometra (NanoDrop Technologies, Inc., Wilmington, DE), integritet DNA je provjeren pomoću denaturiranje elektroforezu u agaroznom gelu. Pregled DNA su modificirani natrijev bisulfit pomoću EpiTect bisulfita kita (Qiagen Inc.) prema uputama fabrika-a. Modificirane DNA su analizirani u realnom vremenu MSP na ABI7500 PCR (ABI Co.) pomoću SYBR Premiks Taq ExTaq Kit (Takara Co. Ltd). XAF1 pregled metilacije i unmethylation specifični primeri su dizajnirani kako slijedi: XAF1 pregled (MF) 5'-TTTGTAAGAAACG AAATTTAATCGA-3 ', (MR) 5'CCTACCCTTAAAACCCACGAT-3'; XAF1 pregled (UF) 5'-TTTGTAAGAAATGAAATTTAATTGA-3 ', (UR) 5'-CTCCTACCCTTAAAACC CACAAT-3' [23]. Ljudske genomske DNA (NEB) tretira SssI metiltransferaze in vitro korišten je kao pozitivna kontrola. DNA periferne krvi iz zdrave jedinke upotrijebljen je kao negativna kontrola. Postotak metilnog DNA u uzorcima su izračunati u skladu s referencama kao prethodno opisane [27], [28]. Metiliran DNA indeks je postigao prema postotku metilacije DNA; 0, < 20%; 1, 20% -40%; 2, 40% -60%; 3, 60% -80%; i 4, > 80%. Indeks rezultat od 0 smatra DNA unmethylation i rezultati 1-4 smatrani hypermethylated, odnosno [7], [27]. 20% odsječen prag za DNA Hipermetilacija se temelji na kontroli normalno uzoraka i unutarnje kontrole kvalitete dobivenih u MSP analizu u realnom vremenu. Pregled Stanična kultura i droga tretman ljudskog želuca stanične linije raka (AGS i KATO-III) uzgajane su u RPMI1640 mediju uz 10% fetalnog goveđeg seruma, 100 u /mL penicilina i 100 u /ml streptomicina na 37 ° C i 5% CO 2, respektivno. Kultivirane stanice tretirane su s 5-aza-2'-deoksicitidina (5-aza-CDR) (Sigma-Aldrich) u konačnoj koncentraciji od 1,0 umol /L. Trihostatin A (TSA) (Sigma-Aldrich) u konačnoj koncentraciji od 20 ng /ml je primijenjena nakon 5-aza liječenja ili samo 24 sata. Stanice su skupljene i podvrgnuti DNA, RNA i pročišćavanje proteina i naknadne analize. Pregled Statistička analiza pregled SPSS statistički softver 17,0 usvojen je za analizu podataka. Brojanje usporedbe podataka između skupina bile podvrgnute χ pregled 2 test i Fisherov egzaktni test. Preživljavanje analiza computered pomoću Kaplan-Meier metodi i značajne su određene pomoću log-rank testa. Jednosmjerna analiza s Cox regresijska modela korištena je za određivanje utvrđene prognostički čimbenici i multivarijatna analiza s Cox regresijski model je korišten za istraživanje kombinaciji učinaka. Za sve statističke analize, p Rezultati Down-regulacija XAF1 pregled u primarnoj Gastric tumori pregled Da bi istražili XAF1 pregled ekspresije gena profil, ispitali smo ekspresiju mRNA za XAF1 pregled u 88 volontera koji nisu raka, a 202 primarnih želučanog tkiva raka i njihovih odgovarajućih PCHNTs. Kao što je prikazano na slici 1A, XAF1 pregled izražavanje bilo značajno smanjena u uzorcima karcinoma želuca u usporedbi s onim u normalnim kontrolama i PCHNTs ( p < pregled 0,001). Međutim, nije bilo značajne razlike u XAF1 pregled izražavanja u PCHNTs u usporedbi s kontrolama bez raka. Nadalje, XAF1 pregled, izraz je značajno niža u razvijenim tumorima (fazi III /IV), nego da je u ranim tumorima stage (faza i /II) ( p < pregled, 0,0001, slika S1A), a bila je značajno niža u loše diferenciranim tumorima nego da se u otvor /umjereno diferenciranim tumorima ( p. < pregled, 0,0001, slika S1B) pregled za provjeru razine XAF1 proteina u želučanim tkiva raka, proveli smo imunohistokemijske analize u 202 želučanog tkiva raka i njihovih odgovarajućih PCHNTs. Nuklearna XAF1 izraz bio stalno prisutan u normalnoj želučanog epitela pokazuju visoku imunološki reaktivne rezultate. Ekspresija XAF1 protein je otkriven u visokoj razini u 97,5% (197/202) za PCHNTs (Slika 1B). Međutim, visoka ekspresija XAF1 proteina je otkriven u 16,8% (34/202) želučanog tkiva raka; većina želučanih tkiva raka bili odsutni ili na niskoj razini XAF1 proteina (Slika 1C). Imunohistokemijske rezultati su prikazani u Tablici 1. imunohistokemijsko bojanje rezultat u želučanom tkivu raka bio značajno niži nego u PCHNTs ili kontrolnom ( p < pregled 0,0001, slika 1D). Gubitak XAF1 proteina značajno korelira s H. pylori pregled infekcija, veličina tumora, histološki diferencijacija, limfna invazija, venska invazija, invazivni dubina, limfni čvor metastaze, udaljena metastaza i klinički stadij (tablica 1) (sve p < pregled, 0,05) pregled. imunohistokemijski rezultati 20 želučanog tkiva raka su nadalje potvrđeni pomoću Western blot analize. Predstavnička zapadni hibridizacije rezultati u dva slučaja prikazani su na slici 1E. Relativna količina XAF1 ekspresije proteina je bila normalizirana na beta-tubulina istih uzoraka. Prosječna razina XAF1 proteina u 20 želučanog tkiva raka, bila je značajno niža nego u PCHNTs ( p izvoznici < 0,05). (Slika 1F) pregled Promotor Hipermetilacija u XAF1 pregled u osnovnoj želučanih tumora Netlogu kako istražiti molekularne mehanizme za XAF1 pregled tišina u želučanog karcinoma, primjenjuje se u realnom vremenu MSP tehnologiju za proučavanje status DNA metilacije XAF1 Treba spomenuti je metiliran status XAF1 XAF1 pregled Promotor Hipermetilacija je povezana sa svojim transkripcije Ušutkavanje u želučanom stanice raka Kako utvrditi odnos između XAF1 pregled metilacije i XAF1 pregled, izraza, Usporedili smo XAF1 pregled, stupanj metilacije s određuje XAF1 pregled na razini mRNA i proteina razina bilo imunohistokemijske analize (Slika 3A) ili western blot-(slika 3B) analizom Spearmanovim korelacije. Kao što je prikazano na Slici 3a, XAF1 ekspresije proteina (određeno imunohistokemijsku analizu) u 202 GC tkivima usko povezana s XAF1 pregled razina mRNA [lg (T /N)] (određeno pomoću RT-PCR) ( γ pregled = 0,841, p < pregled 0,0001). Što je još važnije, XAF1 pregled, stupanj metilacije je značajno povezana s XAF1 pregled na razini mRNA ( y 5-aza-CDR uprava Vraća izražavanju XAF1 pregled Kako bi se dalje potvrđuju epigenetičku regulaciju XAF1 pregled ekspresija AGS i KATO III-stanice su tretirane s 5-aza-CDR i /ili TSA. XAF1 pregled ekspresija mRNA je aktiviran na oba želučani staničnim linijama karcinoma, u pratnji metilne skupine iz XAF1 pregled promotor (slika 4), što ukazuje da je XAF1 pregled je za prepisivanje ušutkan u tim stanicama DNA Hipermetilacija. Zanimljivo, TSA tretman sama bila učinkovita u obnovi XAF1 pregled izraz u AGS i Kato-III, bez značajne promjene u XAF1 pregled metilacije razini, što sugerira da histon promjene također mogu biti uključeni u regulaciju XAF1 pregled izraz. Međutim, primjena TSA slijedi 5-aza-CDR imao aditivni učinak u obnovi ekspresiju gena s daljnjim smanjenjem razine metilacije XAF1 pregled. Ovi su rezultati u skladu s nedavnim studijama koje je predložio da TSA može imati Demetilacija učinak na način gena specifičnih [5]. Western blot analize pomoću AGS stanica, kao model, potvrdio regulaciji XAF1 proteina sljedećih 5-aza-CDR i 5-aza-CDR /TSA tretmana (Slika 4). Pregled otkrivanje cirkulirajućih XAF1 pregled metilacije Netlogu Otkrili smo visoku učestalost XAF1 pregled metilacije u primarni karcinom želuca (83,2%), što ukazuje da to može biti dobar biomarker ako XAF1 Dalje, potvrdio nam je dosljednost u XAF1 pregled metilacije između tumorskih tkiva i odgovarajući serum. U 168 slučajeva koji su pokazali XAF1 pregled metilacije u tumorskim tkivima, 141 prikazuje XAF1 pregled metilacije u paru serumu, što daje konzistenciju 83,9% između njih. A u 34 bolesnika s rakom želuca, bez XAF1 pregled metilacije u svojim želuca tkiva raka, bez metilacije pronađen je u svim DNA u serumu (Slika S2). Pregled XAF1 pregled metilacije kao biomarker u dijagnostici raka želuca Netlogu Da bi se procijenila vrijednost XAF1 pregled metilacije kao biomarker u dijagnostici GC, nacrtane smo prijemnik karakteristične (ROC) krivulja i izračunati površinu ispod krivulje (AUC) koriste metilacija DNA podataka iz obje GC tkiva i seruma. I ROC analize XAF1 pregled metilacije u tkivima i seruma pokazala značajnu razlikovnu sposobnost (slika 6); AUC vrijednost tkiva XAF1 pregled metilacije je 0,849 (95% interval pouzdanosti, 0,806-,892; p izvoznici < 0.0001), AUC vrijednost serumu AXF1 pregled metilacije bio je 0,909 (95% interval pouzdanosti, 0,875 - 0,942; p izvoznici &0.0001). pregled Osim toga, kao što je XAF1 pregled metilacije status u želučanim tkiva raka i seruma značajno korelira s limfnih čvorova metastaza, T-fazi, fazi kliničkog ispitivanja, i druge kliničko-patoloških parametara (sve p < pregled, 0,05, tablica 2) pregled XAF1 pregled metilacije. korelaciji s prognozom rak želuca bolesnika pregled značajna korelacija XAF1 pregled metilacije s mnogim kliničko-patološki parametara (Tablica 2) predložio da se može povezati s prognozom bolesnika s rakom želuca. Do datuma dospijeća praćenja, 113 od 168 pacijenata s XAF1 pregled Hipermetilacija u želučanim tkiva raka ode brzo napredovanje bolesti ili smrti. Medijan bez znakova bolesti opstanak (DFS) je samo 23,4 mjeseci. Nasuprot tome, u 34 bolesnika bez XAF1 pregled Hipermetilacija u svojim želuca tkiva raka, samo 5 pacijenti su se pogoršale, a medijan DFS je 39,6 mjeseci. Kaplan-Meier analiza pokazala je da pacijenti s XAF1 pregled Hipermetilacija u svojim želuca tkiva raka pokazala je očigledan lošije preživljenje nego da bez XAF1 pregled Hipermetilacija ( p < pregled 0,0001) (Slika 7A). Slično tome, Kaplan-Meier analiza pokazala da bolesnici s pozitivnim serumom XAF1 pregled metilacije imali su značajno niže DFS nego u bolesnika bez seruma XAF1 pregled metilacije ( p izvoznici < 0.0001 ) (Slika 7B), što ukazuje da je XAF1 pregled promotor metilacije u serumu bila je nepovoljna prediktor za pacijente s rakom želuca. pregled Cox regresijska analiza pokazala je da je XAF1 pregled metilacije u serumu je nezavisni faktor na preživljavanje bolesnika: bolesnici s XAF1 pregled metilacije imali lošiju prognozu ( p < pregled 0,0001; omjer rizika, 5,710; 95% CI, 3.474~9.383). Osim toga, TNM stadija i starost u vrijeme dijagnoze može se smatrati kao faktor koji utječu na prognozu u rak želuca, samo kada je XAF1 pregled metilacije bio eliminiran učinak. Osim toga, kruženje metilira XAF1 pregled u krvi je imao veći utjecaj na prognozu nego da je u TNM stadija (Tablica S1). Pregled Pozitivna Tranzicija Cirkulacija XAF1 pregled metilacije predviđa tumor Ponavljanje i lošu prognozu pregled Među 202 bolesnika koji su ispitani na preoperativne kruži XAF1 pregled metilacije, 72 pacijenata primili praćenje preglede cirkulirajućih XAF1 pregled metilacije 2~5 puta u razmacima od 1~6 mjeseca nakon operacije. Među 12 povratnih bolesnika, 10 bolesnika prikazana negativno za pozitivne tranzicije u XAF1 pregled metilacije status u serumu, a druga dva su pokazali uvijek pozitivna za XAF1 pregled metilacije, sugerirajući da praćenje XAF1 pregled metilacije u serumu može biti dobar marker za predviđanje tumora ponavljanje (tablica 3). pregled Rasprava pregled XAF1 pregled ( XIAP pregled -associated faktor 1) novi je XIAP pregled binding protein koji bi mogao poremetiti kombiniranje XIAP pregled sa kaspaze, ukida svoju zaštitu na tumorske stanice i rezultata u tumorske stanice, apoptoza [12] - [ ,,,0],14]. Anti-apoptoza funkcija XIAP pregled određuje omjer razine ekspresije XIAP DNA metilacije može se koristiti kao potencijalni biomarkera tumora u različitim humanim karcinomima [3] - [11], [23]. Prisutnost DNA bez stanica u cirkulaciji u perifernoj krvi je opisan u bolesnika s malignih procesa i oslobađanja aktivne tumora DNA u cirkulaciji je opisano [29] - [31]. Brojne studije pokazale su tumorski specifične promjene u cirkulaciji DNA oporavio od plazmi ili serumu bolesnika s različitim malignih bolesti koje se podudaraju genetske promjene koje su prisutne u primarnim tumorima, nalaz koji ima potencijal za molekularnu dijagnostiku i prognozu [29] - [32]. Markeri nukleinske kiseline koji su opisani u cirkulaciji DNA uključuju onkogene mutacije mikrosatelitski preinake, preuredba gena i Epigenetske promjene, kao što su abcrantnog promotora Hipermetilacija [7], [8], [30] - [34]. Na temelju tih promatranja, a posebno smo otkrili visoku učestalost XAF1 pregled, DNA metilacije u želučanim tkiva raka (83,2%), odlučili smo istražiti mogućnost koristiti XAF1 pregled promotor metilacije u seruma kao biomarkera u bolesnika s karcinomom želuca. Prvo smo pokazali veliku dosljednost u otkrivanju XAF1 pregled metilacije između seruma i osnovnih želučanog tkiva raka. Zatim smo analizirali mogućnost korištenja kruženje metilira XAF1 pregled kao dijagnostički biljeg pomoću ROC analize. AUC (površina ispod krivulje) od 0,909 pokazali su visoku dijagnostičku vrijednost za detekciju XAF1 pregled metilacije u uzorcima seruma. Dakle, naši podaci ukazuju da detekcija XAF1 pregled metiliranje u cirkulaciji DNK može koristiti kao neinvazivna biomarkera za dijagnozu raka želuca. Osim toga, naši rezultati također pokazuju da su pozitivni XAF1 pregled metilacije u serumu bila samostalna prognostički čimbenik; predviđanje lošu prognozu. Što je još zanimljivije, prijelaz iz negativne u pozitivnu cirkulirajućih XAF1 pregled metilacije nakon operacije bila je značajno povezana s recidiva tumora. Ovi podaci pokazuju da je otkrivanje XAF1 pregled metilacije u cirkulaciji u serumu DNK može biti i tumor biomarker za predviđanje prognoze želučanog oboljelima od raka ', a za praćenje recidiva tumora nakon operacije tretmana. Budući da je broj pacijenata prošla taj pregled u serumu follow-up je bio mali, daljnja istraživanja u velikom uzorku od broja pacijenata potrebno je potvrditi ovu zanimljivu nalaz i optimizirati strategiju i protokol za tu svrhu. U svakom slučaju, u usporedbi s tradicionalnim načinima kao što su gastroskopija ispita za pacijente s rakom želuca, najviše pažnje karakteristika kruženje metilira XAF1 pregled, otkrivanje je učinkovit, brz, niske cijene, neinvazivna, a ne uništava okoliš, visoka dijagnostički pokoran stopa i tako dalje, i kao takav pokazati važna primjena izglede u budućnosti. pregled Zaključci pregled disfunkcija XAF1 pregled je česta i reguliran kroz XAF1 pregled promotor Hipermetilacija kod raka želuca. Cirkulirajućih metiliranog XAF1 pregled, DNA je povezan s tumorom tereta i maligna progresija, koja može biti vrijedan biomarker za dijagnosticiranje raka želuca, predviđajući prognozu bolesnika i praćenje recidiva tumora nakon operacije obrade. Pregled Podrška
mRNA; imunohistokemijski i Western blot kako bi se ispitala XAF1 ekspresije proteina u GC tkiva (n = 202) i njihove odgovarajuće para-kancerogen histološka normalnim tkivima (PCHNTs). Real-time metilacije specifično-PCR je korišteno za istraživanje XAF1 pregled promotor metilacije u istoj ploči GC tkiva, njihovih PCHNTs i seruma. Pregled
značajno korelira s down-regulacije XAF1 pregled u GC tkiva u obje mRNA i proteina razina ( p izvoznici < 0,001 svaki). Osim toga, otkrili smo visoku učestalost XAF1 pregled metilacije (69,8%, 141 od 202) u serumu DNA iz istih bolesnika, a sera DNA od 88 ne-tumorske kontrole bili su negativni na XAF1 pregled metilacije. XAF1 pregled metilacije u oba GC tkiva i seruma može biti dobar biomarker za dijagnozu GC (AUC = 0,85 za tkiva i AUC = 0,91 za seruma) i značajno korelira s lošijom prognozom ( p pregled < 0,001). Osim toga, nakon operacije negativan za pozitivne tranzicije XAF1 pregled metilacije u serumu snažno povezana s recidiva tumora. Pregled
vrijednosti. ≪ 0,05 smatra se statistički značajna razlika pregled
promotor. Učestalost XAF1 pregled Hipermetilacija u želučanim tkiva raka, što odgovara PCHNTs i kontrolama bez raka bile su 83,2% (168/202), 24,8% (50/202) i 5,7% (5/88), respektivno. Hipermetilacija učestalost XAF1 pregled kod karcinoma je znatno veći nego u PCHNTs i kontrolama bez raka (sve p izvoznici < 0.0001, Slika 2). Pregled
značajno korelira s nekim kliničko-patoloških parametara karcinoma želuca, kao što su limfni čvor metastaza, T-fazi, H Netlogu. pylori pregled infekcije, itd (sve p < pregled, 0,05, tablica 2). Nema značajne korelacije između Hipermetilacija od XAF1 pregled i spol, dob u vrijeme postavljanja dijagnoze, sijelo tumora i udaljene metastaze se pokazalo (sve p izvoznici > 0,05). (Tablica 2) pregled
= - 0,846, p < pregled, 0.0001) i XAF1 proteina razina ( γ pregled = -0,969, p < pregled 0,0001). Slični rezultati su dobiveni kada se analizira korelaciju XAF1 pregled promotor metiliranje i ekspresija XAF1 proteina određuje se pomoću Western blot analize (slika 3B). Ovi rezultati jako su optuženi da XAF1 pregled izraz regulirano je XAF1 pregled promotora metilacije. Pregled
metilacije moglo biti moguće otkriti u serumu. Dakle, ispitali smo XAF1 pregled metilacije u podudarne seruma DNA iz GC pacijenata 202. XAF1 pregled metiliranje je otkriven u 141 (69,8%) u serumu DNA iz pacijenata oboljelih od raka želuca 202 (Slika 5). Za razliku od toga, XAF1 pregled metilacije nije otkriven u serumu DNA od 88 kontrola ne-raka.
protiv XAF1
[15]. Smanjena ekspresija ili šutnja XAF1 pregled je česta pojava u ljudskim tumorima [16] - [19]. U ovom istraživanju, najprije potvrdio da XAF1 pregled, ekspresija gena bila je značajno dolje regulira iu razini mRNA i proteina u velikoj ploči primarnih želučanog tkiva raka i down-regulacije XAF1 pregled izražavanje bilo značajno povezano s tumorskim faze, metastaza i tako dalje, što ukazuje na gubitak XAF1 pregled funkcija u progresiji tumora. To je u skladu s drugim istraživačkih izvješća [17] - [19]. Kako bi istražili molekularne mehanizme odgovorne za XAF1 pregled tišini, ispitali smo XAF1 pregled promotor metilacije u velikoj panel želučanog tkiva karcinoma ( N pregled = 202) i normalne kontrole ( N pregled = 88), koristeći stvarnom vremenu MSP tehnologije. Otkrili smo visoke frekvencije (83,2%) DNA Hipermetilacija od XAF1 Netlogu u želučanog tkiva raka. DNK Hipermetilacija od XAF1 pregled značajno korelira s down-regulacije XAF1 pregled u oba mRNA i proteina u želučanog tkiva raka (Slika 3). Osim toga, 5-aza-CDR tretman značajno obnovljena XAF1 pregled izraz u XAF1
ušutkao želučanog raka stanične linije (slika 4). Ovi podaci jasno ukazuju da česte dolje regulacija XAF1 pregled u želučanim stanicama raka regulirano je njegova promotorska Hipermetilacija. Zanimljivo je da je liječenje želučanih stanica raka s TSA, inhibitor HDAC također obnovljena XAF1 pregled izraz, sam ili u kombinaciji s 5-aza-CDR liječenja, što pokazuje da histona modifikacija također mogu biti uključeni u XAF1 <. br> regulacija pregled
Informacije Slika S1. pregled, jpg. A, XAF1 pregled razina ekspresije gena bila je niža u uznapredovalim rakom želuca (faza III /IV), nego da je u ranim rakom želuca (faza I /II). B, XAF1 pregled razina ekspresije gena bila je niža u loše diferenciranim karcinomom želuca nego na dobro /umjereno (dobro /Mod) diferencirani karcinom želuca, p < pregled, 0,05 pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0067195.s001 pregled (TIF) pregled Slika S2. pregled, jpg. Korelacija analiza XAF1 pregled Hipermetilacija rezultatima između GC tkiva i upareni perifernoj krvi (sera) pregled doi. 10,1371 /journal.pone.0067195.s002 pregled (TIF) pregled tablica S1. pregled, xls. Multivarijatna analiza preživljenja kliničko-patoloških podataka od 202 slučajeva karcinoma želuca u.
Kako ojačati imunološki sustav u borbi protiv koronavirusa
Matematički model otkriva rizik od infekcije SARS-CoV-2 nakon transplantacije fekalne mikrobiote
Istraživači pronalaze novi način zaštite od bolesti u MS modelu
Ekstrakt sjemena ksilitola i grejpa obećava u sprječavanju infekcije SARS-CoV-2,
Ograničenja vezana uz COVID-19 dovela su do pada zaraze norovirusom u SAD-u za 86 posto,
Brza hrana može biti glavni krivac tinejdžerske depresije
Rizik od raka jednjaka mogao bi se smanjiti esomeprazolom i niskim dozama aspirina
Prema rezultatima ispitivanja faze III predstavljenim na godišnjem sastanku ASCO -a 2018. dva jednostavna lijeka bez recepta-visoke doze esomeprazola i niske doze aspirina kada se redovito uzimaju mog
Vrsta crijevnih bakterija može povećati rizik od raka crijeva
Novo istraživanje predstavljeno na NCRI konferenciji o karcinomu 2019. pokazalo je da bi ljudi s određenom vrstom bakterija u crijevima mogli vjerojatnije razviti rak crijeva. Kredit za sli
Transplantacija izmeta od određenih donatora bolja je od drugih
Transplantacija fekalne mikrobiote ili transplantacija stolice od donatora korisna je za pacijente zaražene smrtonosnim recidivom Clostridium difficile što dovodi do teškog proljeva, bol i često ozb