PLoS ONE: Superior antitumorsko djelovanje od nanočesticama albumin-Bound paklitaksel u eksperimentalnu rak želuca

Sažetak pregled

Rak želuca je drugi najčešći uzrok raka povezane smrti u svijetu i nema visoko učinkovit tretman za uznapredovalu bolest. NAB-paklitaksel je roman mikrotubula inhibitorni citotoksično sredstvo koje nije testiran kod raka želuca kao od još. U ovoj studiji, ljudske stanične linije raka želučani AGS, NCI-N87 i SNU16 su proučavali. NAB-paklitaksel inhibirali staničnu proliferaciju s vrijednošću IC50 od 5 nM u SNU16, 23 nM u AGS i 49 nM u NCI-N87 stanica nakon 72 sata obrade, koja je niža od one oksaliplatin (1,05 uM do 1,51 uM) i epirubicin ( 0.12 um do 0,25 m). NAB-paklitaksel tretmana povećava ekspresiju mitoze-vretena povezana fosfo-statmin neovisno o osnovnom ukupno ili fosforiliranog razini statmin i induciraju smrt stanica u mitozu kao što je potvrđeno kroz povećanu ekspresiju cijepati-PARP i kaspaze-3. Nakon dva tjedna NAB-paklitaksela, oksaliplatin ili epirubicin liječenja, prosječna in vivo lokalnoj tarifi inhibicije rasta tumora bio je 77, 17,2 i 21,4 posto, odnosno (p = 0,002). Učinci terapije na tumorskih proliferativni i apoptotičnih indeksa korespondira sa podacima inhibicije rasta tumora, dok je izraz fosfo-statmin također povećana u tkivima. Došlo je do povećanja preživljavanja medijana životinja nakon NAB-paklitaksela tretmana (93 dana) u odnosu na kontrolnu skupinu (31 dana, p = 0,0007), oksaliplatina (40 dana, p = 0,0007), ili da docetaksela terapije (81 dana, p = 0,0416) , Snažan antitumorska aktivnost NAB-paklitaksela u eksperimentalnoj raka želuca podržava takvu mikrotubula inhibitorni strategiju za kliničku primjenu. NAB-paklitaksel prednosti uočene su neovisni od fosforiliranog statmin izražavanja na početku, stavljajući u pitanje razmatranje uporabe NAB-paklitaksela u rak želuca na temelju ovog potencijalnog biomarkera pregled

Izvor:. Zhang C, Awasthi N, Schwarz MA, Hinz S, Schwarz RE (2013) Superior antitumorsko djelovanje od nanočesticama albumin-Bound paklitaksel u eksperimentalnu rak želuca. PLoS ONE 8 (2): e58037. doi: 10,1371 /journal.pone.0058037 pregled

Urednik: Lu-Gang Yu, Sveučilište u Liverpoolu, Velika Britanija pregled

Primljeno: 20. studenoga 2012; Prihvaćeno: 29. siječnja 2013. godine; Objavljeno: 27. veljače 2013 pregled

Copyright: © 2013 Zhang i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Autori nemaju podršku ili sredstva za prijaviti pregled

suprotstavljenih interesa. autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca (GC) je četvrti najčešći. rak i drugi najčešći uzrok smrti od raka povezane s cijelom svijetu [1] - [3]. Većina pacijenata su napredni ili metastatske bolesti u vrijeme postavljanja dijagnoze [4], [5]. Kombinacija oksaliplatin i 5-fluorouracila, sa i bez epirubicina, postao je najkorišteniji režim u prvoj liniji kemoterapije za uznapredovali karcinom želuca [6], [7]. Međutim, ova kombinacija tretmana ima potencijal za značajne nuspojave, a još uvijek nosi ograničeno djelovanje, dok je prognoza bolesnika ostaje tuga s medijanom preživljenja od oko 10 mjeseci, [8] - [11]. U nastojanju da se poboljša preživljavanje, a za smanjenje toksičnosti, molekularno ciljano liječenje aktivno se istražuje za liječenje raka želuca [12]. Pregled

Mikrotubulc odavno smatra cilj od interesa za neke antitumorskih lijekova zbog njihova univerzalna uloga u proliferacijom stanica i njihovu bitnu ulogu u mitozi [13] - [15]. Paklitaksel i docetaksel su klasični inhibitori mikrotubula koji pokazuju svoju aktivnost promicanjem polimerizaciju tubulina i stabilizaciju mikrotubula rezultiraju fazi G2-M zastoj i mitotičke stanične smrti [15]. Mitoze stanična smrt je način smrti stanice pojavljuje posebno u različitim stadijima mitoze izazvano pomoću sredstava za oštećivanje DNA i vretena otrova /inhibitora mitoze [16], [17]; to je uglavnom kaspaze ovisna, ali pod rijetkim slučajevima mogu biti kaspaze nezavisnu [18]. Paklitaksel je testiran za napredne i povratnih želučanom raka sa stopom odgovora od 43%, u kombinaciji sa 5-fluorouracila i folne kiseline [9], [19]. U odnosu na postotak odaziva 38~45% dobiven je kombinacijom oksaliplatina s 5-fluorouracilom i folne kiseline, paklitaksel nije rezultiralo vrhunskim opstanak, ali uslijed više nuspojave, osobito u starijih bolesnika [9], [20] - [ ,,,0],22]. Paklitaksela potrebno emulgiranje otapalima kako bi se omogućilo intravensku primjenu koji je rezultirao reakcija preosjetljivosti i potencijalno dramatične nuspojave u bolesnika [23], [24]. Nanočestica albumin vezan (NAB) paklitaksel je novi albumin stabiliziran, kromofor bez i u vodi topljivi nanočestica formulacija paklitakselom. To je dobro tolerirati bez reakcije preosjetljivosti nakon intravenske infuzije [25]. Klinički i eksperimentalni studije su pokazale da je u usporedbi s paklitakselom bazi otapala NAB-paklitaksel je viša zadržavanje tumora, nižu toksičnost [23], [26] i više snažne antitumorske efekte i na rak dojke, ne-malih stanica karcinoma pluća (NSCLC), gušterače rak, melanom i karcinom glave i vrata [27] - [31]. Međutim, potencijalni uloga NAB-paklitaksela u želučanih stanica raka ne ispituje kao i još pregled

statmin, fosfoproteina mikrotubula destabiliziranja je važan regulator polimerizaciju mikrotubula i dinamike [32] - [34]. i ustanovljeno je da se odnosi na otpornost taksana kod nekih tipova tumora kroz izmjenu lijek veže i odgađa G2-M fazni prijelaz [33], [35]. inhibicija statmin imala sinergistički antiangiogensku i antitumorsko djelovanje s Taxol [36]. Statmin ekspresija je nađeno da postoji u raznim humanim karcinomima, uključujući rak želuca, te stoga može predstavljati atraktivna meta za terapiju raka [34], [37], [38]. Jeon et al. utvrdio da statmin može poslužiti kao prognostički biljeg i potencijalni terapijski cilj za rakom želuca [37]. Fosforilacija statmin smanjuje njegove destabilizirajuće učinke mikrotubula, fenomena koji je također pripisuje taksana aktivnosti [34]. Pregled

Ova studija vrednuje antitumorskih aktivnosti NAB-paklitaksela u ljudskim stanicama raka želuca in vitro i in vivo. Usporedili smo antitumornu učinkovitost NAB-paklitaksela u drugih citotoksičnih sredstava na rast lokalnog tumora i preživljavanja životinja. Također smo mjerili izraz ukupne statmin i fosfo-statmin in vitro i in vivo procijeniti njihovu ulogu kao prediktivnih biljega u NAB-paklitaksel antitumorskih odgovora.

Materijali i metode

stanična kultura i reagense pregled

ljudskog želučanog raka stanične linije AGS, NCI-N87 i SNU16 dobiveni su od American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD) i uzgajane su u RPMI 1640 mediju (Sigma Chemical Co. St. Louis, MO ) uz dodatak 10% fetalnog goveđeg seruma (FBS) pri 37 ° C u vlažnoj 5% CO _{2 atmosfere. NAB-paklitaksel je kupljen od Abraxis BioScience (Los Angeles, CA). Oksaliplatina je kupljen od Sanofi Aventis (Bridgewater, NJ). Docetaksel, epirubicin i 5-fluorouracil dobiveni su iz lokalnoj ljekarni. Proliferacija stanica reagens WST-1 iz Roche Diagnostic kupljen Corporation (Indianapolis, IN). Pregled}

Stanična održivost Test pregled

Stanična vijabilnost je procijenjena kolorimetrijskom WST-1 testa. Mjerenje se temelji na sposobnosti vitalnih stanica da se odcijepi sulfoniranog tetrazolijeve soli WST-1 (4- [3- (4-jodfenil) -2- (4-nitrofenil) -2H-5-tetrazolij] -1, 3- benzen disulfonat) od strane mitohondrija dehidrogenaza [39]. Stanice raka želuca (5.000 stanica po jamici) su nasađene u posudu s 96 jažica u regularnom medija za rast i pomiješa se s NAB-paklitaksel, 5-fluoruracil, oksaliplatin i epirubicin nakon 16 sati inkubacije. Raspon koncentracije se koristi (1 nM do 10 uM) bila je usporediva s njihovim klinički ostvarive koncentracijama. Nakon dodatne inkubacije od 72 sata, 10 ul reagensa WST-1 je dodan u svaku jamicu nakon čega slijedi inkubacija od 2 sata. Apsorbancija pri 450 nm je mjerena pomoću čitača mikroploče. Pregled

staničnog ciklusa analiza pregled

Analiza staničnog ciklusa izvedena je protočnom citometrijom s fluorescentno propidij jodid (PI) obojenja. Stanice su uzgajane i pomiješa s NAB-paklitaksel, oksaliplatin, epirubicin i docetaksel trajanju od 8 do 24 sata. Stanice su zatim sakupljene i fiksirane u 75% etanol-PBS preko noći na -20 ° C. Stanice se centrifugiraju 5 minuta na 2000 × g. Stanični talog je ponovno suspendiran i inkubira u 0.05 mg /ml PI, 0,1% Triton X-100, te 1 mg /ml RNAze A u PBS tijekom 45 minuta na sobnoj temperaturi. Suspenzija je zatim analizirana na Becton Dickinson FACScanu. Odnos stanica u sub-G1, G1, S i G2-M faze staničnog ciklusa utvrđena je njihova DNA sadržaja.

imunocitokemijsku analizu pregled

želučane stanice raka (1 × 10 ^{5 stanica po komore) su stavljene u 4-komorni slajd u redovnoj medija za rast u. Nakon 24 sata stanice su tretirane s NAB-paklitaksel 16 sati i zatim su fiksirane u 4% paraformaldehidu. Stanice su inkubirane s CAS blokirajućeg pufera, a zatim 1 h inkubacije s fosfo-statmin protutijela (1:100) i 40 minuta inkubacije s Cy3 (1:200 razrjeđenje) drugog antitijela. Stakalca su montirani pomoću noseće otopinu koja sadrži 4 ', 6-diamidino-2-fenilindolom (DAPI) (Invitrogen, Carlsbad, CA). Fluorescentne mikroskopije se koristi za otkrivanje fluorescentne signale pomoću IX81 Olympus mikroskop opremljen Hamamatsu Orca digitalna kamera (Hamamatsu Corporation, Bridgewater, NJ). Pregled}

Western blot analiza pregled

Pod sjedinjenih reda stanica pomiješa se s NAB-paklitaksel, oksaliplatin i epirubicin. Dobije se stanični lizati i tumorske lizati kao što je prethodno opisano [40]. Supernatanti su skupljene centrifugiranjem pri 13000 rpm, su mjerene koncentracije proteina i jednake količine ukupnog proteina su razdvojeni pomoću SDS-PAGE. Proteini su prebačeni na PVDF membrane (Bio-Rad, Hercules, CA) i membrane su blokirane 1 sat u TBS-T. Membrane su inkubirane preko noći na 4 ° C sa sljedećim antitijelima: ukupno statmin, fosfo-statmin (ser38) cijepa poli (ADP-riboza) polimeraze 1 (PARP-1), cijepa kaspaza-3 (sve od tvrtke Cell Signaling Technology Beverly, MA), α-tubulin i β-aktin (oba iz Sigma, St. Louis, MO). Membrane su zatim inkubirane s odgovarajućim HRP konjugiranih sekundarnih antitijela (Pierce Biotechnologies, Santa Cruz, CA) tijekom jednog sata. Posebni bendovi su otkrivene pomoću poboljšane chemoilluminescence reagens (ECL, Perkin Elmer Life Sciences, Boston, MA) na Autoradiografskom filmu. Pregled

potkožnog rast tumora studija pregled

Svi su pokusi na životinjama su provedeni u skladu s smjernice i odobrena protokoli Sveučilišta Texas Southwestern Medical Center (Dallas, TX) institucionalni Animal Care i korištenja odbora (broj dozvole 2012-0081). Životinje su se dnevno pratile tijekom eksperimenta za bilo kakav znak opasnosti. Žena SCID miševa (6 do 8 tjedana) su korišteni za usporednu modeliranje subkutanog tumorskog rasta. Želučani stanice raka (10 × 10 ^{6 NCI-N87 ili 20 × 10 6 SNU16 stanice) su supkutano ubrizgava u svaku miša. Miševi su vagani dvaput tjedno. Četrnaest dana poslije injekcije stanica tumora, svi miševi su imali mjerljivu tumora (prosječna veličina tumora od 100 do 150 mm 3). Miševi su nasumce podijeljeni u skupine (n = 6~8 po skupini) te liječeni s intraperitonealno sa PBS-om (kontrola), NAB-paklitaksel (10 mg /kg u 100 ul PBS-a, 2 puta tjedno), oksaliplatin (5 mg /kg u 100 jal PBS, 2 puta tjedno) i epirubicin (1 mg /kg u 100 ul PBS-a, 2 puta tjedno) za 14 dana. Veličina tumora je mjerena dva puta tjedno kroz čeljust, a volumen tumora (V) je izračunata pomoću formule V = ½ [L × (W) 2], L = duljina a W = širina. Relativna volumen tumora (RTV) određena je prema formuli RTV = V _{n /V 0, gdje V 0 i V 1 predstavljaju volumen tumora na dan 0 i naredni dan mjerenja, odnosno. Stopa inhibicije rasta tumora je izračunata pomoću formule (1 RTVt /RTVc) × 100%, a t i c predstavljaju tretman i kontrolne skupine. Nakon završetka liječenja, svi miševi su eutanazirani s CO2, tumori su uklonjeni, izvagani izrezana i procesirani su za histološke, imunohistokemijske i Western blot analize. Pregled}}

Imunohistokemijska analiza pregled

uzorci tumora tkiva su fiksirani u 4% paraformaldehid i uklopljene u parafin. Intratumoralno proliferacija je mjerena Ki67 bojanjem nuklearni antigen prema protokolu proizvođača (Abcam, Cambridge, MA). Rezovi tkiva u parafin ugrađeni su rezani (5 um), deparafmizirane, rehidrira i antigen preuzeti. Rezovi tkiva su inkubirani sa CAS blokirajućeg pufera, a zatim 1 h inkubacije s 1:200 razrjeđivanjem osnovne Ki67 i fosfo-statmin protutijela (1:200) i 40 minuta inkubacije s Cy3 (1:200 razrjeđenje) drugog antitijela. Stakalca su montirani pomoću noseće otopinu koja sadrži 4 ', 6-diamidino-2-fenilindolom (DAPI) (Invitrogen). Intratumoralno proliferativna indeksa i statmin aktivnost je procijenjena izračunom pozitivne stanice iz pet različitih područja velike snage (HPF) u slijepo. Intratumoralno apoptoze aktivnost je procijenjena bojenjem dijelove tkiva s "Apoptag apoptoze Detection Kit" prema (Millipore) uputama proizvođača. Fluorescentne mikroskopije se koristi za otkrivanje fluorescentne signale pomoću IX81 Olympus mikroskop opremljen Hamamatsu Orca digitalna kamera (Hamamatsu Corporation, Bridgewater, NJ) i DSU predenje Osnove optike jedinici pomoću Slidebook softvera (Intelligent Imaging Innovations, Philadelphia, PA). Pregled

preživljavanje životinja analiza pregled

životinja studije o preživljavanju su provedena pomoću 6 do 8 tjedana stare ženke SCID miševa [41]. Miševi su intraperitonealno injektiran SNU16 (40 × 10 ^{6) stanica i tjelesne težine mjerene su dva puta tjedno. Tri tjedna nakon davanja injekcije stanica tumora miševa nasumice podijeljeni u skupine (n = 6 do 8 po skupini). Pregled}

U prvoj studiji preživljavanja, miševi su tretirani intraperitonealno s PBS (kontrola), NAB-paklitaksel (10 mg /kg u 100 ul PBS-a, 2 puta tjedno), i oksaliplatin (5 mg /kg u 100 ul PBS-a, 2 puta tjedno) tijekom 2 tjedna. U drugoj studiji preživljavanja, miševi su tretirani intraperitonealno s PBS (kontrola), NAB-paklitaksel (10 mg /kg u 100 ul PBS-a, 2 puta tjedno), docetaksel (3 mg /kg u 100 ul PBS-a, 2 puta tjedno ) ili oksaliplatin (5 mg /kg u 100 ul PBS-a, 2 puta tjedno) tijekom 2 tjedna. Patnje životinja je smanjena za žrtvovanja pri skretanju na samrti prema definiranim kriterijima, uključujući brzo mršavljenje ili dobitak (> 15%), neuspjeh za jelo ili piće, pospanost, nesposobnost da ostanu u uspravnom položaju i nedostatak snage. preživljavanje životinja je procijenjena od prvog dana liječenja do smrti. pregled

Statistička analiza pregled

Survival analize ocijenjena s GraphPad Prism 5 Software (GraphPad Software, San Diego, CA). In vitro stanične proliferacije Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija. Statistička analiza provedena je ANOVA za višestruke usporedbe grupe i t-test za individualne usporedbe grupe. Preživljavanje Kontrolna skupina je provedeno putem log-rank testa u analizi Kaplan-Meier tipa. Vrijednosti p < 0,05 smatrane su da predstavljaju statistički značajne razlike grupe pregled

Rezultati

izraz statmin u želučanim stanicama raka pregled

Analiza ljudskih želučanih stanica raka AGS, NCI-. N87 i SNU16 otkrila je da su sve tri linije izrazio statmin. Nema razlika ukupnog izražavanja statmin je pronađena među ova tri stanične linije. Izražavanje fosfo-statmin varirala između stanične linije, na sljedeći način: SNU16 > AGS > NCI-N87 stanica (Slika 1A). Pregled

NAB-paklitaksel inhibira želučano proliferacije stanica karcinoma pregled

NAB-paklitaksel inhibira proliferaciju stanica raka želuca u način ovisan o dozi, a inhibicija u proliferaciju stanica pojavio slijediti isti red kao i izražavanje fosfo-statmin (Slika 1B). Na 100 nM koncentracije inhibicije stanične proliferacije bio 94,5, 66,7 i 41,8 posto u SNU16, AGS i NCI-N87 stanica respektivno. NAB-paklitaksel je pokazao najveću antiproliferativnog potenciju s najnižom učinkovitom dozom nalazimo u sva 3 ispitanih staničnih linija u odnosu na 5-fluouracil, oksaliplatin i epirubicina. IC _{50 NAB-paklitaksel bio je 5 nM u SNU16 23 nM u AGS i 49 nM u NCI-N87 stanica, što je manje od 5 fluouracil (6.46 M u SNU16, > 10 uM u AGS i 10.2 M u NCI-N87 stanice), oksaliplatin (1,51 M u SNU16, 1,64 M u AGS i 1.05 uM u NCI-N87 stanicama) ili epirubicin (0.12 M u SNU16, 0,16 M u AGS i 0.25 uM u NCI-N87 stanice) ( Slika 1C). pregled}

NAB-paklitaksel izaziva zastoj u G2 i mitoze smrt stanica in vitro pregled

Da bi se procijenila temeljni mehanizam inhibicije rasta po NAB-paklitaksela, profil stanični ciklus analiziran. Kao što je prikazano na Slici 2A, NAB-paklitaksel (100 nM) rezultirao je G2-M staničnog ciklusa u SNU16 stanicama. Postotak propidij jodid pozitivnih stanica u fazi G2-M povećao se s 35,6 na 71,6 nakon 100 nM NAB-paklitaksela za liječenje 12 sati. Slične promjene u AGS i NCI-N87 stanica s NAB-paklitaksel i docetaksel liječenja, ali ne i oksaliplatin i epirubicin obrade (Slikama S1 i S2).

Učinak NAB-paklitaksel na mitotičke stanične smrti ekspresiju fosfo -stathmin i apoptoze povezanih proteina je mjerena immunocystochemistry i Western blot. NAB-paklitaksel tretman izazvao mikrotubula prekid i mitotičkih uhićenja u želučanim stanicama raka Kao što je primijetio jezgre fragmentacije i kariopiknoze (slika 2b). Izražavanje fosfo-statmin je povećano nakon NAB-paklitaksela liječenja, a veći izraz fosfo-statmin bio povezan s većim stupnjem mitoze uhićenja, jezgra fragmentacija ili kariopiknoze i smrt stanica (Slika 2b i 2c). Nuklearne fragmentacije i kariopiknoze došlo u 16,7% stanica s niskom ekspresijom fosfo-statmin ali 95,7% stanica s visokom ekspresijom fosfo-statmin (r = 0,672, p < 0.001). Bilo je i dokaza za vremenski ovisnog povećanom ekspresijom fosfo-statmin od NAB-paklitaksela liječenja (Slika 2D). Pregled

Ispitivan ako mitoze smrt stanica inducirana NAB-paklitaksel može djelomično biti povezana s indukcijom apoptoze , Evaluacija PARP-1 i cijepanja kaspaze-3 cijepanja kao markera indukciju apoptoze pokazala da je u stanicama raka želuca NAB-paklitaksel, oksaliplatin i epirubicin liječenje uzrokuje povećanje u ekspresiji i cijepa PARP-1 i kaspaze-3. Ovaj izraz apoptoze vezanih proteina pojavio veći nakon NAB-paklitaksela liječenja u usporedbi s oksaliplatin ili epirubicin tretmana (Slika 2E). Pregled

NAB-paklitaksel inhibira rast želučanih ksenografta raka

in vivo antitumorski učinci NAB-paklitaksel je procijenjena na mišjem modelu ksenografta upotrebom SNU16 stanice. NAB-paklitaksel terapiju od 10 mg /kg dva puta tjedno po dva tjedna se dobro podnosi, bez očitih znakova toksičnosti prema procjeni s mišem težine i dnevne procjene. Nakon tretmana dvotjedne, NAB-paklitaksel terapija daje statistički značajnu inhibiciju rasta tumora (p = 0.0004) koja je veća od one oksaliplatina (p = 0,0361) i epirubicin (p = 0,032) u usporedbi s kontrolom vozila, odnosno (Slika 3A). Brzina inhibicije rasta tumora nakon 2 tjedna tretmana s NAB-paklitaksel, oksaliplatin i epirubicin bio 77, 17,2 i 21,4 posto (p = 0.002), redom. Samo NAB-paklitaksel tretman stvorio smanjenje veličine potkožnih lezija u odnosu na njihovo prethodno utvrđenim veličine tumora. Određena je srednja težina tumora je značajno smanjena za NAB-paklitaksela obrade (0,154 ± 0,075 g vs. 0,756 ± 0,232 g, p = 0,037), ali ne i oksaliplatin (0,408 ± 0,12 g) i epirubicin (0,46 ± 0,172 g) liječenje u usporedbi s vehiklom kontrola, odnosno (Slika 3A). Isto smo antitumorskih efekata NAB-paklitaksel na NCI-N87 ksenograft miševa lokalnih tumora. Nakon dva tjedna liječenja, NAB-paklitaksel terapija daje značajan volumen tumora inhibicije (p = 0,0023) (Slika 3B) i brzine inhibicije rasta tumora je bila 72.8 posto. Srednja masa tumora u tretiranoj grupi NAB-paklitaksel bio je značajno niži nego u skupini vozila (0,093 ± 0,026 g vs. 0,288 ± 0,02 g, p = 0,0054) (Slika 3B). Nema značajne promjene u mišje tjelesne mase zabilježeno je u bilo kojoj od NAB-paklitaksela, oksaliplatin ili epirubicin terapijskim skupinama. Pregled

NAB-paklitaksel potiče mitozu smrt stanice in vivo

mehanizama in vivo protu-tumorskog djelovanja od NAB-paklitaksel su dodatno ispitani kod tumorskih tkiva dobivenog od SNU16 i NCI-N87 ksenografta. Značajan porast ekspresije fosfo-statmin zabilježeno je u SNU16 (slika 4a) i NCI-N87 (slika 4b) ksenografta tumora liječenje NAB-paklitaksela po obje Imunohistokemijska i Western blot analize. Pregled

tumora tkivo u miševa tretiranih NAB-paklitaksela prikazuje smanjenu tumora proliferaciju. Intratumoralno proliferativni indeks Ki67 ekspresija bazi manji od 90,7% (p = 0,001) u usporedbi s kontrolama iz grupe NAB-paklitaksela liječi, za razliku od 72,6% (p = 0,004) u tretiranoj skupini oksaliplatin i 67,7% (p = 0,003 ) u tretiranoj skupini epirubicin (Slika 5A). NAB-paclitaxel uzrokuje jači inhibicijski učinak na proliferaciju stanica tumora nego oksaliplatin i epirubicin, pregled

Ispitivanje apoptoze u tumorskim tkivima otkrila da je indukcija apoptoze u indeks bio 7,9 puta u NAB-paklitaksela skupini (p = 0.013 ), 5,7-puta u tretiranih životinja oksaliplatin (p = 0.024), i 5.2 puta u skupini epirubicin tretira (p = 0.042) u odnosu na početnu razinu kontrolnoj skupini (slika 5B). pregled

NAB-paklitaksela povećava preživljavanje životinja pregled

u prvoj studiji preživljavanja, medijan preživljenja SCID-NOD miševa bila je 24 dana u kontrolnoj skupini. Ova povećana do 86 dana nakon NAB-paklitaksela liječenja (p = 0.0004 u odnosu na kontrolnu grupu, p = 0,0005 u odnosu na oksaliplatin skupini) i 37,5 dana nakon oksaliplatin tretmana (p = 0.0004 u odnosu na kontrolnu skupinu). Raspon opstanak grupa je također superiorniji nakon NAB-paklitaksela liječenja (raspon: 75 do 95 dana) u odnosu na oksaliplatin liječenja. (Raspon: 34 do 41 dana) (Slika 6a) pregled

U drugoj studiji preživljavanja, medijan preživljavanje SCID-NOD miševa je 31 dana u kontrolnoj skupini. Povećao na 93 dana nakon NAB-paklitaksela liječenja (p = 0.0007 u odnosu na kontrolu i oksaliplatin skupina, i p = 0.0416 u odnosu na docetaksela skupina), 81 dana nakon tretmana docetaksela (p = 0.0007 prema kontrola) i 40 dana po tretman oksaliplatina (p = 0,038 u odnosu na kontrolna skupina). Raspon opstanak skupina bila je 75 do 96 dana nakon NAB-paklitaksela tretman u odnosu na docetaksela liječenja (raspon: 74 do 93 dana) i oksaliplatin liječenja (raspon: 35 do 45 dana). (Slika 6b) pregled

Rasprava

Advanced karcinom želuca je po život opasno i predstavlja težak izazov liječenja. Tradicionalni dvostruke ili trostruke citotoksične kemoterapije imaju ograničen učinak i mogu izazvati nuspojave i kemijska otpornost [42] - [44]. Ova studija jasno pokazuje da NAB-paklitaksel je znatno jače antitumorske efekte i na želučani staničnim linijama karcinoma nego trenutno koriste citotoksično sredstvo oksaliplatin i epirubicin in vitro i in vivo, mjereno antiproliferativnih učinaka, apoptoze mitoze smrt stanica, lokaliziran antitumorskih odgovora i opstanak povezane do tumora teret. pregled

In vitro studija je pokazala da NAB-paklitaksel je vrlo aktivan u inhibiciji proliferacije stanica za ljudske stanične linije želuca nego oksaliplatina i epirubicina. SNU16 stanice osjetljivije na NAB-paklitaksel nego NCI-N87 stanica. Neke studije su otkrili da statmin je u korelaciji s otporom taksana i statmin obaranje može povećati osjetljivost na taksan [33], [36]. Testirali smo ekspresiju statmin i utvrdili da nema razlike između ta tri stanične linije. Zanimljivo, kada se ispituje ekspresiju fosfo-statmin smo da je sposobnost NAB-paklitaksela u inhibiciji proliferacije vitro stanica u istoj ljestvicu kao izraz fosfo-statmin ova tri želuca stanica raka: SNU16 > AGS > NCI-N87. Tako se pojavio u početku da fosfo-statmin ekspresija je povezana s NAB-paklitaksela učinkovitost, kreditiranje određena podrška hipotezi da fosfo-statmin može poslužiti kao potencijalni biomarkera predviđanja NAB-paklitaksel antitumorsko odgovor u želučanom liječenja raka. Pregled

izvodi smo NCI-N87 ksenografta studija za procjenu antitumorsko djelovanje NAB-paklitakselom. Umjesto neočekivano, NAB-paklitaksel značajno inhibiraju NCI-N87 rast tumorskih usporedbi s kontrolnom skupinom. Ti donekle proturječni rezultati upućuju na zaključak da je in vivo antitumorsko djelovanje NAB-paklitaksela kod raka želuca može biti neovisan o osnovnom izrazu fosfo-statmin ili ukupni statmin. Budući da su samo tri stanične linije testirani, ne možemo napraviti definitivan zaključak o odnosu između statmin ili fosfo-statmin i NAB-paklitaksela efikasnost raka želuca. Daljnja istraživanja s statmin pokucao-outa bi trebao biti koristan za rješavanje ovog pitanja i istražiti ulogu statmin kao biomarkera za NAB-paklitaksela učinkovitosti. Pregled

U ovoj studiji smo tada u odnosu antitumorskih učinaka NAB paklitaksela s oksaliplatina i epirubicina na SNU16 stranog tijela lokalnih tumora. NAB-paklitaksel je pokazala jače antitumorsku učinkovitost od oksaliplatina i epirubicin koji je u skladu s rezultatima in vitro proliferacije stanica i proliferaciju tumorskih stanica tkiva i apoptoze podataka. Iako je 5-fluouracil je najviše osnovana jednog agenta lijek u kemoterapijski želučanog raka,, odgovor tumora 5-fluorouracil je izvijestio da se nedovoljno predviđeni u SCID mišjim modelima do točke u kojoj su uočene još nema antitumorski efekti [45]. Cisplatina i oksaliplatina, snažnije induktori apoptoze, a također se često koriste u tretmanu želučanog kemoterapiji, izabrani su češće kao sredstva za svrhu usporedbe sa novim sredstvima koji će se testirati, [22], [45]. Na bazi otapala paklitaksela ima više nuspojava i ne dodavati poboljšanje preživljavanja u odnosu na oksaliplatina u kliničkoj za liječenje raka želuca [22]. U našim istraživanjima, oksaliplatina nije statistički različito od epirubicina. Stoga izaberite oksaliplatin kao polazna agent u studiji preživljavanja životinja i utvrdio da NAB-paklitaksel povećao medijan preživljenja miša za oko 40 dana tijekom oksaliplatina, više nego dvostruko učinak nego da se postiže oksaliplatina. Docetaksel čini se da je aktivniji taksan, s bržim celularnog unosa i duže intracelularne zadržavanje u usporedbi s otapalom bazi paklitaksel [46]. Proveli smo dodatni studiju preživljavanja za usporedbu antitumorskih učinaka NAB-paklitaksela s docetakselom i utvrdio da je srednja vrijednost vremena preživljenja malo proširena je nakon NAB-paklitaksela tretmana (93 dana naspram 81 dana, p = 0,0416). Naši rezultati su u skladu s rezultatima nedavnog suđenja protiv raka dojke Faza II koji su pokazali da je 100 mg /m ^{2 NAB-paklitaksel je imao produženi Prosječno preživljavanje (omjer rizika 0,575, p = 0,008) u usporedbi s docetakselom [47]. Na temelju naših rezultata, NAB-paklitaksel je pokazao jači antitumorsko učinkovitost u eksperimentalnoj raka želuca i čini se da predstavlja relativno moćan novi kemoterapijski agens za kliničko liječenje raka želuca. Pregled}

statmin je važan mikrotubula mikrotubula destabiliziranja fosfoprotein. Kad statmin fosforiliran, njegova aktivnost mikrotubula destabiliziranja smanjio [32], [34], a to se može poboljšati osjetljivost na taksan. Statmin fosforilira uglavnom o ciklinu ovisna proteinska kinaza (CDKs) vezivna lokacija Ser38 u mitozi [32], te usredotočili izraz analize na ser38 ostatak. Ustanovili smo da su NAB-paklitaksel liječenje povećane fosfo-statmin ekspresiju in vitro i in vivo, te je povezana s mitotičkim uhićenjima nuklearna usitnjenost kariopiknoze i mitotičke smrti stanice. Mitoze stanična smrt dogodila se u onim stanicama s visokom ekspresijom fosfo-statmin. Zhou i sur. [33] pokazala da je dolje regulirano statmin ekspresiju poslije STMN1 gen obaranje u jetrene stanice karcinoma doda 7,7-puta osjetljivost na NAB-paklitaksel i 2,7 puta osjetljivost na osnovi otapala paklitaksel, ali ne i osjetljivost na doksorubicin. Molekularna priroda koja izaziva smrt stanica tijekom dužeg zaustavljanja mitoze, ostaje slabo definirane [17], [32]. Vretena za montažu kontrolne točke su odavno mislili da igraju ključnu ulogu u tom procesu [48]. U ovom istraživanju, NAB-paklitaksel izazvanu fosforilaciju statmin u želučanih stanica raka, koje se očekuje da će stabilizirati aparat mikrotubula, što zauzvrat može uzrokovati mitotičkih uhićenja i smrti okidač stanica. Iako su rani i preliminarni podaci, neki podrška za fosfo-statmin regulaciju NAB-paklitaksel antitumorsko djelovanje uočeno je i zaslužuje da se dodatno vrednovati. Pregled

U zaključku, ova studija pokazuje da jedan agent NAB-paklitaksel imali veću antitumornu aktivnost i eksperimentalnim raka želuca od trenutnog standardnog kemoterapeutskih sredstava oksaliplatin i epirubicin i čini se da je superiorna u odnosu na taksan docetaksel. Ova snažna antitumorska aktivnost podržava razlog za kliničku procjenu NAB-paklitaksela kao obećavajući mikrotubula inhibitorni sredstvo kod raka želuca. Pregled

popratne podatke pregled Slika S1. pregled NAB-paklitaksel dovodi do G2-M fazi zastoja u želučanom stanica raka. (A) Histogrami pokazuju staničnog ciklusa profile AGS i NCI-N87 stanica u različitim vremenima nakon NAB-paklitaksela liječenja. Želučani stanice raka su kultivirane tijekom 24 sata, a zatim obradi s 100 nM NAB-paklitaksel 12 sati ili 24 sata. Analiza staničnog ciklusa izvedena je protočnom citometrijom. Prikazani rezultati su prikazuje dva neovisna pokusa. (B) distribucija staničnog ciklusa za želučanih stanica raka liječenih 100 nM NAB-paklitakselom. . Simbol * znaci uvjeti pod kojima se stanice raspao pregled doi: 10,1371 /journal.pone.0058037.s001 pregled (TIF) pregled Slika S2. pregled progresije staničnog ciklusa želučanih stanica raka liječenih oksaliplatin, epirubicin i docetaksel. (A) Histogrami pokazati staničnog ciklusa profile SNU16 i AGS stanica nakon oksaliplatina, epirubicin i docetaksela liječenje. Želučani stanice raka su kultivirane 24 sata, a zatim se pomiješa sa 10 uM NAB-paklitaksel, oksaliplatin, epirubicin i docetaksel 8 sati. Stanični ciklus je provedena protočnom citometrijom. Prikazani rezultati su prikazuje dva neovisna pokusa.

• PLoS ONE: Obnova Mir-1228 * Expression Potiskuje epitelnih-mczcnhimnog tranzicije u želučani Cancer
• PLoS ONE: MDM2 SNP309 rs2279744 Polimorfizam i rak želuca rizika: Meta-Analysis