PLoS One: Superior daganatellenes hatását nanorészecske albuminhoz kötött paclitaxel Experimental Gyomor Cancer

absztrakt katalógusa

A gyomorrák a második leggyakoribb oka a rák okozta halál a világon, és nincs hatékony kezelés az előrehaladott betegség. Fülönfog-paclitaxel egy újszerű mikrotubulus-gátló citotoxikus szer, nem vizsgálták a gyomorrák, mint még. Ebben a vizsgálatban a humán gyomor rákos sejtvonalak AGS, NCI-N87 és SNU16 vizsgáltuk. Nab-paclitaxel gátolja a sejtproliferációt, ahol az IC50 az 5 nM SNU16, 23 nM AGS és 49 nM NCI-N87 sejtek után 72 órás kezelés, amely alacsonyabb volt, mint az oxaliplatin (1,05 | iM és 1,51 uM) és epirubicin ( 0,12 jiM és 0,25 | iM). Nab-paklitaxel kezelés megnövekedett expressziója a mitotikus orsó kapcsolódó foszfo-sztatmin függetlenül a kiindulási teljes vagy foszforilezett sztatmin szinten, és az indukált mitotikus sejthalál megerősített fokozott expressziója a hasított PARP és a kaszpáz-3. Miután a két hetes NAB-paclitaxel, oxaliplatin vagy epirubicin kezelés, az átlagos in vivo helyi tumornövekedés gátlási arányt 77, 17,2 és 21,4 százalék volt (p = 0,002). Hatásai terápia daganatos proliferatív és apoptotikus index levelezett tumor gátlására vonatkozó adatokat, míg kifejezése foszforilált sztatmin is emelkedett a szövetekben. Nőtt a medián állatok túlélését követően NAB-paclitaxel kezelés (93 nap), mint a kontroll (31 nap, p = 0,0007), oxaliplatin (40 nap, p = 0,0007), illetve a docetaxel-kezelés (81 nap, p = 0,0416) . Az erős tumorellenes aktivitása NAB-paclitaxel kísérleti gyomorrák támogatja az ilyen mikrotubulus-gátló stratégia klinikai alkalmazása. Fülönfog-paclitaxel előnyöket észleltek független foszforilált sztatmin kifejezés kiinduláskor megkérdőjelezése a figyelmet a NAB-paclitaxel felhasználásra gyomorrák alapján a feltételezett biomarker. Katalógusa

Citation: Zhang C, Awasthi N Schwarz MA, Hinz S, Schwarz RE (2013) Superior daganatellenes hatását nanorészecske albuminhoz kötött paclitaxel Experimental gyomorrákban. PLoS ONE 8 (2): e58037. doi: 10,1371 /journal.pone.0058037 katalógusa

Szerkesztő: Lu-Gang Yu, University of Liverpool, Egyesült Királyság katalógusa

Beérkezett: november 20, 2012; Elfogadva: január 29, 2013; Megjelent: február 27, 2013 katalógusa

Copyright: © 2013 Zhang et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: A szerzők nincs támogatás vagy támogatási jelenteni. katalógusa

Érdekütközés: a szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető katalógusa

a gyomorrák (GC) a negyedik legelterjedtebb rák és a második leggyakoribb oka a rák összefüggő halálozás világszerte [1] - [3]. A legtöbb beteg előrehaladott vagy áttétes betegség a diagnózis idején [4], [5]. A kombináció oxaliplatin és 5-fluorouracil, és anélkül epirubicin vált a legszélesebb körben használt protokoll az elsővonalbeli kemoterápiát előrehaladott gyomorrák [6], [7]. Azonban ez a kombinációs kezelés lehetősége van a jelentős mellékhatásokat, és még mindig hordoz korlátozott hatásosság, míg a betegek prognózisát marad lehangoló a medián túlélési körülbelül 10 hónap [8] - [11]. Annak érdekében, hogy javítja a túlélést és csökkenti a toxicitás, molekulárisan célzott terápia aktívan vizsgálták a kezelés gyomorrák [12].

A mikrotubulusok már régóta tekintik a cél az érdeklődés egyes rákellenes gyógyszerek, mert a univerzális szerepét az osztódó sejtekben és alapvető szerepet mitózis [13] - [15]. Paclitaxel és docetaxel vannak klasszikus mikrotubulus inhibitorok, amelyek hatásukat előmozdításával tubulin polimerizációt és stabilizálása mikrotubulusok eredményez a G2-M fázisban történő leállást és mitotikus sejt halál [15]. A mitotikus sejt halál egy mód sejtpusztulás, kifejezetten alatt mitosisos szakaszában által indukált DNS-károsító ágensek és magorsómérgek /sejtosztódást gátló [16], [17]; ez elsősorban a kaszpáz-függő, de az ritka körülmények között is lehet kaszpáz független [18]. A paclitaxel tesztelték haladó és visszatérő gyomor daganatok a válaszadási arány 43% és 5-fluorouracil és a folsav [9], [19]. Összehasonlítva a válasz mértéke 38~45% engedett kombinációja oxaliplatin és 5-fluorouracil és folinsav, paclitaxel nem eredményez kiváló túlélési de okozott több mellékhatást, különösen idős betegek esetében [9], [20] - [ ,,,0],22]. Paclitaxel szükséges emulgeálás oldószerekkel, hogy lehetővé tegye az intravénás beadás, amely azt eredményezte, hogy a túlérzékenységi reakciók és potenciálisan drámai mellékhatásokat betegeknél [23], [24]. Nanorészecske albuminhoz kötött (fülönfog) paclitaxel egy újszerű albumin-stabilizált, Cremophor-mentes, és vízben oldható nanorészecskéket tartalmazó gyógyszerforma a paklitaxel. Ez jól tolerálható és nem túlérzékenységi reakciók után intravénás infúzió [25]. Klinikai és kísérleti vizsgálatok kimutatták, hogy összehasonlítva az oldószer alapú paklitaxel, NAB-paclitaxel magasabb volt a tumor-visszatartás, alacsonyabb toxicitást [23], [26] és a hatásosabb tumorellenes hatása a mellrák, nem kissejtes tüdőkarcinóma (NSCLC), hasnyálmirigy rák, melanoma, és a fej-nyaki rák [27] - [31]. Ugyanakkor a potenciális szerepe NAB-paklitaxel gyomorrák sejtek nem vizsgálják, mint még. Katalógusa

sztatmin, egy mikrotubulus destabilizáló foszfoprotein, fontos szabályozója mikrotubuluspolimerizáció és dinamikája [32] - [34] , és azt találtuk, hogy kapcsolatos taxán ellenállás néhány tumortípus keresztül megváltoztatása kábítószer kötelező érvényű, és késlelteti a G2-M fázisban átmenet [33], [35]. Sztatmin gátlás volt a szinergikus antiangiogén és tumorellenes aktivitás taxollal [36]. Sztatmin expressziót találtuk, hogy jelen legyen a legkülönbözőbb emberi rákos megbetegedések, beleértve a gyomorrákot, és ezért jelentenek vonzó célpont a rák terápiájában [34], [37], [38]. Jeon és munkatársai. megállapította, hogy a sztatmin szolgálhat egy prognosztikai marker, és potenciális terápiás célpontot gyomorrák [37]. Foszforilációja sztatmin csökkenti a mikrotubulus destabilizáló hatását, egy olyan jelenség, is tulajdonítható, hogy a taxán aktivitás [34].

Ez a vizsgálat értékelte a tumorellenes tevékenységét NAB-paclitaxel humán gyomorrák sejtek in vitro és in vivo. Összehasonlítottuk a daganatellenes hatás a NAB-paclitaxel más citotoxikus ágensek a helyi daganat növekedését és az állatok túlélését. Azt is mérik a kifejezés teljes sztatmin és foszforilált sztatmin in vitro és in vivo, hogy értékelje saját szerepüket prediktív markerek NAB-paclitaxel daganatellenes választ. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Sejtkultúrák és reagensek

az emberi gyomor rákos sejtvonalak AGS, NCI-N87 és SNU16 kaptuk az American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD), és RPMI 1640 tápközegben (Sigma Chemical Co. St. Louis, MO ), kiegészítve 10% magzati borjúszérummal (FBS), 37 ° C-on, nedvesített, 5% CO _{2 atmoszférában. NAB-paclitaxel-től vásároltuk Abraxis Bioscience (Los Angeles, Kalifornia). Az oxaliplatin vásároltunk a Sanofi Aventis (Bridgewater, NJ). A docetaxel, epirubicin és az 5-fluor-uracil szereztünk be egy helyi gyógyszertárban. A sejt proliferációs reagens WST-1-től vásároltuk Roche Diagnostic Corporation (Indianapolis, IN).}

életképesség teszt

A sejtek életképességét úgy értékeljük ki, kolorimetriás WST-1 vizsgálati eljárásban. A mérés alapján képes az életképes sejtek hasítja a szulfonált tetrazólium só WST-1 (4- [3- (4-jód-fenil) -2- (4-nitro-fenil) -2H-5-tetrazolio] -1, 3- benzol diszulfonát) mitokondriális dehidrogenázok [39]. Gyomorrák sejteket (5.000 sejt per lyuk) szélesztünk egy 96 mérőhelyes lemez szabályos növekedés közepes és kezeltük NAB-paclitaxel, 5-fluor-uracil, oxaliplatin és epirubicin után 16 óra inkubálás után. A tartomány a használt koncentrációk (1 nM és 10 uM) összehasonlítható volt a klinikailag elérhető koncentrációk. Miután további inkubálás 72 órán át, 10 ul WST-1 reagenst adtunk minden egyes lyukban majd inkubáltuk 2 órán át. Az abszorbanciát 450 nm-en mértük mikrolemez leolvasóval.

cell cycle analysis

A sejtciklus analízist áramlási citometriával fluoreszcens propidium-jodid (Pl) festéssel. A sejteket tenyésztettük, és kezeltük NAB-paclitaxel, oxaliplatin, epirubicin és docetaxel 8-24 órán keresztül. A sejteket ezután összegyűjtjük és a rögzített 75% -os etanollal-PBS-ben egy éjszakán át -20 ° C hőmérsékleten. A sejteket 5 percig centrifugáltuk 2000 x g sebességgel. A sejtüledéket újra szuszpendáljuk, és inkubáljuk 0,05 mg /ml PI, 0,1% Triton X-100, és 1 mg /ml-es RN-áz A PBS-ben 45 percig, szobahőmérsékleten. A szuszpenziót ezután analizáltuk egy Becton Dickinson FACScan. Az arány a sejtek a sub-G1, G1, S és G2-M fázisokban a sejtciklus határoztuk meg a DNS-tartalom.

immuncitokémiai elemzését

Gyomorrák sejteket (1 × 10 ^{5 sejt per kamra) szélesztettünk egy 4 kamrát dia rendszeres tápközegben. Miután a 24 órás a sejteket kezeltük NAB-paclitaxel 16 órán át, majd rögzítettük 4% paraformaldehidben. A sejteket CAS blokkoló pufferben, majd 1 órás inkubálás foszfo-sztatmin antitest (1:100) és 40 perc inkubálás Cy3 (1:200 hígítás) másodlagos antitesttel. A metszeteket szerelt segítségével szerelési megoldás, amely 4 ', 6-diamidino-2-fenil-(DAPI) (Invitrogen, Carlsbad, CA). Fluoreszcencia mikroszkópia kimutatására használt fluoreszcens jelek felhasználásával IX81 Olympus mikroszkóp szerelve egy Hamamatsu Orca digitális kamerával (Hamamatsu Corporation, Bridgewater, NJ).}

Western-blot-analízis

Sub-konfluens egyrétegű sejteket kezeltük NAB-paclitaxel, oxaliplatin és epirubicin. A sejtlizátumot és a tumor lizátumokat előzőekben leírtak szerint előállított [40]. A felülúszókat centrifugálással kinyertük, 13000 rpm fordulaton, a protein koncentrációkat mértük, és azonos mennyiségű teljes fehérje elválasztottuk SDS-PAGE. A fehérjéket átvittük PVDF-membránokra (Bio-Rad, Hercules, CA), és a membránokat blokkoltuk 1 órán TBS-T. A membránokat egy éjszakán át inkubáltuk 4 ° C-on a következő antitestek: a teljes sztatmin, foszfo-sztatmin (ser38), hasított a poli (ADP-ribóz) polimeráz-1 (PARP-1), a hasított kaszpáz-3 (valamennyi a Cell Signaling Technology , Beverly, MA), α-tubulin és β-aktin (mindkettő a Sigma, St. Louis, MO). A membránokat ezután inkubáljuk a megfelelő HRP-konjugált másodlagos antitestekkel (Pierce Biotechnologies, Santa Cruz, CA) egy órán keresztül. Konkrét sávokban detektáltuk a megerősített chemoilluminescence reagens (ECL, Perkin Elmer Life Sciences, Boston, MA) a autora film. Katalógusa

A szubkután tumor növekedését tanulmány katalógusa

A kísérleteket végeztünk szerint az iránymutatások és elfogadott jegyzőkönyvek, a University of Texas Southwestern Medical Center (Dallas, TX) Institutional Animál Care and Use Committee (engedély száma 2012-0081). Az állatokat naponta ellenőrizzük a kísérlet során minden jele szorongást. Nőstény SCID egereket (6-8 hetes) használtuk összehasonlító modellezésére szubkután tumor növekedését. A gyomorrák sejtek (10 × 10 ^{6 NCI-N87 vagy 20 × 10 6 SNU16 sejteket) szubkután beadjuk egér. Az egereket lemérjük kétszer egy héten. Tizennégy nappal azután, hogy a tumorsejtek injekció, minden egér mutatott mérhető tumort (átlagos tumor mérete 100 és 150 mm-es 3). Az egereket ezután véletlenszerűen csoportokba (n = 6~8 per csoport), és kezeltünk intraperitoneálisan PBS-sel (kontroll) NaB-paclitaxel (10 mg /kg-os 100 ul PBS-ben, hetente 2-szer), oxaliplatin (5 mg /kg 100 ni PBS, hetente 2-szer) és epirubicin (1 mg /kg-os 100 ul PBS-ben, hetente 2-szer) 14 napig. A tumor méretét hetente kétszer mértük keresztül féknyereg, és a tumor térfogatát (V) úgy számítottuk ki, az alábbi képlet segítségével V = ½ [L × (W) 2], L = hossz és W = szélesség. Relatív tumortérfogat (RTV) határoztuk meg a következő képlet szerint RTV = V _{N /V 0, ahol a V 0 és v 1 képviseli tumor térfogat a 0. nap és az azt követő mérés nap, illetőleg. A tumor növekedésének gátlási arányt úgy számítjuk ki, az alábbi képlet segítségével (1-RTVt /RTVc) × 100%, ha a T és C minta kezelt és a kontroll csoportban. A kezelés végeztével, az összes egér eutanáziát CO2 tumorokat eltávolítjuk, lemérjük, tagolt és feldolgozott szövettani, immunhisztokémiai és Western blot analízissel. Katalógusa}}

immunhisztokémiai vizsgálatát katalógusa

A daganatos szövetet egyedeket rögzítették 4% paraformaldehidet és paraffinba ágyaztuk. Intratumoralis proliferáció mértük Ki67 nukleáris antigén festés, mint egy gyártó protokollja (ABCAM, Cambridge, MA). Paraffinba ágyazott szövet metszeteket (5 um), paraffint, rehidratált és antigén letöltésére. A szövet metszeteket CAS blokkoló pufferben, majd 1 órás inkubálás 1:200 hígítása primer Ki67 vagy foszfo-sztatmin antitest (1:200) és 40 perc inkubálás Cy3 (1:200 hígítás) másodlagos antitesttel. A metszeteket szerelt segítségével szerelési megoldás, amely 4 ', 6-diamidino-2-fenil-(DAPI) (Invitrogen). Intratumorális proliferatív index és a sztatmin aktivitás számítása útján értékeltük ki a pozitív sejtek öt különböző nagy teljesítményű mezők (HPF) egy vak módon. Intratumoralis apoptotikus aktivitás értékeltük festéssel szöveti metszeteken a "Apoptag Apoptosis Detection Kit" szerint, a gyártó (Millipore) utasításokat. Fluoreszcens mikroszkópia kimutatására használt fluoreszcens jel segítségével IX81 Olympus mikroszkóppal Hamamatsu Orca digitális fényképezőgép (Hamamatsu Corporation, Bridgewater, NJ) és a vitarendezési egyetértés fonás konfokális egységet Slidebook szoftver (Intelligent Imaging Innovations, Philadelphia, PA). Katalógusa

Animal túlélési analízis katalógusa

Animal túlélési vizsgálatokat végeztünk 6- 8 hetes nőstény SCID egerekben [41]. Az egereket intraperitoneálisan injektáltunk SNU16 (40 × 10 ^{6) sejtek és a testtömeget mértük hetente kétszer. Három hét után a tumor sejt injekció egereket véletlenszerűen csoportokba (n = 6-8 per csoport).}

Az első túlélés vizsgálatban egereket kezeltünk intraperitoneálisan PBS-sel (kontroll) NaB-paclitaxel (10 mg /kg 100 ul PBS-ben, hetente 2-szer), és az oxaliplatin (5 mg /kg-os 100 ul PBS-ben, hetente 2-szer) 2 hétig. A második túlélés vizsgálatban egereket kezeltünk intraperitoneálisan PBS-sel (kontroll) NaB-paclitaxel (10 mg /kg-os 100 ul PBS-ben, hetente 2-szer), a docetaxel (3 mg /kg 100 ul PBS-ben, 2-szer egy héten ) vagy oxaliplatin (5 mg /kg-os 100 ul PBS-ben, hetente 2-szer) 2 hétig. Állatok szenvedését csökkent, elaltatta ha a kasza haldokló előre meghatározott kritériumok szerint, beleértve a gyors fogyás vagy nyereség (> 15%), nem enni vagy inni, levertség, képtelenség, hogy továbbra is egyenes és hiányzik az erő. Állatok túlélését értékelték a kezelés első napján, amíg a halál. Katalógusa

A statisztikai elemzés katalógusa

Túlélési analízis értékeltük GraphPad Prism 5 szoftver (GraphPad Software, San Diego, CA). In vitro sejtproliferációs adatokat átlag ± standard deviáció. A statisztikai analízist ANOVA több csoport összehasonlítása és Student-féle t-próba az egyes csoportok összehasonlítása. Túlélési csoportok összehasonlítása végeztük keresztül log-rank teszt egy Kaplan-Meier analízis típusú. P értéke < 0,05 tekinthető a statisztikailag szignifikáns csoportok közötti különbségeket. Katalógusa

Eredmények katalógusa

sztatmin kifejezés a gyomorrák sejtek katalógusa

Elemzés a humán gyomorrák sejtek AGS, NCI N87 és SNU16 kiderült, hogy mindhárom vonal kifejezett sztatmin. Nincs különbség a teljes sztatmin expressziót találtunk ezek között három sejtvonalak. Expression of foszfo-sztatmin között változott sejtvonalak, a következő sorrendben: SNU16 > AGS > NCI-N87-sejtek (1a ábra).

Nab-paclitaxel gátolja a gyomorrák sejtek proliferációját

Nab-paclitaxel gátolja gyomorrák sejtproliferáció dózisfüggő módon, és a gátlás a sejtburjánzás megjelent követni ugyanabban a sorrendben, mint kifejezése a foszforilált sztatmin (1B). 100 nM koncentráció-gátlás a sejt-proliferáció 94,5, 66,7 és 41,8 százalék SNU16, AGS és az NCI-N87 sejtekben volt. NAB-paclitaxel mutatta a legnagyobb antiproliferatív potencia egy legkisebb hatásos dózis megtalálható mind a 3 vizsgált sejtvonalban képest 5-fluouracil, oxaliplatin és epirubicin. Az IC _{50 NAB-paclitaxel 5 nM volt a SNU16, 23 nM AGS és 49 nM NCI-N87-sejtek, amely kevesebb, mint 5-fluouracil (6,46 | iM SNU16, > 10 | iM AGS és 10,2 iM NCI-N87-sejtek), oxaliplatin (1,51 | iM SNU16, 1,64 | iM AGS és 1,05 jiM NCI-N87-sejtek) vagy epirubicin (0,12 | iM SNU16, 0,16 | iM AGS és 0,25 jiM NCI-N87 sejtek) ( 1C). katalógusa}

Nab-paklitaxel hatására G2 letartóztatás és mitotikus sejthalált in vitro katalógusa

értékelésére szolgáló mechanizmus a növekedés gátlása fülönfog-paclitaxel, a sejtciklus profilját elemezték. Amint azt a 2A ábra, NAB-paclitaxel (100 nM) eredményezte a G2-M sejtciklus SNU16 sejtekben. A százalékos propidium-jodid pozitív sejtek G2-M fázisban emelkedett 35,6-71,6 után 100 nM NAB-paclitaxel kezelés 12 órán át. Hasonló változások történtek AGS és az NCI-N87 sejtek NAB-paclitaxel és docetaxel kezelést, de nem az oxaliplatin és epirubicin kezelés (ábra S1 és S2).

hatása NAB-paclitaxel mitotikus sejt halál, kifejezése foszfo -stathmin és az apoptózis-kapcsolatos fehérjék mértük immunocystochemistry és Western-blottal. NAB-paclitaxel kezelés hatására a mikrotubulusok zavarok és mitotikus letartóztatások gyomorrákban sejtekben megfigyelt sejtmag fragmentáció és karyopyknosis (2B). Expression foszforilált sztatmin nőtt után NAB-paclitaxel kezelést, és magasabb expressziós foszforilált sztatmin társult nagyobb fokú mitotikus letartóztatások, a nucleus fragmentáció vagy karyopyknosis és sejthalál (2B és 2C). Nukleáris töredezettség és karyopyknosis fordult elő 16,7% sejtek alacsony expressziója foszfo-sztatmin de 95,7% a sejtek nagy expressziós foszfo-sztatmin (r = 0,672, p < 0,001). Volt még bizonyíték időfüggő fokozott expressziója foszfo-sztatmin által fülönfog-paclitaxel kezelés (2D, ábra).

Megvizsgáltuk, ha a mitotikus által kiváltott sejthalált fülönfog-paklitaxel részben összefüggésben lehet az apoptózis indukciójában . Értékelés A PARP-1 hasítás és a kaszpáz-3 hasítási markerek indukció apoptózis során kiderült, hogy a gyomorrák sejtek NAB-paclitaxel, oxaliplatin és epirubicin kezelés növelte a kifejezés a mindkét hasított PARP-1 és a kaszpáz-3. Ez a kifejezés az apoptózis-kapcsolatos fehérjék megjelent magasabb után NAB-paclitaxel kezelés összehasonlítva az oxaliplatin vagy epirubicin kezelés (ábra 2E).

Nab-paclitaxel gátolja a gyomorrák xenograftok

In vivo tumorellenes hatásai NAB-paclitaxel értékeltük egy rágcsáló xenograft modellben segítségével SNU16 sejteket. Nab-paklitaxel kezelés 10 mg /kg, hetente kétszer két hétig jól tolerálták nélkül nyilvánvaló toxicitási tüneteket megítélése szerinti egér súly és a napi értékelést. Miután a két hetes kezelés NaB-paklitaxel kezelés eredményezett statisztikailag szignifikáns tumornövekedés-gátlás (p = 0,0004), amely nagyobb volt, mint az oxaliplatin (p = 0,0361) és az epirubicin (p = 0,032), összehasonlítva a járműirányító, illetőleg (ábra 3A). A tumor növekedés gátlás mértéke után egy 2 hetes kezelés NAB-paclitaxel, oxaliplatin és epirubicin volt 77, 17,2 és 21,4 százalék (p = 0,002) volt. Csak NAB-paclitaxel kezelés létrehozott egy méret csökkentése szubkután léziók képest, hogy preestablished tumor méretét. Tumor átlagos súlya szignifikánsan csökkent fülönfog-paclitaxel kezelés (0,154 ± 0,075 g vs. 0,756 ± 0,232 g, p = 0,037), de nem az oxaliplatin (0,408 ± 0,12 g) vagy epirubicin (0,46 ± 0,172 g) kezelés, hordozóval összehasonlítva, kontroll, illetve (3A). Mi is értékeltük a tumorellenes hatásai NAB-paclitaxel NCI-N87 xenograft egér helyi daganatok. Két hét után a kezelés, NAB-paklitaxel kezelés eredményezett szignifikáns tumor térfogat gátlás (p = 0,0023) (3B ábra), és a tumor növekedés gátlás aránya 72,8 százalék. Átlagos tumor-tömeg a NAB-paclitaxel kezelési csoport szignifikánsan alacsonyabb volt, mint amit a gépkocsi csoport (0,093 ± 0,026 g vs. 0,288 ± 0,02 g, p = 0,0054) (3B ábra). Nincs jelentős változás egér testtömeg volt megfigyelhető minden a NAB-paclitaxel, oxaliplatin vagy epirubicin terápia csoportok.

Nab-paclitaxel indukál mitotikus sejthalált in vivo

mechanizmusai in vivo tumorellenes aktivitás a NAB-paclitaxel tovább vizsgálták a daganatos szövetekben nyert SNU16 és NCI-N87 vizsgálatára. A jelentős növekedés a kifejezés a foszfo-sztatmin volt megfigyelhető SNU16 (4a ábra) és az NCI-N87 (4b ábra) xenograft tumorok kezelésére NAB-paclitaxel egyaránt immunhisztológiai és Western-blot-analízissel.

Tumor szövetet fülönfog-paclitaxellel kezelt egerek csökkent tumorsejtek proliferációját arány. A Ki67-alapú intratumorális proliferatív index csökkent 90,7% -kal (p = 0,001), mint a kontrollok a NAB-paclitaxel kezelt csoportban, szemben a 72,6% -kal (p = 0,004) az oxaliplatin kezelt csoportban és 67,7% -kal (p = 0,003 ) az epirubicin kezelt csoportban (5A ábra). Nab-paclitaxel okozott erősebb gátló hatás érvényesül a daganatos sejtek proliferációját, mint az oxaliplatin és epirubicin.

vizsgálata apoptózis tumorszövetekben feltárta, hogy az indukciós apoptotikus index 7,9-szeres a NAB-paclitaxel csoportban (p = 0,013 ), 5,7-szeres volt oxaliplatint kezelt állatok (p = 0,024), és 5,2-szeres a epirubicin kezelt csoportban (p = 0,042) az alapvonal belül a kontroll csoport (5B ábra).

Nab-paclitaxel növeli állat túlélését

az első túlélés vizsgálatban a medián túlélési SCID-NOD egerekben volt 24 nap a kontroll csoportban. Ez a megnövekedett, hogy 86 nap után NAB-paklitaxel kezelés (p = 0,0004 versus kontrollcsoport, p = 0,0005 vs. oxaliplatin csoport) és 37,5 nap elteltével oxaliplatin kezelés (p = 0,0004 vs kontroll csoport). A csoport túlélési tartományban is kiváló után NAB-paclitaxel kezelés (tartomány: 75-95 nap), mint az oxaliplatin kezelés (tartomány: 34-41 nap) (6A ábra). Katalógusa

A második túlélési tanulmány medián túlélését SCID-NOD egerekben volt 31 nap a kontroll csoportban. Ez az arány 93 napon belül NAB-paclitaxel kezelés (p = 0,0007 vs. kontroll és az oxaliplatin-csoport és p = 0,0416 vs. docetaxel csoportban), 81 nappal azután, hogy a docetaxel-kezelés (p = 0,0007 vs. kontroll) és 40 napon oxaliplatin kezelés (p = 0,038 vs. kontroll csoport). A csoport túlélési tartományban volt 75-96 nap után NAB-paclitaxel kezelést összehasonlítva a docetaxel-kezelés (tartomány: 74-93 nap) és az oxaliplatin kezelés (tartomány: 35-45 nap) (6B). Katalógusa

Vita

Speciális gyomorrák életveszélyes, és a jelentése félelmetes kezelés kihívás. Hagyományos kettős vagy hármas citotoxikus kemoterápiás sémák korlátozott hatásuk is okozhat mellékhatásokat, és kemorezisztenciájának [42] - [44]. A jelen tanulmány egyértelműen bizonyítja, hogy NAB-paclitaxel szignifikánsan erősebb daganatellenes hatást a gyomor rákos sejtvonalak, mint a jelenleg használt citotoxikus szerek oxaliplatin és epirubicin in vitro és in vivo körülmények között mért antiproliferatív hatásokat, az apoptózis, a mitotikus sejt halál, lokalizált tumorellenes válasz és a túlélési kapcsolódó a tumor terhet. katalógusa

az in vitro vizsgálat kimutatta, hogy a sziklacsúcs-paclitaxel rendkívül hatékony a sejtburjánzásgátlás emberi gyomor sejtvonalak, mint az oxaliplatin és epirubicin. SNU16 sejtek sokkal érzékenyebbek a elcsíp-paclitaxel mint NCI-N87 sejteket. Egyes vizsgálatok szerint sztatmin korrelált taxán ellenállás és sztatmin akciós növelheti érzékenység taxán [33], [36]. Megvizsgáltuk a kifejezés sztatmin és nem találtak különbséget e három sejtvonal. Érdekes módon, amikor megvizsgáltuk a kifejezés a foszfo-sztatmin azt találtuk, hogy a képessége, NAB-paclitaxel, hogy gátolják az in vitro sejt-proliferáció ugyanabban a sorrend, mint a kifejezés a foszfo-sztatmin e három gyomor rákos sejtek: SNU16 > AGS > NCI-N87. Így tűnt kezdetben, hogy a foszfo-sztatmin expressziót korrelált NAB-paclitaxel hatásosság, hitelezési néhány vonatkozásában egy hipotézist, hogy a foszfo-sztatmin szolgálhat potenciális biomarker megjósolni NAB-paclitaxel daganatellenes választ gyomor rák kezelésére.

végeztünk NCI-N87 xenograft vizsgálatban, tumorellenes hatását NAB-paclitaxel. Inkább Váratlanul, NAB-paclitaxel szignifikánsan gátolta NCI-N87 xenograft tumor növekedését, mint a kontroll csoportban. Ezek némileg eltérő eredményeket azt sugallják, hogy az in vivo tumorellenes hatását NAB-paclitaxel gyomorrákban lehet független a kiindulási kifejezése foszforilált sztatmin vagy teljes sztatmin. Mivel csak három-vonalat teszteltünk, nem tudjuk, hogy a határozott következtetésre jutni a kapcsolat sztatmin vagy foszfonotiolátok sztatmin és fülönfog-paclitaxel hatékonyságát a gyomorrák. További kutatások sztatmin knock-out hasznos lehet ezt a kérdést, és vizsgálja meg a szerepét sztatmin mint biomarker NAB-paclitaxel hatékonyságát. Katalógusa

Ebben a tanulmányban azt majd szemben tumorellenes hatását NAB paclitaxel oxaliplatin és epirubicin a SNU16 xenograft helyi daganatok. NAB-paclitaxel kimutatta erősebb tumorellenes hatékonyság, mint az oxaliplatin és epirubicin, amely összhangban volt in vitro sejtproliferációs eredmények és tumorszövetben apoptózist és a sejtproliferációt adatokat. Bár 5-fluouracil a legismertebb single-szer hatóanyag kemoterápiás gyomorrák ellátás, a tumor válasz 5-fluoruracil azt közölték, hogy nem megfelelően megjósolt SCID egér modell arra a pontra, ahol még nincs tumorellenes hatást nem figyeltek meg [45]. Ciszplatin és oxaliplatin, erősebb induktorok apoptózis és gyakran használt gyomorrák kemoterápiás kezelést, már döntött, gyakrabban, mint ügynökök összehasonlítás céljából az új szerek, amelyek a vizsgálandó [22], [45]. Oldószer alapú paklitaxel több mellékhatása, és nem hozzá túlélési előnyöket képest oxaliplatin klinikai kezelés gyomorrák [22]. Vizsgálatainkban oxaliplatin nem különbözött statisztikailag származó epirubicin. Ezért válasszon oxaliplatin, mint a kiindulási hatóanyag az állatok túlélését tanulmány megállapította, hogy a sziklacsúcs-paclitaxel nőtt medián túlélés egér körülbelül 40 nap alatt oxaliplatin, több mint kétszeres hatás érhető el, mint az oxaliplatin. A docetaxel úgy tűnik, hogy az aktívabb taxán, több gyors celluláris felvétel és hosszabb intracelluláris retenciós összehasonlítva oldószer alapú paklitaxel [46]. Végeztünk egy túlélési tanulmány összehasonlítani tumorellenes hatását NAB-paclitaxel docetaxel és megállapította, hogy az átlagos túlélési idő kissé meghosszabbodik után NAB-paclitaxel kezelés (93 nap vs. 81 nap, p = 0,0416). Eredményeink összhangban voltak egy közelmúltban fázis II vizsgálatban az emlőrák, amely azt mutatta, hogy a 100 mg /m ^{2 NAB-paclitaxel volt elhúzódó medián teljes túlélés (relatív hazárd 0,575, p = 0,008), míg a docetaxel [47]. Eredményeink alapján, NAB-paclitaxel megmutatta erősebb daganatellenes hatás kísérleti gyomorrák, és úgy tűnik, hogy képviselje a meglehetősen hatásos, új kemoterápiás szer klinikai gyomorrák kezelésére. Katalógusa}

sztatmin fontos mikrotubulus mikrotubulus destabilizáló foszfoprotein. Amikor sztatmin foszforilálja, a mikrotubulus destabilizáló aktivitás csökkent [32], [34], és ez javíthatja érzékenység taxán. Sztatmin foszforilált főleg a ciklin-függő protein kináz (CDK) kötőhely Ser38 mitosisát [32], ezért elsősorban a kifejezés elemzések ser38 maradékot. Azt találtuk, hogy NAB-paclitaxel kezelés növelte a foszfo-sztatmin expressziót in vitro és in vivo, és korrelál a mitotikus letartóztatások, nukleáris fragmentáció, karyopyknosis és mitotikus sejt halálát. A mitotikus sejt haláleset azokban a sejtekben nagy expressziós foszfo-sztatmin. Zhou et al. [33] megállapította, hogy a leszabályozott sztatmin kifejezés után STMN1 gén kiütése a máj carcinoma sejt hozzáadunk 7,7-szeres érzékenység sziklacsúcs-paclitaxel és 2,7-szeres érzékenység az oldószer alapú paklitaxel de nem érzékeny doxorubicin. A molekuláris természete, hogy kiváltja a sejthalál során elhúzódó mitózis is kevéssé definiált [17], [32]. Orsó összeszerelés ellenőrző pontok már régóta úgy gondolják, hogy kritikus szerepet játszanak a folyamat során [48]. Ebben a vizsgálatban NaB-paclitaxel által kiváltott foszforilezését sztatmin gyomor rákos sejtekben, amely várhatóan stabilizálja a mikrotubulus készülék, ami viszont okozhat mitotikus letartóztatások és ravaszt sejthalált. Bár ezek a korai és az előzetes adatok némi támogatást foszforilált sztatmin szabályozó NAB-paclitaxel daganatellenes aktivitást figyeltek és megérdemli, hogy további értékelésre. Katalógusa

Összefoglalva, a jelen tanulmány azt bizonyítja, hogy egy-szer fülönfog-paclitaxel volt erősebb tumorellenes aktivitást a kísérleti gyomorrák, mint a jelenlegi standard kemoterápiás szerek oxaliplatin és epirubicin, és úgy tűnt, hogy a kiváló taxán képest docetaxel. Ez az erős tumorellenes aktivitást támogatja a logikai klinikai értékelése NAB-paclitaxel ígéretes mikrotubulus-gátló szer a gyomorrák. Katalógusa

alátámasztó információk katalógusa ábra S1.
Nab-paclitaxel vezet G2-M fázis leállását a gyomorrák sejtek. (A) A hisztogramok mutatják, sejtciklus-profilok AGS és az NCI-N87 sejteket különböző időpontokban után NAB-paclitaxel kezelést. Gyomorrák sejteket tenyésztettünk 24 órán át, majd hozzáadunk 100 nM NAB-paclitaxel 12 órán át vagy 24 órán át. Sejtciklus analízist áramlási citometriával. Bemutatott eredmények reprezentatívak két független kísérlet során. (B) Sejtciklus eloszlás gyomorrák kezelt sejtek 100 nM NAB-paclitaxel. Symbol * jelek feltételeket, amelyek mellett a sejtek szétesnek. Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0058037.s001 katalógusa (TIF) hotelben ábra S2.
sejtciklus előrehaladását a gyomorrák kezelt sejtek által oxaliplatin, epirubicin és docetaxel. (A) Hisztogramok mutatják sejtciklus-profilját SNU16 és AGS sejteken oxaliplatin, epirubicin és docetaxel kezelést. Gyomorrák sejteket tenyésztettünk 24 órán át, majd hozzáadunk 10 nmol NAB-paclitaxel, oxaliplatin, epirubicin és a docetaxel 8 órán keresztül. Sejtciklus végeztük áramlási citometriával. Bemutatott eredmények reprezentatívak két független kísérlet során.

• PLoS One: helyreállítása miR-1228 * Expression Megszünteti Epithelialis-mesenchymalis Transition gyomorrákban
• PLoS One: MDM2 SNP309 rs2279744 polimorfizmusa és a gyomorrák kockázata: meta-analízis