PLoS ONE: Glyoxalase-ja je roman Prognoza čimbenik povezan s rakom želuca progresiju

Sažetak pregled

Glyoxalase I (GLO1), A metilglioksal detoksifikacija enzim je uključen u progresiji humanih malignih bolesti. Uloga GLO1 u razvoju želučanog karcinoma ili progresije je trenutno nejasno. Izraz GLO1 je određen u osnovnim želučanih uzoraka raka pomoću kvantitativne lančane reakcije polimeraze, imunohistokemiju (IHH), te analizira Western blot. GLO1 izraz bio veći u želučanog tkiva raka, u usporedbi s onim u susjednim noncancerous tkiva. Pojačana ekspresija GLO1 značajno povezana s želučanu stijenku invazije, limfnih čvorova metastaza i patoloških fazi, što upućuje na novu ulogu GLO1 u želučanom razvoja i napredovanja raka. 5 godina stopa preživljavanja od nižih GLO1 izraz grupa je bila znatno veća od viših ekspresije skupine (log rank P pregled = 0,0373) u IHC eksperimenata. Prekomjerna ekspresija GLO1 u želučanim staničnim linijama raka povećava proliferaciju stanica, migraciju i invazivnost. S druge strane, down-regulacije GLO1 s shRNA dovelo do značajnog smanjenja migracije i invazije sposobnosti. Naši podaci jasno ukazuju da visoke izraz GLO1 kod raka želuca povećava metastaza sposobnosti tumorskih stanica In vitro
i in vivo pregled, a podržao svoju učinkovitost kao potencijalni marker za otkrivanje i prognozu raka želuca pregled

Izvor. Cheng WL, Tsai MM Tsai CY, Huang YH, Chen CY, Chi HC, et al. (2012) Glyoxalase-ja je roman Prognoza čimbenik povezan s rakom želuca progresiju. PLoS ONE 7 (3): e34352. doi: 10,1371 /journal.pone.0034352 pregled

Urednik: DunFa Peng, Vanderbilt University Medical Center, Sjedinjene Američke Države pregled

Primljeno: 8. prosinac 2011; Prihvaćeno: 27. veljača 2012; Objavljeno: 29. ožujka 2012 pregled

Copyright: © 2012 Cheng et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo bio podržan od dotacija iz Chang-Gung University, Taoyuan, Tajvan (NMRPD 150311, NMRPD170441-42, CMRPG 640042-43, CMRPG 670291-93) i Nacionalnog vijeća za znanost Republike Kine (NSC 95-2314-B-182 -027, 97-2314-B-182-009-MY2, 99-2314-B-182-022). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca je četvrti najčešći oblik raka i drugi najviši uzrok smrtnosti od raka povezanih svijetu [1]. Malignosti je šesti vodeći uzrok smrti od raka povezanih u Tajvanu [2]. Pravilan screening može olakšati otkrivanje raka želuca prije razvoja simptoma u stvrdnjava fazi. [3] Određivanje ekspresije profila ključnih molekula u nekoliko puteva koji su uključeni u želučanom napredovanje raka može pomoći u dijagnozi, prognozi i predviđanje napredovanja tumora. Pregled

metastazirajući tumor vitalni korak u određivanju agresivnog fenotipa ljudskih rakova i predstavljaju glavne uzroke raka povezanih smrti [4]. Visoka ekspresija migracijskih povezanih faktora, kao što ciklooksigenaze 2 (COX-2), [5], faktor rasta vaskularnog endotela (VEGF) [6], CXC kemokina ligand (CXCL) -8 [7], kemokina (CXC motiv) receptor (CXCR) 2, i CXCL-1 [8], su povezane sa želučanom progresije raka. Nekoliko potencijalnih onkogeni putevi (proliferacija /matičnih stanica, NF-kB i Wnt /β-katenina) deregulirani u većini želuca raka [9]. Dakle, daljnje razjašnjenje molekularnih događaja koji su doveli do želučanog raka progresije i identifikacije vrijedne dijagnostičke ili prognostičke markera i novih terapeutskih strategija će biti od značajne kliničke vrijednosti. Pregled

Glyoxalase I (također nazvan GLO1) je bitna komponenta u putevima koji vode do detoksikaciju metilglioksalom (MG), jedan od sporednih proizvoda glikolize [10], [11], [12]. GLO1 ekspresija kojeg je povećana u nekoliko humanih karcinoma debelog crijeva, dojke, prostate i melanoma [13], [14], [15], [16], [17]. Novije studije su izvijestili da prekomjerna ekspresija GLO1 je povezana s progresijom raka i otpornosti na lijekove [17]. Iz našeg prethodnog podataka, GLO1 regulaciju zabilježeno je u želučanim uzoraka raka pomoću cDNA mikročipa [18]. Međutim, specifična uloga GLO1 tijekom želučane tumorigenezi i njen klinički značaj tek treba utvrditi. Pregled

Naši pokusi jasno pokazuju da GLO1 je često prekomjerno izražen kod raka želuca, a povezana je s metastazama raka. Naime, izraz GLO1 je značajno viša u naprednim stadijima raka želuca. Nadalje, promjene izraz GLO1 u želučanim staničnim linijama karcinoma utječe migracija stanica i invazije sposobnosti. Pregled

materijali i postupci

Etika Izjava pregled

Protokol istraživanja je odobren od strane medicinske Etika i ljudska klinička ispitivanja odbor Gung Memorial Hospital Chang (IRB NO. 95-0472B). Pismeni informirani pristanak koji je dobiven od svih pacijenata pregled

Tema pregled

114 bolesnika (64 muškaraca i 50 žena, srednja dob, 66 godina; raspon 28-86 godina). Rak želuca dijagnosticiran u Chang Gung Memorial Hospital od 2000. do 2005. godine su upisani u ovoj studiji. Svi su bolesnici primili operaciju za primarni karcinom želuca, bez prethodne kemoterapije ili radioterapije. Svaki pacijent je podvrgnut želuca resekcija (35 bolesnika je učinjena totalna gastrektomija i 79 djelomično gastrektomije). Pregled

kliničkopatološkim studije

resected primjerci su pregledane patološki koriste kriterije japanskog Opća pravila za rak želuca studije [19] i Zajedničko povjerenstvo američki na rak (AJCC) (pTNM) klasifikacijski sustav [20]. Kliničkopatološkim parametri uključuju dob pacijenta i spol, mjesto tumora i veličine, bruto (Borrmann-a) tip tumora, zidne invaziju, resekcija margine, histološki tip, limfnog čvora metastaza, vaskularnu invaziju, limfna invazija, i perineuralnu invazije. Nakon pražnjenja, svi pacijenti imali periodične praćenje posjeta na ambulantni odjel Chang Gung Memorial Hospital do smrti ili do početka pripreme ovog članka. Pregled

U stvarnom vremenu kvantitativni reverzne transkripcije lančana reakcija polimeraze (QRT-PCR ) pregled

QRT-PCR, kako je opisano u prethodnom izvješću [21]. Korišteni su sljedeći primeri: ljudski GLO1 pregled QRT-PCR (prednji primer, 5'-TGAGGATAAAAATGACATCCCTA- AAGA-3 ', a obrnuti primer, 5'-TGTGTCAGCTCAAGTGTAGCTTTC-3'), ljudska 18S rRNA QRT-PCR (Forward primer, 5'-CGAGCCGCCTGGATACC-3 ', a obrnuti primer, 5'-CCTCAGTT CCGAAAACCAACAA-3'). pregled

Proizvodnja anti-GLO1 antitijela pregled

cDNA koja kodira pune duljine GLO1 pregled je klonirana u pGEX-4T1. Lizati iz E. Coli pregled BL21 soja pročisti perlice glutation-agaroza (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO). Topivi proteini su bili pročišćeni pomoću kromatografije s glutation-agaroznim zrnima, u skladu s uputama proizvođača, emulgirana sa pomoćnim sredstvom, te je za imunizaciju zečeva. Poliklonalna antitijela se proizvode i afinitetno pročistiti, kao što je prethodno opisano [22]. Specifičnost in-house GLO1 je provjerena pomoću western blot analize (Slika S1). Pregled

imunoblot analiza pregled

cijelih stanica lizati, ekstrakti jezgre i uvjetne mediji su pripremljeni od ljudskog tkiva ili stabilna GLO1 obaranje staničnih linija. Western blot je izvedena pomoću monoklonskih antitijela protiv humanog HIF-1 a (Abcam, San Francisco, CA), P65 (Epitomic, Burlingame, CA), ili P50 (Millipore, Billerica, MA) ili poliklonskog protutijela protiv ljudskog GLO1 (u kući, razrjeđivanje, 1:500), CXCL1 (Peprotech Inc, Rocky Hill, NJ), CXCL8 (R &.. D Systems Inc., Minneapolis, MN), VEGF (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) pregled

Imunohistokem (IHH) pregled

formalinom fiksne i parafin-ugrađen tkiva su ispitani IHC pomoću poliklonskog antitijela protiv humanog GLO1 proizveden u kući (razrjeđivanje, 1:3000) i avidin-biotin kompleks (ABC ) metoda, kao što je prethodno [23] opisano [24]. Usporedbe su provedene između intenziteta bojanja stanice karcinoma i benignog površnog epitela, koje su smještene na istom slajdu. Za polu-kvantitativna analiza GLO-1 imunoreaktivnost, A Histoscore (H) -scoring sustav korišten je [25]. Ukratko, negativni skupina sastojala se od stanica raka bez detektirati (-) ili samo u tragovima bojenjem za za Glo-1 (1). Pozitivan skupina sastojala se od stanica raka s umjerenim (2) ili visoke razine (+3) GLO-1 imunoreaktivnost. H-bodovanja je izračunata i prosječno dva neovisna patologa, zaslijepljeni na početnu rezultat za svakog pacijenta. Rezultati su pomoću množenjem postotka pozitivnih stanica (P) pomoću intenziteta (I), prema formuli: H = P × I. Na primjer, poglavlje u kojem je 10% od tkiva imali bojenje ocjena +1, 60% rezultat od +2, a 30% rezultat od +3, H = (10 x 1) + (60 x 2) + (30 x 3) = 220. pregled

Uspostavljanje GLO1 povećanom ekspresijom u SC-M1 stanične linije pregled

korištena je stanična linija SC-M1 eksprimiraju nižu razinu GLO1. Transfekcija u GLO1 pregled cDNA izvedena je Lipofectamine reagensa (Life Technologies, Grand Island, NY). Nakon inkubacije od 24 sata, stanice su prenesene u mediju koji sadrži G418 za odabir i zatim se koristi u proliferacije, migracije i pokusima invazije, pregled

Uspostava GLO1 obaranje na TSGH i AGS staničnim linijama pregled

Dvije ljudske stanične linije raka želuca, AGS, a TSGH, bili zaposleni. Kratkom ukosnica RNA (shRNA) sekvence cilja GLO1
(TRCN0000118630 ​​i TRCN0000118631) kupljeni su od Nacionalnog RNA interferencije osnovne Facility (Institut za molekularnu biologiju, Academia sinica, Tajvan). Specifična represija GLO1 je potvrđeno pomoću Western blot analize. Pregled

Razmnožavanje stanica Test

Ćelije (1 × 10 ^{4) uzgojeni na 6 cm tanjur na 37 ° C u 5 % CO _{2. U svakoj vremenskoj točki, rast stanica je određen brojanjem stanica. Rezultati su prikazani kao mnogostrukost promjene u odnosu na svaku kontrolnu vrijednost. Pregled}}

In vitro pregled test migracije i invazivnog djelovanja pregled

Učinak GLO1 osiromašenja ili prekomjerna ekspresija na migracija i invazivni aktivnost želučane staničnim linijama karcinoma procijenjen je brza in vitro pregled test (Transwell® tehnika), kao što je prethodno opisano [26]. pregled

priprema RNA i analize mikropolja pregled

GLO1-silenced klon TSGH (KG2) i kontrola staničnog klon (C1) su kratko isprani s ledeno hladnim PBS-om i liziraju u Trizol reagensa (Invitrogen) za ekstrakciju RNA. Gene Expression profili između KG2 i C1 stanica su analizirani s ljudskim U133A GeneChip (Affymetrix, Santa Clara, CA) prema proizvođača protokola [27]. Pregled

Statistička analiza pregled

GLO1 izraze svaka podskupina clinicopatholgoical parametara u tablici 1 su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD) za IHC rezultatom pacijenata u ovoj skupini. Kolmogorov-Smirnov test je neparametrijskim testa za usporedbu uzoraka s distribucijom referenca vjerojatnosti. Prema potrebi, Mann-Whitney U ili Fisherov egzaktni test primijenjen je za usporedbu između dvije skupine, dok je Kruskal-Wallis ili Pearsonov hi-kvadrat test je korišten za usporedbu više od dvije skupine. Odnos između podataka dobivenih iz dva različita ispita je analizirana s Spearman-a korelacije testa. Pacijenti su praćeni do vremena rukopisa pripreme ili smrti. Rak specifični ishod preživljavanja je određena primjenom Kaplan-Meier metodi za sve pacijente, osim onih koji su umrli od kirurških komplikacija. Log-rank test je korišten za usporedbu prognostički značaj pojedinih varijabli na preživljavanje. Cox proporcionalnih rizika model je zaposleno u multivarijatne analize identificirati nezavisni prediktori preživljavanja. P
vrijednosti. ≪ 0,05 smatrana značajnom pregled

Rezultati pregled

GLO1 mRNA i proteina razine reguliran u bolesnika s rakom želuca

Korištenje cDNA mikročipa, mi su identificirali nekoliko regulira prema gore gena iz želučanog tkiva, u odnosu na susjedne nontumorous tkiva [18]. Među tim genima, usredotočili smo se na GLO1 pregled kao molekularni cilj za rak želuca. Ekspresija GLO1 mjerena je u tkivu karcinoma, i u usporedbi s onim u podudarne nontumorous želučane sluznice, koristeći QRT-PCR (n = 89) (Tablica 2) ili IHC (n = 114) (Tablica 1). Podaci iz QRT-PCR pokusima otkrio GLO1 ekspresijom (≥1.5 puta) u 51 (57,3%) želučanog tkiva raka, u usporedbi s noncancerous tkiva. Srednja GLO1 izraz u tumorskim tkivima bila 2,87 puta da se u noncancerous tkiva. Naši rezultati potvrđuju značajno povećanje GLO1 izražavanja u tumorskim tkivima ( P pregled = 0,005, jedan uzorak Kolmogorov-Smirnov test). Pregled

Izražavanje GLO1 proteina u uparenih uzoraka dalje analizirana pomoću western upijajući. Slika 1A predstavlja izraz GLO1 u osam reprezentativnih pacijenata. Jednake količine ukupnih proteina bojanog s Coomassie blue SDS-PAGE nakon su korišteni kao kontrola za punjenje. Svi tkiva raka iz uzoraka rak želuca (G1 na G8) prikazana regulira prema gore GLO1 izraz, u usporedbi s podudaranjem noncancerous susjednom sluznice (sl. 1). Pregled

Imunobojanje pokazuje GLO1 protein povećanom ekspresijom u želučanom kancerogenih tkiva pregled

nadalje ukazuju da li GLO1 regulaciju korelaciji s kliničkim napredovanjem raka želuca, IHC je izvedena na parafinskim fiksiranih želučanom tkivu raka sparuju nekancerozno sluznicu 114 pacijenata. Četiri para reprezentativnih slučajeva (a /b, c /d, e /f i g /h) prikazane su na slici 1B. IHC podaci za noncancerous sluznice kolege (A, C, E i G) i raka tkiva (b, d, f, h) uspoređene su u parovima. Tamno-smeđe imunološko je uglavnom rasprostranjen u stanicama raka, dok razina bojenja bile su niže u stanice strome ili fibroblasta želučane tkiva raka. Intenzivno obojenje za GLO1 često uočeno u naprednim želuca tumorskih stanica, za razliku od slabe ili bez obojenja u normalnim želuca epitelnim stanicama (Sl. 1B, gornji panel). Bojanje je intenzivniji na naprednim želučane fazama raka [stage III na slici. 1B (f, h)], dok je faza I [Sl. 1B (b)] i II [Sl. 1B (d)]. Među 114 bolesnika koji su obrađeni, srednji IHC rezultat u tumorskim tkivima bilo 139,8 ± 62,8, što je značajno veća od one (36.7 ± 40.4) na odgovarajući susjedni sluznice (n = 87) ( P pregled < 0.001 , Wilcoxonovim-rank test). Nadalje, u paru usporedbu imunoreaktivnost za GLO1 (n = 87) otkrila je da su IHC rezultate od kancerogenih tkiva su bili viši od onih u nontumorous kolegama u 77 (88,5%) bolesnika, jednako u tri bolesnika (3,4%), a manji u sedam bolesnika (8,0%). pregled

GLO1 izraz i kliničke korelacije

GLO1 izraz u tumorskom tkivu nije bio značajno povezan s dobi, mjestu tumora ili histološka tipa (tablice 1 i 2). Viša razina GLO1 su evidentno u T3 /T4 skupinama gdje serozne površine želučanu stijenku je provalila od raka, u usporedbi s onom u T1 /T2 skupina u kojoj nema invazija bila je očita ( P
= 0,015 za QRT - PCR i P = 0,001 pregled za IHC, Slika 2A, Tablice 1 i 2)., Ekspresija GLO1 značajno je povećana, s metastazama u limfne čvorove ( P pregled = 0,001 za QRT-PCR i P izvoznici < 0.001 za IHC;. Slika 2B; Tablice 1 i 2) , Viši izraz je evidentno u bolesnika s limfnom invaziji ( P pregled = 0,001 i P pregled = 0,016 za QRT-PCR i IHC respektivno; tablicama 1 i 2) i perineuralnu invaziji ( P pregled = 0,024 za QRT-PCR, tablica 2). Povećana ekspresija GLO1 nije bila povezana s vaskularnom invazijom ili udaljenih metastaza, uključujući peritonejsku sijanje ili metastaze jetre, u oba QRT-PCR i IHC eksperimenata. Izražavanje GLO1 bila je značajno viša u bolesnika s naprednijim patološkim fazama (III /IV) od raka želuca, u usporedbi s onima u ranijim fazama patoloških (I /II) ( P pregled = 0,001 i P izvoznici < 0.001 za QRT-PCR i IHC,) (Slika 2C;. Tablice 1 i 2) pregled

Survival rezultati pregled

srednje trajanje praćenja vremena za. 52 preživjelih je 70,4 mjeseci (raspon 28-119 mjeseci). Četiri bolesnika umrla od postoperativnih komplikacija i šest drugih uzroka. Pedeset i dva bolesnika umrlo zbog želučanog raka progresije. Ukupna kumulativna stopa preživljavanja od pet godina od 114 bolesnika bila je 49,3%, nakon gastrektomije. Da bi se odredio utjecaj GLO1 izrazom na ishod preživljavanja, pacijent je bio podijeljen u dvije skupine, viših i nižih izrazima, prema vrijednosti kritična koji bi pokazali značajnu razliku (log rank P izvoznici < 0,05) stope preživljavanja između 2 skupine. Medijan (= 140), gornji kvartil (= 180 ili 75 ^{percentil), a donji kvartil (= 90 ili 25 percentil) od IHC rezultate našeg bolesnika u početku su bili testirani kako bi se utvrdilo gušeći vrijednosti. Među njima, samo donji kvartil mogao pokazati značajnu razliku u ishodu preživljavanja. Sl. 2D prikazuje kumulativne krivulje preživljavanja pacijenata u nižim i višim izrazom GLO1 skupine, podijeljene prema kritična IHC rezultatom 90. 5 godina stopa preživljavanja od niže GLO1 izraz skupina bila je značajno veća od viših ekspresije skupine ( 69,6% vs 43,3%; log rank P pregled = 0,0373) u IHC eksperimenata. Jednosmjerna analiza objavljeni niz značajnih prognostičkih čimbenika, uključujući i status limfnih čvorova metastaza, udaljenim metastazama, peritonejsku sijanje, vaskularne invazije, limfna invazija, dubini invazije, patološko fazi, metastaze jetre i perineuralnu invazije, osim GLO1 izraz. Ostali značajni parametri su histološki tip, veličinu tumora, a bruto tip (Tablica 1). Nadalje, u multivarijatne analize, nezavisni prognostički čimbenici koji utječu na preživljavanje pacijenata uključene limfnih čvorova metastaze (relativni rizik = 5,954, 95% CI = 1,183 do 29,977, P pregled = 0,031) i udaljene metastaze (relativni rizik = 2,464, 95% CI = 1,030-5,896, p pregled = 0,043). pregled}

Prekomjerna ekspresija GLO1 u SC-M1 povećava proliferaciju stanica, migraciju i invaziju aktivnosti. pregled

Da odrediti učinke ekspresijom GLO1 pregled u SC-M1 stanica, proliferacije stanica, migraciji i invaziji aktivnosti su ispitani. Nakon dva tjedna transfekcije, osnovana je stabilna ekspresija GLO1 proteina. Slika 3A pokazuje 2,36 puta i 2,29 puta veći izraz GLO1, respektivno. proliferacija stanica određena je brojanjem stanica i označeni kao fold kontrole za do pet dana. GLO1 pregled -overexpressing stanica značajno izložene ( P izvoznici < 0,01) više stope proliferacije (1.86- ili 2,06 puta) od onih transfecirane kontrolnim vektorom na 5 dana (slika 3B).. Štoviše, GLO1 pregled -overexpressing stanice prikazane su značajno ( P izvoznici < 0,01) više stope migracije (5.53- ili 4,57 puta) i invazivne sposobnosti (3.7- ili 3,47-struki), nego njihova kontrola kolege (Sl. 3C i D). Slike gustoće stanica su prikazani za dvije kontrole i dva pre-ekspresija stanične linije (lijeva ploča na Sl. 3C i D). Pregled

Down ekspresija GLO1 u TSGH ili AGS stanica smanjuje migraciju stanica i invaziju aktivnosti

Naši rezultati potvrđuju visoku ekspresiju GLO1 u uznapredovalim rakom želuca, u odnosu na noncancerous želučane sluznice. Kako bi se utvrdilo je li ekspresija GLO1 je povezana s invazivnošću želučanih staničnim linijama raka, učinci GLO1 omotača pomoću kratke ukosnica (sh) RNA plazmidi na invaziju tumorskih stanica aktivnosti TSGH ili AGS stanice su određeni. ShRNA ekspresijski vektori koji kodiraju antisense GLO1 sekvence su transfektirani u TSGH i AGS staničnim linijama koje eksprimiraju visoke razine endogenog GLO1. GLO1 izražavanje bilo značajno potisnuti u TSGH-KG1, -KG2 (0.32- i 0,14 puta) i AGS-KS1, -KS2 (0.26- i 0,21 puta) sublini, odnosno, u usporedbi s onim u stanicama zaraženim s kontrolnim vektorima ( C1, C2,, slike 4A i B). KG1 i KG2 GLO1-iscrpljena stanice značajno izložena ( P pregled < 0,05) smanjenje brzine putovanja (0.16- ili 0.044 puta, respektivno) i invazija sposobnosti (0.43- ili 0.29-struki) nego kontrolnim vektorom -transfected stanice (Sl. 4C i D). Slični rezultati dobiveni su s AGS-KS stanica (KS1 i KS2) (Sl. 4e i F). Naši rezultati upućuju na to da kolektivno GLO1 pozitivno regulira migraciju i invaziju sposobnosti želučanih stanica raka. Pregled

Down-izražavanja rezultata GLO1 u smanjenom ekspresijom gena koji sudjeluju u metastaza povezane putevima pregled

Da bi se utvrdilo je li GLO1 proteina utječe na gene metastaza povezanih, usporedili smo genoma širom izraz KG2 i C1. Nekoliko gena regulira prema gore (≥1.5 puta) u C1, u odnosu na KG2, odabrano je. MetaCore ™ analiza [28] pokazala je da su top-rangirani molekularni putevi promijenjeni u kg klonovi su adhesion_cytokines i adhezijskih putevi. Proteine, kao što su [matrične metaloproteinaze (MMP), CXCL8 i CXCL1] su uključeni u ovim putevima podregulirani nakon GLO1 utišavanja. Među puteve citokinom povezani, visoka ekspresija VEGF, CXCL8, CKSCR2 i CXCL1 povezani s metastaze raka i progresiju [8], [29]. Prije toga, Daniel J. et al.
[30] izvijestili da prekomjerna ekspresija GLO1 može poboljšati strome stanice-derivirani faktor-1 (SDF-1), CXCR4 i ekspresiju VEGF u hipoksičnom endotelnih prekurzorskih stanica kulture u visokoj glukoze. Zbog toga smo također analizirali ekspresiju VEGF u kg stabilne linije. Pregled

Nadalje potvrdio je izraz uzoraka proteina u VEGF ili puteva citokina povezanih putem Western blot analize. Razine ciljnih gena, uključujući CXCL1, CXCL8, CKSCR2 i VEGF, značajno su inhibirane u TSGH kg stabilne stanične linije (KG1 i KG2), u usporedbi s vektorskim transfektirane kontrole (Sl. 5a). Nadalje, razina NF-kB i HIF1-a, poznatih transkripcijskih faktora pro-angiogenih faktora rasta (kao što CXCL8, CXCL1 i VEGF) [31], smanjene su u jezgrama TSGH kg stabilne stanične linije u usporedbi s kontrolnim stanicama (Sl. 5A). MMP2 i MMP9, ključni enzimi za razgradnjom kolagena tipa IV, se vjeruje da igraju ključnu ulogu u tumorskoj invaziji i metastazama [32]. Značajno je, osiromašeni GLO1 dovelo do označenog suzbijanje MMP2 i MMP9 djelatnosti (Sl. 5B). Naši podaci pokazuju da GLO1 regulira aktivaciju metastaza povezanih s signalnim putovima u želučanom stanica raka. Na temelju tih nalaza, predlažemo da GLO1 posreduje želučane migraciju stanica raka i invaziju barem djelomično posredovana aktivacijom CXCL1, CXCL8 i VEGF. Pregled

IHC pokazuje koekspresiji GLO1 s CXCL1 i CKSCR2 proteina i njegova prevelika izraz u želučanim kancerogenih tkiva pregled

Ranije studije su izvijestili da je interakcija citokina receptora i VEGF signalne puteve povezane s malignosti značajke u rak želuca, [8], [33]. Prije toga, naša grupa je pokazala značajnu povezanost CKSCR2 i CXCL1 prekomjerna ekspresija (n = 116) u želučanom progresiju raka [8]. Dosljedno, u IHC analize, pozitivan Nađena je korelacija isključivo između ocjenama od GLO1 i CXCL1 ili CKSCR2 u tkivu raka (Spearmanov koeficijent korelacije = 0,238 i 0,293; P pregled = 0,013 i P
= 0.003, respektivno). Nadalje, imunološko uzastopnih sekcija pokazala značajan izraz GLO1, CXCL1 i CKSCR2 proteina u epitelnim stanicama tumora [Sl. 5C (b), (d) i (f)], za razliku bez ili s malom ekspresije u tkivima netumorskih [Sl. 5C (a), (c) i (e)]. Pregled

Rasprava pregled

Kao što je drugi najčešći uzrok raka povezanih smrti, rak želuca ostaje izazovna bolest. Podaci iz ove studije su pokazali da uzlazni GLO1 u želučanim tkivima raka značajno je povezana s progresijom tumora i uznapredovalim fazama bolesti. Skladan, pacijenti s nižom razinom GLO1 imala bolju prognozu bolesti. Štoviše, QRT-PCR i IHC pokusi objavljeni korelaciju povećanom ekspresijom GLO1 s lokalnim progresije tumora i limfnih čvorova invazije. Zapaženo je da je značajno smanjenje u metastazi i invazije sposobnosti GLO1 deficijentnih stanica, popratno sa smanjenim razinama nekoliko metastaza povezana čimbenika, uključujući VEGF, CXCL1, CXCL8, MMP i CKSCR2. U IHC studiji, pozitivna značajna korelacija između GLO1 i CXCL1 izraz uzoraka zabilježeno je u reseciranih uzoraka karcinoma želuca. Osim toga, povišeni GLO1 uz prateću CXCL1 povećanom ekspresijom u bolesnika s karcinomom želuca su značajno korelira s preživljavanjem. Naši rezultati pružaju izravnu dokaze o umiješanosti GLO1 u želučanom progresije raka i moći kroz izmjene njegovih nizvodno migraciju i invaziju puteva. Pregled

Visoka izraz GLO1 je povezan s nekoliko vrsta raka [16], [17] , Nedavna istraživanja pokazuju bitnu ulogu GLO1 u nekoliko vrsta raka u uklanjanju metilglioksalom (MG), što se smatra karcinostatskim, što je rezultiralo razvojem inhibitora GLO1 kao sredstva protiv tumora [34], [35]. Prema tome, visoka ekspresija GLO1 je uključen u otpornosti stanica raka na apoptozu koja je izazvana sredstva protiv tumora [36]. Sakamoto i sur.
[36] je predložio da GLO1 nije samo tumor, ali i markera otpornosti na lijek. Dosljedno su GLO1 obaranje-klonovi su bili osjetljivi na više kemoterapijskih sredstava, kao što je kamptotecin, etopozid (podaci nisu prikazani). Klinički, naši rezultati pokazuju da GLO1 vrlo izražena kod raka želuca i značajno povezana s progresijom tumora i naprednim stadijima bolesti. Pregled

glikolize promjene u stanicama raka predstavlja metaboličku prilagodbu hipoksije tumora putem djelovanja hypoxia- induciran faktor transkripcije (HIF-1) [37], [38]. Osim toga, transkripcijski faktori, HIF1-a i NF-kB, igraju ključnu ulogu u različitim procesima, kao što su upale, mikroba ubijanja i raka progresije [39]. Tumor hipoksiju se čini da je snažno povezana s razmnožavanja tumora, malignog napredovanja, i otpornost na terapije. HIF-1α put jasno je uključen u karcinogeneze želučanog raka [39]. Osim toga, imunohistokemijski ekspresija HIF-1α ciljanih gena (Glut1, VEGF, CA9, iNOS) je povezana sa želučanom napredovanja tumora [40]. Među onkogena puteva, signalizaciju NF-kB je povišen u značajnom udjelu želučanog karcinoma [9]. Štoviše, nekoliko dokazi podupiru preslušavanja između NF-kB i HIF-1 a signalnih putova [41]. U našim eksperimentima, razine oba HIF-1 a i NF-kB smanjeni su u jezgri nakon GLO1 ušutkavanja u želučanim staničnim linijama karcinoma, zajedno s daljnjim ciljnih gena (VEGF, CXCL1, CXCL8, MMP). Pregled

U našem studija, abnormalno povišene GLO1 izraz bio je povezan s progresivnim fenotipova, kao što su želučane stijenke invazije, limfnih čvorova metastaza, patološkog fazi i limfna invazije. Ranije smo izvijestili da je povišeni CXCL1 i CKSCR2 u karcinomu želuca je povezana s progresijom tumora, te da je razina u plazmi CXCL1 može biti korisna cirkulirajućeg biomarkera za dijagnozu raka želuca [8]. Evo, mi smo dobili izravan klinički dokaz jake korelacije između ekspresije obrascima GLO1 i CXCL1 ili CKSCR2. GLO1 ekspresija može biti povezana s aktivacijom receptora citokina povezanih i VEGF signalizaciju putova, predstavlja potencijalnu mehanizam za poboljšanu motiliteta i invazivnog sposobnosti. Naši rezultati potvrđuju prekomjerna ekspresija GLO1 u želučanom karcinomu i svoje jake povezanosti s uznapredovalom stadiju i lošu prognozu. Ranije studije našoj skupini su pokazali da SPARC [18], CLIC1 [42], SLPI [43], CXCL1, CXCL8 i CKSCR2 su vrlo izražen i povezana s uznapredovalim fazama i loše prognoze karcinoma želuca [8]. Ovi novi potencijalni biomarkeri mogu se stoga primijeniti za poboljšanje specifičnost i osjetljivost dijagnoze raka želuca. Daljnji razvoj i potvrda o korisnosti tih biljega u većim skupina pacijenata potencijalno dovodi do kliničke primjene.

popratne podatke Slika S1.
specifičnost in-house GLO1 je potvrđen Western blot analizom. Korištene su zečji poliklonski anti-GLO1 antitijela (desna slika) i negativna kontrola pred-imuni serum (lijeva slika). Razina GLO1 proteina određena je u TSGH-C1 i -KG2 želučanih staničnim linijama s GLO1 antitijela u kući. β-aktin je korištena kao interna kontrola za ukupnih staničnih lizata pregled doi:. 10,1371 /journal.pone.0034352.s001 pregled (TIF) pregled

• PLoS ONE: Prostorni raspored LGR5 + stanica u korelaciji s rakom želuca Progression
• PLoS ONE: Stathmin1 Igranja onkogenih Uloga i meta mikrornk-223 u želučanom Cancer