Sažetak pregled
RABEX-5, faktor razmjena gvanin-nukleotida (GEF) za RAB-5 , je implicirano u tumorogenezi i razvoja određenih karcinoma u ljudi. Ovdje smo izvješće da RABEX-5 potiče rast tumora i metastaza mogućnost želučanih stanica raka i In vitro pregled i in vivo pregled. Ekspresija RABEX-5 značajno je viša u želučanom tkivu raka i povezana je s veličinom tumora i metastaza limfnog čvora. Osim toga, ciljano odsutnost RABEX-5 redukcijom proliferacije želuca stanica raka i formiranja kolonija in vitro Izvor. Wang S, Lu A, Chen X, Wei L Ding J (2014) RABEX-5 je reguliran i igra onkogenih ulogu u rak želuca razvoj aktiviranjem VEGF signalnog puta. PLoS ONE 9 (11): e113891. doi: 10,1371 /journal.pone.0113891 pregled Urednik: Xin-yuan Guan, Sveučilište u Hong Kongu, Kina pregled Primljeno: 3. rujna 2014; Prihvaćeno: 31. listopada 2014; Objavljeno: 26 studeni 2014 pregled Copyright: © 2014 Wang et al. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled Data Dostupnost:. The autori potvrđuju da su svi podaci na kojima se temelji nalaze u potpunosti na raspolaganju bez ograničenja. Svi relevantni podaci u radu i njegove popratne podatke datoteka pregled Financiranje:. Ovi autori nemaju podršku ili sredstva za prijaviti pregled suprotstavljenih interesa. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi. pregled Uvod pregled Unatoč padu globalnog učestalost u pojedinim regijama svijeta, rak želuca i dalje četvrta najveća u učestalosti i drugi smrtnosti među svim karcinomima u svijetu [1]. Studije pokazuju da okolišni čimbenici, kao što su Helicobacter pylori pregled, infekcija, pušenja cigareta i prehrane, može igrati važnu ulogu u razvoju [2] želučanog karcinoma. Rani stadij raka želuca je obično asimptomatski ili povezane s nespecifičnim simptomima, kao što su dispepsija, a kad se simptomi pojavljuju, često je dosegla naprednu fazu. Unatoč opće uporabe multimodalnog liječenja (kemoterapija, zračenje i kirurgiju), 5-godišnje preživljavanje pacijenata i dalje je niska, na 20-40% [3]. Iako istraživanja kod raka želuca je napravio veliki napredak, molekularni mehanizmi na kojima se temelji razvoj karcinoma želuca nepotpuno ostaju razumio. Pregled eksocitozu i endocitoza su ključni procesi koji se koriste stanice za održavanje normalne fiziološke funkcije i transporta vezikula je jezgra dio ovog procesa. Malih GTP igraju ulogu prekidača za intracelularne molekule i vrlo važnu ulogu u endocitoze i transporta vezikula, uključujući regulaciju staničnog rasta, prijenos signala, diferencijacija i aktina stanični skelet zgrade i mnogim aspektima druge stanične procese [4]. U Ras superobitelji, postoji više od 50 vrsta GTP, uključujući Raba, koja spada u najveće potfamilija [5]. Istraživanja su pokazala da većina Rab proteina Reguliranje prometa, fagocitoze i kesice pristajanje na određene membrana ciljanje, dok je mali broj Rab proteina regulirati kesicu pupi [6], [7]. Mala GTP-aze RAB-5, koji se distribuira u staničnom membranom i rani endosomi, je majstor regulator početkom endocytic trgovine [8]. Poput drugih malih GTP, RAB-5 se aktivira razmjenu vezanog BDP-a s GTP, koju katalizira obitelji razmjene gvanin-nukleotida faktora [9]. RABEX-5 je identificiran kao interaktora od Rabaptin-5 i ima djelovanje GEF prema RAB-5 i srodnih GTP. Isto tako, i RABEX-5 i Rabaptin-5 su potrebne za RAB-5-driven endozomu fuzije In vitro pregled [10]. Pregled Nedavna istraživanja su pokazala da RABEX-5 Izraz je znatno veća u nekoliko vrsta raka, uključujući rak dojke [11], rak prostate [12] i raka debelog crijeva [13]. Nenormalan RABEX-5 ekspresije u tumorima sugerira da RABEX-5 je značajna u raka patogenezi i progresiji, te može utjecati tumora biološko ponašanje. Međutim, uloga i mehanizam djelovanja RABEX-5 u želučanom karcinogeneze i progresiju raka još nije određen. U ovom istraživanju, prvo analizirani ekspresiju RABEX-5 u želučanom tkivu raka kvantitativno reverzne transkripcije-lančanu reakciju polimerazom (PCR) QRT-i imunohistokemije. Nakon toga, ispitali smo učinke RABEX-5 na tumorske biološke funkcije in vitro pregled i in vivo pregled. Naši rezultati pokazuju da RABEX-5 ekspresija mu je povećana i igra onkogeni ulogu u raka želuca. Pregled materijali i postupci Etika Izjava pregled Svi su pokusi na životinjama koji su opisani u ovoj studiji su odobrena od njega i uporaba odbora Institucionalna životinja (IACUC) na Taishan medicinskog sveučilišta i svih životinja koje su održavane u skladu sa smjernicama IACUC. Prikupljanje i korištenje ljudskih uzoraka odobren od strane Institutional Review Board of Taishan Medicinskog Sveučilišta i povezanih Taian Central Hospital Medical Center, nakon informiranog pisanog odobrenja od svih pacijenata. Pregled pacijenata i tkiva primjerci pregled ukupno 110 kompleta želučanih tumora i susjedstvu, non-tumorskim tkivima (najmanje 5 cm od ruba tumora) dobiveni su od pacijenata koji su se podvrgnuli ljekovito operaciju Taian središnje bolnice u razdoblju od siječnja 2010. do prosinca 2013. među njima 27 žena i 83 ljudi, s prosječnom dobi od 59,3 godina (raspon: 32-80 godina). Nema pacijenta su dobila radioterapiju ili kemoterapiju prije operacijskog zahvata. Kliničkopatološkim Podaci su prikupljeni i patološko stupnjevanje tumora određena je prema Zajedničkom odboru američkog protiv raka (AJCC) želučanog karcinoma TNM sustav. Histološka tipizacija je izvedena najmanje dva stručna patologa, samostalno raditi u modi dvostruko oslijepio. Studija je odobren od strane Institutional Review odbora Taishan medicinskog sveučilišta i povezanih Taian Central Hospital Medical Center. Pismeni informirani pristanak dobiven je od svakog pacijenta prije upisa u istraživanju. Pregled Stanične linije i uvjeti uzgoja Ljudska stanične linije raka želudca i besmrtne želudac, za sluznicu epitelnih stanica linije, GES-1 , nabavljene su od Šangaj instituta za biološke znanosti, kineske akademije znanosti. Stanične linije su rutinski održavaju u RPMI-1640 medija koji sadrži 10% telećeg seruma, penicilin (100 IU /ml) i streptomicin (100 IU /ml) u CO s 5% 2 atmosferi na 37 ° C. Pregled izdvajanja ukupne RNA, a QRT-PCR pregled Ukupna RNA ekstrahirana je iz uzoraka tkiva ili staničnih linija je pomoću Trizol reagensa (Invitrogen, USA), u skladu s uputama proizvođača. Reverzna transkripcija provedena je pomoću 1 ug ukupne RNA u skladu s uputama proizvođača (Promega, Madison, WI, USA). PCR je izvedena pomoću SYBR Green reagensa (Applied Biosystems, CA, USA), a sljedeće PCR primera; RABEX-5 pregled (naprijed) 5'-TTGGACAGATGGAATTGCAA-3 'i (natrag) 5'-GTTGCAGTGGTGGAGGAAGT-3'; VEGF pregled (naprijed) 5'-CTGTACCTCCACCATGCCAAGT-3 'i (natrag) 5'-CTTCGCTGGTAGACATCCATGA-3' i GAPDH pregled (naprijed) 5'-GGACCTGACCTGCCGTCTAG-3 'i (natrag) 5'-GTAGCCCAGGATGCCCTTGA-3 '. PCR reakcije provedene su s početnim denaturacije na 95 ° C 2 min, zatim 30 ciklusa od 94 ° C za 30 s, 55 ° C za 30 s i 72 ° C za 30 s, a konačno proširenje pri 72 ° C 10 min. GAPDH pregled korištena je kao interna kontrola i sve reakcije su provedene u triplikatu. Relativna izraženost omjeri RABEX-5 pregled u svaki upareni tumor na uzorku ne-tumorsko tkivo izračunate su pomoću 2 -ΔΔCt metoda. parafin sekcije -embedded tkiva iz pacijenata ili golih miševa su tretirane grijanjem na 60 ° C tijekom 1 sata, odvoštiti u ksilolu, ponovno hidrirana u etanol serije (100-50%) i pomiješa se u 0,01 mol /L citratnom puferu (pH 6,0 ) za dohvat antigena. Aktivnost endogene peroksidaze bila je inhibirana nakon inkubacije s metanolom koji je sadržavao 0.3% H 2O 2 30 min. Uzorci su potom inkubirani s antitijelima otkrivanje RABEX 5 (1:50, Santa Cruz Biotechnology, USA) ili VEGF (1:150, Ab46154, Abcam, USA) na 4 ° C preko noći. Slijedeći eksperimentalni postupak je inkubirana sa sekundarnim antitijelom. Uzorci tkiva su obojena Mayerovim hematoksilinom. Ploče su samostalno ocjenjuju dva patologa, zaslijepljeni na bilo podataka o pacijentima. Intenzitet bojenja za RABEX-5 ocijenjena je kao 0 (nema bojanje), 1 (blaga bojenje), 2 (umjereno bojenje) ili 3 (intenzivno bojanje). Bojenje površina je ocijenjen kao 0 (0%), 1 (1-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) i 4 (76-100%), na osnovi postotka pozitivno obojene stanice. Konačni bojenje rezultat, izračunava se kao zbroj bodova intenzitet i proširenje, je bila podijeljena u tri skupine: 0-2, negativni izraz; 3-4, slaba izraz; i 5-6, jak izraz. pregled Ciljano utišavanje od RABEX-5 pregled RABEX-5 lentivirusni smetnje vektor je kupljen iz Šangaja GenePharma Co., Ltd. slijed RABEX-5 smetnje oligo ciljanje bio je 5'-GGATGCAAACTCGTGGGAA-3 ', dok je nehomolognu kontrolna sekvenca 5'-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3'. SGC 7901 i NCI-N87 stanice su smještene na ploče sa 6 jažica (5 × 10 4 stanica /jažici) uzgajaju do 40% konfluencije, a liječeni titrirani virusnog supernatanta pri multiplicitetu infekcije (MOI) od 10. pregled Western blot analiza pregled cijelih stanica proteini su ekstrahirani iz stanica korištenjem RIPA puferu koji sadrži inhibitor proteaze koktel (Pierce, Rockford, IL, USA). Protein je kvantificiran pomoću BCA proteinski test kit (Pierce). Stanični ekstrakti (100 u.g) je odvojen od 10% natrij dodecil sulfata poliakrilamid gel elektroforezom, i transferirana na membrane poliviniliden fluorida. Membrane su blokirane u 5% bezmasnim mlijekom u Tris-puferiranoj slanoj otopini (TBS) i inkubirani s primarnim antitijelima na 4 ° C preko noći. Primarni protutijela su zečji anti-RABEX 5 (1:200, Santa Cruz Biotechnology), zec anti-GAPDH (1:5000; Ab9485, Abcam) i miš anti-VEGF (1:300, Ab46154, Abcam). Membrane su zatim isprane tri puta u TBS-Tween otopinu tijekom 15 minuta, te se inkubira sa sekundarnim antitijelima. Signali su detektirani pomoću unaprijeđen sustav detekcije chemiluminescence (Amersham bioznanosti, Piscataway, New Jersey, USA), u skladu s uputama proizvođača. Pregled Razmnožavanje stanica Test pregled Razmnožavanje stanica je izmjerena pomoću brojanja Kit -8 (CCK-8, Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japan). SGC 7901 ili NCI-N87 stanice su posađene u pločice s 96 jamica (1,5 × 10 3 stanica /jažici) i inkubira različitim vremenski točkama (24, 48, 72, 96 i 120 h). Medij za rast se tada uklonjen i zamijenjen s 200 ul RPMI-1640 medija koji je sadržavao 10% FBS-a i 20 ul CCK-8 i ploče se inkubiraju na 37 ° C tijekom 3 sata. Apsorbancija je mjerena pri 450 nm pomoću Safire2 čitač za mikropločice. Mediju RPMI-1640 koji sadrži 10% FBS i CCK-8 je korišten kao kontrola. Pregled Colony Test formiranje pregled Stanice su nasađene u 6 jamica (1 × 10 3 stanice /jažici) i medij za kulturu je zamijenjen svaka 3-4 dana. Nakon 14 dana kulture stanica kolonije su fiksirane s 4% paraformaldehidom tijekom 10 minuta, obojene s 0.1% kristalno ljubičastog 20 minuta, te fotografirani. Kolonije s više od 50 stanica se broji u svakoj ploči. Pregled Analiza staničnog ciklusa i apoptoze pregled SGC-7901 /KD, NCI-N87 /KD stanice i kontrolnih stanica su sakupljene i stanični ciklus i apoptoza je određena protočnom citometrijom. Za analizu staničnog ciklusa, stanice su fiksirane sa 75% etanol i pohrani na 4 ° C preko noći. Sljedećeg dana, Fiksirane stanice oprane s PBS, pomiješa se s RNA-ze A (50 ug /ml) i bojaju s propidij jodida (PI) (50 ug /ml) tijekom 30 min u mraku. Obojene stanice su analizirane pomoću protočne citometrije (FACSCalibur, Becton-Dickinson). Pregled apoptoze analizu, Annexin V-APC Apoptoza Detection Kit I (BD Pharmingen, USA) je korišten u skladu s uputama proizvođača. PI i Annexin V-APC dvostruko bojenje je provedena i stanice su analizirane pomoću protočne citometrije (FACSCalibur, Becton-Dickinson), korištenjem Cell Quest softver (Becton-Dickinson). Aneksin V-APC-pozitivne i PI-negativnih stanica definirana kao prođu apoptozu. Svi pokusi su provedeni u tri primjerka i izračunate su prosječne vrijednosti tih skupina. Pregled Transwell® migraciju i invaziju Test pregled Za migracija testovima, 1 × 10 5 stanice su suspendirane u bez seruma free RPMI-1640 medijem i nasađene na komore koje nisu prevučene s Matrigel (Corning Costar, NY, USA). Za ispitivanje invazije, gornja komora je prethodno obložene sa Matrigel (BD Bioscience, CA, USA) prema protokolu proizvođača, te 1 × 10 5 stanica u RPMI-1640 mediju bez seruma dodano je u komoru. Za oba ispitivanja, medij koji sadrži 10% FBS je dodano u donjoj komori, kao kemoatraktant. Nakon 24 h kulture komore su označene s 0,5% -tnom otopinom kristalno ljubičastog kroz 15 min, i uroni se u fiziološkoj otopini puferiranoj fosfatom (PBS) tijekom 10 minuta. Stanice iz donje komore su zatim izbrojene pod invertiranog mikroskopa. Vrijednosti su izražene kao brojke stanica u pet slučajnih polja prikazu (200 ×). Pregled zacjeljivanja rana Test pregled Stanice su stavljene u 6 jažica i uzgajane sve dok nisu stigli ušće. Rane su izgreben na sloja stanica, pomoću 20-lL pipeta s savjete. Ploče su bile jedanput isprane sa svježim medijem za uklanjanje nezaljepljene stanice nakon kulturi stanica za 0 ili 48 sata (medij bez goveđeg seruma) i fotografirani. Pregled modelu ksenografta pregled četiri kratka afera stari muški BALB /c nudo miševa nabavljeni su iz Instituta za zoologiju, kineske akademije znanosti Šangaju. Životinje su držane u kavezima s drvnu sječku posteljina u sobi sa kontroliranom temperaturom (68-72 ° F) s 12-satnom ciklusu svjetlost-tama je i 45-55% relativne vlage, a bilo je dozvoljeno slobodan pristup prehrani i pitke vode. Ukratko, SGC-7901 /KD ili SGC-7901 /NC stanice su tripsinizirane i resuspendirane u PBS (pH 7.4) kroz injekciju u mišu, u ukupnom volumenu od 100 ul. Suspenzije stanica (1 x 10 6 stanice) se injicira u desni bok miša. Veličina tumora je mjerena izvana svaka 3 dana koristeći šestar, a volumen tumora procijenjena je pomoću jednadžbe: Dužina (mm) x širina 2 (mm) x 0,52. Za ublažavanje bilo koje pate od miševa promatrane tijekom ovih eksperimentalnim studijama, miševi su eutanazirani sa CO 2 udisanja na 28. dan nakon intraperitonealne injekcije, a tumori su izvagani nakon seciranje. Uzorci su pohranjeni u tekućem dušiku za QRT-PCR ili fiksirani u 4% formalinu za dobivanje dijelova parafin uklopljenih. Svi postupci provedeni su u skladu s njega i uporaba smjernicama životinja odobren od strane Njega životinja odbora Taishan Medical University. Pregled Statistička analiza pregled Podaci su prikazani kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). Statističke razlike između dviju skupina su pregledane Studentov t pregled -test. Korelacija između RABEX-5 ekspresije u želučanog tkiva raka i kliničkopatološkim parametara analizirani su hi-kvadrat i Fisherov egzaktni test. P izvoznici < 0,05 smatra važnom, i P izvoznici < 0,01 smatrana vrlo značajne pregled Rezultati RABEX-5 izraz je reguliran u. želučani tkiva raka pregled izraz RABEX-5 pregled je ispitana u rak želuca i susjednih ne-tumorskih tkiva QRT-PCR. Uočili smo značajno višu ekspresiju RABEX-5 podreguliranje RABEX-5 inhibira proliferacija raka želuca stanica i koloniziranje pregled sljedeći istraživali ekspresiju RABEX-5 u staničnim linijama želučanih i stanične linije bez raka , GES-1 Western blot analizom. RABEX-5 je izražen u svim ispitanim staničnim linijama, te je osobito visoka u sGC 7901 i NCI-N87 stanicama (Sl. 2). Istražiti funkcija RABEX-5 u želučanim staničnim linijama raka, izvodi se ciljano obaranje RABEX-5 u staničnim linijama koje eksprimiraju visoke, SGC-7901 i NCI-N87. RABEX-5 ekspresije značajno smanjena u sGC 7901 /KD i NCI-N87 /KD stanica u usporedbi s kontrolnim stanicama (Sl. 2B). Prvo, ispitan je učinak gubitka RABEX-5 na rast želučanih stanica raka. Nakon 5 dana kulture, stopa rasta SGC-7901 /KD i NCI-N87 /KD stanica bio je znatno sporiji od kontrolne skupine (Sl. 2c). Također, potvrdio je ova opažanja formiranja kolonija testovima. Colony brojevi su značajno smanjeni u SGC-7901 /KD stanica i NCI-N87 /KD stanica u usporedbi s kontrolnim stanicama (Sl. 2d), a mi smo primijetili da veličina kolonije bio je manji u pokusnim skupinama u usporedbi s kontrolnom skupinom. Ovi podaci ukazuju na to da podreguliranje RABEX-5 potiskuje želučane proliferaciju stanica raka. Pregled silazni RABEX-5 potiče apoptozu želučanih stanica raka i potiče G0 /G1 staničnog ciklusa pregled opaženih učinaka RABEX-5 obaranje na stanični rast može biti zbog promjene u progresiju staničnog ciklusa i apoptozu. Stoga smo ispitali učinke RABEX-5 utišavanje na stanični ciklus i apoptozu In vitro pregled, protočnom citometrijom. Analiza protočnom citometrijom pokazala je da je udio stanica u G0 /G1 fazi u SGC-7901 /KD ili NCI-N87 /KD stanica bila je veća nego u SGC-7901 /NC ili NCI-N87 /NC kontrolne skupine, dok je postotak stanice u G2 /M fazi značajno smanjen u odnosu na kontrole (Sl. 3A, B). Također smo uočili značajan učinak na apoptozu u različito tretiranih skupina (Sl. 3C, D), s silazni RABEX-5 ekspresije dovodi do povećanja u želučanom stanica karcinoma apoptoze. Pregled podreguliranje RABEX-5 inhibira migraciju , invazija i za liječenje rana sposobnost želučanih stanica raka Kako istražiti utjecaj RABEX-5 na migracije i invazije, što sljedeći put izvedena transjažičnih migraciju i invaziju testovima. Silazni RABEX-5 potisnute stanične migracije (SGC-7901 /KD grupe, 121,3 ± 6,1 stanica /polje, SGC-7901 /NC grupa, 261.0 ± 10,5 stanica /polje; NCI-N87 /KD grupa, 108,7 ± 6,1 stanica /polje NCI-N87 /NC skupina, 241.7 ± 10.6 stanica /polja; P pregled. < 0,05) (Slika 4A, C). Slični rezultati su opaženi u transjažična pokusima invazije (SGC-7901 /KD grupe, 76,3 ± 6,1 stanica /polje, SGC-7901 /NC skupinu, 108,7 ± 6,0 stanica /polja; NCI-N87 /KD Group, 60,7 ± 6,0 stanica /terenski NCI-N87 /NC grupa, 119.0 ± 8.5 stanica /terenu; p izvoznici < 0,05) (Slika 4B, D) pregled Kako bi istražili učinak RABEX-5 na motilitet.. i zacjeljivanje rana, također izvodi testove za liječenje rana. Ustanovljeno je da se razmak između rubova rana sGC 7901 /KD i NCI-N87 /KD stanica je bila značajno duži nego sGC 7901 /NC ili NCI-N87 /NC stanica (sl. 4E). U skladu s tim opažanjima, razine VEGF su regulirani na obje razine mRNA i proteina u SGC-7901 /KD stanica (Sl. 4f, G). Pregled odsutnost RABEX-5 inhibira rast raka želuca in vivo na temelju In vitro Rasprava pregled Iako su prethodna istraživanja pokazala da RABEX-5 ima ulogu u nastanku tumora u nekoliko vrsta raka [11]. - [14], njegova uloga kod raka želuca nije istražen. U ovom istraživanju, otkrili smo da RABEX-5 ekspresije značajno povećana u želučanom tkivu karcinoma u usporedbi sa susjednim normalnog tkiva, što znači da RABEX-5 može pridonijeti nastanku tumora želuca raka. Osim toga, ekspresija RABEX-5 značajno povezan s veličinom tumora i metastaza limfnog čvora. Nasuprot tome, nije bilo značajne korelacije između abnormalnog RABEX-5 izražavanja i spolu, dobi ili mjesto tumora. Ovo je prva studija koja se razjasnila kliničkopatološkim značaj RABEX-5 ekspresije u bolesnika s karcinomom želuca. Pregled Kako bi istražili ulogu RABEX-5 u promociji tumora, što sljedeći put izvedena opsežna gubitak funkcija analize u RABEX- 5 stanične linije visoko izražavanje, SGC-7901 i NCI-N87. Uspješno inhibicija RABEX-5 izražavanja je postignuto RNAi tehnologije i obaranje potvrđena je Western blot. Naše analize su pokazale da proliferacija stanica bila je značajno smanjena u SGC-7901 /KD i NCI-N87 /KD stanice i slični rezultati dobiveni su u nastanak kolonija testovima. Važno je, in vivo Prethodne studije pokazale su da RABEX-5 mogu se specifično vezati na aktivni oblik RAB- 5, čime se regulira pristajanje i fuziju endozomnim membrana, pokretljivost endosomima i unutarstanične signalne [15]. Ekspresija Rab-5 proteina bila je povezana s razvojem različitih malignih tumora [16] - [18], te je sposobna stimulirati migraciju tumorskih stanica [19], [20]. Angiogeneza igra ključnu ulogu u nastanku tumora [21] i reguliran je nekoliko faktora kao što je faktor rasta iz trombocita-(PDGF) i faktora rasta vaskularnog endotela (VEGF) [22]. PI3K /Akt signalnog puta se može regulirati i VEGF i PDGF. Na primjer, VEGF potiče proliferaciju neuroblastoma aktivacijom PI3K /Akt signalizacije [23]. Slično tome, studije su pokazale da PDGF može utjecati na migracijski sposobnost stanica putem PI3K /AKT puta [24]. Aktivacija PI3K /Akt signalizacije mogu inhibirati apoptozu stanica induciranu različite stimulanse [25] - [29] i promoviraju progresije staničnog ciklusa [30], [31], čime pospješuje opstanak stanica i proliferacije. Ovaj put također sudjeluje u angiogenezu [32], [33], i igra važnu ulogu u formiranju tumora, invazija i metastaza, [34], [35]. Naša studija pokazuje da RABEX-5 utišavanje izaziva pad VEGF izražavanja. Stoga pretpostavljamo da RABEX-5 potpomaže rast i metastatskog mogućnost želučanih stanica raka kroz aktivaciju VEGF i njihovih nizvodnih signalnih putova. Pregled Na kraju smo pokazali da RABEX-5 potiče proliferaciju, nastanak kolonija, migraciju i invaziju, što ukazuje da RABEX-5 može biti onkogeni kod karcinoma želuca, i njegovi učinci mogu biti djelomično posredovane modulacijom aktivacijom VEGF. RABEX-5, dakle, može značiti novi dijagnostički i prognostički biljeg i novi terapijski cilj u raka želuca. treba uložiti dodatne napore kako bi se pojasnile signalne putove u pozadini tih bioloških pojava. pregled
putem izazivanje G0 /G1 fazi zastoja i stimulira želučane stanica raka apoptozu. Obaranje RABEX-5 također inhibira zacjeljivanje rana, migracije i invazivnih sposobnosti želučanih stanica raka. Rezultate in vivo
pokusi na životinjama su također u skladu s tim in vitro
nalaza. Odsutnost RABEX-5 dovela do smanjene ekspresije VEGF. Ovi rezultati pokazuju da RABEX-5 je upregulated i igra onkogeni ulogu u razvoju karcinoma želuca aktiviranjem VEGF signalizacije pregled
Imunohistokem pregled
mRNA u želučanom tkivu raka u usporedbi s odgovarajućim ne-tumorskih tkiva ( P pregled. < 0.01, Slika 1A). Ovi rezultati su potvrđeni na razini proteina pomoću imunohistokemijsko bojanje (Sl. 1B, C, D, E). RABEX-5 ekspresije pretežno je lokaliziran u citoplazmi stanica raka. RABEX-5 je reguliran u 61,8% (68/110) bolesnika s rakom želuca. Potom smo istražili odnos između RABEX-5 izražavanja i kliničko obilježja karcinoma želuca. Pojačanu regulaciju RABEX-5 bio je povezan s veličinom tumora ( P pregled = 0,035) i limfnih čvorova metastaze ( P pregled = 0,006), ali ne i sa drugim kliničkopatološkim faktora, uključujući spol, dob ili mjesto tumora (Tablica 1). pregled
nalaz je opisano gore, sljedeći smo ispitali učinak RABEX-5 ušutkavanja na rast tumora In vivo
ubrizgavanjem SGC7901 /KD ili SGC7901 /NC stanice supkutano u desni bok regijama golim miševima. Veličina tumora je praćen svaka 3 dana s čeljusti. Volumen tumora je značajno smanjena u miševa 2 tjedna nakon injekcije SGC-7901 /KD stanica u usporedbi s kontrolnim stanicama ( P pregled i 0.05; Sl. 5A). Volumen tumora ksenografta potječe od SGC-7901 /KD skupine bila je usporediva s onom SGC-7901 /NC skupinu, pokazuje značajno smanjenje volumena tumora u 4 tjedna nakon inokulacije tumorskih stanica ( P pregled < 0.05, Sl. 5B, C). Osim toga, težina tumora dobivenih od SGC-7901 /KD stanica bila je značajno manji od kontrole ( P pregled i 0.05; Sl. 5D). Sljedeće smo ispitali ekspresiju VEGF u uzorcima tumora transplantacija od QRT-PCR i imunohistokemije. Kao što je prikazano na slici. 5E i 5F, razine VEGF mRNA i proteina su smanjeni u SGC-7901 /KD grupe u usporedbi s SGC-7901 /NC kontrole. Ove In vivo pregled podaci su u skladu s našim in vitro
opažanja i potvrditi da je odsutnost RABEX-5 inhibira želučani rast raka i napredovanje modulacijom VEGF transkripcijsku aktivnost. Ukratko, RABEX-5 ima onkogeni ulogu kod raka želuca pregled
modelima stranog tijela podržali ove in vitro
opažanja. Taj fenotip može biti uzrokovano RABEX-5 regulaciju specifične gene i signalnih putova, čime utječu stanični ciklus i apoptozu. U transjažična pokusima, manje SGC-7901 /KD i NCI-N87 /KD stanice su migrirale na donju komoru od kontrolnih stanica, što ukazuje da RABEX-5 poboljšava migraciju i invaziju u želučanim stanice raka. Zacjeljivanje rana je također značajno smanjio sljedeće odsutnost RABEX-5. Ovi rezultati potvrdili važnu ulogu RABEX-5 u želučanom rast stanica raka i metastatskim ponašanja. Međutim, točna molekularni mehanizam, kojim RABEX-5 pokazuje ove efekte ostaje nepoznata, jer studije koje uključuju RABEX-5 ograničena. Pregled
Istraživači su in vitro identificirali bakteriju s anti-SARS-CoV-2 aktivnošću:Dolosigranulum pigrum
Pankreatitis
Bakterije u rodnom kanalu povezane su s manjim rizikom od raka jajnika
Istaknuti i ključni zaključci s Bostonskog bakterijskog sastanka (BBM) 2019.
Prehrana s malo fermentiranih ugljikohidrata poboljšava kvalitetu života pacijenata s IBD -om
Mikrobi na jeziku mogli bi se koristiti za dijagnosticiranje raka gušterače
Protein SARS-CoV N izaziva proizvodnju IFN-β izazivajući sveprisutnu primjenu RIG-I,
nalazi studija Mnogi članovi obitelji Coronaviridae, poput bliskoistočnog respiratornog sindroma (MERS), teški akutni respiratorni sindrom (SARS), te je poznato da je teški akutni respiratorni sindrom
Organske jabuke imaju probiotička svojstva
Jabuka dnevno ... kaže stara poslovica. Čini se da se svi slažu, sudeći prema poziciji broj 1 koju jabuke zauzimaju među voćem diljem svijeta, s 83 milijuna jabuka proizvedenih svake godine. Nova st
Gljive i bakterije u crijevima mogu jednako utjecati na ljudsko zdravlje i težinu bolesti
Mikrobiom crijeva dobio je veliku pažnju, no nova istraživanja pokazuju da su gljive u crijevima također važan mikroorganizam u funkcioniranju i zdravlju crijeva, što tada utječe na zdravlje ljudi.