RABEX-5, faktor izmenjava gvanin-nukleotidov (GEF) za RAB-5, ki je vpleten v tumorigeneze in razvoj nekaterih človeških raka. Tu poročajo, da RABEX-5 pospešuje rast tumorjev in metastaz sposobnost želodčne rakavih celic, tako in vitro Navedba. Wang S, Lu A, Chen X, Wei L, Ding J (2014) RABEX-5 je molekul in Plays onkogeni vlogo želodčnega raka razvoj s Aktiviranje VEGF signalne poti. PLoS ONE 9 (11): e113891. doi: 10,1371 /journal.pone.0113891 Urednik: Xin-Yuan Guan, The University of Hong Kong, Kitajska Prejeto: 3. september 2014; Sprejeto: 31. oktober 2014; Objavljeno: 26. november 2014 Copyright: © 2014 Wang et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo Data Zaloga:. avtorji potrjujejo, da so v celoti na voljo brez omejitev vse podatke, na katerih temeljijo ugotovitve. Vsi pomembni podatki so v papirju in njene dodatne informacije datotek Financiranje:. Ti avtorji nimajo podpore ali sredstva za sporočanje nasprotujočimi si interesi. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi. Uvod Kljub upadu svetovnega pojavnosti v nekaterih regijah sveta, želodčni rak ostaja četrta največja v pojavnosti in druga v umrljivosti med vsemi vrstami raka na svetu [1]. Študije kažejo, da okoljski dejavniki, kot so Helicobacter pylori eksocitoza in endocitoza so ključni procesi, ki jih celice, ki se uporabljajo za vzdrževanje normalne fiziološke funkcije, in Žuborenje prevoz je jedro del tega procesa. Mala GTPases imajo funkcijo stikala v znotrajceličnih molekul in zelo pomembno vlogo pri endocitozo in mehurčkov prometa, vključno z ureditvijo rast celic, prenos signala, diferenciacijo in aktin citoskeletona stavbe in mnogih vidikov drugih celičnih procesov [4]. V Ras superdružine, obstaja več kot 50 vrst GTPases, vključno z Raba, ki pripada največji poddružine [5]. Študije so pokazale, da urediti večina Rab beljakovine ciljanje promet, fagocitozo, in mehurček docking na posebne membrane, medtem ko manjše število Rab proteinov urediti mehurček nadobudnega [6], [7]. majhna GTPase RAB-5, ki je razdeljen v plazemski membrani in zgodnjih endosomov, je mojster regulator zgodnje endocytic trgovine [8]. Tako kot druge majhne GTPases, je RAB-5 aktivira z izmenjavo vezanega BDP z GTP, katalizira družino menjalnih gvanin-nukleotidov dejavnikov [9]. RABEX-5 je bila opredeljena kot interaktor za Rabaptin-5 in ima GEF aktivnost proti RAB-5 in sorodnih GTPases. so prav tako RABEX-5 in Rabaptin-5 potrebne za RAB-5-pogon endosoma fuzije in vitro Nedavne študije so pokazale, da je RABEX-5 izraz bistveno višja na več vrst raka, vključno z rakom dojke [11], rak prostate [12] in kolorektalnega raka [13]. Nenormalno RABEX-5 izraz v tumorjih kažejo, da je RABEX-5 pomembna v patogenezi raka in napredovanje, in lahko vpliva na tumorja biološke lastnosti. Vendar vloga in mehanizem delovanja RABEX-5 v želodčnem karcinogenezi in napredovanja raka še niso bili določeni. V tej študiji, smo najprej analizirali izražanje RABEX-5 v želodčnih tkivih rakavih s kvantitativno reverzne transkripcijske reakcije-polimerazo verige (QRT-PCR) in imunohistokemično. Kasneje smo preučevali učinke RABEX-5 na tumorja biološko funkcijo in vitro Etika Izjava Vsi poskusi na živalih, opisane v tej študiji so bili odobreni Odbor za institucionalne živali Nega in uporabo (IACUC) na Taishan Medical University in vse živali so se vzdržuje v skladu s smernicami IACUC. Zbiranje in uporaba človeških vzorcev je odobril Institutional Review Board je Taishan Medical University in povezan Taian Central Hospital Medical Center, po pisno soglasje od vseh bolnikih. skupaj 110 sklopov želodčnih tumorjev in sosednje, non-tumorskih tkiv (vsaj 5 cm od robu tumorja) so bili pridobljeni pri bolnikih, ki so doživeli kurativno operacijo na Taian Central Hospital med januarjem 2010 in decembrom 2013. med njimi 27 žensk in 83 moških, s povprečno starostjo 59,3 let (razpon: 32-80 let). Noben bolnik ni prejela radioterapijo ali kemoterapijo pred operacijo. Clinicopathological Podatki so bili zbrani in patološko tumor uprizoritev je bila določena glede na Skupni odbor ameriškega raka (AJCC) želodčni rak TNM sistem odrov. Histološka tipkanje bila izvedena z vsaj dvema strokovnih patologi, neodvisno delo v dvojno slepo način. Študija je bila odobrena s strani institucionalnih Pregled svetih Taishan Medical University in povezan Taian Central Hospital Medical Center. Pisna privolitev je bila pridobljena iz vsakega bolnika pred vpisom v študiji. Človekove želodca rakave celične linije in ovekovečena želodca, sluznice epitelijskih celic linija, GES-1 so bile kupljene od Shanghai inštituti za biološke vede, kitajske akademije znanosti. Celične linije so bile redno vzdrževane v RPMI-1640 medij vsebuje 10% telečjega seruma, penicilin (100 ie /ml) in streptomicin (100 ie /ml) v 5% CO 2 atmosferi pri 37 ° C. Celotna RNA izolacija in QRT-PCR Celotna RNA je bila ekstrahirana iz tkivnih vzorcev ali celičnih linijah z uporabo TRIzola reagenta (Invitrogen, ZDA), v skladu z navodili proizvajalca. Reverzna transkripcija smo izvedli z uporabo 1 ug celotne RNA v skladu z navodili proizvajalca (Promega, Madison, WI, ZDA). PCR smo izvedli z uporabo SYBR Green reagenta (Applied Biosystems, CA, ZDA) in naslednje PCR primerjev; RABEX-5 Imunohistokemija Parafinski RABEX-5 Ciljno utišanje RABEX-5 RABEX-5 lentivirusni motnje Vektor je bila kupljena od Shanghai GenePharma Co., Ltd. zaporedje RABEX-5 vmešavanje ciljanje oligo je 5'-GGATGCAAACTCGTGGGAA-3 ', pri čemer kontrolna sekvenca ne-homologna je 5'-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3'. SGC-7901 in NCI-N87 celice zasadimo v 6 vdolbinami (5 x 10 4 celic /vdolbinico), ki rastejo na 40% konfluence in obdelane z titered virusno supernatanta na multipliciteto infekcij (moi) 10. Western blot analiza Cela beljakovine celic so bili pridobljeni iz celic, ki uporabljajo Ripa pufer, ki vsebuje inhibitor proteaze cocktail (Pierce, Rockford, IL, USA). Protein je količinsko, z uporabo BCA Protein Analiza Kit (Pierce) v. Celični ekstrakti (100 ug) smo ločili s 10% natrijevega dodecil sulfata poliakrilamidno gelsko elektroforezo in prenese na poliviniliden fluorida membran. Membrane smo blokirali s 5% nemastnega mleka v Tris pufrom (TBS) in inkubirali s primarnimi protitelesi pri 4 ° C preko noči. Primarni protitelesa, ki se uporabljajo so zajčjih RABEX-5 (1:200; Santa Cruz biotehnologija), zajčjih ali GAPDH (1:5000, Ab9485, Abcam) in miške anti-VEGF (1:300; Ab46154, Abcam). Membrane smo nato sprali trikrat v raztopini TBS-Tween 15 minut, ter inkubirali s sekundarnimi protitelesi. Signali so odkrili s sistemom izboljšano zaznavanje kemiluminescenca (Amersham Bioscience, Piscataway, NJ, ZDA) v skladu s protokolom proizvajalca. Cell orožja je bila izmerjena z uporabo mobilnega Counting Kit -8 (CCK-8; Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japonska). SGC-7901 ali NCI-N87 Celice smo zasejali v 96-vdolbinami (1,5 x 10 3 celic /jamico) in inkubirali različnih časovnih točkah (24, 48, 72, 96 in 120 h). Gojišče smo nato odstranimo in nadomestimo s 200 ul v RPMI-1640 medij vsebuje 10% FBS in 20 ul iz CCK-8 in plošče inkubiramo pri 37 ° C 3 ure. Absorbanco smo izmerili pri 450 nm z uporabo Safire2 bralec mikroplošči. RPMI-1640 medij, ki vsebuje 10% FBS in CCK-8 smo uporabili kot kontrolo. Celice smo zasejali v 6 vdolbinami (1 x 10 3 celice /jamico) in gojišče je zamenjal vsakih 3-4 dni. Po kulture 14 dni, smo celične kolonije pritrjen s 4% paraformaldehida v 10 min, obarvamo z 0,1% kristal vijoličnim 20 minut in fotografirali. Kolonije z več kot 50 celic so bili prešteti v vsakem pomišljaj. SGC-7901 /KD, NCI-N87 /KD celic in kontrolnih celicah, so bili zbrani in celični cikel in apoptozo je bila ocenjena s citometrije toka. Za analizo celičnega cikla, smo celice določen s 75% etanolom in shranimo pri 4 ° C preko noči. Naslednji dan smo določene celice izperemo s PBS, obdelamo z RNazo A (50 mg /ml) in obarvamo z propidijevim jodidom (PI) (50 mg /ml) 30 minut v temi. Obarvane celice so analizirali citometrije pretoka (FACSCalibur, Becton, Dickinson). Za analizo apoptoze, aneksin V-APC Apoptoza Detection kit I (BD Pharmingen, ZDA) je bila uporabljena v skladu z navodili proizvajalca. PI in aneksin V-APC dvojno obarvanje je bila izvedena in celice so analizirali citometrije pretoka (FACSCalibur, Becton, Dickinson), z uporabo programske opreme Cell Quest (Becton, Dickinson). Aneksin V-APC-pozitivni in PI-negativne celice so definirani kot v procesu apoptoze. Vse poskuse smo izvajali v treh izvodih in so bile izračunane povprečne vrednosti teh skupin. Za migracijskih testih, 1 x 10 5 celice smo suspendirali v serumska proste RPMI-1640 medij in nanese na komorah, ki niso bile prevlečene s Matrigelove (Corning Costar, NY, ZDA). Za invazijo testu je bila zgornja komora predhodno prevlečene s Matrigelove (BD Bioscience, CA, USA), po protokolih proizvajalca in 1 x 10 5 celice v seruma RPMI-1640 medij dodamo v komoro. Pri obeh testih smo medij, ki vsebuje 10% FBS doda spodnji komori kot chemoattractant. Po 24 h kulturi so komore obarvamo z 0,5% raztopino kristal vijoličnim 15 minut in potopi v-fosfatnim pufrom (PBS), 10 minut. Celice v spodnji komori smo nato prešteti na podlagi obrnjenem mikroskopom. Vrednosti so izražene kot številke srednja celic v petih naključnih vidnih polj (200 ×). Celice zasejemo v 6 vdolbinami in kultivirani, dokler niso dosegli sotočje. Rane so bile opraskan na enojno plast celic z uporabo 20-ul konice pipet. Plošče speremo enkrat s svežim medijem, da se odstranijo brez prilepljenih celic po kulturi celic za 0 ali 48 ur (medij brez seruma tele) in fotografirali. Štiri-week- star moški BALB /C golih miši so bile kupljene z inštituta za zoologijo, kitajske akademije znanosti Šanghaju. Živali so bile nastanjene v kletkah z žagovino steljo v nadzorovano temperaturo prostora (68-72 ° F) z 12-h svetlobe in teme cikla in 45-55% relativne vlažnosti, in je bilo dovoljeno prost dostop do hrane in pitne vode. Na kratko, SGC-7901 /KD ali SGC-7901 /NC celice tripsiniziramo in resuspendirali v PBS (pH 7,4) za injiciranje v eno miš, v celotnem volumnu 100 ul. Celična suspenzija (1 x 10 6 celic) smo injicirali v desnega krila miši. velikost tumorja je bila izmerjena od zunaj vsake 3 dni s pomočjo čeljusti in volumen tumorja je bila ocenjena z enačbo: dolžina (mm) x širina 2 (mm) x 0,52. Da bi izboljšali vsako trpljenje miših opazili v teh eksperimentalnih študijah so miši žrtvovati s CO 2 inhalacijo na 28. dan po intraperitonealno injekcijo, in tumorji so stehtali po disekciji. Vzorce smo shranili v tekočem dušiku QRT-PCR ali določen v 4% formalinu, da dobimo-parafinskih vgrajeni odsekov. Vsi postopki so bili izvedeni v skladu s smernicami Animal Care in uporabite odbor za oskrbo živali Taishan Medical University odobrenih. Podatki so predstavljeni kot povprečje ± standardni odklon (SD). Statistične razlike med obema skupinama so bile pregledane s Študent je t Rezultati RABEX-5 izraz je povečana pri. želodčni rak tkiva izraz RABEX-5 downregulation od RABEX-5 zavira proliferacijo želodčni rak celic in nastanek kolonij Naslednja raziskovali izražanje RABEX-5 v celičnih linijah želodca in celične linije brez raka , GES-1, z western blot analizo. RABEX-5 je bilo izraženo v vseh celičnih linijah testiranih, in je še posebej visoka v SGC-7901 in NCI-N87 celic (sl. 2A). Če želite raziskati funkcije RABEX-5 v želodcu raka celičnih linijah, smo izvedli ciljno rasklapanje za RABEX-5 v celičnih linijah visoko izražanje, SGC-7901 in NCI-N87. RABEX-5 izražanje je bistveno zmanjšalo v SGC-7901 /KD in NCI-N87 /KD celic v primerjavi s kontrolnimi celicami (sl. 2B). Najprej smo preučili vpliv izgube RABEX-5 na rast želodca rakavih celic. Po 5 dneh kulture, je bila stopnja rasti SGC-7901 /KD in NCI-N87 /KD celic bistveno počasneje kot v kontrolni skupini (sl. 2C). Prav tako so potrdili te ugotovitve v ustanovitvenih kolonija testih. številke kolonije so se bistveno zmanjša v SGC-7901 /KD celic in NCI-N87 /KD celic v primerjavi s kontrolnimi celicami (sl. 2D), in smo ugotovili, da je velikost kolonij, je bila manjša tudi v poskusnih skupinah v primerjavi s kontrolno skupino. Ti podatki kažejo, da downregulation od RABEX-5 zavira proliferacijo želodčni rak celic. opaženih učinkov RABEX-5 razgradljiv na celično rast lahko posledica sprememb v napredovanju celičnega ciklusa in apoptozo. Zato smo pregledali učinke RABEX-5 utišanje na celični cikel in apoptoze in vitro Da bi raziskali vpliv RABEX-5 na področju migracij in invazije, bomo naslednjič izvedli transwell migracije in invazijo testov. Downregulation od RABEX-5 zatreti celični migraciji (SGC-7901 /skupine KD, 121,3 ± 6,1 celic /polje; SGC-7901 /NC skupina, 261.0 ± 10,5 celic /polje; NCI-N87 /skupina KD, 108,7 ± 6,1 celic /polje; NCI-N87 /NC skupina, 241.7 ± 10,6 celic /polje; P Da bi raziskali vpliv RABEX-5 na gibljivost.. in celjenje ran, smo izvedli tudi celjenje rane testov. Opazili smo, da je razdalja med zavitimi robovi SGC-7901 /KD in NCI-N87 /KD celic znatno dlje od tistih SGC-7901 /NC ali NCI-N87 /NC celic (sl. 4e). V skladu s temi ugotovitvami so bile koncentracije VEGF navzdol reguliranih tako na ravni mRNA in proteinov, v SGC-7901 /KD celic (sl. 4F, G). Glede na in vitro je opisano zgoraj Pogovor Čeprav so prejšnje študije pokazale, da RABEX-5 igra pomembno vlogo pri tumorigeneze na več vrst raka [11]. - [14], ni bila raziskana njegova vloga pri raku želodca. V tej študiji smo ugotovili, da je RABEX-5 izraz bistveno povečana pri želodčnih tkivih rakom v primerjavi s sosednjim normalnem tkivu, kar kaže, da lahko RABEX-5 prispevajo k želodčne tumorigeneze raka. Poleg tega je izraz RABEX-5 značilno povezana z velikostjo tumorja in bezgavk metastaz. V nasprotju s tem pa ni bilo pomembnih korelacije med nenormalno RABEX-5 izražanja in spolu, starosti ali lokacije tumorja. To je prva študija za pojasnitev clinicopathological pomen RABEX-5 izražanja pri bolnikih z rakom želodca. Da bi raziskali vlogo RABEX-5 pri spodbujanju tumorja, bomo naslednjič izvedli obsežno izgubo analize funkcije v RABEX- 5 visoko-izražanje celičnih linij, SGC-7901 in NCI-N87. Uspešno zaviranje RABEX-5 ekspresijo smo dosegli z RNAi tehnologije ter rasklapanje bil potrjen z Western blot. Naše analize so pokazale, da je širjenje celic bistveno zmanjšal v SGC-7901 /KD in NCI-N87 /KD celic in podobni rezultati so bili pridobljeni v ustanovitvenih kolonija testih. Pomembno je, in vivo Predhodne študije so pokazale, da lahko RABEX-5 specifično vežejo na aktivne oblike RAB- 5, s čimer se ureja združevanje in zlitje endosomske membran, gibljivost endosomov in znotrajcelični prenos signalov [15]. Izraz Rab-5 proteinov je povezana z razvojem različnih malignih tumorjev [16] - [18] in je sposoben spodbujati migracije tumorskih celic [19], [20]. Angiogenezo igra ključno vlogo pri tumorigeneze [21] in ureja več dejavnikov, kot so trombocitov izpeljani rastni faktor (PDGF) in vaskularnega endotelijskega rastnega faktorja (VEGF) [22]. V /Akt signalne poti PI3K mogoče urediti tako VEGF in PDGF. Na primer, VEGF povečuje nevroblastoma širjenje z aktiviranjem PI3K /Akt signaliziranje [23]. Podobno so študije pokazale, da lahko PDGF vplivajo na migracije sposobnost celic preko PI3K /Akt pot [24]. Aktivacija PI3K /Akt signaliziranje lahko inhibira apoptozo celic z različnimi dražljaji [25] inducirano - [29], in spodbujajo napredovanje celičnega ciklusa [30], [31], s čimer se spodbuja celično preživetje in razmnoževanje. To pot se udeležuje tudi angiogenezo [32], [33], in igra pomembno vlogo pri nastanku tumorja, invazije in metastaz [34], [35]. Naša raziskava je pokazala, da RABEX-5 utišanje sproži zmanjšanje VEGF izražanja. Zato smo hipotezo, da RABEX-5 pospešuje rast in metastatskega sposobnost želodčne rakavih celic z aktivacijo VEGF in njenih nadaljnjim signalnih poti. Na koncu smo dokazati, da RABEX-5 pospešuje širjenje tvorbo kolonij, migracije in invazije, kar kaže, da lahko RABEX-5 onkogen raka želodca, in njeni učinki so lahko delno posredovana z modulacijo aktivacijo VEGF. RABEX-5 lahko zato predstavlja novo diagnostično in prognostično marker in novo terapevtsko tarčo pri raku želodca. Več si je treba prizadevati za razjasnitev signalne poti, ki vplivajo na te biološke pojave.
in in vivo
. Izražanje RABEX-5 je bistveno višja pri želodčnih tkivih raka in je povezana z velikostjo tumorja in bezgavk metastaz. Poleg tega ciljno utišanje RABEX-5 znižanem želodca proliferacijo rakavih celic in tvorbo kolonije vitro
preko indukcijo G0 /G1 fazo prijetje in stimulirane želodčne rakavih celic apoptoze. Rasklapanje za RABEX-5 tudi blokiranem celjenje ran, migracije in invazivnih sposobnosti želodca rakavih celic. Rezultati in vivo
poskusi na živalih so bili prav tako v skladu s temi vitro
ugotovitev. Utišanje RABEX-5 vodila v zmanjšanje ekspresije VEGF. Ti rezultati kažejo, da je RABEX-5 molekul in igra onkogenega vlogo pri razvoju raka želodca z aktiviranjem VEGF signalne poti
okužbe, kajenje in prehrana cigaret, lahko igrajo pomembno vlogo pri razvoju želodčnega raka [2]. Zgodnji fazi raka želodca je običajno brez simptomov ali v povezavi z nespecifičnimi simptomi, kot so dispepsija, in do takrat, ko se pojavijo simptomi, je pogosto dosegla visoko stopnjo. Kljub skupni uporabi multimodalnega zdravljenja (kemoterapijo, sevanjem in kirurgije) o, 5-letno preživetje z dne bolnikov ostaja nizko, pri 20-40% [3]. Čeprav so raziskave raka želodca naredila velik napredek, ostajajo molekularne mehanizme, na katerih temelji razvoj raka želodca nepopolno razume.
[10].
in in vivo
. Naši rezultati kažejo, da je RABEX-5 prekomerno in igra onkogenega vlogo pri raku želodca.
Materiali in metode
Bolniki in vzorci tkiva
Celične linije in kultura pogoji
(naprej) 5'-TTGGACAGATGGAATTGCAA-3 'in (nazaj) 5'-GTTGCAGTGGTGGAGGAAGT-3'; VEGF
(naprej) 5'-CTGTACCTCCACCATGCCAAGT-3 'in (nazaj) 5'-CTTCGCTGGTAGACATCCATGA-3' in GAPDH
(naprej) 5'-GGACCTGACCTGCCGTCTAG-3 'in (nazaj) 5'-GTAGCCCAGGATGCCCTTGA-3 '. PCR reakcije smo izvedli z začetnim denaturacija pri 95 ° C za 2 min, čemur sledi 30 ciklov 94 ° C za 30 sekund, 55 ° C za 30 sekund in 72 ° C za 30 sekund, s končno razširitvijo pri 72 ° C 10 min. GAPDH
je bila uporabljena kot notranji nadzor in so bile izvedene vse reakcije v treh izvodih. Razmerja glede izraz za
v vsak seznanjem tumorja v vzorcu niso tumorsko tkivo so bile izračunane z uporabo 2 -ΔΔCt metoda. -embedded odseki tkiva pri bolnikih ali golih miši toplotno obdelani pri 60 ° C 1 uro, razvoskani v ksilenu, ponovno hidrirani v seriji etanola (100-50%) in obdelamo pri 0,01 mol /L citratnega pufra (pH 6,0 ) za pridobivanje antigena. Endogene peroksidaze dejavnost je bila inhibirana po inkubaciji z metanolom, ki vsebuje 0,3% H 2o 2 za 30 min. Oddelki smo nato inkubirali s protitelesi za odkrivanje RABEX-5 (1:50, Santa Cruz, biotehnologija, ZDA) ali VEGF (1:150; Ab46154, Abcam, ZDA) pri 4 ° C preko noči. Naslednji eksperimentalni postopek je bil inkubiran s sekundarnim protitelesa. Tkivo odseki so jih nasprotno s hematoksilinom Mayer. Ploščice smo neodvisno ocenili z dvema patologi, slepo za podatke pacientov. Intenzivnost obarvanja za RABEX-5 je dosegel kot 0 (ni umazano), 1 (blag barvanja), 2 (zmeren obarvanja) ali 3 (intenzivno barvanjem). Obarvanje površina je dosegel kot 0 (0%), 1 (1-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) ali 4 (76-100%), na osnovi odstotka pozitivno obarvajo celice. Končni obarvanja rezultat, izračunana kot vsota intenzivnosti in razširitev rezultatov smo razdelili v tri skupine, kot sledi: 0-2, negativno izražanje; 3-4, šibko izražanje; in 5-6, močan izraz.
Cell širjenje test
kolonija tvorba vsebnosti
Analiza celičnega cikla in apoptozo
Transwell migracije in invazije test
-celjenje ran test
ksenotransplantskih modela
Statistična analiza
-test. Korelacije med RABEX-5 izražanja v želodcu tkivih rakom in clinicopathological parametrov smo analizirali s hi-kvadrat ali Fisherjev testov. P
< 0.05 je zdelo pomembno, in P
< 0,01 je zdelo zelo pomembno
bila preučena v raka želodca in sosednjih non-tumorskih tkivih s QRT-PCR. v želodčnih tkivih rakom Opazili smo bistveno višje izražanje RABEX-5
mRNA v primerjavi z ustreznimi ne-tumorske tkiva ( P
. < 0,01, slika 1A). Ti rezultati so bili potrjeni na ravni proteina, ki ga imunohistokemično barvanjem (sl. 1B, C, D, E). RABEX-5 ekspresijo pretežno lokaliziran v citoplazmi rakavih celic. RABEX-5 je bila povečana pri 61,8% (68/110) bolnikov z rakom želodca. Bomo naslednjič raziskovali odnos med RABEX-5 izražanja in clinicopathologic značilnosti raka želodca. Uravnavanjem RABEX-5 je bila povezana z velikostjo tumorja ( P
= 0,035) in na bezgavkah metastaze ( P
= 0,006), ne pa tudi z drugimi clinicopathological dejavnikov, med drugim na spol, starost ali lokacija tumorja (tabela 1).
downregulation od RABEX-5 spodbuja apoptozo želodčnih rakavih celic in povzroči G0 /G1 aretacijo celičnega ciklusa
, z uporabo citometrija. Analiza toka citometrična je pokazala, da-7901 GSS /KD ali NCI-N87 /KD celic je bil delež celic v G0 /G1 fazo višja kot v SGC-7901 /NC ali NCI-N87 /NC kontrolni skupini, medtem ko se je delež celice v G2 /M fazo bistveno zmanjšala v primerjavi s kontrolami (sl. 3A, B). Opazili smo tudi pomembne učinke na apoptozo v različno tretiranih skupinah (sl. 3C, D), s downregulation za RABEX-5 izražanja, ki vodi do povečanja rakave celice apoptoze želodca.
downregulation od RABEX-5 zavira migracije , invazija in celjenje ran sposobnost želodca rakavih celic
. < 0,05) (slika 4A, C). Podobni rezultati so bili v transwell invazijo teste (SGC-7901 /skupine KD opazili, 76,3 ± 6,1 celic /polje; SGC-7901 /skupina NC, 108,7 ± 6,0 celic /polja; NCI-N87 /skupine KD, 60.7 ± 6,0 celic /polja; NCI-N87 /skupina NC, 119,0 ± 8,5 celic /na terenu; P
< 0,05) (slika 4B, D)
utišanje RABEX-5 zavira rast rak želodca vivo
ugotovitve, smo poleg preučila učinek RABEX-5 utišanje na rast tumorjev in vivo
z vbrizgavanjem SGC7901 /KD ali SGC7901 /NC celice subkutano v desnega krila regijah golih miših. velikost tumorja smo spremljali na vsake 3 dni s šestilom. Volumen tumorja je bila močno zmanjšana pri miših 2 tedna po injekcijo SGC-7901 KD celic /v primerjavi s kontrolnimi celicami ( P
< 0,05;. slika 5A). Obseg tumor presadkov izhaja iz SGC-7901 /skupine KD bila primerljiva s tisto iz SGC-7901 /NC skupine, ki kaže izrazito zmanjšanje obsega tumorja 4 tedne po tumorskih celic inokulaciji ( P
< 0,05, sl. 5B, C). Poleg tega je bila teža tumorjev, ki izhajajo iz SGC-7901 /KD celic bistveno manjša od kontrole ( P
< 0,05;. Slika 5D). Smo poleg pregleda izražanje VEGF v vzorcih presaditev tumorskih s QRT-PCR in imunohistokemijo. Kot je prikazano na sliki. 5E in 5F, so bile ravni VEGF mRNA in beljakovin v SGC-7901 /skupine KD v primerjavi z SGC-7901 /NC kontrole zmanjšal. Te in vivo
podatki so skladni z našimi vitro
stališčih in potrdi, da utišanje RABEX-5 zavira želodčne rast rakastih celic in napredovanje z modulacijo VEGF transkripcijske aktivnosti. Če povzamemo, RABEX-5 ima onkogenega vlogo pri raku želodca
ksenotransplantskih modeli podpira te vitro
pripombe. Ta fenotip lahko povzroči RABEX-5, ki ureja posebne gene in signalnih poti, s čimer vplivajo celic cikla in apoptozo. V transwell testih manj SGC-7901 /KD in NCI-N87 /KD celice preselili v spodnji komori od kontrolnih celicah, kar kaže, da RABEX-5 poveča migracije in vdor v želodčnih rakavih celic. Celjenje ran je bil tudi občutno zmanjšala po utišanje RABEX-5. Ti rezultati potrjujejo pomembno vlogo RABEX-5 rasti želodčni rak celic in metastatskega obnašanja. Vendar natančen molekularni mehanizem, s katerim RABEX-5 vrši te učinke še ni znan, saj študije vključujejo RABEX-5 pa so omejene.
Raziskovalci uporabljajo fazno terapijo za uspešno zdravljenje alkoholne bolezni jeter
Okužba s SARS-CoV-2 pri bolnikih z rakom podaljša izločanje virusa in izgubo limfocitov
Mikrobiom semenčic, odkrit s sekvenciranjem RNA
Izguba epitelne pregrade v črevesju, odgovorna za MIS-C, povezano s COVID-19, pri otrocih,
Novo preskušanje je pokazalo izboljšano preživetje pri bolnikih z napredovalim kolorektalnim BRAF-mutantnim rakom
Glive in bakterije v črevesju lahko enako vplivajo na zdravje ljudi in resnost bolezni
Sladkorna bolezen tipa 1 je povezana z črevesnim mikrobiomom in genetskimi dejavniki
Nova študija univerze Lingköping na Švedskem in univerze na Floridi je pokazala, da se črevesni mikrobiom otrok z visokim genetskim tveganjem za razvoj sladkorne bolezni tipa 1 bistveno razlikuje od o
Tiopurini bi lahko pomagali ustaviti replikacijo virusa pri človeških koronavirusih
Raziskovalci z Oddelka za mikrobiologijo in imunologijo, Univerza Dalhousie, Univerza v Calgaryju, in Oddelek za biokemijo in molekularno biologijo, Univerza v Britanski Kolumbiji, Kanada, sodeloval s
Raziskovalci z dieto manipulirajo z bakterijskimi vrstami v črevesju
Znanstveniki z Medicinske fakultete Univerze Stanford so pokazali, da z manipulacijo prehrane v mišjem modelu, možno je dati prednost presaditvi določenega bakterijskega seva pred drugimi.