PLoS One: RABEX-5 fokozódik, és játszik egy onkogén szerepe a gyomorrák Fejlesztési aktiválásával VEGF jelzés Pathway

absztrakt katalógusa

RABEX-5, a guanin-nukleotid cserélő faktor (GEF) a RAB-5 , játszik a tumorigenezisben és a fejlesztés a bizonyos emberi daganatok. Itt azt jelentették, hogy RABEX-5 elősegíti a tumor növekedését és a metasztatikus képességét gyomorrák sejtek mind in vitro katalógusa és in vivo katalógusa. Expression of RABEX-5 jelentősen magasabb gyomorrák szövetekben, és a kapcsolódó tumor mérete és a nyirokcsomó-metasztázis. Ezen túlmenően, a célzott csendesítése RABEX-5 csökkentett gyomorrák sejt proliferáció és kolónia képződését in vitro
indukcióján keresztül a G0 /G1-fázisban történő leállást, és a stimulált gyomorrák sejtek apoptózisát. Kiütése RABEX-5 is gátolta a sebgyógyulást, a migráció és a invazív képességek gyomorrák sejtek. Az eredmények a in vivo állatkísérletekben katalógusa is összhangban van ezekkel a in vitro katalógusa megállapításokat. Elhallgattatása RABEX-5 csökkenését eredményezték VEGF expresszióját. Ezek az eredmények azt mutatják, hogy RABEX-5 fokozódik, és játszik egy onkogén szerepet gyomorrák fejlesztés aktiválásával VEGF jelátviteli útvonalat. Katalógusa

Citation: Wang S, Lu A, Chen X, Wei L, Ding J (2014) RABEX-5 fokozódik, és játszik egy onkogén szerepe a gyomorrák Fejlesztési aktiválásával VEGF szignalizációs. PLoS ONE 9 (11): e113891. doi: 10,1371 /journal.pone.0113891 katalógusa

Szerkesztő: Xin Yuan Guan, The University of Hong Kong, Kína katalógusa

Beérkezett: szeptember 3, 2014; Elfogadva: október 31, 2014; Megjelent: november 26, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 Wang et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Az adatok elérhetősége: A szerzők megerősítik, hogy az összes adatot a megállapításokat alátámasztó teljes mértékben hozzáférhető, korlátozás nélkül. Minden lényeges adat a papír és az azt támogató információs fájlokat. Katalógusa

Forrás: A szerzők nem támogatja vagy finanszírozási jelenteni. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek.

Bevezető katalógusa

Annak ellenére, hogy csökken a globális előfordulása bizonyos régióiban a világ, gyomorrák továbbra is a negyedik legmagasabb az előfordulás és a második körében a halálozás az összes rák világszerte [1]. Tanulmányok azt mutatják, hogy a környezeti tényezők, mint például a Helicobacter pylori fertőzés katalógusa, a dohányzás és az étrend, akkor fontos szerepet játszanak a gyomorrák fejlesztés [2]. A korai stádiumban gyomorrák általában tünetmentes vagy kapcsolódó specifikus tünetek, mint például emésztési zavar, és mire a tünetek jelentkeznek, akkor gyakran előrehaladott állapotban. Annak ellenére, hogy a közös multimodális terápia (kemoterápia, a sugárkezelés és a műtét), az 5 éves túlélés a továbbra is alacsony, 20-40% [3]. Bár a kutatás a gyomorrák jelentős előrehaladást ért el, a molekuláris mechanizmusa a gyomorrák kialakulásával marad teljesen tisztázott. Katalógusa

Exocytosis és endocitózis kulcsfontosságú folyamatok által használt sejtek a normális élettani funkciót, és a hordozó közlekedés alapvető e folyamat részeként. Kis GTP-ázok játszanak kapcsoló funkció az intracelluláris molekulák és egy nagyon fontos szerepet endocitózis, vezikulum szállítására, ideértve a sejtnövekedés szabályozásában, jelátvitel, differenciálódás és az aktin citoszkeleton épület és sok szempontból a többi celluláris folyamatok [4]. A Ras szupercsalád, több mint 50 típusú GTP-ázok, beleértve Rab, amely tartozik a legnagyobb alcsaládba [5]. Tanulmányok kimutatták, hogy a legtöbb Rab fehérjék szabályozzák célzási közlekedés, a fagocitózist és a vezikula dokkoló specifikus membránok, míg egy kis számú Rab fehérjék szabályozzák vezikulum bimbózó [6], [7]. A kis GTPáz RAB-5, amely eloszlik a plazma membrán és a korai endoszómákban, a mester szabályozó korai endocitikus kereskedelem [8]. Mint más kis GTP-ázok, RAB-5 aktiváljuk cseréjét kötött GDP GTP, katalizálja egy család guanin-nukleotid cserélő tényezők [9]. RABEX-5 azonosították interaktor a Rabaptin-5, és rendelkezik GEF aktivitás felé RAB-5 és a kapcsolódó GTP-ázok. Hasonlóképpen, mind a RABEX-5 és Rabaptin-5 szükséges RAB-5-vezérelt endoszóma fúziós in vitro katalógusa [10].

A legújabb vizsgálatok azt mutatták, hogy RABEX-5 expresszióját lényegesen magasabb számos rákos megbetegedések, beleértve a mellrák [11], prosztatarák [12] és a kolorektális rák [13]. Kóros RABEX-5 kifejezés tumorokban azt sugallja, hogy RABEX-5 jelentős rák patogenezisében és előrehaladásában, és befolyásolhatja a daganat biológiai viselkedése. Ugyanakkor a szerepe és hatásmechanizmusa RABEX-5 gyomorrákban karcinogenezissel és progresszió még nem határozták meg. Ebben a vizsgálatban először elemeztük expresszióját RABEX-5 gyomorrák szövetekben kvantitatív reverz transzkripciós polimeráz-láncreakció (QRT-PCR) és immunhisztokémia. Ezt követően megvizsgáltuk a hatásait RABEX-5 a daganat biológiai funkció in vitro katalógusa és in vivo katalógusa. Eredményeink azt mutatják, hogy RABEX-5 overexpresszálódik és játszik onkogén szerepe a gyomorrák. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai Nyilatkozat katalógusa

A kísérleteket ismertetett tanulmány jóváhagyták az Institutional Animál Care and Use Committee (IACUC) a Taishan Orvostudományi Egyetem és az összes állatot tartani összhangban IACUC irányelveket. Gyűjtése és felhasználása a humán mintákat jóváhagyta az Institutional Review Board Taishan Orvosi Egyetem és a kapcsolt Taian Central Hospital Medical Center, miután tájékoztatta az írásbeli engedélyt a minden betegnél. Katalógusa

A betegek és szövetminták katalógusa

összesen 110 db gyomor tumorok és a szomszédos, nem daganatos szövetekben (legalább 5 cm-re a tumor peremén) kaptuk átesett betegek kuratív műtét Taian Központi Kórház között 2010. január 2013. december Ezek között 27 nő és 83 férfi, átlag életkor 59,3 év volt (tartomány: 32-80 év). Nem beteg kapott sugárterápia vagy kemoterápia a műtét előtt. Klinikopatológiai adatokat gyűjtöttek és patológiai stádium szerint határoztuk meg a American Joint Committee on Cancer (AJCC) gyomorrák TNM stádium rendszerben. A szövettani tipizálás végeztük legalább két szakértő patológusok, önállóan működő kettős vak módszerrel. A tanulmány által jóváhagyott Az etikai bizottság Taishan Orvosi Egyetem és a kapcsolt Taian Central Hospital Medical Center. Írásos beleegyezését adta Minden beteg előtt részt vesz a vizsgálatban. Katalógusa

A sejtvonalak és tenyésztési körülmények katalógusa

Az emberi gyomor rákos sejtvonalak és a halhatatlanná gyomor nyálkahártya epithelialis sejtvonal GES-1 , vásároltunk a Shanghai Institutes for Biological Sciences, a kínai Tudományos Akadémia. Sejtvonalak rutinszerűen RPMI-1640 közegben, amely 10% borjúszérummal, penicillinnel (100 NE /ml) és sztreptomicinnel (100 NE /ml), 5% CO _{2 atmoszférában 37 ° C-on.}

Teljes RNS izolálás és qRT-PCR

Teljes RNS-t extraháltunk a szövetmintákból vagy sejtvonalak Trizol reagens (Invitrogen, USA), a gyártó utasításai szerint. A reverz transzkripciót végeztünk 1 ug össz-RNS összhangban a gyártó utasításai (Promega, Madison, WI, USA). A PCR-t SYBR Green reagens (Applied Biosystems, CA, USA), és a következő PCR-primerek; RABEX-5 katalógusa (előre) 5'-TTGGACAGATGGAATTGCAA-3 'és (fordított) 5'-GTTGCAGTGGTGGAGGAAGT-3'; VEGF katalógusa (előre) 5'-CTGTACCTCCACCATGCCAAGT-3 'és (fordított) 5'-CTTCGCTGGTAGACATCCATGA-3' és GAPDH katalógusa (előre) 5'-GGACCTGACCTGCCGTCTAG-3 'és (fordított) 5'-GTAGCCCAGGATGCCCTTGA-3 '. PCR-reakciókat végeztünk egy kezdeti denaturáció 95 ° C-on 2 perc, majd 30 ciklusban 94 ° C 30 s, 55 ° C-on 30 s és 72 ° C-on 30 s, a végső lánchosszabbítás 72 ° C-on 10 percig. GAPDH
használtuk, mint belső kontroll, az összes reakciót végeztünk három példányban. A relatív expresszióját arányai RABEX-5 katalógusa minden páros daganat nem tumoros szövetet mintából kiszámított 2 ^{-ΔΔCt módszer. Katalógusa}

Az immunhisztokémiai katalógusa

Paraffin -embedded szöveti metszetek a betegektől vagy csupasz egereket hőkezelt át 60 ° C-on 1 órán, viaszmentesített xilolban újra hidratált etanol sorozat (100-50%) és kezeljék 0,01 mol /l citrát-pufferrel (pH = 6,0 ) az antigén feltárást. Az endogén peroxidáz-aktivitást gátolja inkubálás után metanol, amely 0,3% H _{2 O 2-on 30 percig. A metszeteket ezután inkubáltuk antitestek kimutatására RABEX-5 (1:50, Santa Cruz Biotechnology, Amerikai Egyesült Államok) vagy a VEGF (1:150; Ab46154, ABCAM, USA), 4 ° C-on egy éjszakán át. A következő kísérleti eljárás inkubáljuk a szekunder antitesttel. A szöveti metszeteket kontrasztfestést Mayer féle hematoxilinnel. A lemezeket egymástól függetlenül értékelte két patológusok, vak, hogy minden beteg adatait. A festődés intenzitása RABEX-5 pontoztuk, mint 0 (nincs festés), 1 (enyhe festés), 2 (közepes festés) vagy 3 (intenzív festődés). Festési terület pontoztuk, mint 0 (0%), 1 (1-25%), 2 (26-50%), 3 (51-75%) vagy 4 (76-100%), alapján a százalékos pozitívan festett sejteket. A végső festést pontszám számított összege az intenzitása és kiterjedése pontszámok osztották három csoportba a következők: 0-2, negatív kifejezés; 3-4, gyenge kifejezés; és 5-6, erős kifejezés. katalógusa}

Célzott elhallgattatása RABEX-5 katalógusa

A RABEX-5 lentivirális interferencia vektort vásárolt Shanghai GenePharma Co., Ltd. szekvenciája az RABEX-5 interferencia célzási oligo volt 5'-GGATGCAAACTCGTGGGAA-3 ', míg a nem-homológ szabályozó szekvencia 5'-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3'. SGC-7901 és az NCI-N87 sejteket szélesztettünk 6 lyukú lemezekre (5 × 10 ^{4 sejt /lyuk), növesztjük 40% összefolyás, és kezeltük titráltuk a vírus felülúszót egy fertőzési multiplicitással (MOI) 10.}

Western-blot-analízis

a teljes sejt fehérjéket sejtekből kivont alkalmazásával RIPA pufferben, amely proteáz inhibitor koktélt (Pierce, Rockford, IL, USA). Fehérje mennyiségét egy BCA Protein Assay Kit (Pierce). A sejtkivonatokat (100 ug) elválasztottuk 10% -os nátrium-dodecil-szulfát poliakrilamid gél-elektroforézissel, és vittük át polivinilidén fluorid membrán. A membránokat blokkoltuk 5% zsírmentes tej Tris-pufferolt sóoldattal (TBS), és inkubáltuk primer antitestekkel 4 ° C hőmérsékleten egy éjszakán át. A használt primer ellenanyagok voltak nyúl anti-RABEX-5 (1:200; Santa Cruz Biotechnology), nyúl anti-GAPDH (1:5000; Ab9485, ABCAM) és egér anti-VEGF (1:300; Ab46154, ABCAM). Membránokat ezután háromszor mostuk TBS-Tween oldat 15 percig, és inkubáltuk a másodlagos antitestekkel. Signals alkalmazásával detektáltuk továbbfejlesztett kemilumineszcenciás kimutatási rendszer (Amersham Bioscience, Piscataway, NJ, USA) szerint a gyártó utasításai szerint.

Cell proliferációs vizsgálati

A sejtproliferációt mértük egy sejtszámláló Kit -8 (CCK-8; Dojindo Laboratories, Kumamoto, Japán). SGC-7901 vagy NCI-N87 sejteket oltottunk 96 lyukú lemezekre (1,5 × 10 ^{3 sejt /lyuk), és inkubáltuk különböző időpontokban (24, 48, 72, 96 és 120 óra). Növekedési tápközeget ezután eltávolítottuk és helyettesítettük 200 ul RPMI-1640 közegben, amely 10% FBS-t és 20 ul CCK-8 és a lemezeket inkubáljuk 37 ° C-on 3 órán át. Az abszorbanciát mérjük 450 nm-en egy Safire2 mikrolemez leolvasóval. RPMI-1640 közegben, amely 10% FBS-t és CCK-8-t használtunk kontrollként.}

telepképző assay

sejteket oltottunk 6 mérőhelyes lemezekre (1 × 10 ^{3 sejtek /lyuk), és tápfolyadékot helyébe minden 3-4 nap. 14 nap után "kultúra, a sejt kolóniákat fixáltuk 4% paraformaldehiddel 10 percig, megfestettük 0,1% -os kristályibolya 20 percig, és lefényképeztük. Telepek több mint 50 sejteket megszámoltuk az egyes kötőjel.}

Elemzés a sejtciklus és apoptózis

SGC-7901 /KD, NCI-N87 /KD sejtek és kontroll sejteket összegyűjtöttük, és a sejtciklus és apoptózist áramlási citometriával vizsgáltuk. Sejtciklus analízis a sejteket fixáltuk 75% -os etanollal, és 4 ° C-on egy éjszakán át. A következő napon, fixált sejteket PBS-sel mostuk, kezelt RNáz A (50 ng /ml), és megfestettük propidium-jodid (Pl) (50 ug /ml) 30 percig a sötétben. A megfestett sejteket áramlási citometriával analizáltuk (FACSCalibur, Becton-Dickinson).

apoptózis elemzéshez olyan Annexin V-APC Apoptosis Detection Kit I (BD Pharmingen, USA) használtunk a gyártó utasításai szerint. PI és az Annexin V-APC kettős festést végeztünk, és a sejteket áramlási citometriával elemezzük (FACSCalibur, Becton-Dickinson), felhasználva a Cell Quest szoftver (Becton-Dickinson). Annexin V-APC-pozitív és a PI-negatív sejteket definiált áteső apoptózist. Minden kísérletet három párhuzamossal végzett, és az átlagos értékeket ezen csoportok számoltunk.

Transwell migrációs és inváziós vizsgálati eljárás

migrációs assay, 1 × 10 ^{5 sejteket szérum- RPMI-1640 tápközegben, és szélesztettük kamrák, amelyek nem voltak bevonva Matrigel (Corning Costar, NY, USA). Az inváziós vizsgálati eljárás, a felső kamrát előzetesen bevont Matrigel (BD Bioscience, CA, USA) alkalmazásával a gyártó protokollja szerint, és 1 × 10 5 sejt szérummentes RPMI-1640 tápközeget adtunk a kamrához. Mindkét vizsgálati eljárások, tápközegben, amely 10% FBS-t adtunk az alsó kamrába, mint egy kemoattraktáns. 24 óra eltelte után a kultúra, a kamrák megfestettük 0,5% -os kristályibolya oldattal 15 percig, és elmerül a foszfáttal pufferolt sóoldatban (PBS) 10 percig. A sejteket az alsó kamrába ezt követően megszámoltuk egy invertált mikroszkóp alatt. Az értékeket átlag sejtszám öt random látómezőben (200 ×).}

sebgyógyító assay

sejteket szélesztettünk 6 lyukas lemezeken, és addig tenyésztjük, amíg elérték összefolyása. Sebek karcolt sejtréteg alkalmazásával 20 ni pipetta hegyeket. A lemezeket egyszer mossuk friss táptalajjal hogy eltávolítsuk a nem-tapadó sejteket következő kultúra sejtek 0 vagy 48 óra (közepes nélkül borjú szérum), és lefényképeztük.

xenograft modellben

Négy hét- hím BALB /C nude egereket szereztünk a Zoológiai Intézet, a kínai Tudományos Akadémia a Shanghai. Az állatokat ketrecekben fa chip almot egy hőmérséklet-szabályozott szobában (68-72 ° F), egy 12 órás világosság-sötétség ciklusban, és 45-55% -os relatív páratartalom, és megengedett volt szabad hozzáférést diéta és az ivóvízben. Röviden, SGC-7901 /KD vagy SGC-7901 /NC sejteket tripszinizáltuk és újra szuszpendáljuk PBS-ben (pH = 7,4) történő injektálás céljából egy egér, össztérfogatban 100 ul. A sejtszuszpenziót (1 × 10 ^{6 sejt) injektáltunk a jobb horpasz az egerek. A tumor méretét mértük külsőleg 3 naponként Tolómérővel, és a tumor térfogatát alkalmazásával becsültük az egyenlet: hosszúság (mm) × szélesség 2 (mm) × 0,52. Tudnának minden szenvedését egerek során megfigyelt kísérleti vizsgálatok egereket eutanáziát CO _{2 belégzés 28. napján intraperitoneális injekció, és a tumorok lemértük a kimetszés után. A mintákat folyékony nitrogénben tároljuk QRT-PCR-rel vagy fix 4% -os formaiinban megszerezni, paraffinba ágyazott szakaszok. Minden kísérleti eljárás szerint végzett az Animal Care and Use által elfogadott iránymutatások Taishan Orvostudományi Egyetem Animal Care bizottság. Katalógusa}}

A statisztikai elemzés katalógusa

Az adatok képviselik átlag ± szórás (SD). Statisztikai különbség a két csoportot vizsgáltunk Student t katalógusa próba. Összefüggések a RABEX-5 expresszió gyomorrák szövetek és klinikopatológiai paraméterek elemeztük chi-négyzet vagy Fisher-teszteket. P katalógusa < 0,05 értéket tekintettük szignifikánsnak, és P katalógusa < 0,01 tartották rendkívül jelentős. Katalógusa

Eredmények katalógusa

RABEX-5 expresszió fokozódik gyomorrák szövetek katalógusa

A kifejezés a RABEX-5 katalógusa megvizsgálták a gyomorrák és a szomszédos, nem daganatos szövetekben qRT-PCR-rel. Megfigyeltük szignifikánsan magasabb kifejezése RABEX-5 katalógusa mRNS gyomorrákban szövetekben képest megfelelő, nem daganatos szövetek ( P katalógusa < 0,01, 1A.). Ezeket az eredményeket megerősítették a protein szinten immunhisztokémiai festéssel (ábra. 1B, C, D, E). RABEX-5 expresszióját túlnyomórészt lokalizálódik citoplazmájában rákos sejteket. RABEX-5-ben felülszabályozott 61,8% (68/110) a gyomor rákos betegeknél. Mi a következő kapcsolatát vizsgáltam közötti RABEX-5 a klinikopatológiai jellemzői a gyomorrák. Túlszabályzását RABEX-5 társult tumor mérete ( P katalógusa = 0,035) és a nyirokcsomó-áttétek ( P katalógusa = 0,006), de más klinikopatológiai tényezők, köztük a nem, életkor vagy tumor helyét (1. táblázat).

alulszabályozása RABEX-5 gátolja a gyomorrák sejt proliferáció és kolónia képződését

következő vizsgáltuk expresszióját RABEX-5 gyomor sejtvonalak és az nem rákos sejtvonal , GES-1, Western-blot-analízis. RABEX-5-ben kifejezett összes vizsgált sejtvonalban, és különösen magas volt az SGC-7901 és az NCI-N87 sejtek (2A.). Ahhoz, hogy vizsgálja meg a funkcióit RABEX-5 gyomor rákos sejtvonalak, végeztünk célzott kiütése RABEX-5 a high-expresszáló sejtvonalak, SGC-7901 és NCI-N87. RABEX-5 expresszióját szignifikánsan csökkent SGC-7901 /KD és NCI-N87 /KD sejtekben, mint a kontroll sejtek (ábra. 2b). Először azt vizsgáltuk, a hatás elvesztése RABEX-5 a növekedésre a gyomor rákos sejteket. 5 nap után a kultúra, a növekedési ütem a SGC-7901 /KD és az NCI-N87 /KD sejtek aránya szignifikánsan lassabb, mint a kontroll csoportban (ábra. 2C). Azt is megerősítette ezeket az észrevételeket kolónia kialakulása vizsgálatokban. Colony szám szignifikánsan csökkent az SGC-7901 /KD sejtek és az NCI-N87 /KD sejtek, mint a kontroll sejtek (ábra. 2D), és azt tapasztaltuk, hogy a kolónia mérete is kisebb kísérleti csoportban a kontrollcsoporthoz viszonyítva. Ezek az adatok arra utalnak, hogy downregulációját RABEX-5 elnyomja gyomorrák sejtek szaporodását. Katalógusa

downregulációját RABEX-5 elősegíti az apoptózist gyomorrák sejtek és indukál G0 /G1 sejtciklusmegállás katalógusa

A megfigyelt hatásai RABEX-5 knockdown celluláris növekedés oka lehet, hogy változások a sejtciklus progresszióját és az apoptózis. Ezért hatását vizsgáltuk RABEX-5 hangtompító a sejtciklus és apoptózis in vitro katalógusa, áramlási citométer segítségével. Flow citometriás analízis kimutatta, hogy az arány a sejtek a G0 /G1-fázisban SGC-7901 /KD vagy NCI-N87 /KD sejtek magasabb volt, mint SGC-7901 /NC vagy NCI-N87 /NC kontroll csoportban, míg a százalékos sejtek a G2 /M fázisban szignifikánsan csökkent a kontrollokhoz képest (3A., B). Azt is megfigyelték, jelentős hatást gyakorol az apoptózis a különbözőképpen kezelt csoportokban (3C., D), és alulszabályozása RABEX-5 expressziójának növekedéséhez vezet a gyomor rákos sejtben az apoptózis.

alulszabályozása RABEX-5 gátolja a migráció , invázió és sebgyógyító képességét gyomorrák sejtek

hatásának vizsgálatára RABEX-5 a migrációs és behatolás, mi mellett végzett transzwell migrációs és behatolás vizsgálatokban. Downregulációját RABEX-5 elnyomott sejt migrációt (SGC-7901 /KD-csoport, 121,3 ± 6,1 sejt /területen; SGC-7901 /NC csoport 261,0 ± 10,5 sejt /területen; NCI-N87 /KD-csoport, 108,7 ± 6,1 sejt /területén NCI-N87 /NC csoport 241,7 ± 10,6 sejt /területen; P katalógusa < 0,05) (4A., C). Hasonló eredményeket figyeltek meg transzwell inváziós vizsgálati (SGC-7901 /KD-csoport, 76,3 ± 6,1 sejt /területen; SGC-7901 /NC csoport, 108,7 ± 6,0 sejt /területen; NCI-N87 /KD-csoport, 60,7 ± 6,0 sejt /területén NCI-N87 /NC csoport, 119,0 ± 8,5 sejt /területen; P katalógusa < 0,05) (ábra. 4B, D). katalógusa

hatásának vizsgálatára RABEX-5 a motilitás és a sebgyógyulást is elvégeztük sebgyógyító vizsgálatokban. Megfigyeltük, hogy a távolság a seb szélei SGC-7901 /KD és az NCI-N87 /KD sejtek jelentősen hosszabb, mint az SGC-7901 /NC vagy NCI-N87 /NC sejtek (ábra. 4E). Összhangban ezek a megfigyelések, a VEGF szintje arra downregulált mind az mRNS és fehérje szinten SGC-7901 /KD sejtek (ábra. 4F, G). Katalógusa

elhallgattatása RABEX-5 gátolja a gyomorsav a rák növekedése in vivo Matton

Ennek alapján a in vitro katalógusa fent leírt megállapításokat, azt a következő hatását vizsgálta RABEX-5 hangtompító a tumorok növekedését in vivo katalógusa befecskendezésével SGC7901 /KD vagy SGC7901 /NC sejtek szubkután a jobb horpasz régióiban csupasz egerekben. A tumor méretét ellenőriztük minden 3. napon egy tolómércével. A tumor térfogatát szignifikánsan csökkent egerekben 2 héttel az injektálás után az SGC-7901 /KD sejtekben, mint a kontroll sejtek ( p
< 0,05; ábra. 5A). A tumor térfogatát xenograftok származó SGC-7901 /KD csoport hasonló volt, hogy az SGC-7901 /NC-csoport, mutat jelentős csökkenést tumor térfogatának 4 hét után a tumor sejtek inokulálása ( p
< 0,05, Fig. 5B, C). Ezen túlmenően, a tumorok tömegére származó SGC-7901 /KD sejtek szignifikánsan kisebb volt, mint a kontrollokban ( P
< 0,05; ábra. 5D). Mi következő kifejeződését vizsgáltuk a VEGF transzplantáció tumorminták által QRT-PCR és immunhisztokémia. Ábrán látható. 5E és 5F szintje VEGF mRNS és fehérje is csökkent az SGC-7901 /KD csoportban, mint SGC-7901 /NC vezérlés. Ezek in vivo katalógusa adatok összhangban vannak a in vitro katalógusa megfigyelések és megerősítik, hogy elhallgattatása RABEX-5 gátolja a gyomorsav a rák növekedését és progresszióját modulálja a VEGF transzkripciós aktivitást. Összefoglalva, RABEX-5 játszik onkogén szerepet gyomorrákban.

Discussion

Bár a korábbi tanulmányok kimutatták, hogy RABEX-5 szerepet játszik a tumorigenezisben számos típusú rák [11] - [14], szerepe a gyomorrák még nem vizsgálták. A jelen vizsgálatban azt találtuk, hogy RABEX-5 expressziójának mértéke szignifikánsan felülszabályozott gyomorrák szövetekben képest szomszédos normál szövetben, jelezve, hogy RABEX-5 hozzájárulhat a gyomorrák tumorgenezis. Ezen túlmenően, a kifejezés a RABEX-5 szignifikáns összefüggést mutatott a tumor mérete és nyirokcsomó-metasztázis. Ezzel ellentétben, nem volt szignifikáns korrelációt abnormális RABEX-5 expressziójának és nemük, koruk vagy tumor helyét. Ez az első tanulmány, hogy feltárja a klinikopatológiai jelentősége RABEX-5 expresszió gyomorrákos betegeknél. Katalógusa

A betöltött szerepének vizsgálatára RABEX-5 tumor promóció, mi mellett végzett kiterjedt funkciójának elvesztése elemzés RABEX- 5 nagy kifejező sejtvonalak, SGC-7901 és az NCI-N87. Sikeres gátlása RABEX-5 expresszióját érjük el RNSi technológia, és a leütés igazoltuk Western-blottal. Vizsgálataink során kiderült, hogy a sejtproliferációt szignifikánsan csökkent SGC-7901 /KD és NCI-N87 /KD sejtek és hasonló eredményeket kaptunk a kolónia képződését vizsgálatokban. Fontos megjegyezni, hogy in vivo katalógusa xenograftmodellekben támogatta ezeket in vitro katalógusa észrevételeit. Ez a fenotípus okozhatja RABEX-5 szabályozó specifikus gének és jelátviteli utak, ezáltal befolyásolja a sejtciklus és apoptózis. A transwell vizsgálatokban kevesebb SGC-7901 /KD és NCI-N87 /KD migrált sejteket az alsó kamrába, mint a kontroll sejtekben, ami arra utal, hogy a RABEX-5 fokozza migrációs és behatolás a gyomor rákos sejtekben. A sebgyógyulás is jelentősen visszaestek, elhallgattatása RABEX-5. Ezek az eredmények igazolják, milyen fontos szerepet RABEX-5 gyomorrák sejtek növekedését és metasztázis. Azonban a pontos molekuláris mechanizmus, amellyel RABEX-5 fejt ki ezeket a hatásokat továbbra is ismeretlen, mivel tanulmányok bevonásával RABEX-5 korlátozottak.

Korábbi tanulmányok azt mutatták, hogy RABEX-5 specifikusan kötődni az aktív formája RAB- 5, és ezáltal szabályozza a dokkoló és a fúziós endoszomális membránok, a motilitását endoszómák és intracelluláris jelátviteli [15]. A kifejezés a RAB-5 fehérjék összefüggésbe hozták a fejlesztés különböző rosszindulatú daganatok [16] - [18], és képes elősegíteni tumorsejtek migrációját [19], [20]. Az angiogenezis fontos szerepet játszik a tumorigenezisben [21], és szabályozza számos tényező, mint például a vérlemezke-eredetű növekedési faktor (PDGF), és a vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF) [22]. A PI3K /Akt jelátviteli útvonal lehet szabályozni mindkét VEGF és PDGF. Például, a VEGF fokozza neuroblasztóma proliferációt aktiváló PI3K /Akt jelátviteli [23]. Hasonlóképpen, a tanulmányok kimutatták, hogy a PDGF hatással lehet a migrációra képes sejtek keresztül a PI3K /AKT útvonal [24]. Aktiválása PI3K /Akt szignalizáció képes gátolni sejtek apoptózisát különféle stimulusok által kiváltott [25] - [29], és elősegíti a sejtciklus progresszióját [30], [31], ezzel is elősegítve a sejtek túlélését és proliferációját. Ez az útvonal is részt vesz az angiogenezis [32], [33], és fontos szerepet játszik a tumor kialakulását, invázió és metasztázis [34], [35]. A tanulmány azt mutatja, hogy RABEX-5 hangtompító váltja csökkenését VEGF expresszió. Ezért feltételezzük, hogy RABEX-5 elősegíti a növekedést és metasztatikus képességét gyomorrák sejtek aktiválása révén a VEGF és a jelátviteli utak. Katalógusa

Végeredményben azt bizonyítjuk, hogy RABEX-5 elősegíti proliferáció, kolónia kialakulása, a migráció és invázió, ami arra utal, hogy a RABEX-5 lehet onkogén gyomorrákban, és annak hatásai lehetnek részben közvetíti modulációs VEGF aktiválást. RABEX-5 ezért olyan, új diagnosztikai és prognosztikai marker, és új terápiás célpont a gyomorrák. További erőfeszítéseket kell tenni, hogy tisztázza a jelátviteli mögött meghúzódó biológiai jelenségek. Katalógusa

• PLoS One: A szérum OPN kifejezése azonosítása a gyomorrák és a sorvadásos gyomorhurut és az azt befolyásoló tényezők
• PLoS One: CEACAM6 Elősegíti gyomorkarcinóma invázió és metasztázis indukálva Epithelialis-mesenchymalis átmenet útján PI3K /AKT jelátviteli útvonal