PLoS ONE: histon deacetilaze HDAC4 promovira rak želuca SGC-7901 stanica Progresija preko p21 Repression

Sažetak pregled

karcinoma želuca (GC) je jedan od vodećih uzroka smrti od raka u svijetu. Uloga histon deacetilaze 4 (HDAC4) u određenim tipovima stanica i tkiva je identificiran. Međutim, njegova biološka uloga u razvoju karcinoma želuca i dalje u velikoj mjeri neistražen. Kvantitativna real time PCR (QRT-PCR) i Western blot su korišteni za analizu ekspresije HDAC4 u kliničkim uzorcima. siRNA i prekomjernom ekspresijom HDAC4 i siRNA p21 su se koristili za proučavanje funkcionalne efekte u proliferaciji formaciju kolonija, adenozin 5'-trifosfat (ATP) testa te reaktivni kisikovi spojevi (ROS) generacije, stanični ciklus, stanična apoptoza cijene i autophagy analiza. HDAC4 se regulira prema gore u želučanim tkiva raka i nekoliko staničnih linija raka želuca. Proliferacija, kolonija formiranje sposobnosti i ATP razine su poboljšana u HDAC4 prekomjerne ekspresije SGC-7901 stanice, ali sputan u HDAC4 obaranje SGC-7901 stanice. HDAC4 obaranje dovelo do stanica uhićenja G0 /G1 fazi i izazvao apoptoze i povećanje ROS. Štoviše, HDAC4 nađeno je da inhibiraju ekspresiju p21 kod raka želuca sGC 7901 stanica. p21 obaranje drastično oslabljena stanica inhibicije proliferacije, staničnog ciklusa, promociju staničnoj apoptozi i autophagy up-regulaciji u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanica. pokazali smo da HDAC4 potiče želučane napredovanje stanica raka posredovanu sprečavanjem p21. Naši rezultati pružaju eksperimentalnu osnovu za razumijevanje mehanizma pro-tumorsku HDAC4 kao liječenje raka želuca pregled

Izvor. Kang Z-H, Wang C-Y, Zhang W-L, Zhang J-T, Yuan C-H Zhao P-W, et al. (2014) histon deacetilaze HDAC4 promovira rak želuca SGC-7901 stanica Progresija preko p21 represije. PLoS ONE 9 (6): e98894. doi: 10,1371 /journal.pone.0098894 pregled

Urednik: Wei-Guo Zhu, Peking University Health Science Center, Kina pregled

Primljeno: 12. veljače 2014.; Prihvaćeno: 8. svibnja 2014; Objavljeno: 4. lipnja 2014 pregled

Copyright: © 2014 Kang i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ovo djelo je podržan od strane grant od Health Department of Jilin Province (br 2012z119). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca (GC) je četvrti najčešći zloćudni tumor i drugi vodeći uzrok smrti od raka u svijetu [1]. Azijskih i južnoameričkih zemalja ima veću stopu incidencije GC nego u Sjedinjenim Državama i Zapadnoj Europi [2]. Većina ciljane terapije usredotočiti na vaskularnog endotelnog faktora rasta (VEGF) i receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR) u vezi pokazivanja u naprednom GC. Spojevi protiv novih meta, kao mTOR [3], (receptora faktora rasta hepatocita) c-Met [4] i HDACs, također u fazi ispitivanja. Pregled

histon deacetilaze 4 (HDAC4), koji je klasa IIa HDAC, poznato je da postoje u različite transkripcijske kosupresori kompleksa. HDAC4 je kritična komponenta put odgovora oštećenja DNA koja djeluje kroz 53BP1 [5]. HDAC4 potiskuje ekspresiju inhibitora kinaze p21 ciklin-zavisne (također poznat kao p21WAF1 /CIP1) u humanim stanicama raka kroz SP1 ovisan, p53-ovisnog mehanizma [6]. HDAC4 promiče rast stanica raka debelog crijeva preko represije p21 [7]. Inaktivacija HDAC4 strane malih ometa RNA ili inhibitori HDAC potiskuje smrtnost živčanih stanica. [8] pregled

Uloga HDAC4 u pojedinim stanicama (HeLa (karcinom vrata maternice), U373 (gliom) Ovčar (jajnika), T98G ( gliom) HCT 116 (kolorektalni), NHA (astrocitnih) i SKBR3 (grudi)) i tkiva (moždana kora, testisa, prostate, i epidermalni sloj kože) postaje jasno [9]. Međutim, točan mehanizam HDAC4 u karcinoma želuca nije određen. Stoga je svrha ovog istraživanja bila je najprije ocijeniti razine ekspresije HDAC4 u ljudski rak želuca tkiva i stanične linije. Drugo, učinak HDAC4 na želučani staničnim linijama raka je ispitan pomoću ekspresiju i obaranje. Konačno, istraživali smo da li HDAC4 imao odnos s p21 u želučanom stanica raka. Zajedno, naš cilj je bio pronaći bilo HDAC4 ima biološku ulogu u razvoju GC i da se razjasni pozadina mehanizma. Pregled

Materijali i metode

Uzorci tkiva

Dvadeset i devet u paru primarni želučani tkiva karcinoma i daleki normalni želučani tkiva prikupljeni su od bolesnika (dob: 58.46 ± 9.17 godina) tijekom uobičajenog terapijskog zahvata u Zavodu za gastrointestinalna kirurgija, Prve bolnice Sveučilišta Jilin. Svi uzorci su dobiveni uz informirani pristanak u skladu s Deklaracijom Helsinkija i odobren od strane Etičkog povjerenstva za ljudska Prve bolnice Sveučilišta Jilin i Sveučilišta Jilin, NR Kina. Pismeni informirani pristanak dobiven je od svih sudionika. Pregled

staničnih linija i kultura pregled

Ljudski rak želuca stanične linije SGC-7901, AGS i BGC-823 i normalan epitel linija stanica želuca GES su dobiveni iz American Type Culture Collection (Manassas, VA), i nasade u RPMI 1640 mediju s 10% fetalnog goveđeg seruma u vlažnoj atmosferi s 5% CO _{2 na 37 ° C. pregled}

Stabilno transfektirane stanične linije i privremene transfekcije pregled

HDAC4 fragment pune duljine bio je amplificiran PCR-om s reverznom transkripcijom iz GES stanica pomoću specifičnih primera, kao što je ranije opisano [10] i umetnut u mjesto BamH i i Hind III pcDNA3.1 (+ ) (Clontech, Hampshire, Velika Britanija). PcDNA3.1 (+) - HDAC4 plazmid je verificiran analizom sekvence, kako bi potvrdili da nema mutacija. SGC-7901 stanice su posađene na ploče sa 6 jažica, a transfektirane s pcDNA3.1 (+) - HDAC4 i pcDNA3.1 (+) - vektori, odnosno pomoću Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA), prema uputama uvjetom od proizvođača za 24 sata bez selekcije na antibiotike. Zatim, stanice su uzgajane u mediju koji sadrži 400 ug /ml G418 (Sigma, St. Louis, MO) do svih stanica u ne-transfektirana kontrolnoj kulturi su ubijene. Pregled

sGC 7901 stanice su posađene na ploče sa 6 jažica, a potom transfektirane s ne-ciljanja siRNA ili siRNA usmjereno protiv humanog HDAC4 ili p21 (Santa Cruz) pomoću Lipofectamine 2000 prema uputama proizvođača. Protežu eksperimenti na stanicama 48 ili 72 sati nakon transfekcije. Pregled

Izolacija RNA i kvantitativni PCR u realnom vremenu (QRT-PCR) pregled

Ukupna RNA je izolirana iz tkiva ili stanica pomoću Trizola reagensom ( Invitrogen) i preokrenuti transkripcija provedena je korištenjem Takara RNA PCR kit (Takara, Dalian, Kina) prema uputama proizvođača. Kvantitativni PCR je izvedena pomoću SYBR Green premiks Ex Taq (Takara, Japan) u realnom vremenu PCR sustava (Eppendorf, Njemačka). Relativni odnos ekspresije u svakom paru tumora i ne-tumorskog tkiva izračunat je 2 ^{-ΔΔCT metodom. Pregled}

brojanja kit-8 (CCK-8) Test pregled

proliferacija od SGC-7901 stanica utvrđena je pomoću CCK-8 testa (Beyotime, Jiangsu, Kina) prema protokolu koji je preporučio proizvođač. Ukratko, stanice su uzgojene u pločama s 96 jažica pri koncentraciji od 2000 stanica po jažici. Na 0, 1, 2 i 3 dana nakon transfekcije, test proliferacije stanica je provedena dodatkom 10 ul CCK8 otopine u svaku jažicu, nakon čega slijedi inkubacija na 37 ° C tijekom 2 sata. Apsorbancija je mjerena pomoću ELISA čitača na valnoj duljini od 450 nm.

Colony Test formiranje

Ukratko, HDAC4-s povećanom ekspresijom i -knockdown SGC-7901 stanice su posađene u tri primjerka (1.000 stanica po 60 mm posude za uzgoj) i inkubira na 37 ° C tijekom dva tjedna da se dobije klonova. Stanice su isprane s PBS, fiksirane s 4% paraformaldehidom tijekom 15 minuta i obojeni Kristal violet bojom (0,5% kristalno ljubičastog, 1% paraformaldehidom i 20% metanol u PBS) kroz 30 min. Kolonije na svakoj ploči su izbrojene, te stanično preživljenje je izražena kao postotak broja preživjelih kolonija na kontrolnim pločama. Pregled

staničnog ciklusa analiza pregled

stanice su sakupljene i ponovno suspendirane u blago jednostanične suspenzije fluorescencije aktiviranog staničnog sortiranja (FACS) pufera (PBS koji sadrži 2% FBS). Stanice su isprane s PBS-om i fiksirane u dva puta hladnim 70% etanolom preko noći. Stanice su zatim isprane dva puta s hladnim PBS, resuspendira se u RNaza A i inkubira 30 minuta na 4 ° C. Suspenzija se doda 0,05 mg /ml propidij jodida (Beyotime) nakon čega slijedi inkubacija na 4 ° C tijekom 30 minuta, a analiza korištenjem FACSalibur (BD Biosciences, San Jose, CA). Pregled

Cell apoptoza analiza pregled

Propidiumiodide (PI, 1 ug /ml) i s Annexin V-FITC (1 ug /ml) korišteni su za određivanje stanične apoptoze. Ukratko, stanice su tripsinizirane i inkubirane sa PI i Annexin V-FITC kroz 15 minuta na 37 ° C. Uzorci su detektirane FACS Calibur protočnog citometra. Svi pokusi su provedeni u triplikatu. Pregled

razine intracelularnog adenozin-5'-trifosfata (ATP) testa pregled

Intracelularno ATP razine se testiraju pomoću bioluminiscencija [11]. Ukratko, stanice su lizirane i centrifugirana na oko 15.000 g tijekom 10 minuta na 4 ° C. Supernatanti su zatim pomiješa s ATP ispitivanje mješavine radne otopine (Sigma), a količina svjetla emitiranog odmah se izmjeri s luminometru (Thermo Scientific Luminoskan Ascent, Walthan, MA). Podaci luminiscencije su normalizirani po uzorku proteina količinama (mjereno pomoću testa BCA). Pregled

reaktivni kisikovi spojevi (ROS) Mjerenje pregled

Generiranje intracelularne ROS ispitana je pomoću 6-karboksi-2 ' 7'-diklorfluorescein diacetat (H _{2DCFDA). Ukratko, 5 × 10 ^{4 stanice su stavljene u posude od 60 mm i ostave preko noći. Stanice su obojene s 5 uM H 2DCFDA 30 minuta na 37 ° C, a zatim skupljene i fluorescencija je analizirana s fluorescentnom spektrometru (Flex StationII 384, Molecular Devices) pri 485 nm (ekscitacija) i 538 nm ( emisija). Stanične razine oxidant izraženi su kao relativna DCF fluorescencije po uzorku protein iznose (metoda BCA). U nekim eksperimentima, stanice su tretirane s 10 mm N
-acetylcysteine ​​(NAC), prije analize ROS generacije. Pregled}}

Western blot analiza pregled

Stanice su lizirane u IP pufera za lizu (Beyotime), denaturirani tijekom 10 min na 95 ° C, razdijeljena je sa štrcaljkom inzulina i razdvojeni na SDS /PAGE gelovima. Nakon imunoblot, membrane su bile blokirane i inkubirane s primarnim antitijelima u PBS /0.1% Tween-20 s 5% nemasnim suhim mlijekom. Antitijela protiv HDAC4, p21, LC3, Beclin 1. ATG 7, kaspaze 3, 9, Bcl-2, Bax i anti-p-aktin su sve kupili od Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz). Kemiluminiscentni detekcija je analiziran pomoću kita za detekciju ECL (Pierce, Rockford, IL, USA). Rezultati su analizirani pomoću količina One softvera kako bi se dobio omjer optičke gustoće ciljnog proteina kako bi p-aktin. Pregled

Imunofluorescencija pregled

Stanice su stavljene na pokrovnim, fiksirane s 4% paraformaldehidom (Sigma Aldrich) u trajanju od 10 minuta i permeabilizirane s 0,1% Triton X-100 /PBS. Stanice su blokirane s 1% BSA u trajanju od 1 h, nakon čega su inkubirani preko noći na 4 ° C s anti-LC3 antitijela i zatim stanice su inkubirane s FITC-konjugiranih sekundarnih antitijela (Beyotime) tijekom 1 sata. Jezgre su obojene s 4,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI; Sigma). Fluorescentna slike vizualizira pomoću konfokalnog laserskog skeniranja mikroskopom (Carl Zeiss, Oberkochen, Njemačka). Pregled

Statistička analiza pregled

Svi podaci predstavnik najmanje tri neovisna pokusa. Podaci su prikazani kao prosjek ± s.e.m. Statistička značajnost izračunata jednosmjernom analizom varijance (ANOVA), ili t-test između dvije skupine pomoću GraphPad Prism 5 statistički softver. P
vrijednosti. ≪ 0,05 smatrana značajnom pregled

Rezultati

izraz HDAC4 su up-regulirana u želučanom tkivu raka i staničnim linijama

Prvo, analizirani HDAC4 izraz u dvadeset devet paru raka želuca i susjednih ne-tumorskih tkiva koje QRT-PCR analize i Western blot. Otkrili smo da HDAC4 bila je značajno viša u želučanog karcinoma tkivo (slikama 1A, B i C, ** P izvoznici < 0,01, *** P izvoznici < 0,001). Osim toga, također su analizirani više želučanih stanične linije raka. Uočili smo veću ekspresiju HDAC4 u tri želučane staničnim linijama karcinoma (AGS, BGC-823 i SGC-7901), u usporedbi s normalnim želučani epitel staničnoj liniji (GES) (Slike 1D i E, * P izvoznici <0,05, ** P pregled < 0,01). Dakle, naši rezultati pokazuju da HDAC4 ekspresija bila viša u obje želučanog tkiva raka i staničnim linijama. Pregled

Izraz HDAC4 uspješno je preuzet ili viša u SGC-7901 stanice pregled

pcDNA3.1 (+) vektor ekspresije je korišten za prekomjernu ekspresiju HDAC4 u SGC-7901 stanica kako bi se ispitati njegovu učinkovitost kao regulator rasta. Nakon stabilne transfekcije, izraz razinama HDAC4 mRNA je obilniji u pcDNA3.1 (+) - HDAC4 stanica nego u ne-transfektirane stanice ili negativna kontrola (NC) SGC-7901 stanica (slika 2a, ** * p pregled. < 0,001), što je u skladu s rezultat Western blot analizi (slika 2B) pregled

Da bi se procijenila učinkovitost genom utišavanje humanog HDAC4-siRNA, stupanj HDAC4 ekspresije proteina bila mjereno nakon HDAC4-siRNA transfekciju i perioda inkubacije od 48 sati u ljudski rak želuca stanične linije SGC-7901. Realnom vremenu PCR analiza je pokazala da HDAC4 siRNA infekcija rezultiralo 36,3% obaranje razina HDAC4 mRNA (Slika 2C, *** P pregled < 0,001). Western blot analiza je pokazala da je protein HDAC4 je značajno smanjena (Slika 2D), u skladu s redukcijom mRNA. Uzeti zajedno, ovi podaci predložio da HDAC4 siRNA može značajno potisnuti endogene HDAC4 izraz. Pregled

HDAC4 promovirao povećanje broja stanica i nastanak kolonija pregled

Dalje, ispitan je učinak HDAC4 na rast stanica. proliferacija stanica ispitana je pomoću stanica Brojanje kit-8 (CCK-8) u vremenskim točkama od 24, 48 i 72 sata. Krivulje rasta su pokazali da kada se HDAC4 bila pojačana ekspresija u SGC-7901 stanice, rast stanica je povećan je za 1,5 puta u usporedbi s kontrolnom skupinom od dana 3 (slika 3A * P pregled i 0.05 ∧∧P pregled < 0,01). Pored toga, ispitivanje je formiranje kolonije prikazuju dramatičan porast 2 puta broja kolonija kada SGC-7901 stanice su transfektirane s pcDNA3.1 (+) - HDAC4 odnosu na NC skupinu (Slikama 3B i C, ** p izvoznici < 0,01) pregled

također smo ispitali učinke HDAC4 pod-reguliranja u SGC-7901 stanica.. CCK-8 i analiza koloniziranje analiza je pokazala da je HDAC4 Smanjivanje se potiskuje proliferaciju sposobnosti (Slika 3D, ∧P pregled < 0.05) a koloniziranje broj SGC-7901 stanice (slike 3E i F, ** P pregled < 0,01). Ukratko, ovi podaci sugerirao da HDAC4 može biti promotor rasta SGC-7901 stanica. Pregled

HDAC4 povećana razina ATP i smanjen ROS generacije pregled

Povećanje razine ATP u HDAC4 ekspresijom stanicama opaženo u odnosu na NC SGC-7901 stanica (Slika 3G, * P pregled i 0.05). Osim toga, razina ATP je smanjen u HDAC4 obaranje stanica (Slika 3 H, * P izvoznici < 0,05). Pregled

Zbog unutarstanični ROS generacije mogu biti povezane disfunkcije mitohondrija, mi i dalje ispituje da li HDAC4 može potaknuti ROS generacije u SGC-7901 stanica. Rezultati pokazuju da je značajno smanjenje ROS generacije zabilježeno je u pcDNA3.1 (+) - HDAC4 SGC-7901 stanica u odnosu na NC SGC-7901 stanica (Slika 3G, ∧P izvoznici < 0,05). U međuvremenu, odsutnost HDAC4 snažno aktivira ROS generaciju SGC-7901 stanica (Slika 3H, ** P pregled < 0,01). Blokiranje ROS proizvodnje pomoću antioksidansa NAC značajno inhibiraju ROS generacije (Slika 3 H, ∧P izvoznici < 0,05). To blokiranje ROS generacije predobradom stanica s NKP također značajno spriječiti ATP gubitak u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanica (Slika 3 sata, ∧P izvoznici < 0,05). Pregled

prema dolje -regulated HDAC4 izraz uhićen stanica u G0 /G1 fazi pregled

smanjivanje se od HDAC4 pokazuju povećanje u broju stanica u G0 /G1 fazi (78,74% u odnosu na 49.92% u NC-siRNA skupina). Tu je i odgovarajuće smanjenje broja stanica u S fazi (12,94% u usporedbi s 34,61% u NC-siRNA skupine) (Slika 4A). Rezultati za distribuciju Kvantificirati staničnog ciklusa su pokazala da HDAC4 obaranje značajno inducirane SGC-7901 stanica G0 /G1 uhićenje i S fag inhibicije (Slika 4B, * P izvoznici < 0,05, ** P pregled < 0,01). Dakle, ovi rezultati ukazuju na to da je razina HDAC4 može regulirati progresije staničnog ciklusa. Pregled

regulirano HDAC4 izraz inducira apoptozu i autophagy pregled

Kako bi se ispitalo da li HDAC4 inducirane inhibicije rasta stanica regulirano se odnosi na stanične apoptoze, učinak podregulirani HDAC4 na staničnu apoptozu, procijenjena je protočnom citometrijom pomoću Annexin V-FITC /PI dvostruko bojenje. Opaženo je da apoptoza značajno povećana u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanice, u usporedbi sa NC-siRNA skupine (Slika 4C). Smo potvrdili dalje indukciju apoptoze kroz aktivaciju kaspaze-3 i 9 western blot. Analiza je pokazala da se regulira-HDAC4 povećao cijepanja kaspaze-3 i 9 u usporedbi s NC-siRNA grupi. Ekspresija anti-apoptotički protein Bcl-2, i pro-apoptotički protein Bax također su kvantificirani. Omjer Bax /Bcl-2 je značajno povećana u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanica u usporedbi s NC-siRNA skupine (Slika 5D). Pregled

Da bi istražili da li inducirana autophagy HDAC4 dolje regulirana u SGC-7901 stanice, prvo smo ispitali unutarstanične lokalizacije u LC3 u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanica imunofluorescencije analizom pomoću fluorescentnih protutijela na LC3. Specifični raspodjela interpunkcije endogenog LC3 uočeni su točkaste točaka zelene fluorescencije u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanice, u usporedbi s onom NC-siRNA skupine (Slika 4E), što ukazuje da autophagy inducirana je kao sredstvo za preživljavanje. Subćelijski raspodjela LC3 značajno je inhibirana autophagy specifičnih inhibitora 3-MA u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanica (Slika 4E). Tada su autophagy srodnog proteina Atg7, Beclin 1, a omjer LC3-II LC3-I su analizirani Western blot. Uočili smo da je razina ekspresije Atg7, Beclin 1 i LC3-II svi su značajno povećana u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanica u usporedbi s NC-siRNA skupine (slika 4F). Atg7, Beclin 1 i omjer LC3-II LC3-I značajno je smanjena u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanice koje su tretirane s 3-MA u usporedbi s NC-siRNA skupini (slika 4F). Pregled

regulirano HDAC4 ekspresija potiskivao rast stanica putem p21 doreguliranje

Zbog liječenje ljudskih stanica raka inhibitora HDAC konzistentno dovodi do doreguliranje p21 izraza, inhibitor kinaze ovisne o ciklinu koji je dobro uspostavljena meta inhibitora HDAC [6], [7], [12], tražili smo utvrditi da li pojačanom ekspresijom ili obaranje HDAC4 može utjecati na regulaciju p21 i nagađati mehanizam HDAC4 posredovane promicanje rasta u želučanim stanicama raka.

Kao što je prikazano na slici 5A, gore-regulacija HDAC4 dramatično dovela do smanjene ekspresije p21 proteina. Nasuprot tome, HDAC4 podreguliranje dovelo do povećane ekspresije p21 (slika 5A). Zatim smo ispitali je li p21 obaranje moglo utjecati na rast stanica i apoptozu u SGC-7901 stanica u kojima HDAC4 je izbrisan. SGC-7901 stanice su kotransfektirane sa siRNA HDAC4 i siRNA p21. Razina p21 mRNA je znatno smanjena u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanica nakon p21 obaranje (slika 5B, ** P izvoznici < 0,01, *** P izvoznici < 0,001). p21 obaranje znatno oslabljena stanična proliferacija inhibicija HDAC4-siRNA SGC-7901 stanica (Slika 5C, * P pregled < 0.05, ∧∧ P pregled < 0,01). Razina ATP povećao, ali intracelularni ROS generacija smanjena u siRNA-p21-HDAC4 skupine u odnosu na siRNA HDAC4 skupine (Slika 5D, * P pregled i 0.05 ** P pregled <0,01). p21-dolje reguliranje znatno usporeno G0 /G1 uhićenju i S fag inhibiciju u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanice (slike 5E i F, * P izvoznici < 0,05). Imunobloting pokazali da je količina bcl-2 bila je značajno viša, ali je Bax bio niži u siRNA-p21-HDAC4 stanica (Slika 5 g). Stanična apoptozu značajno se smanjilo u siRNA-p21-HDAC4 SGC-7901 stanice, u usporedbi sa siRNA HDAC4 skupine (Slika 5H). Također je uočeno da je p21 obaranje mogao spasiti povećanu autophagy isprekidanih fluorescentne mrlje (Slika 5i) i ATG 7, Beclin 1 i LC3II proteine ​​izraz u SGC-7901 stanica izazvanih siRNA HDAC4 (Slika 5J). Zajedno, ovi podaci pokazuju da dolje regulacija p21 mogla oponašati učinak HDAC4 prekomjernu ekspresiju i može biti važan posrednik u HDAC4 posredovanog SGC-7901 promicanju rasta stanica. Pregled

Rasprava pregled

Brojne HDAC inhibitore, koji su prikazani da inhibira proliferaciju i inducirati diferencijaciju ili apoptoze u tumorskim stanicama, se ispituje u kliničkim istraživanjima, bilo kao sredstva protiv raka, ili u kombinaciji s drugim tretmanom [13]. Visoka izraz HDAC1 /2 pronađen je u želučanom tkivu karcinoma [14]. U našem istraživanju, pokazali smo da HDAC4 izraz su up-regulirana želučanog raka tkiva i stanične linije in vitro pregled. HDAC4 Reguliranje u SGC-7901 stanice potisnuti proliferaciju stanica i brojeve formiranje kolonija uhitila stanični ciklus i induciraju staničnu apoptozu ovise o aktivaciji kaspaze 3 i 9, koji je u skladu s anti-proliferativni i proapoptotskih učincima inhibitora HDAC u ljudskim staničnim linijama karcinoma [15] i uz ranije objavljen opažanja da HDAC4 dolje regulacije smanjuje klonogenskog opstanak i inducira apoptozu u stanicama HeLa [5]. Proproliferative učinak HDAC4 u želučanim stanicama raka je u skladu s onim što je ranije izvijestili za HDACs klase I, HDAC1, -2 i -3 [16]. Dakle, ciljanje inhibiciju HDAC4 aktivnosti mogu biti potencijalni terapijski pristup u liječenju raka želuca. Pregled

Autophagy je u biti razgradnja proteina sustav vlastitih lizosomi stanice. Razne stresa signala, kao što su hranjivom gladi ili tretiranja s različitim sredstvima protiv raka, potiču proces autophagy [17]. Autophagy općenito karakterizira prisutnost autophagosomes i povećanje cijepanja LC3 [18]. Uloga autophagy u procesu stanične smrti je kontroverzna, ali je potvrdio da preslušavanja između apoptoze i autophagy je bitno u programiranoj staničnoj smrti [19]. U našoj studiji, indukcija autophagy u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanica svjedoči i punktirati uzorkom LC3 imunološkim i akumulacije biokemijskih ukazujućih proteina autophagy (Atg7, Beclin 1 i LC3) Western blot analizom. Autophagy inhibicija inhibitora 3-MA prigušuje autophagy indukcije u HDAC4-siRNA SGC-7901 stanica. Tako, nagađa se da je došlo autophagy štiti SGC-7901 stanice raka apoptozu koja je izazvana HDAC4 obaranje. Pregled

p21 protein, također poznat kao ciklin-ovisne kinaze (CKD) inhibitor 1 regulira G1 faze progresije staničnog ciklusa , p21 je često pogrešno uređena s rakom u čovjeka, a to može djelovati kao supresor tumora ili kao onkogena [20]. Oni s p21-pozitivnih i p53-negativnih karcinoma imaju značajno veće krivulje preživljavanja u želučanog karcinoma [21], dok je gubitak p21 izražavanja uz povećanu otkrivanje p53 je povezana s lošom prognozom i smanjen ukupno preživljenje u rakom želuca [22]. U skladu s rezultatom da p21 protein je dolje regulirano u želučanog tkiva raka [23], primijetili smo da HDAC4 potiče proliferaciju i rast želučani karcinom stanica, posredstvom represije p21 u želučanih stanica raka, te je u pratnji povećanje ATP razine i represija ROS generacije. Dakle, istraživali smo da li p21 bio važan posrednik za HDAC4 posredovanog SGC-7901 promicanju rasta stanica. U ovom istraživanju, HDAC4 obaranje značajno inducira povećanu ekspresiju p21 protein, dok pretjerana ekspresija HDAC4 značajno smanjila ekspresiju p21 proteina u SGC-7901 stanice. Ovi podaci podrazumijevaju da p21 može biti nizvodno meta HDAC4. Funkcionalna analiza je pokazala-naniže p21 mogla oponašati učinak HDAC4 prekomjernom ekspresijom na SGC-7901 promicanju rasta stanica. Uzeti zajedno, ti rezultati sugeriraju da HDAC4 potisnuta regulacija može potaknuti SGC-7901 staničnoj apoptozi po povećati ekspresiju p21. p21 može biti tumor supresor u razvoju i napredovanju raka želuca, ekspresija koja može pomoći u kontroli raznih malignih ponašanja raka želuca. Međutim, potencijalni relevantnosti HDAC4 regulacije p21 izražavanja također treba promatrati u kontekstu da postoji više ključnih čimbenika i putevi koji potencijalno moduliraju ekspresiju p21 kod raka želuca. Pregled

Sve u svemu, naši rezultati su otkrio važnu ulogu za HDAC4 u kontroliranju ljudski rak želuca stanične linije SGC-7901 razvitak putem regulacije p21, što ukazuje da promjena HDAC4 izražavanja i /ili aktivnost može biti važan događaj tijekom raka želuca. U zaključku, ti rezultati prepoznati HDAC4 kao važan regulator širenja raka želuca represijom p21 in vitro
. Pregled

• PLoS ONE: cirkulirajućih stanica tumora (CTCs) Otkrivena pomoću RT-PCR i njegova prognostička uloga u rak želuca: meta-analiza objavljenih književnost
• PLoS ONE: MUG5AC uzvodno Kompleksni Ponavljaju Regija Dužina polimorfizmi povezani su s osjetljivošću i kliničku stadij raka želuca