PLoS One: hiszton Deacetylase HDAC4 Elősegíti gyomorkarcinóma SGC-7901 sejtek Progression keresztül p21 Elnyomás

absztrakt katalógusa

A gyomorrák (GC) az egyik fő oka a daganatos halálok a világon. A szerepe a hiszton-dezacetiláz 4 (HDAC4) speciális sejt és szöveti típusú állapítottak meg. Azonban a biológiai szerepek a fejlesztés a gyomorrák nagyrészt feltáratlan. Kvantitatív valós idejű PCR (QRT-PCR) és Western-blot segítségével elemeztük expressziójának HDAC4 a klinikai mintákban. siRNS és overexpressziója HDAC4 és siRNS p21 arra használni, hogy tanulmányozza funkcionális hatások egy proliferáció, egy kolónia képződését, egy adenozin-5'-trifoszfát (ATP) vizsgálati eljárás és a reaktív oxigén (ROS) generáció, a sejtciklus, sejt apoptózis árak, és autofágiát vizsgálatokban. HDAC4 volt, akár szabályozott gyomorrákban szövetek és több gyomorrák sejtvonalakon. A proliferáció, kolónia kialakulása képesség és ATP szint fokoztuk HDAC4 túltermelése SGC-7901 sejtek, hanem gátolta HDAC4 knockdown SGC-7901 sejtek. HDAC4 knockdown vezetett G0 /G1 fázisban sejt letartóztatás és apoptózist és ROS növekedése. Sőt, HDAC4 találtuk, hogy gátolják a p21-expresszió gyomorrák SGC-7901 sejteket. p21 knockdown drámaian csökkentette proliferációt gátló, sejtciklusmegállás, sejt apoptózis promóciós és autofágia up-szabályozás HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek. Kimutattuk, hogy HDAC4 elősegíti a gyomor rákos sejt progresszió által közvetített elnyomását p21. Eredményeink kísérleti alapon megértéséhez a pro-tumor mechanizmusa HDAC4 mint kezelés a gyomorrák.

bevezető hivatkozás: Kang Z-H, Wang C-Y, Zhang W-L, Zhang J-T, Yuan C-H, Zhao P-W, et al. (2014) hiszton Deacetylase HDAC4 Elősegíti gyomorkarcinóma SGC-7901 sejtek Progression keresztül p21 elnyomás. PLoS ONE 9 (6): e98894. doi: 10,1371 /journal.pone.0098894 katalógusa

Szerkesztő: Wei-Guo Zhu, Peking University Health Science Center, China katalógusa

Beérkezett: február 12, 2014; Elfogadva: május 8, 2014; Megjelent: június 4, 2014 katalógusa

Copyright: © 2014 Kang és mtsai. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka támogatott a támogatás a egészségügyi Minisztérium Jilin tartomány (No. 2012z119). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák (GC) a negyedik leggyakoribb rosszindulatú daganat, és a második vezető daganatos halálok világszerte. [1] Ázsiai és dél-amerikai országokban magasabb előfordulási aránya GC, mint az Egyesült Államokban és Nyugat-Európában. [2] A legtöbb célzott terápiák összpontosítani vaszkuláris endoteliális növekedési faktor (VEGF) és az epidermális növekedési faktor receptor (EGFR) kapcsolatos indikációk fejlett GC. Vegyületek ellen újszerű célok, mint például az mTOR, [3] a c-Met (hepatocita növekedési faktor receptor) [4], és a HDAC-k, szintén vizsgálat alatt.

hiszton dezacetiláz 4 (HDAC4), amely egy osztály IIa HDAC ismert, hogy létezik külön transzkripciós korepresszor komplexek. HDAC4 kritikus eleme a DNS-károsodás válasz nyomvonal, amely révén 53BP1 [5]. HDAC4 represszálja a kifejezés a ciklin-függő kináz inhibitor p21 (más néven p21WAF1 /Cip1) a humán rákos sejtek keresztül egy SP1-függő, a p53-független mechanizmus [6]. HDAC4 elősegíti a növekedést a vastagbél rákos sejtek keresztül elnyomása P21 [7]. Inaktiválása HDAC4 kis interferáló RNS-t vagy HDAC-inhibitorok elnyomja a neuronális sejthalál [8].

A szerepe HDAC4 a specifikus sejtek (HeLa (méhnyakrák), U373 (glióma), OVCAR (petefészek), T98G ( glióma), HCT116 (kolorektális), NHA (asztrocita) és SKBR3 (emlő)) és a szövetek (agykéreg, here, prosztata, és az epidermális réteg a bőr) egyre egyértelmű [9]. Azonban a pontos mechanizmusa HDAC4 a gyomorrák még nem határozták meg. Ezért a tanulmány célja az volt, az első, hogy értékelje az expressziós szintek HDAC4 humán gyomorrák szövetekben és sejtvonalakban. Másodszor, a hatás a HDAC4 a gyomor rákos sejtvonalak segítségével vizsgáltuk túltermelése és akciós. Végül megvizsgáltuk, hogy HDAC4 kapcsolata volt p21 gyomorrákban sejtekben. Együtt volt a célunk, hogy megtalálja-e HDAC4 van biológiai szerepe GC fejlesztés és megvilágítására szolgáló mechanizmust. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

A szövetminták

Huszonkilenc párosított primer gyomor carcinoma szövetekben és a távoli normális gyomor szöveteket gyűjtöttünk beteg (életkor: 58,46 ± 9,17 év) rutin terápiás műtét Tanszék gasztrointesztinális sebészetben, az első Kórház Jilin Egyetem. Minden mintát kapott tájékoztatáson alapuló beleegyezése szerint a Helsinki Nyilatkozattal és jóváhagyta az emberi etikai bizottság az első Kórház Jilin Egyetem és Jilin University, Kína. Írásos beleegyezését adta a minden résztvevő számára. Katalógusa

Sejtvonalak és tenyésztési katalógusa

Az emberi gyomor rákos sejtvonalak SGC-7901, AGS, és BGC-823 és a normál gyomornyálkahártya sejtvonal GES voltak az American Type Culture Collection (Manassas, VA), és RPMI 1640 tápközegben 10% magzati szarvasmarha szérumot, nedvesített atmoszférában, 5% CO _{2 37 ° C-on.}

stabilan transzfektált sejtvonal és tranziens transzfekciós

a teljes hosszúságú HDAC4 fragmenst amplifikáltunk reverz transzkripciós PCR-GES sejtekből a specifikus primerek a korábban leírt [10], és beiktatjuk a BamHI és HindlII helyei pcDNA3.1 (+ ) (Clontech, Hampshire, Egyesült Királyság). A pcDNA3.1 (+) - HDAC4 plazmidot igazoltuk szekvencia analízis, hogy erősítse hiányában mutációk. SGC-7901 sejteket szélesztettünk 6 lyukas lemezeken, és transzfektáltuk a pcDNA3.1 (+) - HDAC4 és pcDNA3.1 (+) - vektorok, illetve Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) utasításai szerint, feltéve, a gyártó által 24 órán antibiotikum nélkül kiválasztása. Ezután a sejteket tartalmazó tápközegben 400 ng /ml G418-at (Sigma, St. Louis, MO), amíg az összes sejt a nem-transzfektált kontroll kultúra megölték.

SGC-7901 sejteket oltottunk 6-lyukú lemezekre, majd transzfektált nem-célzott siRNS vagy siRNS ellen irányuló humán HDAC4 vagy P21 (santa Cruz) Lipofectamine 2000 utasításainak megfelelően a gyártó által biztosított. Stretch kísérleteket végeztünk olyan sejteken, 48 vagy 72 órával a transzfekció.

RNS-izolálás és kvantitatív valós idejű PCR (QRT-PCR)

Teljes RNS-t izoláltunk a szövetekben vagy sejtekben által TRIzol reagenssel ( Invitrogen), és a fordított átiratokat végeztük a Takara RNS PCR készlet (Takara, Dalian, Kína) a gyártó utasításai szerint. Kvantitatív PCR-t végeztünk egy SYBR Green Premix Ex Taq (Takara, Japán), egy valós idejű PCR-rendszer (Eppendorf, Németország). A relatív expressziós arány minden összekapcsolt tumor és a nem tumoros szövetet által kiszámított 2 ^{-ΔΔCT módszerrel.}

Sejtszámlálás kit-8 (CCK-8) assay

proliferációk az SGC-7901 sejteket használva értékeljük CCK-8 vizsgálatban (Beyotime, Jiangsu, Kína) protokoll szerint a gyártó által ajánlott. Röviden, a sejteket egy 96-lyukú lemez koncentrációban 2000 sejt per lyuk. 0, 1, 2 és 3 nappal a transzfekció után, a sejt proliferációs vizsgálati végeztük hozzáadásával 10 ul CCK8 oldattal minden lyukban, ezt követi az inkubálás 37 ° C-on 2 órán át. Az abszorbanciát mértük ELISA-leolvasóval hullámhosszon 450 nm-es.

telepképző assay

Röviden, a HDAC4 overexpresszáló és -knockdown SGC-7901 sejteket oltottunk három párhuzamosban (1.000 sejt per 60 mm-es tenyésztő edénybe), és inkubáljuk 37 ° C-on két hétig alkotnak klónokat. A sejteket PBS-sel mostuk, fixáltuk 4% paraformaldehiddel 15 percig, és megfestettük kristályibolyával (0,5% kristályibolya, 1% paraformaldehidet és 20% metanolt tartalmazó PBS-ben) 30 percig. A telepeket az egyes lemezeken megszámoltuk, és a sejtek túlélését százalékában kifejezett számának túlélő telepeket a kontroll lemezeken.

cell cycle analysis

A sejteket összegyűjtöttük, és óvatosan reszuszpendáljuk figyelembe egysejtes szuszpenzió Fluorescence Activated Cell (FACS) puffer (PBS 2% FBS). A sejteket PBS-sel mostuk kétszer és rögzített hideg 70% -os etanollal egy éjszakán át. A sejteket ezután kétszer mostuk hideg PBS-ben, újra szuszpendáljuk RNáz A-oldatot és 30 percig inkubáltuk 4 ° C-on. A szuszpenziót hozzáadjuk 0,05 mg /ml propidium-jodid (Beyotime) majd inkubáltuk 4 ° C-on 30 percig, és analízis FACSCalibur (BD Biosciences, San Jose, CA).

sejt apoptózis assay katalógusa

Propidiumiodide (PI, 1 ng /ml) és az Annexin V-FITC (1 ng /ml) használtunk meghatározására sejt apoptózist. Röviden, a sejteket tripszinnel kezeltük, és inkubáltuk a PI és Annexin V-FITC-on 15 percig 37 ° C-on. A mintákat alkalmazásával detektáltuk FACS Calibur áramlási citométeren. Minden kísérletet három párhuzamosban végeztük.

Az intracelluláris adenozin-5'-trifoszfát (ATP) szint assay

Az intracelluláris ATP-szinteket alkalmazásával vizsgáltuk biolumineszcencia [11]. Röviden, a sejteket lizáltuk és centrifugáltuk 15.000 g-vel 10 percig 4 ° C-on. A felülúszókat ezután összekeverjük egy ATP-teszt-elegyet munkaoldatot (Sigma), és az összeget a kibocsátott fény azonnal mérjük luminométerben (Thermo Scientific LuminoSkan Ascent, Walthan, MA). A lumineszcencia adatokat normalizáltuk a minta fehérje mennyiségét (mérése egy BCA vizsgálati eljárás).

A reaktív oxigén (ROS) mérés

Generation intracelluláris ROS alkalmazásával vizsgáltuk 6-karboxi-2 ' , 7'-diklór-fluoreszcein-diacetát (H _{2DCFDA). Röviden, 5 × 10 ^{4 sejteket szélesztünk 60 mm-es edények és éjszakán át hagytuk letapadni. A sejteket megfestettük 5 nmol H 2DCFDA 30 percen át 37 ° C-on, majd összegyűjtjük, és a fluoreszcencia analizáltuk egy fluoreszcens spektrométer (Flex StationII 384, Molecular Devices) 485 nm-en (gerjesztés) és 538 nm ( kibocsátás). Cellular oxidálószer szinten fejeztük relatív DCF fluoreszcens mintánként fehérjetartalma (BCA-módszer). Néhány kísérletben a sejteket előkezeltük 10 mM N
-acetylcysteine ​​(NAC), mielőtt az elemzés a ROS-termelés.}}

Western-blot-analízis

A sejteket lizáltuk IP lízis puffert (Beyotime), denaturált 10 percen át 95 ° C-on, nyírt az inzulin fecskendővel, és megoldódott SDS /PAGE gélen. Miután immunoblot a membránokat blokkoltuk, és inkubáltuk primer antitestekkel PBS /0,1% Tween-20, 5% -os zsírmentes tejjel. Ellen irányuló antitestek HDAC4, P21, LC3, Beclin 1 ATG 7, kaszpáz-3, 9, Bcl-2, Bax és anti-β-aktin vásároltuk a Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz). Kemilumineszcens detektálást alkalmazásával vizsgáltuk ECL detektáló reagenskészlet (Pierce, Rockford, IL, USA). Az eredményeket analizáltuk Quantity One szoftver beszerzése optikai sűrűség aránya célfehérje a p-aktin.

Immunfluoreszcens

A sejteket fedőlemezen, fixáltuk 4% paraformaldehiddel (Sigma Aldrich) 10 percig és permeabilizált 0,1% Triton X-100 /PBS-ben. A sejteket blokkoltuk 1% BSA-val 1 órán, majd az inkubálást egy éjszakán át 4 ° C-on az anti-LC3 ellenanyag, és azután a sejteket FITC-konjugált másodlagos antitesttel (Beyotime) 1 órán át. A sejtmagokat festettük 4,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI, Sigma). A fluoreszcens képalkotó tettük láthatóvá segítségével konfokális lézer pásztázó mikroszkópot (Carl Zeiss, Oberkochen, Németország).

Statisztikai analízis

Minden adatok reprezentatívak legalább három független kísérlet során. Az adatokat az átlag ± S.E.M. A statisztikai szignifikanciát által kiszámított egyutas varianciaanalízissel (ANOVA), vagy Student-féle t-próbával a két csoport közötti GraphPad Prism 5 statisztikai szoftver. P katalógusa értékek < 0,05 értéket tekintettük szignifikánsnak. Katalógusa

Eredmények katalógusa

HDAC4 kifejezés volt akár szabályozott gyomorrákban szövetek és sejtvonalak

Először is elemzett HDAC4 expressziót huszonkilenc párosított gyomorrák és a szomszédos, nem daganatos szövetekben qRT-PCR analízis és western blot. Azt találtuk, hogy HDAC4 szignifikánsan felfelé szabályozott a gyomor rákos szövetekből (1A, B és C, ** P katalógusa < 0,01 *** P katalógusa < 0,001). Emellett több gyomor rákos sejtvonalak is elemezték. Megfigyeltük magasabb kifejezése HDAC4 három gyomor rákos sejtvonalak (AGS, BGC-823, SGC-7901), míg a normál gyomornyálkahártya sejtvonal (GES) (ábrák 1D és E, * P <katalógusa 0,05, ** P katalógusa < 0,01). Ezért mi eredmények igazolták, hogy HDAC4 kifejezés volt akár szabályozott, mind a gyomorrák szövetek és sejtvonalak. Katalógusa

A HDAC4 kifejezés sikeresen le- vagy felfelé szabályozzák SGC-7901 sejtek katalógusa

A pcDNA3.1 (+) expressziós vektort használtuk túltermelése HDAC4 az SGC-7901 sejtek vizsgálata érdekében, hatékonyan növekedést szabályozó. Miután kialakult a stabil transzfekció, a kifejezés a HDAC4 mRNS szintek több volt, bőséges a pcDNA3.1 (+) - HDAC4 sejtekben, mint a nem-transzfektált sejtek vagy negatív kontroll (NC) SGC-7901 sejtek (2A ábra, ** * p
< 0,001), ami összhangban volt eredményeként Western-blot-analízis (2b ábra).

értékeli a gén-silencing hatásosságát humán HDAC4-siRNS, a mértéke HDAC4 fehérje expresszió volt után mért HDAC4-siRNS transzfekció és 48 órás inkubációs idő humán gyomorrák sejtvonal SGC-7901. Real-time PCR analízis kimutatta, hogy HDAC4 siRNS fertőzés eredményeként 36,3% kiütése HDAC4 mRNS szintek (2C ábra, *** P katalógusa < 0,001). Western-blot analízis azt mutatta, hogy a HDAC4 fehérje szignifikánsan csökkent (2D, ábra), amely összhangban áll a mRNS csökkentésére. Együttesen ezek az adatok arra utalnak, hogy HDAC4 siRNS jelentősen elnyomja az endogén HDAC4 kifejezést. Katalógusa

HDAC4 támogatni sejtburjánzás és telepek kialakulása katalógusa

Ezután megvizsgáltuk a hatását HDAC4 a sejtek növekedését. A sejtproliferációt alkalmazásával vizsgáltuk sejtszámláló készlet-8 (CCK-8) idején pontok 24, 48 és 72 órán át. A növekedési görbék azt mutatták, hogy amikor HDAC4 volt túltermelése SGC-7901 sejtek a sejt növekedést nőtt 1,5-szeres összehasonlítva kontrollcsoporttal a 3. napon (3A, * p
< 0,05, ∧∧P katalógusa < 0,01). Ezen túlmenően, a telepképző assay megjelenített drámai növekedés 2 szeresére kolónia számát, amikor SGC-7901 sejteket transzfektáltunk a pcDNA3.1 (+) - HDAC4 viszonyítva az NC-csoport (3B és C, ** P katalógusa < 0,01). katalógusa

Azt is megvizsgáltuk a hatásait HDAC4 leszabályozza az SGC-7901 sejtek. A CCK-8 próba és telepek kialakulása vizsgálat azt mutatja, hogy a HDAC4 leszabályozza elnyomta a proliferációs képessége (ábra 3D, ∧P katalógusa < 0,05), és a telepek kialakulása számát SGC-7901 sejtek (ábra 3E és F, ** P katalógusa < 0,01). Összefoglalva, ezek az adatok azt javasolta, hogy HDAC4 lehet a növekedésserkentő az SGC-7901 sejtek. Katalógusa

HDAC4 megnövekedett ATP szint és csökkent ROS katalógusa

A növekedés az ATP szint HDAC4 overexpresszáló sejtek megfigyelt összehasonlítva az NC SGC-7901 sejtek (ábra 3G, * p
< 0,05). Sőt, az ATP szint csökkent HDAC4 knockdown sejtek (ábra 3H, * P katalógusa < 0,05). Katalógusa

Mivel ROS termelés kapcsolatban lehet a mitokondriális diszfunkció, mi is vizsgálta, hogy HDAC4 ösztönözheti a ROS-termelés SGC-7901 sejtek. Az eredmények azt mutatják, hogy jelentősen csökken a ROS-termelés volt megfigyelhető a pcDNA3.1 (+) - HDAC4 SGC-7901 sejtek összehasonlítva NC SGC-7901 sejtek (ábra 3G, ∧P
< 0,05). Eközben elhallgattatása HDAC4 erőteljesen aktivált ROS termelés SGC-7901 sejtek (ábra 3H, ** P katalógusa < 0,01). Blokkolása ROS termelés az antioxidáns NAC jelentősen gátolt ROS (ábra 3H, ∧P katalógusa < 0,05). Ez blokkolását ROS előkezelés a sejtek NAC is jelentős mértékben megelőzhető ATP veszteség HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek (ábra 3H, ∧P katalógusa < 0,05). Katalógusa

A lefelé -regulated HDAC4 expresszió letartóztatott sejtek G0 /G1 fázisban

a down-regulációja HDAC4 mutatott egyértelmű arányának növekedése a sejtek a G0 /G1-fázisban (78,74%, szemben a 49,92% az NC-siRNS csoport). Volt még egy megfelelő számának csökkenése a sejtek az S-fázisban (12,94%, szemben a 34.61% az NC-siRNS-csoport) (4a ábra). A mennyiségi sejtciklus eloszlást mutattak, hogy HDAC4 knockdown jelentősen indukált SGC-7901 sejtek G0 /G1 és az S fág gátlás (4B ábra, * P katalógusa < 0,05, ** P katalógusa < 0,01). Ezért ezek az eredmények arra utalnak, hogy a HDAC4 szinten lehetne szabályozni a sejtciklus előrehaladását. Katalógusa

A leszabályozott HDAC4 kifejezés apoptózist és autofágia katalógusa

Annak vizsgálata, hogy a leszabályozott HDAC4 indukálta sejt növekedésének gátlását volt kapcsolatos sejt apoptózis, a hatás a alulszabályozott HDAC4 sejt apoptózist értékeltük áramlási citometriával Annexin V-FITC /PI kettős festéssel. Azt figyeltük meg, hogy az apoptózis fokozott markánsan HDAC4-siRNS SGC-7901 sejteket, mint az NC-siRNS-csoport (4C). Mi tovább megerősítette az apoptózis indukciója az aktiválási kaszpáz-3 és 9 Western-blottal. Az elemzés feltárta, hogy alulszabályozott HDAC4 megnövekedett hasítását kaszpázok-3 és 9 képest NC-siRNS-csoport. A kifejezés az antiapoptotikus protein Bcl-2 és a pro-apoptotikus fehérje Bax is mennyiségileg. A Bax /Bcl-2 arány jelentősen emelkedett HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek képest az NC-siRNS-csoport (5D ábra). Katalógusa

Annak vizsgálatára, hogy lefelé szabályozni HDAC4 indukált autofágia SGC-7901 sejtek, először megvizsgálta a sejten belüli lokalizációja LC3 a HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek immunfluoreszcens analízis fluoreszcens antitestekkel LC3. A konkrét központozás eloszlása ​​endogén LC3 észleltek, mint punctata pontok a zöld fluoreszcencia HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek összehasonlítva a NC-siRNS-csoport (ábra 4E), jelezve, hogy autofágiát indukálódott, mint egy olyan túlélést. A sejten belüli eloszlása ​​LC3 szignifikáns mértékben gátolta az autofágia-specifikus inhibitor 3-MA HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek (ábra 4E). Ezután a autofágia kapcsolatos fehérjék Atg7, Beclin 1 és az arány a LC3-II LC3-I analizáltuk Western-blottal. Megfigyeltük, hogy az expressziós szintek a Atg7, Beclin 1 és LC3-II mind szignifikánsan emelkedett HDAC4-siRNS SGC-7901 sejteket, mint az NC-siRNS-csoport (4F). A Atg7, Beclin 1 és az arány a LC3-II LC3-I jelentősen csökkent HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek kezeltünk 3-MA összehasonlítva az NC-siRNS-csoport (4F).

a alulszabályozott HDAC4 expresszió gátolta a sejtnövekedést keresztül P21 up-regulációját

mert a kezelés a humán rákos sejtek HDAC-inhibitorokkal következetesen vezet up-regulációját p21 kifejezés, egy ciklinfüggő kináz inhibitor, amely egy jól megalapozott cél HDAC inhibitorok [6], [7], [12], igyekeztünk meghatározni, hogy túltermelése vagy kiütése HDAC4 befolyásolhatja p21 szabályozása és spekulálni a mechanizmus HDAC4 közvetített növekedés elősegítésére gyomor rákos sejteket.

Amint azt az 5A ábra az up-regulációját HDAC4 drámaian vezetett, hogy a csökkent p21 fehérje expresszióját. Ezzel szemben, a HDAC4 leszabályozását vezetett, hogy a fokozott p21 expressziós (5A ábra). Ezután megvizsgálták, hogy a p21 kiütése befolyásolhatja a sejtek növekedését és apoptózis SGC-7901 sejtek, amelyekben HDAC4 törölve lett. Az SGC-7901 sejteket együtt transzfektáltunk siRNS HDAC4 és siRNS P21. A p21 mRNS szintje szignifikánsan csökkent HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek után p21 kiütése (5B, ** P katalógusa < 0,01 *** P katalógusa < 0,001). P21 knockdown drámaian attenuált sejtproliferáció gátlását HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek (5C, * p
< 0,05, ∧∧ P
< 0,01). Az ATP szint megemelkedett, de ROS-termelés csökkent siRNS-p21-HDAC4 csoportban, mint az siRNS HDAC4 csoport (5D ábra, * P katalógusa < 0,05, ** P <katalógusa 0,01). p21 leszabályozza szignifikánsan csökkenti G0 /G1 és az S fág gátlást HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek (ábra 5E és F * P katalógusa < 0,05). Immunoblot azt mutatta, hogy az összeget a Bcl-2 szignifikánsan magasabb volt, de Bax alacsonyabb volt a siRNS-P21-HDAC4 sejtek (ábra 5G). Az apoptózis jelentősen csökkent siRNS-p21-HDAC4 SGC-7901 sejtek összehasonlítva a siRNS HDAC4 csoport (ábra 5H). Azt is megfigyelték, hogy a p21 leütés lehet megmenteni a megnövekedett autofágia szakították fluoreszkáló foltok (ábra 5l) és az ATG 7 Beclin 1 és LC3II fehérjék expressziója SGC-7901 sejtek által indukált siRNS HDAC4 (ábra 5J). Együttesen ezek az adatok azt mutatták, hogy leszabályozza p21 Komputertomográfia hatását HDAC4 túltermelése, és lehet, fontos mediátor HDAC4 közvetített SGC-7901 sejtek növekedésének elősegítése. Katalógusa

Vita katalógusa

Számos HDAC inhibitorok, amelyekről kimutatták, hogy gátolják a proliferációt és differenciálódást serkentő vagy apoptózist tumorsejtekben, jelenleg klinikai vizsgálatokat akár rákellenes szerek, vagy együtt más kezelési [13]. Magas expressziója HDAC1 /2 találtak gyomorkarcinóma szövetekben [14]. Tanulmányunkban bemutattuk, hogy a HDAC4 kifejezés volt akár szabályozott gyomorrákban szövetek és sejtvonalak in vitro katalógusa. HDAC4 down-szabályozás SGC-7901 sejtek elnyomta a sejtproliferáció és a kolónia képződését számok, letartóztatták sejtciklus és indukált apoptózis függ a kaszpázok aktiválása a 3. és a 9., ami összhangban van az anti-proliferatív és proapoptotikus hatásai HDAC inhibitorok humán rákos sejtvonalak [15], valamint a korábban közölt megfigyelés, hogy HDAC4 down-regulációja csökkenti klonogén túlélés és indukál apoptózist HeLa sejtekben [5]. A proproliferative hatása HDAC4 a gyomor rákos sejtek összhangban van arról korábban az I. osztályú HDAC enzimek, HDAC1, -2 és -3 [16]. Így, célzott gátlását HDAC4 aktivitás lehet egy potenciális terápiás megközelítést kezelésére gyomorrák.

autofágia lényegében egy fehérje lebomlását rendszerét a sejt saját lizoszómákban. A különböző stressz jelek, mint például a tápanyag éhezés vagy a kezelés különböző rákellenes szerek, serkentik az autofágia folyamat [17]. Autofágia általában jellemzi a jelenléte autophagosomes és nőtt a hasítását LC3 [18]. A szerepe autofágia a folyamat a sejthalál ellentmondásos, de megerősítést nyert, hogy áthallás az apoptózis és autofágia nélkülözhetetlen a programozott sejthalál [19]. Tanulmányunkban az indukciós Az autofágia HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek azt a központozás mintázata LC3 immunfestés és a felhalmozási biokémiai fémjelzi fehérjék autofágia (Atg7, Beclin 1 és LC3) western blot analízis. Az autofágia gátlás inhibitor 3-MA csökkentette az autofágia indukció HDAC4-siRNS SGC-7901 sejtek. Így gondolták autofágiát történt védelmet nyújthat SGC-7901 a rákos sejtek által indukált apoptózis HDAC4 knockdown.

P21 fehérjét, vagy más néven a ciklin-függő kináz (CKD) inhibitor 1, szabályozza a G1 fázis progressziójának a sejtciklus . P21 gyakran MIS-szabályozott humán rákok, és működhet, mint a tumor szuppresszor vagy mint egy onkogént [20]. Azok a p21-pozitív és p53-negatív daganatok szignifikánsan magasabb túlélési görbék gyomor karcinóma [21], míg a veszteség a p21 expressziós együtt fokozott p53 kimutatására társul rossz prognózissal és csökkent a teljes túlélés a gyomorrák [22]. Összhangban azzal az eredménnyel, hogy a p21-fehérje lefelé szabályozni a gyomorrák szövetekben [23], azt tapasztaltuk, hogy HDAC4 elősegíti a gyomor rákos sejtek szaporodását és növekedését, közvetíti az elnyomás p21 a gyomor rákos sejtek, és kíséri növekedése ATP szint és az elnyomás ROS-termelés. Ezért megvizsgálta, hogy a p21 egy fontos közvetítő HDAC4 közvetített SGC-7901 sejt növekedés elősegítésére. Ebben a vizsgálatban, HDAC4 kiütése jelentősen indukált fokozott expressziója a p21 fehérje, míg HDAC4 overexpresszió szignifikánsan csökkent expresszióját P21 fehérje SGC-7901 sejteket. Ezek az adatok azt sugallta, hogy a p21 lehet egy downstream célpontja HDAC4. Funkcionális vizsgálatok azt mutatták, leszabályozza p21 Komputertomográfia hatását HDAC4 fokozott expressziója SGC-7901 sejt növekedés elősegítésére. Összefoglalva, ezek az eredmények arra utalnak, hogy a HDAC4 down-regulációja segítheti SGC-7901 sejt apoptózis által fel-szabályozó p21 expressziót. P21 lehet egy tumor szupresszor a fejlesztés és progressziójában gyomorrák, amelynek expressziója segíthet vezérlésére a különféle rosszindulatú viselkedések gyomorrák. Ugyanakkor a potenciális relevanciáját HDAC4 szabályozása p21 expresszió is annak kell tekinteni, abban a kontextusban, van több kulcsfontosságú tényezők és pályák, amelyek potenciálisan módosítják a kifejezés a p21 gyomorrákban. Katalógusa

Mindezzel együtt, az eredményeknek kiderült, hogy fontos szerepet HDAC4 szabályozásában humán gyomorrák sejtvonal SGC-7901 fejlesztés keresztül szabályozás a p21, ami arra utal, hogy a megváltoztatása HDAC4 expressziójának és /vagy aktivitásának lehet egy fontos esemény során gyomorrák. Összefoglalva, ezek a megállapítások azonosítani HDAC4 fontos szabályozója elterjedése gyomorrák keresztül elnyomás p21 in vitro katalógusa. Katalógusa

• PLoS One: A keringő daganatsejtek (CTC) által észlelt RT-PCR és prognosztikai szerepe a gyomorrák: meta-analízise Megjelent Literature
• PLoS One: MUC5AC Upstream Complex ismétlődő régió hossza polimorfizmus társul érzékenységi és klinikai stádium Gyomor Cancer