Gastric Kriibs (GC) ass eent vun de bedeitendste Ursaachen vun Kriibs Doud vun der Welt. D'Roll vun histone deacetylase 4 (HDAC4) an spezifesch Zell an Otemschwieregkeeten Zorte huet identifizéiert ginn. Allerdéngs bleiwen seng biologesch Rollen an der Entwécklung vun gastric Kriibs schiddene onerfuerschten. Chemeschen real Zäit Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer) a westlech blot sech benotzt den Ausdrock vun HDAC4 an de Medeziner Echantillon ze analyséieren. siRNA an overexpression vun HDAC4 an siRNA p21 sech benotzt funktionell Effekter vun engem Prolifératioun ze studéieren, eng Kolonie Équipe, e adenosine 5'-Adenosintriphosphat (ATP) assay a reaktiv Sauerstoff Aarten (Ros) Generatioun, Zell Zyklus, Zell apoptosis rates, an autophagy assays. HDAC4 war bis-reglementéiert gastric Kriibs Stoffer an e puer gastric Kriibs Zell Linnen. Der Prolifératioun, Kolonie Opstellung Fähegkeet an ATP Niveau waren an HDAC4 overexpression SGC-7901 Zellen coopération, mä zu HDAC4 knockdown SGC-7901 Zellen inhibited. HDAC4 knockdown Nerve G0 /G1 Phase Zell verhaft an ëmmer apoptosis an Ros Erhéijung. Ausserdeem, war HDAC4 fonnt ze p21 Ausdrock vun gastric Kriibs SGC-7901 Zellen inhibit. p21 knockdown dramatesch Zell Prolifératioun inhibition, Zell Zyklus verhaft, Zell apoptosis Promotioun an autophagy up-Regulatioun vun HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen attenuated. Mir bewisen datt HDAC4 gastric Kriibs Zell Werdegang ënnerstëtzt duerch d'Repressioun vun p21 mediated. Eis Resultater eng experimentell Basis fir Versteesdemech de pro-entholl Mechanismus vun HDAC4 den Traitement fir gastric Kriibs VerfÜgung
Fro:. Kang Z-H, Wang C-Y, Zhang W-L, Zhang J-T, Yuan C-H, Zhao P-W, et al. (2014) Histone Deacetylase HDAC4 förderen Gastric Cancer SGC-7901 BTS zerstéiert via p21 Repressioun. PLoS NËMMEN 9 (6): e98894. Doi: 10.1371 /journal.pone.0098894 VerfÜgung
Redakter: Wei-Yinan Zhu, Korea University Gesondheet Science Center, China VerfÜgung
Arnaque: 12. Februar 2014; Akzeptéiert: 8 Mee 2014; Publizéiert: De 4. Juni 2014 zu
Copyright: © 2014 Kang et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung
Funding:. Dës Aarbecht war duerch Subventiounen vun der Gesondheet Chiffer vun JILIN Province (Nr 2012z119) ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung
Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung
Gastric Kriibs (GC) ass de véiert stäerkste gemeinsam malignancy an der zweeter Virwaat Ursaach vum Kriibs Doud weltwäit [1]. Asiatesch an südamerikanesch Länner hunn eng héich Heefegkeet Taux vun GC wéi d'USA a Westeuropa [2]. Déi meescht geziilte Therapien Schwéierpunkt op wiere endothelial Wuesstem Faktor (VEGF) an epidermal Wuesstem Faktor receptor (EGFR) Zesummenhang Indikatiounen an fortgeschratt GC. Awer géint Roman Ziler, wéi mTOR [3], c-hu (hepatocyte Wuesstem Faktor receptor) [4], a HDACs, sinn och ënnert Enquête. VerfÜgung
Histone deacetylase 4 (HDAC4), deen eng Klass ass IIa HDAC, ass bekannt an isoléiert transcriptional corepressor investéiert ze existéieren. HDAC4 ass eng kritesch Komponent vun der DNA Schued Äntwert Passerelle datt duerch 53BP1 Akten [5]. HDAC4 vun der Expressioun vun der cyclin-ofhängeg kinase inhibitor p21 (och bekannt als p21WAF1 /Cip1) zu Mënsch Kriibs Zellen duerch eng Sp1-ofhängeg, p53-onofhängeg Mechanismus [6]. HDAC4 ënnerstëtzt de Wuesstem vun Colon Kriibs Zellen via Repressioun vun p21 [7]. Inactivation vun HDAC4 duerch kleng interfering RNS oder HDAC inhibitors Hien neuronal Zell Doud [8]. VerfÜgung
D'Roll vun HDAC4 zu spezifesch Zellen (Hela (cervical Kriibs), U373 (glioma), OVCAR (spillt), T98G ( glioma), HCT116 (colorectal), NHA (astrocytic) an SKBR3 (Broscht)) an Stoffer (schwéierer cortex, testis, Aarbecht, an der epidermal Layer vun der Haut) réckelt méi kloer [9]. Allerdéngs huet de genau Mechanismus vun HDAC4 zu gastric Kriibs net alles ginn. Dofir, war d'Zil vun dëser Etude éischt den Ausdrock Niveau vun HDAC4 zu Mënsch gastric Kriibs Stoffer an Zell Zeilen ze diskutéieren. Zweet, war den Effet vun HDAC4 op gastric Kriibs Zell Linnen mat overexpression an knockdown iwwerpréift. Endlech, ze propagéieren mir ob HDAC4 eng Relatioun mat p21 zu gastric Kriibs Zellen haten. Zesumme, war fir eis Zil fannen, ob HDAC4 enger biologescher Roll am GC Entwécklung huet an der Basisdaten Mechanismus ze entschlësselen. VerfÜgung
Ray Echantillon VerfÜgung
Twenty-néng vläit während Iddi therapeutesch Agrëff an d'Pompjeeën vun Gastrointestinal befënnt, déi éischt Klinik vun JILIN University: Grondschoul gastric carcinoma Stoffer an fernen normal gastric Stoffer sech vu Patienten (58.46 ± 9,17 Joer aal) gesammelt. All Echantillon waren mat Awëllegung kritt no der Deklaratioun vun Helsinki a vun de Mënscherechter IFLA- Comité vun der Éischt Hospital vun JILIN Universitéit an JILIN University, PR China guttgeheescht. Schrëftlech informéiert Zoustëmmung vun all de Bedeelegten kritt huet. VerfÜgung
Zell Linnen a Kultur VerfÜgung
De Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen SGC-7901, AGS, an BGC-823 an der normal gastric epithelium Zell Linn GES sech kritt vun amerikaneschen Type Kultur Collection (Manassas, VA) an cultured zu RPMI 1640 mëttelfristeg mat 10% an et Bovine serum zu engem humidified Atmosphär vu 5% CO 2 op 37 ° C. VerfÜgung gëllt transfected Zell Linn a flüchteg transfection VerfÜgung d'HDAC4 ofgesprengt voll-Längt war vun ëmgedréint Transkriptiouns Hinnen alleguer aus GES Zellen Implikatioune spezifesch primers benotzt wéi virdru beschriwwen [10] an hin an der BamH ech an Hind III Siten vun pcDNA3.1 (+ ) (Clontech, Hampshire, UK). D'pcDNA3.1 (+) - HDAC4 plasmid war vun der Haaptrei Analyse ubelaangt dem Fehlen vun Projet'en ze confirméieren. SGC-7901 Zellen sech zu 6-gutt Placke rakommen an transfected mat der pcDNA3.1 (+) - HDAC4 an pcDNA3.1 (+) - vectors, respektiv, mat Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Karlsbad CA) no der Taktik gëtt vun den Hiersteller vun 24 h ouni Antibiotike Auswiel. Dunn, goufen d'Zellen cultured an mëttelgrouss mat 400 μg /ml G418 (Fläch, St. Louis, MO) bis all vun den Zellen an der Net-transfected Kontroll Kultur ëmbruecht goufen. VerfÜgung SGC-7901 Zellen sech géint op 6-och Telleren an duerno mat net-gezielt siRNA oder siRNA ausernee géint Mënscherechter HDAC4 oder p21 (Santa Cruz) benotzt Lipofectamine 2000 no der Taktik vum Fabrikant gëtt transfected. Zéien Experiment op Zellen 48 oder 72 h Post-transfection gesuergt. VerfÜgung RNS Isolatioun a grouss real Zäit Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer) VerfÜgung Total RNS vom Stoffer oder Zellen vun TRIzol reagent ( Invitrogen), an ëmgedréint Transkriptioune sech mat der Takara RNS Hinnen alleguer Kit (Takara, Dalian, China standing) folgenden d'Uweisungen d'Hiersteller. Chemeschen Hinnen alleguer war mat engem SYBR Green Premix Ex Taq (Takara, Japan) an engem real-Zäit Hinnen alleguer System (Eppendorf, Däitschland) gesuergt. Der relativer Ausdrock Verhältnis zu all vläit entholl an Net-entholl Otemschwieregkeeten déi 2 Zell Zielen Kit-8 (CCK-8) assay VerfÜgung D'proliferations vun der SGC-7901 Zellen sech mat engem CCK-8 assay (Beyotime, Jiangsu, China) laut der vun den Hiersteller recommandéiert Protokoll évaluéieren. Kuerz, goufen d'Zellen pro gutt op enger Konzentratioun vun 2000 Zellen zu engem 96-Meter zappen cultured. Op 0, 1, 2 an 3 Deeg no transfection, war d'Zell Prolifératioun assay vun der Zousätzlech vun 10 μl vun CCK8 Léisung fir all gutt, gefollegt vun incubation bei 37 ° C fir 2 h gesuergt. Absorbance war bei enger Wellelängt vun 450 nm duerch eng Elisa Lieser gemooss. VerfÜgung Kolonie Opstellung assay VerfÜgung gefrot, d'HDAC4-overexpressing an -knockdown SGC-7901 Zellen sech am triplicate rakommen (1000 Zellen pro 60 mm Kultur gett) a fir zwou Wochen bei 37 ° C incubated clones zu Form. D'Zellen sech fir 15 min mat PBS, fix mat 4% paraformaldehyde gewäsch, a mat glaskloer mauve (0,5% glaskloer mauve, 1% paraformaldehyde an 20% methanol vun PBS) fir 30 min Kierchefënster. D'Kolonie op all Plack huet gezielt, an Zell Iwwerliewe war wéi e Prozentsaatz vun der Zuel vun Eos Kolonie op der Kontroll Placke ausgedréckt. VerfÜgung Zell Zyklus Analyse VerfÜgung sech d'Zellen recoltéiert a weider resuspended an eenzeger Zell suspensions zu Fluorescence ageschalt Zell Zortéiere (FACS) Prellbock (PBS 2% FBS wouvun). D'Zellen sech mat PBS zweemol zou a kal 70% Ethanol Iwwernuechtung fest. Zellen sech gewäsch dann zweemol mam kal PBS, Eng Léisung vun RNase resuspended a fir 30 min bei 4 ° C incubated. D'Spär gouf dobäi un 0,05 mg /ml propidium Kaliumiodid (Beyotime) bei 4 ° C vun incubation duerno fir 30 min an Analyse mat FACSCalibur (BD Biosciences, San Jose, CA). VerfÜgung Zell apoptosis assay VerfÜgung Propidiumiodide (PI, 1 μg /ml) an Annexin V-FITC (1 μg /ml) waren fir d'Bestëmmung vun Zell apoptosis benotzt. Kuerz, goufen d'Zellen mat PI an Annexin V-FITC fir 15 min bei 37 ° C trypsinized an incubated. D'Echantillon waren mat engem FACS Calibur Flux cytometer fonnt. All vun der Experiment an triplicate gesuergt. VerfÜgung Intracellular adenosine 5'-Adenosintriphosphat (ATP) Niveauen assay VerfÜgung Intracellular ATP Niveauen assayed benotzt bioluminescence [11]. Kuerz, goufen Zellen bei ronn 15,000 g fir 10 min bei 4 ° C lysed an centrifuged. D'supernatants sech dann mat engem ATP assay Mëschung schaffen Léisung (Fläch), an den Undeel vu Liicht gemëscht Emissiounen war direkt mat engem luminometer (Thermo Wëssenschaftlech Luminoskan Tier, Walthan, MA) gemooss. D'luminescence Date goufen duerch d 'Prouf FAQ Quantitéiten normalized (gemooss engem BCA assay benotzt). VerfÜgung reaktiv Sauerstoff Aarten (Ros) Miessung VerfÜgung Generation vun intracellular Ros huet iwwerpréift mat 6-carboxy-2' , 7'-dichlorofluorescein diacetate (H 2DCFDA). Kuerz, 5 × 10 Western blot Analyse VerfÜgung BTS goufen IP lysed lysis Prellbock (Beyotime), denatured fir 10 min bei 95 ° C, mat enger Insulin Sprëtz sheared, an op SDS /PAGE gels geléist. No immunoblotting, goufen d'Schläimhait blockéiert a mat der Primärschoul antibodies vun PBS incubated /0,1% Tween-20 mat 5% nonfat dréchen Mëllech. Antibodies ausernee géint HDAC4, p21, LC3, Beclin 1, Atg 7, Caspase 3, 9, BCL-2, Bax an Anti-β-Actin waren all aus Santa Cruz Déi (Santa Cruz) kaaft. Chemiluminescent erkennen ass mat engem ECL erkennen Kit (Pierce, Rockford, IL, USA) assayed. D'Resultater goufen andeems ech sinn eng Software ze kréien déi optesch Dicht Verhältnis vun Zil- FAQ analyséiert zu β-Actin. VerfÜgung Immunofluorescence VerfÜgung d'Zellen sech op coverslips plated, fix mat 4% paraformaldehyde (Sigma- Aldrich) fir 10 min an permeabilized mat 0,1% Triton X-100 /PBS. D'Zellen sech mat 1% BSA fir 1 h blockéiert, fir Iwwernuechtung mat der anti-LC3 antibody bei 4 ° C vun incubation gefollegt, an dann Zellen sech mat FITC-conjugated Secondaire antibody (Beyotime) fir 1 h incubated. D'Käre sech mat 4,6-diamidino-2-phenylindole (; Fläch DAPI) geschriwwen. D'fluorescence Imaging war mat engem confocal Laser Scannen microscope (Carl König, Oberkochen, Däitschland) visualized. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung All Donnéeën ginn Vertrieder vun op d'mannst dräi onofhängeg Experimenter. D'Donnéeë sinn als Mëttel ± S.E.M. presentéiert war statistique Bedeitung vun eent-Manéier Analyse vun Varianz (ANOVA) oder vum Student d'T-Test tëschent den zwou Gruppe mat GraphPad Prism 5 statistesch Software berechent. P VerfÜgung Wäerter &Si besteet;. 0,05 waren däitlech als VerfÜgung HDAC4 Ausdrock sech weider-reglementéiert gastric Kriibs Stoffer an Zell Linnen VerfÜgung Éischt, mir analyséiert HDAC4 Ausdrock an zwanzeg-néng gastric Kriibs an bascht Net-entholl Stoffer vun qRT-Hinnen alleguer Analyse a westlech blot vläit. Mir hu fonnt, datt HDAC4 war vill weider-reglementéiert gastric carcinoma Otemschwieregkeeten (Sauerdall 1A, B an C, ** P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, *** P VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Ausserdeem, waren e puer gastric Kriibs Zell Linnen och analyséiert. Mir observéiert héich Ausdrock vun HDAC4 zu dräi gastric Kriibs Zell Linnen (AGS, BGC-823 an SGC-7901), am Verglach mat engem normalen gastric epithelium Zell Linn (GES) (Sauerdall 1D an E, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05, ** P VerfÜgung &Si besteet; 0.01). Dofir, hien huet eis Resultater datt HDAC4 Ausdrock sech souwuel an-reglementéiert gastric Kriibs Stoffer an Zell Linnen. VerfÜgung Den Ausdrock HDAC4 erfollegräich war down- oder up-reglementéiert SGC-7901 Zellen VerfÜgung A pcDNA3.1 (+) Ausdrock Vecteure war vun Ufank un HDAC4 zu SGC-7901 Zellen an Uerdnung overexpress fir seng Efficacitéit wéi engem Wuesstem regulator ënnersicht. No stabil transfection, war den Ausdrock vun HDAC4 mRNA Niveau méi räich an der pcDNA3.1 (+) - HDAC4 Zellen wéi an de Net-transfected Zellen oder negativ Kontroll (NC) SGC-7901 Zellen (Dorënner 2A, ** * P VerfÜgung &Si besteet;. 0.001), déi mam Resultat vun westlech blot Analyse (Dorënner 2B) konsequent war VerfÜgung der Gentherapie-silencing Efficacitéit vum Mënsch HDAC4-siRNA, d'Ausmooss vun HDAC4 FAQ Ausdrock ze diskutéieren war gemooss der HDAC4-siRNA transfection an enger 48-h incubation Period vun mënschlech gastric Kriibs Zell Linn SGC-7901. Real-Zäit Hinnen alleguer Analyse gewisen, datt HDAC4 siRNA Wonn zu 36,3% knockdown vun HDAC4 mRNA Niveauen schéinen (Dorënner 2C, *** P VerfÜgung &Si besteet; 0.001). Western blot Analyse gewisen, datt d'HDAC4 FAQ war bedeitend reduzéiert (Dorënner 2D), konsequent mat sengem mRNA Reduktioun. Geholl zesummen, dës Donnéeën ugeholl datt HDAC4 siRNA bedeitend der endogenous HDAC4 Ausdrock oofgesinn hätt. VerfÜgung HDAC4 gefördert Zell Prolifératioun a Kolonie Opstellung VerfÜgung Next, iwwerpréift mir den Effet vun HDAC4 op Zell Wuesstem. Zell Prolifératioun war Zell Counting Kit-8 (CCK-8) bei der Zäit Punkte vun 24, 48 an 72 h iwwerpréift benotzen. De Wuesstem Kéiren gewisen, datt wann HDAC4 war overexpression zu SGC-7901 Zellen, d'Zell Wuesstem vun 1,5 fantastesch am Verglach mat Kontroll Grupp op wëssen 3 (Dorënner 3A, * P VerfÜgung &Si besteet fräi war; 0,05, ∧∧P VerfÜgung &Si besteet; 0.01). Zousätzlech, mat der pcDNA3.1 (+) d'Kolonie Opstellung assay eng dramatesch Erhéijung vun 2 fantastesch vun Amphipolis Zuel ugewisen wann SGC-7901 Zellen transfected waren - HDAC4 relativ zu der NC Grupp (Sauerdall 3B an C, ** P VerfÜgung &si besteet; 0.01) VerfÜgung Mir iwwerpréift och d'Auswierkunge vun HDAC4 verwandelt-Regulatioun vun SGC-7901 Zellen.. D'CCK-8 assay a Kolonie Opstellung assay gewisen, datt d'HDAC4 verwandelt-Regulatioun d'Prolifératioun Fähegkeet Trupen (Dorënner 3D, ∧P VerfÜgung &Si besteet; 0,05) an der Kolonie Opstellung Zuelen vun SGC-7901 Zellen (Sauerdall 3 a F, ** P VerfÜgung &Si besteet; 0.01). Am Resumé, proposéiert dës Donnéeën, déi HDAC4 vläicht e Wuesstem Promoteur am SGC-7901 Zellen ginn. VerfÜgung HDAC4 fräi Niveauen ATP a rofgaang Ros Generatioun VerfÜgung Eng Erhéijung vun der ATP Besatzungszäit HDAC4 overexpressing Zellen war observéiert, am Verglach zu den NC SGC-7901 Zellen (Dorënner 3G, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05). Ausserdem war de ATP Niveau vun HDAC4 knockdown Zellen (Dorënner 3H, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05) ofgeholl. VerfÜgung Well intracellular Ros Generatioun zu Kënschtlech Viagra Zesummenhang kann, mer weider ob HDAC4 iwwerpréift kéint Ros Generatioun zu SGC-7901 Zellen stimuléieren. D'Resultater weisen, dass en däitleche Minus vun Ros Generatioun gouf zu pcDNA3.1 observéiert (+) - HDAC4 SGC-7901 Zellen am Verglach zu NC SGC-7901 Zellen (Dorënner 3G, ∧P VerfÜgung &Si besteet; 0,05). Mëttlerweil, silencing vun HDAC4 robustly ageschalt Ros Generatioun zu SGC-7901 Zellen (Dorënner 3H, ** P VerfÜgung &Si besteet; 0.01). Outil Ros Produktioun der neier Étude NAC mat inhibited vill Ros Generatioun (Dorënner 3H, ∧P VerfÜgung &Si besteet; 0,05). Dësen Outil vun Ros Generatioun vun pretreatment vun den Zellen mat NAC och Ofstand ATP Verloscht vun HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen (Dorënner 3H, ∧P VerfÜgung &Si besteet; 0,05) verhënnert. VerfÜgung D'erof -regulated HDAC4 Ausdrock Zellen an G0 /G1 Phase verhaft VerfÜgung d'verwandelt-Regulatioun vun HDAC4 eng kloer Zounam vun den Undeel vun Zellen am G0 /G1 Phase Schatzkummer (78.74% am Verglach mat 49,92% vun den NC-siRNA Grupp). Et gëtt och an der Zuel vun Zellen am S Phas eng entspriechend geloss huet (12.94% am Verglach mat 34,61% vun den NC-siRNA Grupp) (Dorënner 4A). D'quantitate Zell Zyklus Verdeelung Resultater goufen déi HDAC4 vill entschlof SGC-7901 Zellen knockdown dës G0 /G1 verhaft an S phage inhibition (Dorënner 4B, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05, ** P VerfÜgung &Si besteet; 0.01). Dofir, géif virschloen dëse Conclusiounen, déi de HDAC4 Niveau Zell Zyklus Werdegang regléieren konnt. VerfÜgung D'verwandelt-reegelen HDAC4 Ausdrock entschlof apoptosis an autophagy VerfÜgung Fir ze studéieren, ob den Ugrëff-reegelen HDAC4-entschlof Zell Wuesstem inhibition V-FITC /PI duebel staining Zesummenhang war apoptosis war zu Zell, bewäert den Effet vun verwandelt-reegelen HDAC4 op Zell apoptosis duerch onkontrolléiert cytometry Annexin benotzt. Et war observéiert datt apoptosis Ofstand zu HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen fräi Verglach mat den NC-siRNA Grupp (Dorënner 4C). Mir bestätegt weider der Aféierungs- vun apoptosis duerch d'Aktivatioun vun caspase-3 an 9 vum südwestlechen blot. D'Analyse Teamchef verwandelt-reegelen HDAC4 Rëss vun caspases-3 fräi an 9 am Verglach mat NC-siRNA Grupp. Den Ausdrock vun der anti-apoptotic FAQ BCL-2 an der pro-apoptotic FAQ Bax goufen och laachen. D'Bax /BCL-2 Verhältnis war zu HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen vill fräi wéi de NC-siRNA Grupp Verglach (Dorënner 5D). VerfÜgung Fir ze kucken, ob verwandelt-reegelen HDAC4 entschlof autophagy zu SGC-7901 Zellen, iwwerpréift mir éischter der intracellular Lokalisatioun vun LC3 zu HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen vun immunofluorescence Analyse unisse antibodies zu LC3 benotzt. Déi spezifesch punctuate Verdeelung vun endogenous LC3 sech als punctate dots vun grénge fluorescence zu HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen observéiert Verglach zu deem vun NC-siRNA Grupp (Dorënner 4E), wat beweist, datt autophagy als Mëttel vun Iwwerliewe entschlof war. D'subcellular Verdeelung vun LC3 sech duerch d'autophagy-spezifesch inhibitor 3-MA zu HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen (Dorënner 4E) bedeitend inhibited. Dunn, de autophagy Zesummenhang Proteinen Atg7, Beclin 1 an d'Verhältnis vun LC3-II bis LC3-ech sech duerch westlech blot analyséiert. Mir gesinn, datt den Ausdrock Niveau vun Atg7, Beclin 1 an LC3-II goufen all an HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen vill fräi Verglach mat den NC-siRNA Grupp (Dorënner 4F). D'Atg7, Beclin 1 an d'Verhältnis vun LC3-II bis LC3-ech Ofstand zu HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen ofgeholl, datt mat 3-MA Verglach mat den NC-siRNA Grupp (Dorënner 4F) behandelt goufen. VerfÜgung d'verwandelt-reegelen HDAC4 Ausdrock Zell Wuesstem duerch p21 up-Regulatioun VerfÜgung inhibited Well d'Behandlung vu mënschlechen Kriibs Zellen mat HDAC inhibitors féiert konsequent fir weider-Regulatioun vun p21 Ausdrock, e cyclin-ofhängeg kinase inhibitor datt en ass gutt etabléiert Zilscheif vun HDAC inhibitors [6], [7], [12], géng mir fir festzestellen, ob overexpression oder knockdown vun HDAC4 p21 Regulatioun Afloss hätt an de Mechanismus vun HDAC4-mediated Wuesstem Promotioun vun gastric Kriibs Zellen ze spekuléieren. Als zu Dorënner 5A gewisen, déi an-Regulatioun vun HDAC4 gefouert dramatesch fir d'Verréngerung p21 FAQ Ausdrock. Am Géigesaz, ugefouert HDAC4 verwandelt-Regelung fir d'fräi p21 Ausdrock (Dorënner 5A). Mir iwwerpréift dann ob p21 knockdown Zell Wuesstem an apoptosis zu SGC-7901 Zellen zu wat HDAC4 geläscht war Afloss hätt. D'SGC-7901 Zellen sech mat siRNA HDAC4 an siRNA p21 Co-transfected. D'p21 mRNA Niveau war ofgeholl bedeitend an HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen der p21 knockdown (Dorënner 5B, ** P VerfÜgung &Si besteet; 0,01, *** P VerfÜgung &Si besteet; 0.001). p21 knockdown dramatesch attenuated Zell Prolifératioun inhibition vun HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen (Dorënner 5C, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05, ∧∧ P VerfÜgung &Si besteet; 0.01). D'ATP Niveau war fräi, mä intracellular Ros Generatioun Verréngerung vun siRNA-p21-HDAC4 Grupp am Verglach mat der siRNA HDAC4 Grupp (Dorënner 5D, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05, ** P VerfÜgung &Si besteet; 0.01). p21 verwandelt-Regulatioun vill attenuated G0 /G1 verhaft an S phage inhibition vun HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen (Sauerdall 5E an F, * P VerfÜgung &Si besteet; 0,05). Immunoblotting gewisen, datt d'Quantitéit vun BCL-2 war wesentlech méi héich, mä Bax niddreg zu siRNA-p21-HDAC4 Zellen (Dorënner 5G). D'Zell apoptosis ofgeholl Ofstand zu siRNA-p21-HDAC4 SGC-7901 Zellen am Verglach mat der siRNA HDAC4 Grupp (Dorënner 5H). Et war observéiert och dass p21 knockdown konnt de fräi autophagy punctuated unisse Flecken (Dorënner 5I) an Atg 7, Beclin 1 an LC3II Proteinen Ausdrock vun SGC-7901 Zellen entschlof vun siRNA HDAC4 (Dorënner 5J) retten. Zesummen, uginn dës Donnéeën, déi verwandelt-Regulatioun vun p21 den Effet vun HDAC4 overexpression rescht konnt a kéint eng wichteg Vermëttler am HDAC4-mediated SGC-7901 Zell Wuesstem Promotioun ginn. VerfÜgung Vill HDAC inhibitors, déi Verbreedung an induce dat oder apoptosis zu entholl Zellen ze inhibit gewise goufen, ginn zu de Medeziner Prozesser entweder als Anti-Kriibs Agenten oder verzweifelt aner Behandlung [13] propagéieren. Héich Ausdrock vun HDAC1 /2 war an gastric carcinoma Stoffer [14] fonnt. An eiser Etude, awer mir dass HDAC4 Ausdrock sech weider-reglementéiert gastric Kriibs Stoffer an Zell Linnen kënschtlech VerfÜgung. HDAC4 verwandelt-Regulatioun vun SGC-7901 Zellen Trupen dem Zell Verbreedung an de Kolonie Opstellung Zuelen, festgeholl Zell Zyklus a entschlof Zell apoptosis hänkt op der Aktivatioun vun caspases 3 an 9, déi mat der anti-proliferative an proapoptotic Auswierkunge vun HDAC inhibitors kohärent ass mënschlechen Kriibs Zell Linnen [15] a mat dem virdrun observation gemellt dass HDAC4 verwandelt-Regulatioun am Hela Zellen apoptosis clonogenic Iwwerliewe an induces verklengert [5]. D'proproliferative Effet vun HDAC4 zu gastric Kriibs Zellen ass kohärent mat deem virdrun fir d'Klass ech HDACs gemellt, HDAC1, -2, an -3 [16]. Soumat kënnen d'inhibition vun HDAC4 Aktivitéit gezielt eng potentiell therapeutesch Approche ginn ze gastric Kriibs Plëséier. VerfÜgung Autophagy ass am Fong e FAQ ofgeschnidden System vun der eegener lysosomes senger Zell. A ville Stress Signaler, wéi Nährwert Honger oder Behandlung mat verschiddene anticancer Agenten, stimuléieren d'autophagy Prozess [17]. Autophagy ass duerch d'Präsenz vun autophagosomes an eng Erhéijung vun Rëss vun LC3 [18] allgemeng charakteriséiert. D'Roll vun autophagy am Prozess vun Zell Doud ass ëmstridden, mä et ass confirméiert ginn, dass crosstalk tëscht apoptosis an autophagy zu programmed Zell Doud essentiel ass [19]. An eiser Etude, war d'Aféierungs- vun autophagy zu HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen vun der punctuate Muster vun LC3 immunostaining an der Heefung vun biochemical Markenzeeche Proteinen vun autophagy (Atg7, Beclin 1 an LC3) Siicht vum südwestlechen blot Analyse. Autophagy inhibition vun der inhibitor 3-MA attenuated der autophagy Aféierungs- zu HDAC4-siRNA SGC-7901 Zellen. Sou, mir spekuléieren autophagy Priedegt SGC-7901 Kriibs Zellen entschlof vun HDAC4 knockdown apoptosis kann schützen. VerfÜgung p21 FAQ, och als cyclin-ofhängeg kinase (CKD) bekannt inhibitor 1, reguléieren der G1 Phase Werdegang vun der Zell Zyklus . p21 ass oft ännert-reglementéiert Mënsch Cancers, an et kann een als eng entholl suppressor Akt oder als oncogene [20]. Déi mat p21-positiven an p53-negativ Cancers hunn vill méi héich Iwwerliewe Kéiren am gastric carcinoma [21], wobäi de Verloscht vun p21 Ausdrock zesumme mat fräi p53 erkennen mat aarmséileg hätt verbonnen ass an erofgaangen globale Iwwerliewe vun gastric Kriibs [22]. Konsequent mat der Konsequenz, datt p21 FAQ war verwandelt-reglementéiert an d'gastric Kriibs Stoffer [23], observéiert mir dass HDAC4 gastric Kriibs Zell Prolifératioun a Wuesstem, mediated vun der Repressioun vun p21 zu gastric Kriibs Zellen ënnerstëtzt, an ass duerch eng Erhéijung begleet an ATP Niveauen a Repressioun vun Ros Generatioun. Dofir, lant mir ob p21 war eng wichteg Vermëttler fir HDAC4-mediated SGC-7901 Zell Wuesstem Promotioun. An dëser Etude, vill HDAC4 knockdown d'fräi Meenungsäusserung vun p21 FAQ entschlof, iwwerdeems HDAC4 overexpression bedeitend dem Wëllen vun p21 FAQ zu SGC-7901 Zellen ofgeholl. Dës Donnéeën, déi p21 implizit kéint ee matgeholl Zilscheif vun HDAC4 ginn. Funktionell Analysë zougedréckt verwandelt-Regulatioun vun p21 konnt den Effet vun HDAC4 overexpression op SGC-7901 Zell Wuesstem Promotioun rescht. Geholl zesummen, proposéiert dëse Resultater datt HDAC4 verwandelt-Regulatioun kéint SGC-7901 Zell apoptosis vun up-Regulatioun p21 Ausdrock förderen. p21 vläicht e entholl suppressor zu der Entwécklung an Werdegang vun gastric Kriibs ginn, den Ausdrock vun deem Hëllef kënnen eng ganz Rei vu malignant Verhaalen vun gastric Kriibs an Kontrollfunktioun. Allerdéngs, muss de Potential Relevanz vun HDAC4 Regulatioun vun p21 Ausdrock och am Kontext gekuckt ginn, datt et méi wichteg Facteure a Weeër ginn, datt eventuell den Ausdrock vun p21 zu gastric Kriibs well. VerfÜgung deelgeholl zesummen, eis bruet hunn eng wichteg Roll fir HDAC4 réischt Mënsch gastric Kriibs Zell Linn SGC-7901 Entwécklung via Regulatioun vun p21 zu kontroléieren, suggeréiert, dass den Aménagement vun HDAC4 Ausdrock an /oder Aktivitéit kann een wichtegen Evenement während gastric Kriibs ginn. Zu der Konklusioun, dëse Conclusiounen z'identifizéieren HDAC4 als eng wichteg regulator vun Prolifératioun vu gastric Kriibs duerch Repressioun vun p21 kënschtlech VerfÜgung. VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Mikroben kéinte fatal Resultater bei ventiléierte COVID-19 Patienten viraussoen
De vaginale Mikrobiom kann d'Effizienz vun der HIV -Präventiounstherapie beaflossen
Wann Dir iwwer 50 sidd,
Flagging potenziell molekulare Prädiktoren vun der Äntwert op biologesch Therapien an der ulzerativer Kolitis
Immunzellen reparéieren beschiedegt Darm bei Kanner mat IBD
Darmmikroben a Wasps hëllefen Pestiziden ze iwwerwannen
Migratioun beaflosst Darmmikrobiota déi ofwiesselnd d'Gesondheet fënnt Fuerscher
De mënschlechen Darm enthält Billiounen hëllefräich a frëndlech Bakterien, déi de Mikrobiom ausmaachen. Dës Mikroben gi fonnt datt se staark beaflosst vu mënschleche Bedéngungen abegraff allgemeng Ges
Benotzt FLUOstar Omega fir nei Darmbakterien ze studéieren déi eis Gesondheet beaflosse kënnen
DMikrobial Biologie a Metagenomics Grupp vun der Diamantina Institut vun der University of Queensland benotzt den BMG LABTECH FLUOstar Omega Mikroplatelieser fir nei Methoden zentwéckelen fir de mënsc
Ultraviolet B Liicht ass gutt fir den Darmmikrobiom
Eng kleng Studie, déi am Journal publizéiert gouf Grenzen an der Immunologie de 24. Oktober, 2019, weist datt dBelaaschtung fir ultraviolet B (UVB) Liicht, déi allgemeng duerch Sonneliicht beliicht