Plos ONE: histon HDAC4 Spodbuja želodca Rak SGC-7901 celice napredovanje preko p21 represije

Povzetek

Rak želodca (GC) je eden od glavnih vzrokov smrti zaradi raka v svetu. je bila opredeljena vloga histon 4 (HDAC4) v posebne vrste celic in tkiv. Vendar pa njegove biološke vloge pri razvoju raka želodca še vedno v veliki meri neraziskana. Kvantitativni PCR v realnem času (QRT-PCR) in western blot smo uporabili za analizo izražanja HDAC4 v kliničnih vzorcih. siRNA in čezmernim HDAC4 in siRNA p21 smo uporabili za študij funkcionalne učinke širjenja, postavitev kolonija, adenozin 5'-trifosfat (ATP) testom in reaktivne kisikove spojine (ROS) generacija, celični cikel, stopnje celica apoptosis in avtofagija testi. HDAC4 je reguliran v želodčnih tkivih rakom in več želodca raka celičnih linijah. orožja, kolonija oblikovanje sposobnosti in raven ATP so bile okrepiti HDAC4 Čezmerno SGC-7901 celic, vendar zaviral HDAC4 rasklapanje SGC-7901 celice. HDAC4 rasklapanje privedlo do celic aretacijo G0 /G1 fazo in povzroča apoptozo in ROS povečanje. Poleg tega je bilo HDAC4 ugotovili, da zavira p21 izraz v raka želodca SGC-7901 celic. p21 rasklapanje močno oslabljen zaviranje proliferacije celic, aretacijo celičnega ciklusa, promocijo apoptoza celic in avtofagija up-regulacije HDAC4-siRNA SGC-7901 celic. Pokazali smo, da HDAC4 spodbuja napredovanje želodčni rak celično posredovano z zatiranjem p21. Naši rezultati zagotavljajo eksperimentalno osnovo za razumevanje mehanizma pro-tumorskih HDAC4 kot zdravljenja raka želodca

Navedba. Kang Z-H, Wang C-Y, Zhang W-L, Zhang J-T Yuan, C-H, Zhao P-W, et al. (2014) histon HDAC4 Spodbuja želodčnega raka SGC-7901 celicah napredovanje prek p21 represije. PLoS ONE 9 (6): e98894. doi: 10,1371 /journal.pone.0098894

Urednik: Wei-Guo Zhu, Peking University Health Science Center, Kitajska

Prejeto: 12. februarja 2014; Sprejeto: 8. maj 2014; Objavljeno: 4. junij, 2014

Copyright: © 2014 Kang et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. To delo je podprla z nepovratnimi sredstvi iz higienskega oddelka provinci Jilin (št 2012z119). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca (GC) je četrti najpogostejši malignom, in drugi najpogostejši vzrok smrti zaradi raka na svetu [1]. Azijske in južnoameriške države imajo višjo stopnjo pojavljanja GC kot ZDA in Zahodni Evropi [2]. Najbolj usmerjeni terapije osredotočiti na žilnega endotelija rastni faktor (VEGF) in epidermalni rastni faktor receptor (EGFR), povezanih navedb v naprednih GC. Spojine proti novimi cilji, kot mTOR [3], c-Met (hepatocitni rastni faktor receptorja) [4], in HDACs so tudi predmet preiskave.

histon deacetilaze 4 (HDAC4), ki je razred IIa HDAC je znano, da obstajajo v različnih transkripcijskih corepressor kompleksov. HDAC4 je pomemben del odziva poti škode DNA, ki deluje s pomočjo 53BP1 [5]. HDAC4 zatira izražanje zaviralca kinaze p21 s ciklin-odvisne (znan tudi kot p21WAF1 /Cip1) v človeških rakavih celic skozi, p53 neodvisni mehanizem Sp1 odvisni [6]. HDAC4 spodbuja rast celic raka kolona preko zatiranju p21 [7]. Inaktivacija HDAC4 ga male interferenčne RNA ali zaviralcev HDAC zavira nevronsko celično smrt [8].

Vloga HDAC4 v specifične celice (HeLa (raka materničnega vratu), U373 (glioma), Ovčar (jajčnikov), T98G ( gliom) HCT116 (debelega črevesa), NHA (astrocitov) in SKBR3 (prsi)) in tkiva (možganska skorja, testisov, prostate, in za epidermalni plasti kože), postaja vse bolj jasno, [9]. Vendar pa natančen mehanizem HDAC4 na raka želodca ni bila ugotovljena. Zato je bil namen te študije najprej oceniti raven izražanja HDAC4 v človeški želodčni rak tkiva in celične linije. Drugič, je preučila učinek HDAC4 na želodcu raka celičnih linijah s pomočjo čezmerno in rasklapanje. Na koncu smo raziskovali, ali je HDAC4 razmerje z p21 v želodcu rakavih celic. Skupaj, naš cilj je bil ugotoviti, ali ima HDAC4 biološko vlogo pri razvoju GC in za pojasnitev osnovni mehanizem.

Materiali in metode

tkivnega vzorca

Devetindvajset paru primarni želodca karcinom tkiva in daljni normalne želodčnih tkiva so bili zbrani od bolnikov (starosti: 58.46 ± 9,17 let) med rutinsko terapevtsko operacijo v Oddelek za operacijo na prebavilih, prvega bolnišnici Jilin University. Vsi vzorci so bili pridobljeni s privolitvijo v skladu s Helsinško deklaracijo in odbor za humano etiko prve bolnišnice Jilin University in Jilin University, LR Kitajska. Pisna privolitev je bila pridobljena iz vseh udeležencev.

Celične linije in kultura

želodčni rak humane celične linije SGC-7901, so bili AGS in BGC-823 in normalno želodca epitelij celična linija GES dobimo iz American Type Culture Collection (Manassas, VA) in kultivirali v RPMI 1640 mediju z 10% fetalnega govejega seruma v navlaženi atmosferi 5% CO _{2 pri 37 ° C.}

stabilno transficirane celične linije in prehodno transfekciji

HDAC4 fragment po vsej dolžini je bila dopolnjena z reverzno transkripcijo PCR iz ges celic z uporabo specifičnih primerjev kot je opisano prej [10] in vstavljena v mestih BamH I in Hind III pcDNA3.1 (+ ) (Clontech, Hampshire, Velika Britanija). PcDNA3.1 (+) - HDAC4 plazmid je bila preverjena s sekvenčno analizo, da se potrdi odsotnost mutacij. SGC-7901 Celice smo zasejali v 6 vdolbinami in transfektirali z pcDNA3.1 (+) - HDAC4 in pcDNA3.1 (+) - vektorjev, oziroma s pomočjo Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA) po navodilih pogojem s strani proizvajalca za 24 ur brez antibiotika izbire. Nato so bile celice gojimo v mediju, ki vsebuje 400 mg /ml G418 (Sigma, St. Louis, MO), dokler se vse celice v bile ubite ki ne transfektirana kontrolne kulture.

SGC-7901 Celice smo zasejali na 6 vdolbinami in nato transfekciji s non-ciljanje siRNA ali siRNA usmerjeno proti humanemu HDAC4 ali p21 (santa Cruz) z Lipofectamine 2000 v skladu z navodili, ki jih določi proizvajalec. Raztezajo Poskuse smo izvedli na celicah 48 ali 72 h post-transfekciji.

RNA izolacija in kvantitativni PCR v realnem času (QRT-PCR)

Celotno RNA smo izolirali iz tkiv ali celic po TRIzola reagentom ( Invitrogen) in povratne prepisi so bile izvedene s pomočjo Takara RNA PCR kit (Takara, Dalian, Kitajska), po navodilih proizvajalca. Kvantitativni PCR smo izvedli z uporabo SYBR Green premiks Ex Taq (Takara, Japonska) v realnem času PCR sistem (Eppendorf, Nemčija). Relativno razmerje izraz v vsak seznanjem tumorja in ne-tumorskega tkiva je izračunana po ^{-ΔΔCT 2. način.}

Cell štetje kit-8 (CCK-8) test

proliferacije od SGC-7901 celic, so bile ocenjene z uporabo CCK-8 testa (Beyotime, Jiangsu, Kitajska), v skladu s protokolom, ki ga priporoča proizvajalec. Na kratko, celice gojimo v ploščo s 96 vdolbinami pri koncentraciji 2000 celic na vdolbino. Na 0, 1, 2 in 3 dni po transfekciji preizkus proliferacijo celic smo izvedli z dodatkom 10 ul raztopine CCK8 v vsako vdolbinico, ki mu sledi inkubacija pri 37 ° C 2 h. Absorbanco smo merili s čitalnikom ELISA pri valovni dolžini 450 nm.

kolonija tvorba vsebnosti

Na kratko, so HDAC4-prekomerno ekspresijo in -knockdown celice SGC-7901 zasejanih v treh izvodih (1.000 celic na 60 mm kultura posodo) in inkubiranih pri 37 ° C za dva tedna, da se tvori klonov. Celice smo sprali s PBS, ki so določene s 4% paraformaldehida v 15 min in obarvali s kristal vijoličnim (0,5% kristal vijoličnim, 1% paraformaldehida in 20% metanola v PBS) za 30 minut. Kolonije na vsaki plošči preštejemo in preživetja celic je bil izražen kot odstotek števila preživelih kolonij na krmilne plošče.

Cell ciklusu

Celice požanjemo in previdno ponovno suspendirali v suspenzije enocelične pri fluorescenčno aktiviranem sortiranjem celic (FACS) pufra (PBS, ki vsebuje 2% FBS). Celice speremo s PBS in dvakrat določen v mrzlo 70% etanola preko noči. Celice smo nato dvakrat sprali s hladnim PBS, resuspendirali v RNaze raztopino in inkubiramo 30 minut pri 4 ° C. Suspenzijo dodamo 0,05 mg /ml propidijevim jodidom (Beyotime), čemur sledi inkubacije pri 4 ° C za 30 minut in analizo s FACSCalibur (BD Biosciences, San Jose, CA).

celice apoptoza test

Propidiumiodide (PI, 1 ug /ml) in aneksin v-FITC (1 mg /ml) smo uporabili za določanje celične apoptoze. Na kratko smo celice tripsinizirali in inkubiramo s PI in aneksinom V-FITC 15 minut pri 37 ° C. Vzorce smo zaznali uporabo FACS Calibur tok citometrom. Vse eksperimente smo izvedli v treh izvodih.

nivoji znotrajcelične adenozin 5'-trifosfat (ATP) preizkus

nivoji znotrajcelične ATP smo testirali z uporabo Bioluminiscenca [11]. Na kratko smo celice lizirali in centrifugiramo pri približno 15.000 g 10 minut pri 4 ° C. Supernatante nato zmeša z delovne raztopine ATP test mix (Sigma), in količina oddane svetlobe je takoj merjena s luminometer (Thermo Scientific Luminoskan Ascent, Walthan, MA). Podatki so luminescence smo normalizirali s količinami vzorcu proteina (izmerjeno s pomočjo BCA testom).

reaktivna kisikove spojine (ROS) merjenje

Nastajanje intraceličnega ROS smo raziskali z uporabo 6-karboksi-2 ' , 7'-diklorofluresceina diacetat (H _{2DCFDA). Na kratko, 5 x 10 ^{4 celice zasadimo v 60-mm jedi in pustimo, da se veže preko noči. Celice smo obarvali s 5 uM H 2DCFDA 30 minut pri 37 ° C in nato zbrali in fluorescenca je bila analizirana s fluorescenčno spektrometrom (Flex StationII 384, Molecular Devices) pri 485 nm (vzbujanja) in 538 nm ( emisija). Celični ravni oksidantnimi so bili izraženi kot relativno DCF fluorescence na zneske vzorčnih beljakovin (metodi BCA). V nekaterih poskusih, smo celice obdelamo z 10 mM N
-acetylcysteine ​​(NAC) pred analizo nastajanja ROS.}}

Western blot analiza

Celice smo lizirali v OP liza pufru (Beyotime), denaturirana 10 minut pri 95 ° C, striženo z insulinsko brizgo in rešujejo na SDS /PAGE gelih. Po imuno smo membrane blokirani in inkubiramo s primarnimi protitelesi v PBS /0,1% Tween-20 s 5% nemastno mleko v prahu. Protitelesa proti HDAC4, p21, LC3, Beclin 1, ATG 7, kaspaze 3, 9, Bcl-2, Bax in anti-P-aktina so bili vsi kupljeni od Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz). Kemiluminescenčni odkrivanje testiramo z uporabo kompleta za odkrivanje ECL (Pierce, Rockford, IL, ZDA). Rezultati so bili analizirani s pomočjo količina ena programske opreme pridobiti razmerje optične gostote ciljnega proteina beta-aktin.

Imunofluorescenčni

Celice smo nanesli na coverslips, določen s 4% paraformaldehida (Sigma- Aldrich) v 10 min in permeabiliziramo z 0,1% Triton X-100 /PBS. Celice smo blokirali z 1% BSA 1 uro, čemur sledi inkubacija preko noči pri 4 ° C s protitelesom anti-LC3, potem smo celice inkubirali z FITC konjugiranim sekundarnega protitelesa (Beyotime) 1 h. Jedra smo obarvali z 4,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI; Sigma). Slikanje fluorescence smo vizualizirali s pomočjo konfokalnega laserskega skeniranja mikroskop (Carl Zeiss, Oberkochen, Nemčija).

Statistična analiza

Vsi podatki so reprezentativni za najmanj treh neodvisnih poskusih. Podatki so prikazani kot sredstva ± S.E.M. Statistična značilnost je bila izračunana z enosmerno analizo variance (ANOVA) ali s t-test med obema skupinama uporabo GraphPad Prism 5 statistične programske opreme. P
vrednosti <. 0.05, so bile obravnavane pomembne

Rezultati

HDAC4 izraz so se regulirane v želodčnih tkiv raka in celičnih linij

Najprej smo analizirali HDAC4 izraz v devetindvajsetih seznanjena raka želodca in sosednjih ne-tumorske tkiva z analizo QRT-PCR in zahodni blot. Ugotovili smo, da je HDAC4 močno reguliran želodčnega karcinoma tkiva (slikah 1A, B in C, ** P
< 0,01, *** P
< 0,001). Poleg tega smo analizirali tudi več želodčni rak celičnih linij. Opazili smo večjo izražanje HDAC4 v treh želodčnih raka celičnih linijah (AGS, BGC-823 in SGC-7901), v primerjavi z (sliki 1D in E, * P
<normalno želodčne epitelija celične linije (ges) 0.05, ** P
< 0,01). Torej, naši rezultati pokazali, da so bili HDAC4 izraz up-urejena v obeh želodčne tkiv rakom in celičnih linij.

Izraz HDAC4 je bila uspešno navzdol ali navzgor urejena v SGC-7901 celice

A pcDNA3.1 (+) izraz vektor je bil uporabljen za čezmerno HDAC4 v SGC-7901 celic, da se preuči učinkovitost kot regulator rasti. Po stabilno transfekciji, je izraz ravni HDAC4 mRNA bolj bogat v pcDNA3.1 (+) - HDAC4 celice kot v celicah netransfektiranih ali negativne kontrole (NK) SGC-7901 celic (Slika 2A, ** * P
. < 0,001), ki je bil v skladu z rezultatom zahodne analize blot (slika 2B)

za oceno genom utišati učinkovitost človeškega HDAC4-siRNA, je bil obseg HDAC4 beljakovin izražanja merjeno po HDAC4-siRNA transfekciji in inkubacijski dobi 48-h v človeški raka celične linije želodca SGC-7901. Realnem času analize PCR je pokazala, da okužba HDAC4 siRNA povzročilo 36,3% rasklapanje ravni HDAC4 mRNA (slika 2C, *** P
< 0,001). Western blot analiza je pokazala, da je HDAC4 protein znatno zmanjša (slika 2D), v skladu z zmanjšanjem mRNA. Če povzamemo, ti podatki kažejo, da bi lahko HDAC4 siRNA močno zavirajo endogene HDAC4 izraz.

HDAC4 spodbuja proliferacijo celic in nastanek kolonij

Naprej, smo preučili vpliv HDAC4 na rast celic. Cell širjenje bila preučena uporabo mobilnega štetje kit-8 (CCK-8), pri časovnih točkah 24, 48 in 72 ur. Krivulje rasti je pokazala, da ko je HDAC4 prekomerno v SGC-7901 celic smo celično rast v primerjavi s kontrolno skupino na dan 3. povečala za 1,5-krat (slika 3A, * P
< 0,05 ∧∧P
< 0,01). Poleg tega je test oblikovanje kolonija prikaže dramatično povečanje za 2-krat v številnih družin, ko so SGC-7901 celice transficirane z pcDNA3.1 (+) - HDAC4 glede na skupino NC (sliki 3B in C je, ** P
< 0,01)

Proučili smo tudi učinke HDAC4 navzdol-ureditev v SGC-7901 celic.. CCK-8 test in tvorbo kolonije testa so pokazali, da HDAC4 navzdol ureditev zatreti zmožnost proliferacije (Slika 3D, ∧P
< 0,05) in število tvorbe kolonije z SGC-7901 celice (Sliki 3E in F, ** P
< 0,01). Skratka, ti podatki kažejo, da bi lahko HDAC4 promotor rasti SGC-7901 celic.

HDAC4 povečana raven ATP in zmanjšano nastajanje ROS

je povečanje stopnje ATP v HDAC4 prekomerno ekspresijo celic opazovana v primerjavi z NC SGC-7901 celic (slika 3G, * P
< 0,05). Poleg tega je bila stopnja ATP zmanjšal HDAC4 rasklapanje celic (slika 3 H, * P
< 0,05).

Ker se znotraj celic generacija ROS lahko povezane z mitohondrijske disfunkcije, smo podrobneje proučiti, ali HDAC4 bi spodbudili nastajanje ROS v SGC-7901 celic. Rezultati kažejo, da so opazili bistveno zmanjšanje nastajanja ROS v pcDNA3.1 (+) - HDAC4 SGC-7901 celic v primerjavi z NC SGC-7901 celic (Slika 3G, ∧P
< 0,05). Medtem, utišanje HDAC4 robustni aktivira nastajanje ROS v SGC-7901 celic (slika 3 H, ** P
< 0,01). Blokiranje proizvodnjo ROS pomočjo antioksidantov NAC močno zaviral nastajanje ROS (slika 3 H, ∧P
< 0,05). Ta blokiranje generacije ROS s predhodno obdelavo celic z NAC tudi izrazito preprečiti ATP izgubo HDAC4-siRNA SGC-7901 celic (slika 3 h, ∧P
< 0,05).

navzdol -regulated HDAC4 izraz aretiran celice v G0 /G1 fazi

navzdol ureditev HDAC4 razstavljena jasno povečanje deleža celic v G0 /G1 fazi (78,74% v primerjavi z 49,92% v NC-siRNA skupina). Obstajala je tudi ustrezno znižanje števila celic v fazi S (12,94% v primerjavi z 34.61% v skupini NC-siRNA) (slika 4A). Rezultati distribucijo kvantitativno celičnega ciklusa, so pokazale, da HDAC4 rasklapanje bistveno inducirane SGC-7901 celic G0 /G1 prijetje in S inhibicije fag (slika 4B, * P
< 0,05, ** P
< 0,01). Zato so te ugotovitve kažejo, da bi raven HDAC4 urediti potek celičnega ciklusa.

The-navzdol urejeno HDAC4 izraz inducirane apoptoze in avtofagija

Da bi preučili, ali zaviranja z navzdol urejen HDAC4 povzroča rast celic je povezana z celično apoptozo, je bil učinek navzdol regulirano HDAC4 na celično apoptozo ovrednotili s pretočno citometrijo z uporabo aneksin v-FITC /PI dvojno obarvanje. Ugotovljeno je bilo, da apoptoza v primerjavi s skupino NC-siRNA (slika 4C) izrazito povečalo v HDAC4-siRNA SGC-7901 celic. nadalje smo potrdili indukcijo apoptoze preko aktivacije kaspaze-3 in 9, ki ga zahodni blot. Analiza je pokazala, da dol regulirano HDAC4 povečala cepitev kaspaze-3 in 9 v primerjavi s skupino NC-siRNA. Ekspresijo anti-apoptotske proteina Bcl-2 in pro-apoptotični protein Bax bili količinsko prav. Razmerje Bax /Bcl-2 se je znatno povečal v HDAC4-siRNA SGC-7901 celic, v primerjavi s skupino NC-siRNA (Slika 5D).

Da bi raziskali, ali HDAC4 povzroča avtofagija navzdol urejeno v SGC-7901 celice, moramo najprej preučiti znotrajcelično lokalizacijo LC3 v HDAC4-siRNA SGC-7901 celic z analizo imunofluorescenčni uporabo fluorescenčnih protiteles LC3. Specifična distribucija točkasti endogenega LC3 so kot pikčasto pike zelene fluorescence opazili HDAC4-siRNA SGC-7901 celic primerjavi s skupino NC-siRNA (slika 4E), kar kaže, da je bil avtofagija povzroča kot sredstvo za preživetje. Subceličnih porazdelitev LC3 so znatno inhibira avtofagija specifični zaviralec 3-MA v HDAC4-siRNA SGC-7901 celic (slika 4e). Potem so povezane avtofagija beljakovine Atg7, Beclin 1 in razmerje LC3-II LC3-I smo analizirali z Western blot. Opazili smo, da je raven izraz za Atg7, Beclin 1 in LC3-II je bilo vse v HDAC4-siRNA SGC-7901 celic močno povečal v primerjavi s skupino NC-siRNA (Slika 4F). Atg7, Beclin 1 in razmerje LC3-II LC3-I izrazito zmanjšala HDAC4-siRNA SGC-7901 celic, ki so bili zdravljeni s 3-MA v primerjavi s skupino NC-siRNA (Slika 4F).

HDAC4 izražanja navzdol regulirano inhibira rast celic s p21 navzgor regulacija

Ker zdravljenje človeških rakavih celic z inhibitorji HDAC vedno vodi navzgor regulacija p21 izražanja, ki ciklin-odvisne kinaze inhibitor, ki je uveljavljen cilj zaviralcev HDAC [6], [7], [12], smo skušali ugotoviti, ali lahko prekomerno ali rasklapanje od HDAC4 vpliva na regulacijo p21 in špekulirati mehanizem za pospeševanje rasti, HDAC4 posredovana v želodčnih rakavih celic.

Kot je prikazano na sliki 5A, up-regulacija HDAC4 dramatično privedlo do zmanjšane izražanje p21 proteina. V nasprotju s tem, HDAC4 navzdol uredbe je privedlo do povečanega p21 izražanja (slika 5A). Nato smo pregledali, ali bi p21 rasklapanje vpliva na rast celic in apoptozo v SGC-7901 celic, v kateri je bila HDAC4 izbrisanih. V SGC-7901 celice so sodelovali transfekciji s siRNA HDAC4 in siRNA p21. Nivo p21 mRNA je v HDAC4-siRNA SGC-7901 celic bistveno zmanjšala po p21 rasklapanje (slika 5B, ** P
< 0,01, *** P
< 0,001). p21 rasklapanje močno zaviranje oslabljene celične proliferacije v HDAC4-siRNA SGC-7901 celic (slika 5C, * P
< 0,05, ∧∧ P
< 0,01). Stopnja ATP je povečala, vendar intracelularni generacija ROS zmanjšala siRNA-p21-HDAC4 skupini, v primerjavi s skupino siRNA HDAC4 (Slika 5D, * P
< 0,05, ** P
< 0,01). p21 navzdol uredbe precej oslabljenim G0 /G1 prijetje in S inhibicije bakteriofagov v HDAC4-siRNA SGC-7901 celic (slikah 5E in F, * P
< 0,05). Imunoblot je pokazala, da je bil znesek Bcl-2 bistveno višja, vendar Bax je bila nižja v siRNA-p21-HDAC4 celic (Slika 5G). Apoptozo celic občutno zmanjšala siRNA-p21-HDAC4 SGC-7901 celic v primerjavi s skupino siRNA HDAC4 (slika 5H). Opazili so tudi, da je p21 rasklapanje lahko rešili s povečano avtofagija prekinjala fluorescentne lise (slika 5i) in ATG 7, Beclin 1 in LC3II beljakovin izraza v SGC-7901 celic z siRNA HDAC4 (slika 5j) induciranih. Kolektivno, ti podatki kažejo, da bi lahko dol-regulacija p21 posnemajo učinek HDAC4 prekomerno in bi bil lahko pomemben posrednik pri-HDAC4 posredovano spodbujanje rasti celic SGC-7901.

Pogovor

Številne HDAC inhibitorji, ki je bilo dokazano, da zavira proliferacijo in inducira diferenciacijo ali apoptozo v tumorskih celicah, se raziskovali v kliničnih raziskavah, bodisi kot proti raku ali v povezavi z drugimi zdravljenja [13]. Visoka izraz HDAC1 /2 je bila najdena v želodcu karcinomom tkiva [14]. V naši raziskavi smo pokazali, da so HDAC4 izraz up-urejena v želodčni rak tkiva in celičnih linij in vitro
. HDAC4 navzdol ureditev v SGC-7901 celic zavre proliferacijo celic in številke tvorbe kolonij, aretiran celic cikel in povzročeno apoptozo celic odvisen od aktivacije kaspaze 3 in 9, ki je v skladu z antiproliferativne in proapoptotičnih učinkov zaviralcev HDAC v raka humanih celičnih linijah [15] in z že poročali ugotovitvi, da HDAC4 navzdol uredbe zmanjšuje klonogene preživetje in inducira apoptozo v HeLa celicah [5]. Proproliferative učinek HDAC4 v želodčnih rakavih celic, je v skladu s tem smo že poročali za I HDACs razreda, HDAC1, -2 in -3 [16]. Tako lahko ciljanje inhibicijo HDAC4 dejavnosti potencialni terapevtski pristop pri zdravljenju raka želodca.

avtofagija je v bistvu razgradnja beljakovin sistem lastnih lizosomih celici je. Različne stresnih signalov, kot so lakota hranil ali zdravljenja z različnimi zdravili proti raku, spodbujajo proces avtofagija [17]. Avtofagija je na splošno označen s prisotnostjo autophagosomes in povečanja cepitvijo LC3 [18]. Vloga avtofagija v proces celične smrti, je sporna, vendar pa je bilo potrjeno, da je presluh med apoptozo in avtofagija bistvenega pomena celične smrti programiranem [19]. V naši raziskavi je bila indukcija avtofagija v HDAC4-siRNA SGC-7901 celic, je razvidno iz točkasti vzorec LC3 imunskim barvanjem in kopičenje biokemičnih Hallmark proteinov avtofagija (Atg7, Beclin 1 in LC3) po zahodni blot analizo. zaviranje avtofagija jih zaviralcev 3-MA oslabljen indukcijo avtofagija v HDAC4-siRNA SGC-7901 celic. Tako smo predvidevali prišlo avtofagija lahko zaščitijo SGC-7901 rakave celice apoptozo inducira HDAC4 rasklapanje.

p21 protein, znan tudi kot ciklinsko odvisne kinaze (CKD) inhibitor 1, ureja napredovanje v G1 fazi celičnega cikla . p21 je pogosto napačno-urejeni v človeških rakih in lahko deluje kot zaviralnih ali onkogen [20]. Tisti z P21-pozitivne in P53-negativne raka znatno višje krivulje preživetja v želodčnega raka [21], medtem ko je izguba p21 izražanja skupaj z večjo odkrivanje p53 povezana s slabo prognozo in zmanjšala celokupno preživetje pri raku želodca [22]. V skladu z rezultatom, ki je bil p21 protein down-urejeno v želodcu tkiva raka [23], smo ugotovili, da HDAC4 spodbuja proliferacijo in rast želodčni rak celic, ki jo posreduje zatiranju p21 v želodčnih rakavih celic, ter jo spremlja povečanje ATP ravni in zatiranje nastajanja ROS. Zato smo raziskali, ali je p21 pomemben posrednik za-HDAC4 posredovano spodbujanje rasti celic SGC-7901. V tej študiji, HDAC4 rasklapanje znatno inducirano povečano izražanje p21 proteina, medtem HDAC4 čezmernim znatno zmanjšal izražanja p21 proteina v SGC-7901 celic. Ti podatki implicitne da p21 lahko cilj povečanja dolvodno od HDAC4. Funkcionalne analize so pokazale navzdol ureditev p21 lahko posnemajo učinek HDAC4 prekomerno na SGC-7901 pospeševanje rasti celic. Če povzamemo, ti rezultati kažejo, da HDAC4 navzdol ureditev bi lahko spodbudila SGC-7901 apoptozo celic z up-regulacije p21 izražanja. p21 lahko tumorski supresor v razvoj in napredovanje raka želodca, lahko izraz, ki pomaga pri nadziranju različnih malignih vedenj raka želodca. Vendar je treba potencialni pomen ureditve HDAC4 od p21 izražanja prav tako je treba gledati v kontekstu, da obstaja več ključnih dejavnikov in poti, ki lahko uravnavajo izražanje p21 raka želodca.

Če povzamemo, naše ugotovitve imajo razkrila pomembno vlogo HDAC4 pri nadzoru želodčni rak celična linija človeških SGC-7901 razvoj preko regulacije p21, kar kaže, da je sprememba HDAC4 izražanja in /ali dejavnosti, ki bi lahko bil pomemben dogodek med rakom želodca. Skratka, te ugotovitve opredelijo HDAC4 kot pomemben regulator širjenja raka želodca z zatiranjem p21 in vitro
.

• Plos ONE: obtoku tumorske celice (CTCs) RT-PCR in njeno prognostičnih vlogi želodčnega raka Zaznane: Meta-analiza Objavljeno Literature
• Plos ONE: MUC5AC Pripravljalni Complex Ponavljajoče Regija Dolžina polimorfizmi so povezane s Dovzetnost in klinično odru želodca Cancer