PLoS ONE: Co-Dostava doksorubicin i SATB1 shRNA by Thermosensitive Magnetic kationski liposoma za rak želuca Therapy

Sažetak pregled

U prethodnom istraživanju, imali smo razvili novi thermosensitive sustav magnetski prikazivanja na temelju liposome. Cilj ovog rada bio je procijeniti učinkovitost ovog sustava za suradnju dostave oba lijeka i gena u istoj stanici i njegovih anti-tumorskih učinaka na rak želuca. Doksorubicin (DOX) i SATB1 shRNA vektora prebaci se u sustavu ko-isporuke, i in vitro DOX aktivnost thermosensitive otpuštanjem, ciljano utišavanje gena učinkovitosti ciljani unos u stanicu in vitro citotoksičnost, i in vivo aktivnost protiv tumora su određeni. Rezultati su pokazali da je ovaj sustav ko-isporuka imali poželjan ciljanu isporuku učinkovitost, DOX thermosensitive otpuštanje i SATB1 utišavanje gena. Nadalje, ko-isporuka DOX i SATB1 shRNA izloženih poboljšanu aktivnost za inhibiciju želučane rast stanica raka in vitro i in vivo, u usporedbi s jednom isporuke. U zaključku, roman thermosensitive sustav magnetski droge i gen ko isporuke ima obećavajuću primjenu u kombinaciji kemoterapije i gensku terapiju za rak želuca pregled

Izvor:. Peng Z, Wang C, Fang E, Lu X, Wang G, Tong Q (2014) Co-Dostava doksorubicin i SATB1 shRNA by Thermosensitive Magnetic kationski liposoma za rak želuca terapije. PLoS ONE 9 (3): e92924. doi: 10,1371 /journal.pone.0092924 pregled

Urednik: Elena A. Rozhkova, Argonne National Laboratory, United States of America pregled

Primljeno: 4. prosinac 2013; Prihvaćeno: 26 veljača 2014; Objavljeno: 27. ožujka 2014 pregled

Copyright: © 2014 Peng i sur. Ovo je otvorenog pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan

financiranja. Ova studija je podržan od strane Nacionalne zaklade prirodoslovni Kine (br 81172186). U financijeri nisu imali ulogu u studiju dizajna, prikupljanja i analize podataka, Odluka o objavi, ili pripremu rukopisa pregled

U konkurenciji interese.. Autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi pregled

Uvod pregled

rak želuca je četvrti oblik raka i drugi vodeći uzrok smrti od raka u svijetu [1]. U 2008. godini bilo je oko 989.000 novih slučajeva raka želuca i 738,000 smrtnih slučajeva u svijetu, koji se prvenstveno došlo u Istok, Jug, i središnjoj Aziji; Srednja i Istočna Europa; i Južnoj Americi [2], [3]. U Kini, rak želuca je treći oblik raka s procijenjenih 380.000 novih slučajeva, a najveća stopa smrtnosti oko 26,3 po populaciji od 100.000 svake godine [4], [5]. Kirurških resekcija je zajednička ljekovita mogućnost, ali nije prikladan za većinu pacijenata koji su u kasnom stadiju karcinoma želuca. Druge terapije, poput radioterapije i kemoterapije pokazati učinkovitost, ali je često nezadovoljavajući [4], [6]. Osim toga, sistemska primjena kemoterapije uzrokuje štetne učinke [7], [8]. Pregled

Zbog razvoja rezistencije na lijek za kemoterapiju, tradicionalna kemoterapija također izlaže ograničena antitumorsko djelovanje [9]. Dakle, multi-agent sustav ko-isporuke dobila je više pažnje u zadnje vrijeme, jer bi mogao isporučiti razne vrste agenata s istim tumorske stanice koje onda pokazuju sinergističko anti-tumorske učinke. Na primjer, dva različita kemijska sredstva se mogu kombinirati ili kemijska tvar može se kombinirati s malim interferirajuće RNA (siRNA) protiv onkogen. Osim toga, ciljano isporuke i kontrolirano otpuštanje može dodatno povećati anti-tumorske učinke i smanjiti štetne učinke. Pregled

Posebni AT-bogata vezujući protein (SATB1) je globalna kromatina organizator koji regulira ekspresiju gena i uključen je u modulacija malignih bioloških ponašanja raka [10]. Aberantna ekspresija SATB1 Pokazano je da promovira rak dojke, rak pluća i limfoma [11] - [13]. Naši prethodne studije su pokazale da SATB1 igra važnu ulogu u raka želuca, a može biti i samostalna prognoza marker za rak želuca [14], [15]. Suzbijanje ekspresiju SATB1 isporukom siRNA ili plazmid koji kodira specifični smetaju kratki harpin RNA (shRNA) protiv SATB1 mogu inhibirati proliferaciju i invaziju, te promicati apoptozu tumorskih stanica [16], [17]. Ovi rezultati ukazuju da SATB1 potencijalni terapeutski cilj za želuca. Pregled

nagađaju da kombinacija genske terapije i kemoterapije, može značajno povećati terapijsku učinkovitost protiv raka želuca. U našem prethodnom istraživanju, razvili smo ciljano thermosensitive sustava co-isporuke na temelju thermosensitive magnetskim kationski liposoma (TSMCL). Do Kalccin testa otpuštanja, imali smo optimizirali thermosensitive liposomalnu formulaciju, a zatim mjeriti magnetska svojstva i isporuku gena učinkovitost TSMCL. U ovom istraživanju, prebaci se doksorubicin i SATB1-shRNA vektor u ovom sustavu za kombinaciju genske terapije i kemoterapije i vrednovati njihovu sinergistički antitumorski učinak protiv raka želuca in vitro i in vivo.

Materijali i postupci pregled

Materijali pregled

Kolesterol, 1,2-Dipalmitoil-sn-glicero-3-fosfokolin (DPPC) i 3β- [N- (N ', N'-dimetilaminoetan) karbamoil] kolesterol (DC-Chol) kupljeni su od Avanti Polar Lipids (USA). Dimetildioktadecilamonijev bromid (DOAB) dobiveni su od Sigma-Aldrich (USA). Magnetic Fluid Fe _{3O 4 sintetiziranje Galaxy nanotehnologiji (Kina). FAM označeni siRNA i plazmid pGFP-SATB1 shRNA pružili su GenePharma (Shanghai, Kina). Doksorubicin je kupljen od Hisun Pharmaceutical (Zhejiang Kina). Fetalnog goveđeg seruma (FBS), medij kulture, penicilin /streptomicin (nametnika) i tripsina su isporučeni od Invitrogen (Carlsbad, CA, USA). SATB1 zec monoklonsko antitijelo je iz Epitomics (Abcam, UK). Sve ostale kemikalije su komercijalne analitičke kakvoće te su korišteni bez daljnjeg pročišćavanja. Pregled}

Priprava sustavu ko isporuku pregled

Ovaj sustav ko-isporuka temelju thermosensitive kationskih liposoma, koji su pripravljeni sa thermosensitive kationski formulacija DPPC, DC-kolesterol, DOAB i kolesterola u molarnom omjeru 80:5:5:10 optimizirane u preliminarnim eksperimentima. Liposomi (TsCl) dobije se postupkom tankog filma hidratacije, nakon čega slijedi ekstruzija [18]. Metoda amonijev sulfat gradijent koristi za učitavanje DOX u TsCl (TsCl-DOX). Za pripremu magnetske liposoma (TSMCL), magnetska tekućine Fe _{3O 4 je koriste kao jezgre i co-sadržanih s amonijevim sulfatom tampon u liposome. Nakon formiranja tankog filma u tikvicu okruglog dna, doda se jedna ml suspenzije željeza i amonij sulfata u hidrirati filma, a potom ekstrudira kroz polikarbonatne filtere s porama i opterećena DOX (TSMCL-DOX) postupkom amonij sulfata gradijent , Konačno, proizvodi iz gel filtracije su centrifugirani na 1000 g tijekom 15 min da se ukloni unencapsulated Fe 3o 4. Pregled}

pGFP-SATB1-shRNA (shSATB1) vektor se inkubira s različitim liposomi, u seruma bez medija na sobnoj temperaturi tijekom 30 minuta, da se pripreme TsCl-shSATB1, TsCl-dox-shSATB1, TSMCL-shSATB1 i TSMCL-dox-shSATB1, redom. pregled

Određivanje zeta-potencijal, veličine čestica, i polidisperzivnost pregled

Prosječna veličina čestica i polidisperznosti distribucije veličine čestica liposoma određena na 25 ° C, uz dinamičan raspršenja svjetlosti pomoću ZetaPALS čestica kalibracija instrumenta (Brookhaven Instruments Corporation, SAD). Zeta-potencijal od liposomskih disperzija je određena istim instrumentom pri 25 ° C od pokretljivosti. Pregled

Određivanje doksorubicinom umetnut učinkovitosti pregled

koncentracija DOX u liposome mjerena je fluorimetrom ( Perkin Elmer, USA) s 485 nm ekscitacije i 590 nm emisije filtera sa serijama razrjeđenja slobodne DOX kao standarda. DOX učitan učinkovitost je izračunata na temelju koncentracije DOX. Pregled

Differential Scanning kalorimetrija (DSC) pregled

DSC izvršena je procijeniti thermosensitivity liposoma određivanjem temperature faznih promjena (tm). Tim je procijenjena pomoću nano DSC (TA Instruments, USA) pri brzini zagrijavanja od 20 ° C /h, s 20 mg /ml fosfolipida. Pregled

in vitro thermosensitive DOX Metoda otpuštanja

20 ul Dox učitani liposomi se inkubiraju u 1 ml PBS-a i PBS-a s 50% fetalnog goveđeg seruma (FBS), koji oponaša in vivo okoliš odvojeno u Eppendorf epruvetama. Uzorci zagrijavana u vodenoj kupelji na 37 ° C i 42 ° C 1 h, respektivno. Tada je intenzitet fluorescencije DOX je izmjerena u fluorimetra (Perkin Elmer, USA) upotrebom 485 nm ekscitacije i 590 nm emisije filtera. Za 100% otpuštanje, uzorci su inkubirani u 1 ml PBS sa 1% Triton X-100 za 1 min. Dox postoci oslobađanja su izračunati kako slijedi: gdje je F _{s bilo fluorescencija uzoraka nakon zagrijavanja, F 0 je početna fluorescencije uzoraka prije grijanja i F 100 je fluorescencija uzoraka tretirana s triton X-100. pregled}

kultura stanica pregled

Human želučanom adenokarcinom MKN-28 stanična linija kupljena od keygen Biotech (Nanjing, Kina) i uzgojene u DMEM high-glukoze, uz dodatak 10% FBS, 100 u /ml penicilina i 100 ug /ml streptomicina u vlažnoj atmosferi s 5% CO _{2 na 37 ° C. pregled}

In vitro transfekcija stanica pregled

MKN-28 stanice su posađene u 12-jažica, pri gustoći od 4 × 10 ^{5 stanica /jažica i rasle su preko noći do približno 80% konfluentnosti. Slijedeći dan, stanice su isprane dva puta s prethodno zagrijanim PBS, zatim se TsCl-shSATB1 i TSMCL-shSATB1 dodano u svaku jažicu i inkubirane tijekom 6 sati. Stanice inkubirane s TSMCL-shSATB1 postavljeni su na 12 i magnetsku ploču tijekom prvih 30 minuta ponuditi magnetsko polje. Zatim je medij za inkubaciju je zamijenjen DMEM obogaćenom sa 10% FBS, a stanice se inkubiraju 24 sata. Razina GFP izraz je procijenjena pod fluorescentnim mikroskopom (Nikon 80ĩ) i protočnom citometru (BD FACS Canto II). pregled}

U stvarnom vremenu lančana reakcija polimeraze kvantitativni (RT-qPCR) pregled

Ukupna RNA se ekstrahira od MKN-28 stanica korištenjem TRIzol regenta (Invitrogen, Carlsbad, CA) po uputama proizvođača, a cDNA se sintetizira PrimeScript RT Master MIX (Takara, Dalian). PCR je izvedena pomoću SYBR premiks Ex Taq II (Takara, Dalian) na StepOne Plus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, USA). Sekvence prajmera su slijedeći: SATB1 smisao 5'-ACAGAACCCTGTGGGAGAAC-3 ', i 5'-antisense GCGTTGCTCTCCTGTTCATA-3' GADPH smisla 5'-ACAGAACCCTGTGGGAGAAC-3 'i 5'-antisense GCGTTGCTCTCCTGTTCATA-3'. SATB1 mRNA razina normalizirana onom GAPDH. Pregled

Western blot analiza pregled

MKN-28 stanice su sakupljene i lizirane u RIPA puferom. Supernatanti su sakupljeni nakon centrifugiranja pri 10000 g tijekom 10 minuta. Koncentracija proteina u supernatantu je određena korištenjem dobivenog proteina BCA kit. Zatim 40 ug uzoraka se provodi na 15% SDS-PAGE, a proteini su prebačeni na PVDF membrane. Dalje, membrane se inkubiraju u 5% bezmasnim mlijekom 1 h blokirati nespecifično vezanje i inkubirani preko noći na 4 ° C uz SATB1 ili P-aktin antitijelo (1:500 razrjeđenje). Membrane su zatim ispitane sa HRP-konjugiranim kozjim anti kunić sekundarnim antitijelom tijekom 30 min. Konačno, membrane su vizualizirani s hemiluminiscencija sustava (ECL, Pierce) i izloženi rendgenskom filmu. Pregled

In vitro evaluacija celularnog unosa

Da bi se procijenila intracelularnu položaj isporučene DOX i pGFP-SATB1 shRNA i pojačana penetracija liposoma u stanice magnetski želučanog raka ciljano, a FAM označeni siRNA (zeleni fluorescentni) se koristi oponašati pGFP-SATB1 shRNA i DOX po sebi posjeduje instinkt crvenu fluorescenciju za praćenje stanični unos , MKN-28 stanice su posađene u pločice s 12 jamica pri 4 × 10 ^{5 stanica /jažica i rasle su preko noći. Potom se stanice inkubiraju s slobodnom siRNA, TsCl-siRNA, TSMCL-siRNA, TsCl-DOX, TSMCL-DOX, TsCl-DOX-siRNA ili TSMCL-DOX-siRNA 6 h. Za magnetske liposomima, ploče postavljene su na 12 i magnetsku ploču tijekom prvog sata inkubacije. Stanice su vizualizirani pod fluorescentnim mikroskopom locirati fluorescentne oznake DOX i siRNA. Jezgre su obojene sa DAPI (plava fluorescencije). Pregled}

MTT test pregled

MKN-28 stanice su nasađene u gustoći od 2 x 10 ^{4 stanica /jažici u 96 jažica i rasle su preko noći. Stanice su zatim inkubirane s različitim liposoma na 37 ° C tijekom 2 sata u CO _{2 inkubatoru. Za magnetske liposomima, ploče se stavi u 96 jažica magnetsku ploču tijekom prvih 1 sata inkubacije. Zatim su stanice su isprane dva puta s PBS i inkubirane 46 sata u svježi medij. Nakon toga, se mjeri održivost stanica MTT ispitivanjem. Medij iz svake jažice je zamijenjen 20 ul MTT otopine (Sigma-Aldrich, SAD) i inkubirano je 4 sata na 37 ° C, a zatim su supernatanti su odbačeni, a kristali formazana se otopi u 200 ul DMSO. Ploče je mjerena pri 490 nm u čitaču mikroploče, te je izračunato vijabilnost stanica prema slijedećoj formuli: pregled}}

protočne citometrije

Apoptoza je detektiran upotrebom kompleta Annexin V-FITC Apoptoza Detection (eBioscience, USA). MKN-28 stanice su nasađene na 12-jažične ploče i tretira kao što je prije opisano. Nakon 24 sata, stanice su sakupljene, isprane dva puta s PBS-om i suspendirane u 500 ul pufera za vezanje. Zatim su stanice su dvaput obojani s Annexin V-FITC i propidij jodida (PI). Stanice u ranoj fazi apoptoze bojane s Annexin V-FITC, ali ne i obojene s PI su kvantificirani cytometery protoka.

ksenograft modela miša

Pet do šest tjedana stari mužjaci Balb /c golih miševa su pod uvjetom od strane Centra za životinjama iz Tongji Medical College. Svaki miš inokuliran je supkutano u desni bok s 5 × 10 ^{6 MKN-28 stanica. Nekoliko tjedana nakon inokulacije tumora, 36 kod miševa je nasumično podijeljeno u šest skupina (n = 6). Miševi su injektiraju preko repne vene s besplatnim DOX, TSMCL-DOX, TSMCL-shSATB1, TsCl-DOX-shSATB1, TSMCL-DOX-shSATB1 ili normalnoj fiziološkoj kao kontrola. Doza DOX je bila 2,5 mg /kg i da pGFP-SATB1 shRNA bila 10 ug po mišu. Obradba je davana jednom svaka 3 dana i veličine tumora mjeren je preko calipering i volumen tumora može se izračunati pomoću slijedeće formule: volumen = (D _{Min) 2 × D Max /2, gdje je D Max je bio najveći promjer tumora i D Min je najkraći jedan. Za TSMCL-DOX, TSMCL-shSATB1 i TSMCL-DOX-shSATB1 magnetsko ciljanje je postignuta upotrebom nastavak vanjskog magnetskog polja od 5000 Gaussa za 30 minuta s naglaskom na tumor nakon primjene lijeka. Svi eksperimenti su odobreni od strane Etičkog povjerenstva o Tongji Medical College i sve su životinje tretirane humano prema institucionalnim Animal Care and Use odbora smjernicama. Pregled}}

Statistika analiza pregled

Podaci su izraženi kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (SD). Statistička značajnost između različitih skupina procijenjena sa Studentovim t-testom i jedan jednofaktorska analiza varijance (ANOVA) testa. Za vrijeme preživljavanja kod životinja, uspostavljene su i prijavite rank testom su Kaplan-Meier krivulje svake skupine provedena je usporediti stopu preživljavanja. p < 0.05 se smatra statistički signifikantnim pregled

Rezultati

Karakterizacija liposomi pregled

Kao što je prikazano u tablici 1, što je promjer TsCl bila 83,6 ± 5,7 nm, dok je TsCl. -DOX je povećan na 118,5 ± 7,9 nm zbog kućištima od DOX. U međuvremenu, promjeri TsCl-shSATB1 i TsCl-DOX-shSATB1 značajno povećana na 161,1 ± 11,8 nm i 238.1 ± 20.6 nm zbog adhezije i fuziju plazmidne DNA u liposome. Za magnetske liposomima, veličina čestica TSMCL, TSMCL-DOX, TSMCL-shSATB1 i TSMCL-DOX-shSATB1 su 135,0 ± 11,6 nm, 157.2 ± 14.3 nm, 221,3 ± 15,7 nm i 319,4 ± 20,1 nm, znatno veći od TsCl, TsCl-DOX, TsCl-shSATB1 i TsCl-DOX-shSATB1 zbog uklještenja magnetskih nanočestica. Nadalje, veličina TSMCL-shSATB1 i TSMCL-DOX-shSATB1 bio značajno veći onom TSMCL i TSMCL-DOX, odnosno (p 0,05). Svi liposomi imala usku raspodjelu veličine, jer su njihovi polidisperznost su ne više od 0,3. Pregled

Zeta potencijali TsCl, TsCl-DOX, TsCl-shSATB1 i TsCl-DOX-shSATB1 su 52,0 ± 7,3 mV, 50.1 ± 7.7 mV, 31.3 ± 5.2 mV i 26.7 ± 4.5 mV, respektivno. Nakon inkubacije s pGFP-SATB1- shRNA, površina troškovi značajno smanjila (P 0,05), zbog elektrostatske interakcije između kationskih lipida i plazmidne DNA. Međutim, zarobljavanje magnetskih nanočestica nije rezultirala značajnim smanjenjem Zeta potencijala u magnetskim liposome. Pregled

Za DOX učitava učinkovitosti, DOX encapsulating iznosila je 89 ± 3% i 78 ± 8% (n = 3) za TsCl-DOX i TSMCL-DOX, respektivno, a bio je 85 ± 7% i 73 ± 9% (n = 3) TsCl-DOX-shSATB1 i TSMCL-DOX-shSATB1, respektivno. Ovi podaci pokazuju da interakcija između liposoma i plazmida nije rezultirala DOX propuštanja. Pregled

thermosensitivity liposoma pregled

Diferencijalna skenirajuća kalorimetrija je izvedena da se odredi temperatura faze prijelaza TsCl. Kao što je prikazano na slici. 1, TsCl sastoji od DPPC, DC-kolesterol, DOAB i kolesterola u molarnom omjeru 80:5:5:10 imao Tm 40,8 ° C uz relativno šire prijelazno vrha koji mogu biti fuzijski prijelaz vrh DPPC i DOAB . pregled

In vitro thermosensitive DOX oslobađanje od liposome pregled

Kao što je prikazano na slici. 2 DOX brzina oslobađanja iz TsCl-DOX i TSMCL-DOX bila samo 12% i 16% nakon inkubacije s PBS-om na 37 ° C, a povećao se na 20% i 19% nakon inkubacije s 50% FBS, respektivno. Za TsCl-DOX-shSATB1 i TSMCL-DOX-shSATB1, DOX brzina oslobađanja je bio 12% i 15% nakon inkubacije s PBS-om na 37 ° C, te je bio i 16% nakon inkubacije s 50% FBS-om, što ukazuje da je ugradnja plazmida imao nema značajnog učinka na stabilnost liposoma (p > 0,05). pregled

DOX brzina otpuštanja iz TsCl-DOX i TSMCL-DOX je povećana na 37% nakon inkubacije s PBS-om na 42 ° C, a povećao se na 45% i 49% nakon inkubacije s 50% FBS, respektivno. Za TsCl-DOX-shSATB1 i TSMCL-DOX-shSATB1, DOX brzina oslobađanja je bio 35% i 43% nakon inkubacije s PBS-om i FBS na 42 ° C, odnosno, i značajno viša nego pri 37 ° C (p < 0.05). Ovi rezultati pokazuju da TsCl-DOX, TSMCL-DOX, TsCl-DOX-shSATB1 i TSMCL-DOX-shSATB1 imaju poželjan thermosensitivity, i može se koristiti za hipertermije aktivira kontrolni otpuštanje DOX. Pregled

odsutnost SATB1 ekspresiju MKN-28 stanice transfektirane sa liposomima pregled

Zatim smo ocijenili učinkovitost liposoma za dostavu shSATB1 vektor u MNK-28 stanica. Tipični fluorescencije slike stanica transficiranih TsCl-shSATB1 i TSMCL-shSATB1 su prikazani na slici. 3A. Analiza protočnom citometrijom je pokazala da je efikasnost transfekcije TsCl-shSATB1 samo 15,4 ± 0,15%. Međutim, nakon primjene magnetskog polja vodstvo, efikasnost transfekcije TSMCL-shSATB1 je 34,3 ± 0,93%, što je znatno više nego što TsCl-shSATB1 (sl. 3b). Pregled

Da bi se utvrdilo jesu li isporučene shSATB1 vektora mogao posredovati odsutnost SATB1 izražavanja u MKN-28 ćelija, proveli smo u realnom vremenu kvantitativni PCR i Western blot analize. Rezultati su pokazali da su oba SATB1 mRNA i proteina nivoi smanjena u stanicama koje su transfektirane s TsCl-shSATB1 i TSMCL-shSATB1, u usporedbi s kontrolnim stanicama. Štoviše, TSMCL-shSATB1 uz pomoć magnetskog polja je moćniji od TsCl-shSATB1 inhibirati SATB1 izraz u MKN-28 stanica (sl. 3C, D). Pregled

Magnetska ciljano in vitro unos u stanicu pregled

Da bi usporedili prodori u stanice između ne-magnetskog i magnetskih liposomima s primjenom magnetskog ciljano usmjeravanje, kao i unutarstanični položaj isporučene DOX i shSATB1, a FAM-obilježenim siRNA se koriste kao indikator. Odsustvo zelene fluorescencije u stanicama koje su tretirane s Slobodan siRNA naznačeno da se ne može prodrijeti u stanicama (podaci nisu prikazani). Uočili smo da je više stanice obrađene TSMCL-siRNA izlagao zelenu fluorescenciju od stanice tretirane TsCl-siRNA (Sl. 4a). Štoviše, sve stanice tretirane TSMCL-DOX pokazao crvene fluorescencije od stanica obrađenih TsCl-DOX (Sl. 4B). U stanicama tretiranim TSMCL-DOX-siRNA, visokog intenziteta fluorescencije je uočena, a stanice se pojavila ružičasta zbog spajanja plave, crvene i zelene boje (Sl. 4C). Ova opažanja upućuju na to da TSMCL je učinkovitiji u isporuci siRNA i DOX u stanice od TsCl, nakon primjene magnetskih polja. Pregled

Nadalje, ispitan intracelularnu položaj isporučenog DOX i siRNA. Crvena fluorescencija je zapaženo u obje jezgara i citoplazme, što ukazuje da isporučuje DOX je smješten u oba jezgri i u citoplazmi. Nasuprot tome, zeleni fluorescentni ponajprije pojavila u citoplazmi, što ukazuje da su siRNA isporučeni u citoplazmu (Sl. 4D). Spajanje crvene i zelene pojavila žuta u citoplazmi, a spajanje plave i crvene pojavio lavande u jezgrama. Uzeti zajedno, ovi podaci upućuju na to da oba TsCl i TSMCL mogu prodrijeti u želučanih stanica raka i dostaviti svoj sadržaj u citoplazmi (DOX i siRNA) i jezgre (DOX). Pregled

In vitro antitumorski učinak ovih liposome pregled

procijenjena je in vitro anti-tumorske učinke ovog sustava co-dostava po citotoksičnosti i indukcija apoptoze aktivnosti. Citotoksičnost liposoma je procijenjena pomoću MTT testa. Da bi odredili učinke Dox i plazmida koncentracija na citotoksičnost liposoma, ispitali smo liposoma učitava s različitim koncentracijama DOX i različitim količinama SATB1 shRNA. S porastom koncentracije DOX, citotoksičnost liposoma povećana (Sl. 5A). Međutim, dodatak koncentracije SATB1 shRNA nije rezultirao povećanjem citotoksičnosti, a tu su tek neznatno povećanje citotoksičnosti kada je koncentracija SATB1 shRNA je oko 4 J..lg (Sl. 5B). Stoga smo koristili 25 um DOX i 4 ug SATB1 shRNA usporediti citotoksičnost među besplatan DOX, besplatan shRNA, TsCl, TSMCL, TsCl-DOX, TSMCL-DOX, TsCl-shSATB1, TSMCL-shSATB1, TsCl-DOX-shSATB1 i TSMCL- DOX-shSATB1. pregled

Kao što je prikazano na slici. 5C, slobodno shRNA, TsCl i TSMCL je malo citotoksičnost. Vijabilnost je 40,3 ± 3,4%, 73.6 ± 3.5% i 51.3 ± 4.5% za slobodno DOX, TsCl-DOX i TSMCL-DOX, redom, što ukazuje da je citotoksičnost TSMCL-DOX bila je veća nego TsCl-DOX, ali niže od slobodnog DOX , Sposobnost stanica za život je 79,2 ± 6,9% i 71,6 ± 4,7% za TsCl-shSATB1 i TSMCL-shSATB1, odnosno, ne pokazuje statistički značajna (p > 0,05). Za drogom i gena ko-isporuke, stanična vijabilnost je samo 35,0 ± 3,2% i 22.3 ± 3.4% za TsCl-DOX-shRNA i TSMCL-DOX-shRNA, odnosno znatno niža od one slobodne DOX, TsCl-DOX, TSMCL- Dox i SATB1shRNA učitava liposomi (p < 0.05). Pored toga, stanice se vijabilnost TSMCL-DOX-shRNA bila značajno niža od one koju TsCl-DOX-shRNA (p < 0.05). Ovi rezultati sugeriraju da sinergistički citotoksični učinak postiže se ko-isporuku DOX i SATB1 shRNA. Osim toga, uz primjenu magnetske ciljano, dodatno poboljšana citotoksičnost može dobiti. Pregled

Da bi odredili dodatni mehanizam protiv tumora osim citotoksičnosti sustava co-isporuke, ispitali smo stopu apoptozu MKN-28 stanice tretirane sa Slobodan DOX, TsCl-DOX, TSMCL-DOX, TsCl-shSATB1, TSMCL-shSATB1, TsCl-DOX-shSATB1 i TSMCL-DOX-shSATB1 protočnom citometrijom. Kao što je prikazano na slici. 5D, brzina apoptoze bio je 22,3% u stanicama koje su tretirane s Slobodan DOX bila 8,9% u stanicama tretiranim TsCl-DOX, a povećan na 13,4% u stanicama koje su tretirane s TSMCL-DOX i magnetskog polja. Slično tome, postotak apoptoze 9,4% u stanicama tretiranim TsCl-shSATB1, a povećan na 17,4% u stanicama koje su tretirane s TSMCL-shSATB1 i magnetskog polja. Nasuprot tome, brzina apoptoze 27,7% u stanicama koje su tretirane s TsCl-DOX-shSATB1, veći nego kod stanica koje su tretirane s TsCl napunjenih DOX ili shSATB1 sami. Stopa apoptoza je 32,4% u stanicama tretiranim TSMCL-DOX-shSATB1, najveći među svim skupinama. Ovi rezultati pokazuju da CO-isporuku DOX i SATB1 shRNA dovodi do kombiniranih učinaka indukcije apoptoze. Jednom riječju, ovaj sustav ko-isporuka pokazuje jake anti-tumorske učinke in vitro. Pregled

In vivo antitumorsko djelovanje liposoma

Da bi se odredila in vivo antitumorsko djelovanje sustava co-isporuke, osnovali smo MKN-28 mišjih modela stranog tijela i ubrizgava Besplatno DOX, TSMCL-dox, TSCML-shSATB1, TsCl-DOX-shSATB1 ili TSMCL-DOX-shSATB1 u miševe kroz vene. Obradba je davana jednom svaka 3 dana, a tumori su izrezani (Sl. 6A). Na dan 15, volumen tumora je bila 0.44 ± 0.05 cm ^{3 u miševa tretiranih s TSMCL-DOX-shSATB1, znatno niža od one u slanoj skupini (2,14 ± 0,23 cm 3), Slobodan DOX skupina (1,08 ± 0,13 cm 3), TSMCL-DOX skupina (0,68 ± 0,10 cm 3), TSCML-shSATB1 skupina (1,43 ± 0,21 cm 3) i TsCl-DOX-shSATB1 grupe (0,77 ± 0,12 cm 3) (sl. 6B). pregled}

Nadalje, kao što je prikazano na slici. 6 (C), srednja vrijednost vremena za volumen tumora do 2 cm ^{3 je 30 dana TSMCL-DOX-shSATB1 grupe, više od toga u slanoj skupini Besplatno DOX grupa, TSMCL-DOX grupa, TSCML-shSATB1 grupa i TsCl-DOX-shSATB1 skupine (Sl. 6C). Uzeti zajedno, ovi rezultati pokazuju da zajednički isporuku DOX i shSATB1 by TSMCL pokazuje sinergijski učinak protiv tumora in vivo. Pregled}

Rasprava pregled

Unatoč nedavnom razvoju u kirurgije, radioterapije i ciljati terapija, kemoterapija je još jedan od važnih pristupa za želučane terapije protiv raka. Međutim, terapijski učinci kemoterapije su često nezadovoljni i ne može značajno poboljšati prognozu pacijenata oboljelih od raka [19]. Jedan od glavnih razloga je tumorigenezi i napredovanje karcinoma želuca uključuje niz različitih mehanizama; Jedinstvena anti mehanizam tumor tradicionalne kemoterapije ima ograničenu svoje terapeutske učinke, time kombinaciju kemoterapije s genskoj terapiji mogu poboljšati antitumorske učinke. Još jedna prepreka kemoterapije je da je sistemska primjena lijeka dovodi do koncentracije ograničenom lijeka kod tumorskih sučelja, a što uzrokuje mnoge negativne posljedice. [8] Ključ za rješavanje tih problema oslanja na nove načine dostave lijekova, dakle, razvoj ciljanih multi-agenti isporuku sustava koji se mogu izravno vođene na mjesto tumora s kontroliranim otpuštanjem može prevladati ove probleme i poboljšati terapeutske učinke [20] - [25] . pregled

Među različitim sustavima za otpuštanje lijeka, liposomi su najviše obećava za dobre biocompatibilities koji uzrokuju mali ili nikakav antigenske, alergijski i toksične reakcije, i lako prolaze kroz biološka razgradnja. Kako obje droge i gena nositelji, liposomi ne samo da može zaštititi domaćina od nuspojava obloženih droge, ali i spriječiti zarobljene sadržaj od preranog inaktivacije fiziološkim medijem [26]. Osim toga, liposomi je potencijalno ciljana sustav za primjenu lijeka, da li je postignuta poboljšane propusnosti i zadržavanja (EPR) učinak (Passive ciljane) ili magnetskom polju vodstvo i imunološki veze (Active ciljano) [27]. Osim toga, neki liposome posjeduju kontrolirane aktivira droge značajke oslobađanjem kao što su termo osjetljivost, osjetljivost pH i osjetljivosti mikrovalnoj. Pregled

Nedavno smo razvili novu magnetsku ciljani thermosensitive sustava ko-primjenu lijeka i gena (TSMCL). Na temelju electroneutral thermosensitive formulaciji (DPPC:Cholesterol = 80:20), imali smo dodali različite kationske komponente i optimiziran thermosensitivity liposoma po testu kalceinski otpuštanja. Rezultati su pokazali da smo mogli dobiti željeni thermosensitivity zamjenom 10 mol dijelova kolesterol od 5 mol dijelova DC-kolesterola i 5 mol dijelova DOAB (DPPC:DC-Cholesterol:DOAB:Cholesterol = 80:5:5:10) i kalceina oslobađanje iz liposoma će biti niža, na 37 ° C, ali značajno veći kod 42 ° C u ovu formulaciju. Zatim Magnetska tekućine Fe _{3O 4 je bio korišten kao jezgra i djeluje kao magnetske ciljanje i izvor grijanja TSMCL. Vibracijski uzorak magnetometar (VSM) mjerenje je naznačeno da magnetski fluid Fe 3O 4 bio superparamagnetićne, čime bi TSMCL imaju dobre magnetskih ciljane učinke. U međuvremenu, ovisno o vremenu krivulja zagrijavanja je također pokazala da su magnetski fluid Fe 3O 4 i TSMCL se može grijati od 25 ° C do 42 ° C unutar 20 min. Uz pomoć Magnetic tekućine Fe 3o 4, kako magnetskog usmjeravanja i temperature aktivira otpuštanje lijeka od TSMCL mogao biti realiziran. Konačno, i TsCl i TSMCL je izložena tipična liposomske morfologije i dobre distribucije pod TEM. Na temelju uspješne izgradnje TSMCL, u ovoj studiji smo učitava DOX i SATB1 shRNA vektor u TSMCL da TSMCL-DOX-shSATB1 i ocjenjuju se antitumorski učinak protiv želučanih stanica raka in vitro i in vivo. Pregled}

DOX je uobičajeno lijek u terapiji s visokom učinkovitošću u inhibiciji proliferacije tumorske stanice i inducira apoptozu tumorskih stanica, ali njegova terapijski učinci su ograničeni zbog teškog kardiotoksičnost i mijelosupresija kada primijeniti sistemski [28]. Iako Dox liposomi djelomično popravila situaciju, nedostatak ciljanu isporuku još limites njihovu iskoristivost [29]. SATB1 je globalna kromatina organizator koji direktno regulira ekspresiju ERRB2, MMP2, ABL1 i E-kadherina da djeluje kao ključni regulator razvoja raka [30]. Pojačanom ekspresijom SATB1 u različitih tumora je bila povezana s biološkim malignih ponašanja kao što su invazija, proliferacije i metastaziranja [10] - [13]. Utišavanje SATB1 izraz malim ometa RNA (siRNA) ili plazmida koji kodira kratki harpin RNA (shRNA) mogao spriječiti, proliferaciju, invaziju i metastaziranje, a izazivaju apoptozu različitih tumorskih stanica [16], [17]. Dakle, SATB1 postaje potencijalna meta za terapiju raka [30]. Međutim, odgovarajuće isporuke vektori za siRNA ili shRNA su važni za SATB1 ciljane genskom liječenju. Pregled

U ovom istraživanju, koristeći TSMCL-DOX-shSATB1 sustav, kako DOX i SATB1 shRNA vektor može navesti na sijelo tumora u magnetskom podnesena smjernice, a DOX je objavljen u hipertermije aktivira način. Hipertermija aktivira oslobađanje ovisi o thermosensitive liposome koji su prvenstveno sastoje od Dipalmitoyphosphocholine (DPPC), koji prolazi kroz gel za tekuća kristalna faza tranzicije (tm), koji postaje vrlo propusna za male vodi topljivih molekula na 41 ° C [31]. Liposomi sastoje od različitih DPPC i lipidi imaju izrazitu TM i thermosensitivity [32]. DSC analiza pokazala je da Tm našeg sustava za isporuku je 40,8 ° C, a analiza DOX izdanje je pokazao da je stabilan na 37 ° C, dok DOX je pušten kada je temperatura povišena na 42 ° C.

• PLoS ONE: Ekspresija EGF obitelji u rak želuca: silazni HER4 i njegova Aktivacija liganda NRG4
• PLoS ONE: roman Funkcionalna TagSNP Rs7560488 u DNMT3A1 Promotor je povezana s osjetljivošću na rak želuca modulirajući aktivnost promotora