PLoS One: elvesztése a promielocitás leukémia fehérjét gyomorrákban: következmények az IP-10 expresszió és tumor-infiltráló Lymphocytes

absztrakt katalógusa

A gyomorrák egyik leggyakoribb oka a rák összefüggő halálozás világszerte. Kifejezés a tumor szupresszor, promielocitás leukémia (PML) fehérje, csökken vagy megszűnik a gyomor carcinoma, társulva fokozott nyirokér invázió, fejlesztése magasabb pTNM staging, és kedvezőtlen prognózist. Itt, megvizsgáltuk a kapcsolat a mértékét a tumor-infiltráló limfociták és az állapotát PML protein expresszió előrehaladott gyomorrák. Megfigyeltük magasabb számú infiltráló T-sejtek in gyomorkarcinóma szövetekben, amelyekben a PML-expresszió csökkent vagy megszűnt, míg a szövetekben pozitív PML. A mértéke a T-sejt-migrációra felé kapott tenyészeti felülúszókat származó interferon-gamma (IFN-γ-stimulált gyomor karcinóma sejtvonalak emellett érinti expressziója PML in vitro katalógusa. Interferon-gamma-indukálható protein 10 (IP -10 /CXCL10) expressziós növeltük gyomorkarcinóma szövetekben megjelenítésére csökkentett PML szintjét. Ezenkívül mindkét a PML
knockout és akciós sejtek, továbbfejlesztett IP-10 mRNS és fehérje expressziós jelenlétében IFN-γ. PML knockdown fokozott IFN-γ-közvetítette jelátviteli és transzkripciós aktivátor-1 (STAT-1) kötődését az IP-10 promoter, ami a megemelkedett transzkripcióját az IP-10-gént. Ezzel szemben, a PML IV fehérje expresszió elnyomott IP-10 promoter aktiválását . az eredmények alapján azt javasoljuk, hogy a veszteség PML protein expresszió gyomorrák sejtek hozzájárul a megnövekedett IP-10 transzkripciós via katalógusa fokozása STAT-1 aktivitását, ami viszont elősegíti a limfocita -kereskedelem tumor régiók .

bevezető hivatkozás: Kim HJ, Song DE, Lim SY, Lee SH, Kang JL, Lee SJ, et al. (2011) elvesztése a promielocitás leukémia fehérjét gyomorrákban: következmények az IP-10 expresszió és tumor-infiltráló lymphocyták. PLoS ONE 6 (10): e26264. doi: 10,1371 /journal.pone.0026264 katalógusa

Szerkesztő: Yoshio Jamaoka, Veterans Affairs Medical Center (111D), az Amerikai Egyesült Államok katalógusa

Beérkezett: április 21, 2011; Elfogadva: szeptember 23, 2011; Megjelent: október 12, 2011 katalógusa

Copyright: © 2011 Kim et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Forrás: Ez a munka támogatta a Basic Science Research Program a Nemzeti Kutatási Alapítvány Korea (NRF) finanszírozza az Oktatási Minisztérium, Tudományos és Technológiai (2010-0015506) az Y-HC, a Nemzeti Kutatási Alapítvány Korea (NRF) finanszírozott a koreai kormány (MEST) (2010-0029353) a JLK, és RO1 NS50665 az ENB. A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

a gyomorrák egyik leggyakoribb oka a rák összefüggő halálesetek világszerte. Legújabb előrelépések genetika megkönnyítették a kimutatási során bekövetkező események során gyomor karcinogenezis, beleértve aktiválását onkogének, silencing tumor szuppresszor gének, és a mutáció részt vevő gének DNS-javító [1]. Ezek között a genetikai eseményeket, ismert, hogy tumor szuppresszor promielocitás leukémia (PML) fehérje expressziója lecsökken vagy megszűnik a gyomorrák, és hogy ez a társított kiterjedtebb nyirok invázió, magasabb esetben pTNM stádium, és kedvezőtlen prognózis, ami arra utal, hogy a PML veszteség kapcsolódik a karcinogenezis és gyomor karcinóma progresszióját [2]. Korábbi tanulmányok összefüggésbe PML
diszfunkció progressziójának különféle rákok, és csökkent vagy megszűnt expresszióját PML számoltak be prosztata, emlő, a központi idegrendszer, a vastagbél, a tüdő és a gyomor- rákok [2], [3] .

PML
gén eredetileg azonosított fúzió a retinsav receptor részt vesz a t (15; 17) kromoszóma transzlokáció társult akut promielocitás leukémiában (APL) [4], [ ,,,0],5], [6], [7], [8]. PML egy tumorszuppresszor fehérje, amely szabályozza a sejtciklus előrehaladását, a gén transzkripció, transzformáció elnyomása, és az apoptózis. PML
knockout egerekben lényegesen érzékenyebbek a tumorképződés után rákkeltő anyagoknak való kitettség, mint vad típusú kontrollok, és a PML
-hiányos sejtek kevésbé valószínű, hogy apoptózist alkalmazása után bizonyos típusú celluláris stressz [9]. Amellett, hogy a jelentések összpontosítva tumor szupresszor szerepet játszott PML, több tanulmány is megerősítette, hogy a fehérje működik transzkripciós szabályozó, via katalógusa kapcsolata a koaktivátor CRE-kötő fehérje; korepresszorok beleértve HDAC, N-CoR és mSin3A; és a transzkripciós faktorok Nur77, AP-1, myc, a p53, és a STAT-1α [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16], [17].

Progresszív mutációja és genetikai változások számos tumor szuppresszor gének elősegítik a tumor kialakulásában és fejlődésében [18]. Amellett, hogy a genetikai változások belül tumorsejtek, mind a gyulladásos sejtek és mediátorok hozzájárulnak képződése különösen tumor mikrokörnyezetet [19], [20]. Tumor-asszociált fibroblasztok (TAF-okat) és makrofágok (TAM) is részt vesznek a moduláció a tumor mikrokörnyezetében keresztül
citokinek, kemokinek, az interferonok és más, biológiailag aktív faktorok [21], [22]. Cross-talk között tumorsejtek TAFs, TAM, és a limfociták, jelentős a tumor kialakulásában és fejlődésében, és hozzájárul a létrehozását tumor mikrokörnyezetet dúsított expressziójának különféle, biológiailag aktív faktorok [23], [24], [25] , [26], [27].

a TAM-ok korrelációt az angiogenezissel és kedvezőtlen prognózis többféle rák, beleértve a gyomorrák [22], [28]. Hízósejt termel sok angiogén faktorok, és a különböző citokinek, és sűrűsége leírták, hogy nagymértékben korrelálnak a mértéke tumor neoangiogenezis és rossz prognózissal [29], [30]. CD4 ^{+ és CD8 + limfociták is találhatók a különböző szilárd rák szövetekben. Mostanáig a pontos molekuláris mechanizmusok, amelyek a típusát és számát a tumor infiltráló sejtek szabályozzák nagyrészt ismeretlenek. Számos ellentmondásos jelentések vonatkozásában a számát és a funkció a tumor-infiltráló limfociták. Különösen, a CD8 + T-limfociták, míg a funkciója nem ismert, hogy megszüntesse naszcens transzformált sejteket, és hozzájárulnak a immunológiai [31], ez azt jelentette, hogy a CD8 + tumor-infiltráló T-sejtek hibás effektor fázisában funkció érintkezve tumorsejtekkel [32], és azok beszivárgás kapcsolódik kedvezőtlen prognózist bizonyos típusú rák, mint például nem kissejtes tüdőrák és orr-garat-karcinóma [33], [34].}

a kemokinek által szekretált stroma-sejtek vagy a tumor sejtek befolyásolják a tumorsejtek migrációját, invázió, proliferáció, angiogenezis és immunsejt infiltráció a tumor tömege [35]. IFN-γ-indukálható protein-10 (IP-10, CXCL10) az egyik a CXC-kemokinek, amelyek játszik több szerepet a gyulladásos betegségek és a rák [36], [37]. Mivel az IP-10 preferenciálisan elősegíti Th1 immunválasz által erőteljesen vonzza NK és T-sejtek, akkor javasolt, mint az egyik lehetséges mechanizmus a T-sejt infiltráció a tumorokat.

Akár elvesztése tumorszuppresszor gének tumorsejtekben indukál toborzása limfociták és modulációs funkcióinak ilyen sejtek tumor mikrokörnyezetet jelenleg nem tisztázott. A jelen tanulmányban azt vizsgáltuk, PML funkció tekintetében felvételének limfociták és a moduláció expressziójának tumorból származó faktorok. Expression PML fordítottan korrelált a mértéke beszivárgás a CD8 ^{+ T-sejtek gastricus karcinómák. PML veszteség tovább társult fokozott expressziójának IP-10, az egyik a limfocita-vonzza CXC-kemokinek, a gyomor karcinóma sejteket és szöveteket. PML knockdown mozdítani az IFN-γ-közvetített STAT-1 kötődését a az IP-10 promoter, ami megnövekedett transzkripcióját az IP-10 gént. Adataink alátámasztják az elképzelést, hogy a PML részt vesz a felvételi a limfociták tumorok, keresztül
expresszálásának modulálásán szintek tumorból származó faktorok, beleértve az IP-10, ami további bizonyíték arra, hogy a veszteséget a tumor szuppresszor gének a tumor sejtek aktívan részt vesz a létrehozását tumor mikrokörnyezet. katalógusa}

Eredmények katalógusa

elvesztése PML fehérje összefüggésbe hozható a megnövekedett beszivárgása CD8 ^{+ T-sejtek előrehaladott gyomorrák szövetek katalógusa}

az immunhisztokémiai PML és CD8 végeztünk annak felderítésére, milyen mértékben a limfocita infiltráció járt PML expressziós státus előrehaladott gyomorrákban. CD8-immunpozitív sejteket felsorolt ​​leírtak szerint Anyagok és módszerek. Összesen 35 minta (71,4%) mutatott részleges-to-teljes elvesztése PML a tumorban sejtmagok stádiumú IV fejlett gastricus karcinómák. A mintákat 14 előrehaladott gyomorrák betegek diffúzan pozitív PML, és tartalmazott átlagosan 32,7 CD8 ^{+ T-sejt per mező (1a ábra). Azonosítottunk 19 esetben előrehaladott gyomorrák kiállító fokális pozitivitást PML, átlagosan 47,2 CD8 + T-sejtek számát a területen. Ezenkívül teljes elvesztése PML volt megfigyelhető 16 előrehaladott gyomorrák betegek; A minták átlagos száma 52,8 CD8 + T-sejtek számát a területen. A mintákat megjelenítő fokális pozitivitást vagy teljes elvesztése PML mutatott erőteljesebb növekedése CD8 + T-sejtek száma, mint volt példányok kiállító diffúz pozitivitást PML. Reprezentatív képek ábrán mutatjuk be az 1B. Bár a PML fehérje expresszió csökkent vagy megszűnt a tumorsejtekben, mind a normál gyomornyálkahártya mirigy, a stromális szöveteket, és a limfoid sejtek, mutattak diffúz közepes-erős nukleáris immunpozitivitást PML.}

PML befolyások T-sejt-beszivárgás /migration in vitro Matton

Tekintettel a veszteség PML fehérje expresszióját és a növekedés beszivárgása CD8 ^{+ T-limfociták előrehaladott gyomorrák karcinómaszövetek feltételeztük, hogy a PML hozzájárult a T-sejt beszűrődés /migráció gyomorrák. Annak feltárása, hogy a PML szinten a gyomorrák sejtek befolyásolják a T-sejtek migrációját, kondicionált médiát SNU-638 sejtek átmenetileg transzfektált vagy PML katalógusa siRNS vagy PML IV expressziós vektor, ezután IFN-γ-t használtuk transzwell migrációs vizsgálatokhoz. SNU-638 gyomorrák sejtek magas szinten expresszált fehérje PML, összhangban áll a korábbi megállapítások [2], míg SNU-638 transzfektált sejtek PML katalógusa siRNS megjelenített csökkentett mennyiségű endogén PML kifejezés (~46-56%) által megerősített, immunoblot (2A ábra). IFN-γ indukált mérsékelt növekedését PML fehérje expresszió, megegyeznek a korábbi eredményeket [38]. Migrációs Jurkat T-sejtek felé származó kondicionált tápközeggel PML
siRNS-transzfektált SNU-638 sejtek jelentősen javított, képest, hogy a kontroll siRNS-transzfektált sejtek, kezelés után IFN-γ (2b ábra). Transzfekciója során SNU-638, PML IV expressziós vektorral, a migráció Jurkat T-sejtek felé származó kondicionált tápközeggel PML IV overexpresszált sejtek csökkent képest, hogy az üres vektor (2C ábra). Ezek az eredmények azt sugallják, hogy a PML szabályozza a szintek szekréciós molekulák által termelt és felszabadult IFN-γ-stimulált gyomorsav rákos sejteket, és szintén befolyásolja a migráció a T-limfociták.}

elvesztése PML fokozza az IFN-γ-indukálta IP-10 expression katalógusa

a kemokinek családjába kemotaktikus citokinek, elősegíti a migráció a keringő leukocyták /limfociták a gyulladás és sérülés. Vizsgálni, hogy a kemokinek szintet érintette PML katalógusa genetikai állapot, kemokinek génexpresszió segítségével vizsgáltuk ribonukleáz protection assay (RPA). PML
<sup>+ /+ és PML
- /- egér embrionális fibroblaszt (MEF) sejteket inkubáltunk a távollétében vagy jelenlétében IFN-γ 0-24 h , teljes mRNS-t gyűjtöttünk különböző időpontokban, és alá kell RPA. PML katalógusa - /- MEFs, IP-10 mRNS szintek 1,5-szeresére emelkedett, 2 órán át, és lett határozottan magas (8-szoros) 4 h (3A). RANTES mRNS szintek magasabbak voltak, 3,2-szeres, 0,5 óra, és magas maradt, de kisebb mértékben (1,3-szeres), 8 órával az IFN-γ kezelés PML katalógusa - /- MEFs . Egyéb kemokin gének, beleértve az MIP-1, MIP-2 és az MCP-1, nem detektálható kifejezve PML
+ /+ vagy a PML
- /- MEFs (az adatokat nem mutatjuk be). STAT-1 expresszió fokozott expozíció után az IFN-γ mindkét sejttípus, de nincs különbség nyilvánvaló volt, amikor az IFN-γ szinteket összehasonlították a PML katalógusa + /+ és PML
- /- sejtek. Mivel transzkripcióját az IP-10 gént lényegében megemelkedett IFN-γ-stimulált PML
- /- MEFs, mértük releváns protein szintjét tenyészetének felülúszóiban PML
+ /+ és PML
- /- MEFs segítségével egy enzimmel kapcsolt immunoszorbens assay (ELISA). Összhangban a RPA eredményeket, a magasabb szintű IP-10 fehérje volt nyilvánvaló a kondicionált tápközeggel IFN-γ-val kezelt PML
- /- MEFs (3B ábra). Továbbá, IP-10 mRNS expressziójának PML
siRNS-transzfektált NIH3T3 sejtek fokozott, összehasonlítva a kontroll siRNS-transzfektált sejtek, követve az IFN-γ kezelés (3C, ábra). A csökkentés a kifejezés a PML fehérje PML
siRNS-transzfektált NIH3T3 sejteken igazoltuk immunoblotting.</sup>

Csökkentett PML expressziós fordítottan arányos az IP-10 fehérje szint gyomor rákos szövetekben és SNU- 638 sejtek

Ezután megvizsgáltuk a kapcsolat IP-10 és a PML fehérje expresszió előrehaladott gyomorrák szövetet. Rák szöveteket immunhisztokémiai festettük PML és IP-10, és az intenzitás a IP-10 immunpozitivitás mértük leírtak szerint Anyagok és módszerek. Az átlagos intenzitását IP-10 1,2 14 mutató minták diffúz pozitivitást (DP) a PML, 2.2 19 példányait fokális pozitivitást (FP), és 2,0 16 mintában, amelyben nem volt teljes elvesztése (CL) PML kifejezés ( A 4A, bal panel). Jelentős emelkedése IP-10 expresszió volt megfigyelhető mutató minták fokális pozitivitást PML ( P katalógusa = 0,034), mint azok, mutatja diffúz pozitív PML kifejezést. Növekedése IP-10 expresszió volt megfigyelhető, amikor teljes elvesztése PML nyilvánvaló volt, ahhoz képest, amit jegyezte amikor PML volt diffúz kifejezve; azonban ez a különbség nem érte el a statisztikai szignifikanciát. Jellegzetes példák az eltérések PML fehérje állapot, amely korrelál a különböző IP-10 expressziós szinteket a tumorsejtekben a fejlett gastricus karcinómák mutatja (4a ábra, jobbra). Ahhoz, hogy tovább vizsgálja a kapcsolat IP-10 és a PML fehérje expresszió gyomorkarcinóma sejtvonalon, IP-10 protein szinteket mértünk felülúszóit SNU-638 sejtek átmenetileg transzfektált vagy PML katalógusa siRNS vagy PML IV exression vektor. A sejteket a távollétében vagy jelenlétében IFN-γ 8 órán, felülúszókat összegyűjtjük, és az IP-10 szint mennyiségileg ott (ELISA-val). IFN-γ-indukált IP-10 szekréció szignifikánsan fokozódott SNU-638- PML
siRNS-transzfektált sejtek, összehasonlítjuk a SNU-638 transzfektált sejtek kontroll siRNS (4b ábra). Transzfekciója SNU-638, PML IV expressziós vektorral elnyomott IFN-γ-indukált IP-10 szekréció (ábra 4C). Az eredmények világosan mutatják, hogy a váladék a IP-10 a gyomor rákos sejtek fokozott, ha a PML expressziója csökken.

IP-10 semlegesítés csökkenti a vándorlási a T-sejtek

SNU-638- PML
siRNS-t tartalmazó sejtek csökkent szinten expresszáló PML fehérje mutatta, fokozása T-sejt-felvételi és IP-10 szekréció válaszul IFN-γ (2. és 4. ábrán), akkor a következő megvizsgálták növekedését IP 10 szint megkönnyítette a T-sejt-migrációra felé kondicionált tápközeggel SNU-638 gyomorrák-sejtek által stimulált IFN-γ. SNU-638- PML
siRNS sejteket jelenlétében vagy távollétében IFN-γ 8 órán, és az összegyűjtött felülúszókat előkezeljük egy anti-IP-10 semlegesítő antitest vagy kontroll nem-specifikus IgG 1 H, megkezdése előtt a transwell vizsgálatban. A semlegesítő ellenanyag vagy IgG-tartalmú felülúszókat helyezzük az alsó kamrák, és a migráció Jurkat sejtek felső alacsonyabb kamrák analizáltuk vizsgálatával sejteket betakarított az alsó kamrákat. Felvétele IP-10 semlegesítő ellenanyagok gátolta a Jurkat T-sejt-migrációra felé kondicionált tápközeggel SNU-638- PML
siRNS sejtekben (5A ábra). Ezek az eredmények összhangban vannak nyert adatokat NIH3T3 sejtek Egy IP-10-semlegesítő ellenanyag gátolja EL-4 T-sejt migráció felé kondicionált médium NIH3T3- PML katalógusa siRNS-sejtek (5B ábra). katalógusa

PML kiütése fokozza IP-10 promóter aktiválás

IP-10 expresszió fokozott volt PML knockdown sejtekben, akkor a további megvizsgálta, hogy a PML fehérje expresszióját befolyásolja IP-10 promoter aktivitását. Az egér IP-10 promoter tartalmaz egy feltételezett GAS-szerű elem között fekvő NTS -246 és -238 (TTN _{5AA) (6a ábra). Mi korábban beszámolt arról, hogy a PML negatívan szabályozza a transzkripciós aktivitását STAT-1 [17]. Annak bizonyítására, hogy a PML érintett IFN-γ-indukált IP-10 gén expressziója via katalógusa mechanizmus magában STAT-1, izoláltunk és generált egy riporter konstrukcióval kezdődő pozíciójában -330 a rágcsáló IP-10 promoter tartalmazó feltételezett GAS-szerű elem, ahogy az anyagok és módszerek. Az IP-10- Luc
riporter tartalmazó GAS-szerű elemet tranziensen transzfektáltuk NIH3T3 sejteket inkubáltuk vagy anélkül IFN-γ-on 24 órán, majd ezt követően luciferázaktivitásra vizsgáltuk. IFN-γ-indukált IP-10 promoter aktivitás szignifikánsan fokozott NIH3T3 sejtekben transzfektált PML
siRNS, sejtjeivel összehasonlítva kapó kontroll siRNS (6B). Transzfekciója során NIH3T3 sejteket a PML IV expressziós vektort, az IFN-γ-indukált IP-10 promoter aktiváció szignifikánsan elfojtott. Downregulációját PML kifejezés a PML katalógusa siRNS és túlzott mértékű PML által PML IV expressziós vektor igazoltuk immun. Annak meghatározására, hogy a gátló hatás a PML IFN-γ-indukált IP-10 promoter aktivitásának történt gyomorrák sejtvonalakon végeztünk hasonló kísérleteket SNU-638 gyomor rákos sejteket. A mintákat a növekedését és csökkenését a luciferáz aktivitás SNU-638 volt, hasonló a NIH3T3 sejtek (ábra a 6C). A szint PML protein expresszió SNU-638 sejteket transzfektáltunk vagy PML
siRNS vagy PML IV expressziós vektort igazoltuk immunoblot (adatokat nem mutatjuk).}

PML knockdown növeli az IFN-γ- indukált STAT-1 DNS-kötődésének az IP-10 promoter katalógusa

az effekt PML IFN-γ-indukált STAT-1 DNS-kötődésének az IP-10 promoter alaposabban megvizsgálták. PML fehérje túltermelése NIH3T3 sejtekben, miután tranziens transzfekciót az PML IV expressziós vektor, részlegesen blokkolt IFN-γ-indukált STAT-1 DNS-kötő és a VI-10 promoter, beleértve a szekvencia -246 hogy -238 (7a ábra, hasonlítson 3. és 5. sávban). Verseny használata egy 100 moláris feleslegben jelöletlen kódoló oligonukleotid az IP-10 promoter megszüntette komplex képződését (6. sáv). A szinteket a PML és a STAT-1 fehérje expresszióját teljes sejt lizátumok (WCL) és milyen mértékben a STAT-1 tirozin foszforiláció a nukleáris extraktumok (NE) igazoltuk immunoblot. Kihasználva NE-re NIH3T3- PML
siRNS kapott sejteket 0,5 óra elteltével az IFN-γ kezelés, erős kötődését az egér IP-10 promoter volt megfigyelhető (7B ábra, felső panel, 5. sáv), míg a kötődést látott NIH3T3-kontroll siRNS sejtek (3. sáv). Ugyanez a NES voltak kitéve a STAT-1 konszenzus oligonukleotid, és a STAT-1 DNS kötő fokozódott NA NIH3T3- PML
siRNS sejtek (7B ábra, középső panel, hasonlítson sávokat 3 és 5). Használata SNU-638 gyomorrák-sejtek, azt is tapasztaltuk, hogy a STAT-1 DNS-kötő a PML
siRNS-transzfektált SNU-638 sejtek fokozott képest, hogy a kontroll siRNS-transzfektált sejtek, kezelés után IFN-γ (ábra 7C, hasonlítson sávokat 3 és 5). Ezek az adatok azt jelzik, hogy a PML részlegesen gátolja a STAT-1 kötődését a az IP-10 promoter, és hogy ez a hatás összefüggésben van a megnövekedett IFN-γ-indukált IP-10 transzkripció hiányában PML.

Megbeszélés

kórszövettani vizsgálatok kimutatták, hogy a gyulladásos mikrokörnyezetében daganatok jelenléte jellemzi a mononukleáris sejt infiltrátumok, mind a támogató stroma és a tumor régiókban. Azonban a pontos mechanizmus, amellyel az mononukleáris sejtek beépülni és fenntartják belül rákos szövetekben jelenleg nem teljesen tisztázott. A jelen tanulmányban kínálunk bizonyíték, hogy a veszteség a kifejezés a tumor szupresszor fehérje, PML, hozzájárul javítása limfocita beszivárgása gyomorrák szövet, via katalógusa szabályozása IP-10 expression. Katalógusa

Megvizsgáltuk a funkciója PML tekintetében limfocita felvételi humán gyomorrák szövetminták, PML katalógusa ^{+ /+ és PML katalógusa - /- MEFs, és a PML knockdown mind NIH3T3 és SNU-638 sejtekben. Nyert adatok mind az emberi szövetek tesztek és a migráció transzwell vizsgálat azt mutatta, hogy a veszteség PML elősegíti limfocita-kereskedelem; így kerestük mechanizmusok esetleg magyarázni ezeket a megfigyeléseket. Megmutatjuk, hogy a növekedés az IP-10 szint a rákos sejtekben expresszáló alacsony szintű PML hozzájárul a limfocita felvétel. Továbbá, IP-10 semlegesítő ellenanyag gátolja a T-sejt-migrációra felé származó kondicionált tápközeggel NIH3T3 fibroblasztok és SNU-638 gyomorrák sejtek in vitro katalógusa, összhangban az eredmények a több korábbi in vivo
tanulmányok , amely azt mutatta, hogy a semlegesítés az IP-10 elnyomott T-sejt-toborzás [39], [40]. A legjobb tudomásunk szerint ez az első tanulmány azt mutatja, hogy a tumor-szuppresszor, PML, szabályozza az IP-10 kemokin transzkripciót és limfocita kereskedelem gyomorrák, által aktivitásának modulálására az IFN-γ /STAT-1 jelátviteli.}

IP-10, a-limfocita-célzási CXC kemokin által indukált I. típusú és II IFN, fontos szerepet játszik a limfocita toborzás mellett számos gyulladásos állapotok [41]. IP-10 kiválasztódik a tumor-infiltráló immunsejtek, és szintén a tumoros és parenchyma sejtek egy interferon és citokin-dúsított mikrokörnyezet. TAF-okat tüdőrákban szenvedő betegek konstitutívan termelnek és szekretálnak IP-10 [27]. A hepatociták fertőzött a hepatitis C vírus előállításához IP-10, és indukálják a migráció az aktivált T-sejtek a máj parenchyma, jelezve, hogy az IP-10 szint korrelálnak szövettani súlyosságától és a gyulladást [42]. A mi rendszerünkben, IP-10 szekréció volt megfigyelhető gyomorrák SNU-638-sejtek, NIH3T3 fibroblasztok, és MEFs, válaszul az IFN-γ, és szekréció fokozott hiányában PML fehérje expresszióját. Mivel azt találtuk, hogy nem volt észlelhető különbség a szint STAT-1 expressziója és foszforiláció jelenlétében vagy távollétében a PML upon IFN-γ (3. és 7. ábra), a megnövekedett IFN-γ-indukált IP-10 transzkripció hiányában PML okozta elsősorban a fokozott STAT-1 DNS-kötődésének IP-10 promoter. Javasoljuk, hogy a PML-gátlást STAT-1 DNS kötő vezet elnyomása STAT-1 függő IP-10 expression, összhangban van a korábbi eredményekkel [17]. A jelen tanulmányban azt azonosítani egy potenciális szabályozó régió PML az IP-10 promoter, amely egy feltételezett STAT-1-kötőhely. Továbbá megmutatjuk, hogy a PML knockdown növekszik IFN-γ-indukált STAT-1 DNS-kötő és a VI-10 promoter, valamint fokozza az IP-10 szint hiányában PML.

A limfociták, neutrofilek, makrofágok, és hízósejtek fő összetevője a legtöbb tumor beszűrődés. Tumort infiltráló limfociták azonosítottak különböző szolid daganatos szövetekben. Ugyanakkor a konkrét funkciói ilyen sejtek tumorok, és a pontos molekuláris mechanizmusait limfocita toborzás tumorokba, továbbra is ellentmondásos. Az állapot és funkcionális jelentősége CD8 ^{+ T-sejt-beszivárgás daganatok és az egyesület az ilyen sejtek a beteg prognózisa, szintén világos. A vesesejt-karcinóma, beszivárgó CD8 + T-sejtek társul kedvező prognózist [43]. Ezzel szemben az ilyen beszivárgás kapcsolódik kedvezőtlen prognózissal nem kissejtes tüdőrákos betegek [33]. Mi itt azt mutatják, hogy a PML fehérje expresszióját a tumorsejtekben fordítottan arányos a mértéke beszivárgás a CD8 + T-sejtek tumor szövetekben. Ha a funkció PML a nyirokér invázió tartják együtt a szövetség között PML kifejezés és kedvezőtlen prognózist [2] úgy tűnik, hogy minden kapcsolatát a klinikai jellemzői és milyen mértékben a CD8 + T-sejtes infiltráció olyan gyomorrákos betegek igényel további vizsgálatokat. katalógusa}

az atommagok normál gyomornyálkahártya-mirigyek, stroma szöveteket, és limfoid sejtek diffúz immunpozitívak (közepes-erős) PML fehérje expresszió, míg a PML szint csökkent vagy megszűnt daganatos sejtekben (ábra 1). Ezek az eredmények alátámasztják azt az elképzelést, hogy a rákos sejtek specifikus lebomlási mechanizmusok PML. Azt javaslom, hogy a poszt-transzlációs proteaszóma-függő degradáció magyarázza a veszteséget a PML fehérje. Más szavakkal, lebomlás transzkripciós szinten nem rendelkező [2], [44]. PML fehérje expressziója csökkent vagy megszűnt számos különböző rákos megbetegedések, beleértve a prosztata-, emlő-, központi idegrendszeri, vastagbél-, tüdő- és gyomorrák [2], [3]. Ezekkel az eredményekkel egybevág megfigyeltük, csökkentett vagy elhanyagolható kifejezése PML előrehaladott gyomorrákban szövetekben. Sőt, az eredmények arra utalnak, hogy a rákos sejtek kifejező különböző szintű PML fehérje eltérő képességüket vonzani és megtartani a limfociták daganatos területeken, így biztosítva további bizonyíték arra, hogy az ilyen sejtek aktívan részt vesz a létesítmény gyulladásos daganat mikrokörnyezet, via
PML-mediált mechanizmusok. katalógusa

NF-kB és STAT-3 jelátviteli javasolják, hogy szolgáljon fő szabályozási rendszerek összekapcsolása gyulladás a rák [45]. IL-6, az NF-kB-függő gyulladásos növekedési faktor, lényeges a gyulladás kialakulásával összefüggő karcinogenezis [46]. Újabb bizonyítékok tovább erősítette az elképzelést, hogy az IL-6 /gp130 /STAT-3 jelátviteli tengely szolgál mind autokrin és parakrin amplifikációs hurok tüdő adenokarcinóma, a myeloma multiplex, a Ras-transzformált rákos sejtek, és egy vastagbélgyulladás-asszociált rákos modell [47], [48], [49], [50]. PML kimutatták, hogy elnyomja az IL-6-indukálta STAT-3 aktivitás [51], hogy támogassák az apoptózis keresztül
egy TNF-közvetített folyamat, és a érzékennyé sejtek apoptózis gátlásával NF-kB által közvetített túlélési út [52]. Ugyanakkor azt is meg kell állapítani, hogy veszteség a tumor szupresszor PML hozzájárul változások a gazda immunválaszát vagy tumor mikrokörnyezetében, talán így sem immunológiai vagy az immunrendszer menekülés, modulációval transzkripciós faktorok. Így érdekes lenne összehasonlítani a hatását veszteség PML fehérje expresszió NF-kB /STAT-3 és STAT-1 jelátvitel, és megállapítani, hogy ezek a transzkripciós faktorok funkció összehangolt módon szabályozni a kifejezés egy részét kemokinek kialakításának gyulladásos daganat mikrokörnyezet. katalógusa

anyagok és módszerek katalógusa

Cells katalógusa

Elsődleges és halhatatlanná PML katalógusa ^{+ /+ és PML katalógusa - /- MEFs voltak létrehozni és fenntartani a leírtak szerint [53]. Az SNU-638 humán gyomor carconoma sejtvonalat, Jurkat humán T-sejt limfoblaszt sejtvonal, és az El-4 egér T-limfóma sejtvonalakat tartjuk a korábban leírtak [2], [54].}

gyomorrák szövetek katalógusa

az összesen 49 gyomorrák parafintömböket kaptuk 49 beteg (29 férfi, 20 nő; átlag életkor 64 év; tartomány 35-84) átesett teljes vagy részösszeget gastrectomián színpadi IV fejlett gyomor carcinoma Mokdong Hospital, Ewha Női Cipő Egyetem Orvostudományi, Szöul, Korea a 2001-től 2007-katalógusa

Reagensek és antitestek katalógusa

a rekombináns egér és humán IFN-γ (mIFN-γ és hIFN- γ) és a MIP-10 és a hip-10 vásároltunk ProSpec (Rehovot, Izrael). Antitestek PML (egér monoklonális) és a STAT-1 vásároltuk az Upstate Biotechnology, Inc. (Lake Piacid, NY, USA), és a semlegesítő antitest az IP-10-től vásároltuk R &D Systems (Minneapolis, MN, USA). Ellenanyag-p-Y701-STAT-1-től vásároltuk Cell Signaling Technology (Beverly, MA). Antitestek hiszton, lamin B és a PML (nyúl poliklonális) vásároltunk a Santa Cruz Biotechnology (Santa Cruz, CA, USA), és az anti-tubulin antitesttel a Sigma-Aldrich, Co. (St. Louis, MO, USA) .

az immunhisztokémia, sejtszám, és a mérési immunreaktív területek katalógusa

az emberi gyomor rákos szövet feldolgozása immunhisztokémiai analízis korábban leírtak szerint [2], kisebb módosításokkal. Elsődleges ellenanyagok (PML 1:200; Santa Cruz Biotechnology), CD8 (1:50; Thermo Fisher Scientific, Fremont, CA, USA), és az IP-10 (1:50; R &D Systems) használtunk. Minden metszeten kontrasztfestést Mayer féle hematoxilinnel. A pozitív kontrollok alkalmazásával kaptuk nádor mandulák PML fehérje és CD8, és orr-garat differenciálatlan carcinoma az IP-10. Negatív kontrollt elhagyásával primer antitestek minden diák. Immunpozitivitást PML fehérjét minősíteni diffúz pozitivitást (nukleáris immunreaktivitás ≥50% tumorsejtek), fokális pozitivitást (In ≥10%, de < 50%), vagy teljes elvesztése (a < 10% tumor sejtek). A számok a CD8 immunpozitív sejtek egy high power field (HPF, X40) 0,25 mm ^{2 öt, véletlenszerűen kiválasztott tumor infiltrativ határok megszámoltuk az egyes minta, ezt követően kiszámoltuk az átlagos számot és SD. Immunpozitivitása az IP-10 definiálták a nukleáris vagy citoplazmatikus pozitív kifejeződése a tumor sejtekben. Meghatározására kifejezett szintjének minden dia, digitális képeket kaptunk mikroszkóp szerelt digitális fényképezőgép. Használata ImageJ szoftver (http://rsb.info.nih.gov/ij), minden kép alakítunk 8 bites szürkeárnyalatos és terület sűrűsége mértük a pixelek a régióban az érdeklődés; csak meghaladó pixelek egy meghatározott szintet (> 50 intenzitás érték) is beépítettük, hogy megszüntesse háttér hiba.}

siRNS transzfekció

NIH3T3-sejteket tranziensen transzfektáltunk alkalmazásával Mirus transzfekciós reagens (Mirus Bio LLC, Madison,

• PLoS One: downregulációját RPL6 siRNS proliferációját gátolja, és a sejtciklus progressziójában humán gyomornyálkahártya rákos sejtvonalak
• PLoS One: Mir-29a gátolja a sejtek proliferációs és sejtciklusleállást keresztül downregulációját p42.3 Humán gyomorkarcinóma