enstanen Studien hunn uginn, datt microRNAs zu der Entwécklung an Werdegang vum Kriibs betraff sinn. Hei fannt mir dat Mir-202-3p war dacks verwandelt-reglementéiert gastric Kriibs Stoffer. Overexpression vum Mir-202-3p zu gastric Kriibs Zellen MKN-28 an BGC-823, mat Ofstand Trupen Zell Prolifératioun an entschlof Zell apoptosis souwuel kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung. Doriwwer eraus, war Gli1 Ausdrock dacks positiv zu gastric Kriibs Stoffer an inversely mat Mir-133b Ausdrock soll. Mir bewisen, datt d'transcriptional Faktor Gli1 eng Zilscheif vum Mir-202-3p war a spillt eng wesentlech Roll als Mediateur vun der biologescher Auswierkunge vum Mir-202-3p zu gastric Kriibs. Mir-202-3p inhibited och den Ausdrock vun γ-catenin an BCL-2. Geholl zesummen, dëse Conclusiounen hindeit datt Mir-202-3p als Roman entholl suppressor Funktioun kënnen zu gastric Kriibs a senger Anti-entholl Aktivitéit der direkter gezielt an inhibition vun Gli1 VerfÜgung Fro kann Spezialfäegkeeten:. Zhao Y, Li C, Wang M, Su L, Qu Y, Li J, et al. (2013) Erof vum Mir-202-3p Expression, eng Verfilmung entholl Suppressor, an Gastric Cancer. PLoS NËMMEN 8 (7): e69756. Doi: 10.1371 /journal.pone.0069756 VerfÜgung Redakter: William C. S. Cho, Queen Elizabeth Spidol, Hong Kong VerfÜgung Arnaque: 28. Februar 2013; Akzeptéiert: 11 Juni, 2013; Publizéiert: 25. Juli 2013 zu Copyright: © 2013 Zhao et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Etude war vun Stipendie aus National Natural Science Foundation vu China ënnerstëtzt (Nos. 81072012, 81101847, 81172324, 91229106 oder 81272749), Wëssenschaft an Technologie Kommissioun vu Shanghai Gemeng (Nos. 10jc1411100, 11jc1407602, 09DZ1950100, 09DZ2260200, 12XD1403700 an 12PJ1406300), Key Projetën an der National Science a Technology léit plangen vu China (Nr 2011BA203191), Research Fund fir d'Promotioun plangen Héichschoul- of China (Nr 20110073110071), Key Project vu Shanghai Education Comité (Nos. 12ZZ102, 12ZZ105) an Innovation Foundation fir Dokteraarbecht se vu Shanghai JIAO Tong University School of Medezin (BXJ201213). D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Gastric Kriibs (GC) ass eent vun de meescht genannten malignancies an d'zweet Équipe gemeinsam Ursaachen vun Kriibs Zesummenhang Doud weltwäit [1]. Obwuel Schrett an Behandlung, ass d'Iwwerliewe Taux vu Patienten mat GC enttäuschend ass, dat haaptsächlech wéinst de Manko vu spezifesche therapeutesch Ziler. Dofir, et ass wichteg de molekulare Mechanismen Basisdaten der Entwécklung vun gastric Kriibs ze identifizéieren. VerfÜgung MicroRNAs (miRNAs) sinn eng Klass vu klenge (18-25 nucleotides), noncoding, Single-gekëmmert endogenous RNAs. Si oofgesinn FAQ Ausdrock vun der 3'untranslated Regiounen (3'UTRs) vun Zil- Genen wellkomm mat perfekt oder bruëcht ergänzen Message proposéiert. Etuden iwwer de leschte Joren gewisen, datt dysregulated miRNAs wichteg Roll an verschiddenen Cancers [1] Leeschtung - [4], dorënner GC [5] - [13]. Daten aus Etude op miRNAs an hir Zil- Genen kann spannend therapeutesch Méiglechkeeten bidden [3]. VerfÜgung Mir hu viru puer miRNAs dereguléierte am GC, wéi downregulation vum Mir-126 [14], Mir-409-3p identifizéiert [15], Mir-625 [16], an upregulation vum Mir-21 [17], Mir-301a [18]. Obwuel vill miRNAs identifizéiert ginn mam GC associating, brauch de Mechanismus vun dësen miRNAs zu gastric tumorigenesis nach propagéieren gin. An eiser leschter Aarbecht, vill putative miRNAs datt Ënnerscheed Ausdrock tëscht GC Stoffer an hir bascht Net-entholl Stoffer aus 28 Patienten huet sech identifizéiert [19]. Ënnert hinnen, gouf Mir-202-3p ee vun de stäerkste vill rofgaang miRNAs. Mä d'Roll vum Mir-202-3p am GC ass selten propagéieren. VerfÜgung Mir-202-3p, virdrun genannt kann awer och sin-Mir-202, bannent engem chromosomal fragil Site zu 10q26. Läsche vun der fragiler Site huet mat endometrial [20], Gehir erhéijen assoziéiert gouf [21], [22]. Mir-202 huet gemellt ginn an Broscht Kriibs dereguléierte ginn [23], [24], cervical squamous Zell [25], colorectal Kriibs [26] an follicular lymphoma [27]. Petrocca et al. dass Mir-202 fonnt gouf zu chronescher gastritis verwandelt-reegelen [28]. Mir-202 gouf duerch 4-hydroxynoneal (HNE) an HL-60 Leukämie Zellen [29] verwandelt-reglementéiert gin gewisen. Eng rezent Etude awer och, datt Mir-202 Ziler direkt proto-oncogene MYCN, an d'inhibition vun neuroblastoma Zell Prolifératioun doraus [30]. VerfÜgung Hei, mir eng generell Ofsenkung Mir-202-3p Ausdrock Niveau beweisen an 150 GC Stoffer mat den Net-entholl Stoffer Verglach an fannen dass de Bord-202-3p Niveauen mat entholl Gréisst a Patienten Alter verbonne sinn. Nieft, entdeckt mir, fir d'éischte Kéier, datt Mir-202-3p de Wuesstem inhibit konnt an duerch direkt gezielt Transkriptiouns Faktor apoptosis vun GC Zellen souwuel kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung induce Gli1 an inhibiting Ausdrock vun Gli1 Zil- Genen γ-catenin an BCL-2. VerfÜgung IFLA- breakpoint VerfÜgung Schrëftlech Awëllegung huet aus all Participanten kritt ginn. D'Etude gouf vun de Mënscherechter Research IFLA- Comité vun Ruijin Spidol, School vun Medezin, Shanghai JIAO Tong University (HREC 08-028), Labo Déieren IFLA- Comité vun RuiJin Hospital (LAEC 11-062) abruecht. Déier Prozedure goufen no engem vun de Finanzpolitiker Déier Care an Benotzt Comité (IACUC) op Shanghai JIAO Tong University, Shanghai, China guttgeheescht Protokoll gemaach. VerfÜgung Zell Kultur VerfÜgung Mënscherechter GC Zell Linnen SGC -7901 a BGC-823 huet aus Shanghai Institut fir biologesch Sciences, Chinese Akademie vun de Wëssenschaften (Shanghai, China) kaaft. MKN-45 an MKN-28 Zell Strecken aus der japanescher Cancer Research Resources Bank (Tokyo, Japan) kritt. NCI-N87, AGS, Kato III an SNU-1 Zell Linnen waren ursprénglech aus der American Type Kultur Collection (Manassas, VA, USA) kaaft. Mënschlech embryonal Nier Zell Linn 293T (HEK-293T) war an eisem Institut agekacht. Zellen waren, aus cryopreservation zu flëssegem Stéckstoff wéint gespäichert an um Ufank Passage benotzt. All Zellen sech am RPMI-1640 mëttelfristeg plus 10% An et Bovine serum (FBS) an cultured zu 5% CO2 humidified Atmosphär haten. Exponentially goufen wuessen Zellen fir Experimenter benotzt. VerfÜgung Patienten- Stoffer VerfÜgung primär GC Stoffer a reagéiert Net-entholl Stoffer sech aus 150 GC Patiente kritt radikal gastrectomy am Departement vun befënnt amgaang, Ruijin Spidol, School vun der Medezin, Shanghai JIAO Tong Universitéit. Echantillon waren virgezunnen-gefruer direkt nom Agrëff. All Echantillon waren déi onofhängeg agebousst Bedenken confirméiert. Keen vun de Patienten scho preoperative Behandlung. Fir all Patienten, war clinicopathological Informatiounen sinn. Entholl Klassifikatioun no der International Union Géint Cancer (2009). VerfÜgung RNS Isolatioun a Chemeschen Real-Zäit Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer) VerfÜgung Total RNS war vun Zell Linnen an Otemschwieregkeeten Echantillon ofgebaut Trizol benotzt reagent (Invitrogen, Karlsbad, USA) laut den Hiersteller d'Uweisungen. Konzentratioune an Rengheet vum RNS Echantillon sech duerch electrophoresis an spectrophotometric Methoden gemooss. Den Ausdrock Niveau vun Mir-202-3p an U6 klengen Nuklearsécherheet RNS (RNU6B) waren an triplicates vun der Desaccord-Glück RT-Hinnen alleguer Method mat der Hairpin-et ™ miRNAs qPCR Quantitation Kit (GenePharma, Shanghai, China) mat spezifesche primers assayed formiR-202-3p an U6 klengen Nuklearsécherheet RNS (RNU6B). Relativer miRNA Ausdrock vu Mir-202-3p war normalized géint d'endogenous Kontroll, U6, déi DDCt Method benotzt. D'mRNA Niveau vun Gli1 an GAPDH sech zu triplicates mat der SYBR Green real Zäit Hinnen alleguer (Obwuel Biosystems, USA) folgenden Fabrikant d'Uweisunge gemooss. Quantification war mat der DDCt relativ quantification Method mat Mënscherechter GAPDH wéi eng intern Kontroll geschitt. Déi folgend primers sech benotzt: Gli1 (Sënn: 5'-GGA Agt CAT ACT CAC GCC TCG E-3 "; antisense: 5'-CAT TGC Name AGG CTT TAC TGC E-3") [31] an GAPDH (Sënn: 5'-GGA CCT GAC CTG CCG TCT AG-3 "; antisense: 5'-GTA GCC CAG Gat GCC CTT GA-3".) VerfÜgung flüchteg Transfection vun miRNA Mimics VerfÜgung MiR- 202-3p mimics (dsRNA oligonucleotides) an negativ Kontroll mimics1 (NC) (Sënn: 5'-UUC Zoossis GAA CGU GUC ACG UTT-3 ", antisense: 5'-ACG UGA CAC GUU CGG Agées ATT-3") goufen kaaft aus GenePharma (Shanghai, China). Zellen sech rakommen an 6-gutt Placken um Virowend transfection 40% Zell Niewebaach am Moment vun transfection ze garantéieren. Transfection vun miRNA mimics an Zellen war duerchgefouert mat Lipofectamine 2000 ™ (Invitrogen, Karlsbad CA, USA) no der Prozedur vum Produzent. D'miRNA mimics sech op eng final Konzentratioun vu 100 nm benotzt. VerfÜgung Zell prolifération Assay VerfÜgung Um 24 h Post-transfection mat miRNA mimics, Zellen (2 × 10 Haart Agar Kolonie Formatioun Assay MiRNA mimics transfected Zellen sech mat 0.3% mëll agarose (A9045, niddereg gelling Temperatur, Fläch-Aldrich, USA) zu RPMI 1640 10% resuspended FBS an layered op 0,4% Kéier Agar zu RPMI 1640 mat 10% FBS wouvun am 6-gutt Placke (1 × 10 Apoptosis Analys VerfÜgung Een Dag virun transfection mat miRNA mimics, 1 × 10 Realitéit Transfection fir gëllt Zell zesummeféieren VerfÜgung Frankräich Regioun, dorënner der Primärschoul ët vum Mir-202-3p war an der EcoRI-XhoI Site vun der modifizéiert pMSCV-GW-RfA-PGK-EGFP Realitéit Vecteure gekloonten. Negativ Kontroll vectors hu keng Neiegkeet. HEK 293T Zellen (1 × 10 entholl Wuesstem zu gewaltege Sträit Mais VerfÜgung Männlech BALB /c Nu /Nu Mais, am Alter vu sechs Wochen (Institut vun Zoologie Chinese Academy vun de Sciences), sech op eng bestëmmten pathogen-gratis Ëmwelt an d'Déieren schafft Eenheetspräis, School vun Medezin, Shanghai JIAO Tong University, China waren. Mais scho human Pfleeg an der Etude Ëmwelt- goufen higeriicht no engem Protokoll Accord vun de Finanzpolitiker Déieren Care an Benotzt Comité (IACUC) op Shanghai JIAO Tong University, Shanghai, China. Zellen (100 μl, 2 × 10 TUNEL Analys VerfÜgung Den Uschloss nucleotidyl transferase-mediated Nick Enn Etikette assay (TUNEL) war folgenden Fabrikant d'Instruktioune vun de DeadEnd ™ Colorimetric TUNEL System Kit gesuergt (Promega, USA). Stoffer sech zu 10% neutraliséiert formalin an Ënnerbewosstsinn paraffin Bleck fest. Rubriken (4 μm) sech dann fir Examen preparéiert. No deparaffinization, huet de Sektiounen mat 20 behandelt g /ml proteinase K fir 10 min, mat 0.3% H 2O 2 zu methanol fir 10 min an 0,1% Triton X-100 vun 0,1% Natrium citrate fir 2 min op Äis. Dunn huet sech de Rubriken mat TUNEL Reaktioun Mëschung bei 37 ° C fir 60 min incubated. Weider incubation mat peroxidase-conjugated antibody war fir 30 min bei 37 ° C gesuergt. D'Sektiounen sech mat diaminobenzidine Léisung fir 10 min bei Raumtemperatur Kierchefënster an duerno mat hematoxylin counterstained. VerfÜgung Immunohistochemistry VerfÜgung Moment (6 mm déck) vun formalin-fix, paraffin-Ënnerbewosstsinn entholl specimenswere deparaffinized zu xylene an graded Alkohol rehydrated. Endogenous peroxidase war mat 3% H 2O 2 fir 10 min gespaart. No antigen retrieval zu citrate Prellbock (pH 6.0), waren d'Otemschwieregkeeten Sektiounen mat normal Geess serum incubated nonspecific antibody ze blockéieren bindend (20 min bei Raumtemperatur). D'Sektiounen sech dann mat Gli1 antibodies (1:50, sc-20687, Santa Cruz Déi Galaxy Santa Cruz, CA) bei 37 ° C an humidchambers fir 2 h incubated. dräi Mol No mat PBS wäschen, sech de Rubriken mat peroxidase-conjugated anti-Kanéngchen IgG fir 1 h bei Raumtemperatur incubated. Next, waren der drënner fir 5 min mat botzt Realitéiten fir manner wéi 30 min mat PBS an incubated rinsed. Haematoxylin war fir counterstaining benotzt. VerfÜgung Bau vun Plasmids an Luciferase Aktivitéit Assay VerfÜgung Eng 203-BP voll Längt vun den Wildwest-Typ (virstellen) Gli1-3'UTR oder Mann- Gli1-3 ' UTR (Mut) war de putative Mir-202-3p bindend Site mat Wierderbuch (Sangon, Shanghai, China). No Verdauung vun Viuuulenza an HindIII, goufen d'Fragmenter vu Wëllschwäin-Typ an Mann- Gli1-3'UTR an der Viuuulenza an HindIII gekloonten Siten vun pMIR-Verknëppung Luciferase Vecteure (Obwuel Biosystems) an pMIR /Gli1 an pMIR /Gli1 /Mut genannt, bzw.. DNA sequencing war benotzt der gesond fir z'iwwerpréiwen. VerfÜgung HEK-293T Zellen am 24-gutt Placke 24 h virun assay Leeschtung rakommen goufen. An all gutt, 100 NG pMIR /Gli1 oder pMIR /Gli1 /Mut, 2 NG Praxis-TkLanguage (Promega, Madison, allem, USA) wouvun Renilla luciferase an 100 nm miRNA mimics benotzt Lipofectamine ™ 2000 reagent an Opti-MEMI cotransfected reduzéiert serum mëttelfristeg. Relativer luciferase Aktivitéit war berechent 48 h der cotransfection mat Dual-Glo Luciferase assay (Promega, USA) no der Prozedur vum Produzent. Liichtkäfer luciferase Aktivitéit war normalized zu Renilla luciferase Aktivitéit. VerfÜgung Western Blot Analys VerfÜgung BTS an entholl sech lysed mat M-PRO reagents an Blockéieren Protease Inhibitor Cocktail Trikoten (Pierce, USA). D'FAQ Konzentratioun vun der Zell lysates war mat engem BCA Protein Assay Kit (Pierce, USA) laachen. Protein sech duerch SDS polyacrylamide gelies electrophoresis getrennt an blotted op 0.22-μm polyvinylidene difluoride Schläimhait (Millipore, MA, USA). Déi folgend spezifesch antibodies sech benotzt: Gli1 (1:1000, Zell sécher Technology), γ-catenin (1:2000, BD Biosciences, USA), BCL-2 (1:2000, EPITMICS, USA), a GAPDH (1: 20000, Abcam, UK). Protein Niveau sech ze total GAPDH normalized VerfÜgung Bau vun Gli1 Expression Plasmid an Transfection VerfÜgung Duerch hire cDNA vun MKN-28 mat der folgender primers:. Sënn (5'- Agt Name ACA TGG Gat ATC BEI-3 ") an antisense (5'- ATG CGG CCG CTT AGG CAC TA-3"), voll-Längt Gli1 kritt, verdaut vum EcoR V an net ech an gekloonten an pcDNA3.1 Vecteure (Invitrogen) a benannt pcDNA3 .1-Gli1. DNA sequencing war benotzt der gesond fir z'iwwerpréiwen. VerfÜgung BTS sech rakommen an 6-gutt Placken um Virowend transfection 80-90% Zell Niewebaach am Moment vun transfection ze garantéieren. An all gutt, Zellen sech mat 250 pmol vum Mir-202-3p mimics oder Kontroll, zesumme mat 4 ug vun pcDNA3.1-Gli1 oder der pcDNA3.1 eidel Vecteure transfected, vun Lipofectamine 2000 WST assay benotzt gouf um 24 h gesuergt Post-transfection, iwwerdeems apoptosis Analyse war um 48 h Post-transfection duerchgefouert. VerfÜgung statistique Analys VerfÜgung Lafend Verännerlechen sech mat der d'Student Verglach t VerfÜgung Test fir normalerweis verdeelt Verännerlechen an Wilcoxon Geleeënheet-Zomm Test fir nonnormally verdeelt Variabelen. Der Relatioun tëscht der Mir-202-3p Ausdrock Niveauen a clinicopathologic Parameteren war mat der Pearson Chi-Feld Test analyséiert. All Wäerter virgestallt ginn als Mëttel ± SDs. All Statistik analyséiert goufen benotzt PASW Statistics 18,0 Software (IBM, USA) gesuergt. A zwee-tailed Wäert vun P VerfÜgung &Si besteet;. 0,05 war statistesch relevant als VerfÜgung Den Ausdrock vun Mir-202-3p ass am GC an deemolegt Weltbild Ofgeholl mat Clinicopathologic Parameteren VerfÜgung läschten Beitrag vun Mir-202-3p sech duerch qRT-Hinnen alleguer zu entholl Stoffer an der stemmt Net-entholl Stoffer aus 150 GC Patienten (Figebam. 1A) iwwerpréift. D'Resultater weisen, datt Ausdrock vu Mir-202-3p bedeitend an entholl Stoffer Verglach mat reagéiert Net-entholl Stoffer zu 68% (102/150) vun de GC Patienten downregulated war. (P &Si besteet; 0,001;. Lalumi 1A, B) weider fir d'Korrelatioun tëscht Ausdrock Niveau vum Mir-202-3p an clinicopathologic Facteuren zu Mënsch GC, den 150 Fäll weider (Table 1) analyséiert goufen entschlësselen. Baséierend op relativ Mir-202-3p Ausdrock, waren der 150 Fäll an 3 Gruppen stratified: Mir-202-3p niddereg Ausdrock (entholl /Nët-entholl Verhältnis &Si besteet; 0,66, n = 85), Mir-202-3p moderéiert Ausdrock (entholl /Nët-entholl Verhältnis 0.66-1.5, n = 34) an Mir-202-3p héich Ausdrock (entholl /Nët-entholl Verhältnis > 1,5, n = 31). De Mir-202-3p Ausdrock Niveauen sech negativ ze entholl Gréisst soll a positiv an dëse Patienten ze Alter soll, mat der Raumstatioun-202-3p niddereg Ausdrock Grupp bedeitend méi grouss entholl Gréisst (p = 0.013) an Eelste Alter Verglach mat moderaten Schatzkummer oder héich Ausdrock Gruppen (p = 0.028). Mir-202-3p Ausdrock Niveauen hutt weisen awer, keng Relatioun mat Geschlecht, dat, entholl Standuert, entholl lokal Invasioun, lymph Node Metastasen oder TNM Etapp. VerfÜgung Overexpression vum Mir-202-3p bremst GC Zell prolifération VerfÜgung Tatsaach datt Mir-202-3p ass am GC vill rofgaang ass, kann et als e entholl suppressor Funktioun. Dofir, iwwerpréift mir ob overexpression vum Mir-202-3p am GC Zellen Zell Wuesstem betraff. MKN-28 an BGC-823 Zell Linnen, deem Ausdrock vu Mir-202-3p sech déi ënnescht an der aachter getest GC Zell Linnen (Figebam. 1c), sech fir d'Kierzunge expreiments an dëse Match gaangen. Synthetesch Mir-202-3p mimics an negativ Kontroll rescht Molekülle (NC) waren transfected an MKN-28 an BGC-823 Zellen bzw.. D'ectopic Ausdrock vu Mir-202-3p vun Zellen vun qRT-Hinnen alleguer bestätegt gouf. VerfÜgung D'WST Zell-Wuesstem assay zougedréckt a wesentleche Zell Wuesstem inhibitions zu MKN-28 Zellen mat Mir-202-3p (Lalumi transfected. 2.A). Ähnlech Resultater goufen am BGC-823 Zellen (Figebam. 2.B) observéiert. Fir weider Effet Mir-202-3p op Zell Wuesstem Markenzeeche, mir standing mëll Agar Kolonie Opstellung assay zu transfected Zellen. Mir hunn erausfonnt, datt d'Zuel vun de Kolonien aus MKN-28 Zellen mat der Raumstatioun-202-3p mimics transfected war bal d'Halschent vun deem vun der Kontroll an Elteren Grupp (Figebam. 2C). Ähnlech Resultater goufen am BGC-823 Zellen (Figebam. 2.D) observéiert. Dës Resultater weisen, datt Mir-202-3p kann der Zell Prolifératioun vu GC Zellen oofgesinn kënschtlech VerfÜgung. VerfÜgung Overexpression vum Mir-202-3p Induces GC BTS Apoptosis VerfÜgung Zënter Wuesstem inhibition zu blockéiert Zell Zyklus Werdegang oder fräi apoptosis wéinst kéint, mir duerch onkontrolléiert cytometry nächst preformed Zell Divisioun Zyklus assay an apoptosis. Eis Donnéen uginn, datt d'apoptotic Taux vu béiden MKN-28 an BGC-823 Zellen transfected mat Mir-202-3p mimics mein upregulated (Figebam. 3A, B). Allerdéngs war et kee groussen Ënnerscheed zu Zell Zyklus tëschent anescht behandelt Gruppen (Donnéeën net weisen). Dës Resultater uginn dass overexpression vum Mir-202-3p induces apoptosis am GC Zellen zu de Wuesstem inhibitory Eegeschafte vum Mir-202-3p dréit kann. VerfÜgung Overexpression vum Mir-202-3p Tumorigenicity bremst a Erhéijung Apoptosis zu VIVO Tatsaach datt mir-202-3p Wuesstem GC Zellen bremst a apoptosis induces kënschtlech VerfÜgung, mir iwwerpréift nächst ob mir-202-3p entholl Wuesstem oofgesinn hätt an induce apoptosis zu VIVO VerfÜgung. Zellen vun MKN-28, RV-Mir-202-3p (MKN-28 Zellen mat Aen do-mediated Mir-202-3p stabil Ausdrock) oder RV-Mir-Kontroll (MKN-28 Zellen mat den eidelen Vecteure) huet als beschriwwe kritt vun Material a Methoden. Zellen sech subcutaneously an Sauna Mais heijen. Entholl Équipe war iwwerwaacht. D'entholl latency Zäit weisen eng däitlech Differenz tëscht dem heijen Mais mat RV-Mir-NC Zellen a RV-Mir-202-3p Zellen (Figebam. 4A). Et ass vun bedeitend Interessi datt aus RV-Mir-202-3p Zellen ofgeleet erhéijen gewuess ass déi méi lues wéi de RV-Mir-Kontroll Grupp uechter entholl Wuesstem (Figebam. 4B). D'Moyenne Gewiicht vun erhéijen vum RV-Mir-202-3p doraus huet bedeitend manner wéi ofgeleet erhéijen vum RV-Mir-Kontroll (Figebam. 4C, D). VerfÜgung ervirgestrach, TUNEL assays vun entholl Stoffer gesuergt huet. Als zu Lalumi gewisen. 5E, de RV-Mir-202-3p Zellen duerch eng méi entholl Zell positive staining an eng wesentlech méi héich apoptotic Index wéi de RV-Mir-Kontroll Zellen ( P VerfÜgung &Si besteet; 0.01). Dës Resultater hindeit, datt Mir-202-3p inhibition vun tumorigenicity ze iwwerdribblen fir apoptosis zougeschriwwen ass zu VIVO VerfÜgung. VerfÜgung Mir-202-3p direkt Target Gli1 VerfÜgung de Mechanismus ze verstoen der entholl-inhibiting Eegeschafte vum mir-202-3p am GC Basisdaten, mir fir seng putative Zil- Genen mat Potential pro-oncogenic Funktiounen gesichte online Sich Tools benotzen (RNAhybrid a Miranda algorithms), an de Genen vun zwee vun de bioinformatic Handwierksgeschir virausgesot huet wéi de Kandidat Zil- Genen vun Mir-202-3p an dëse Match gaangen. Ënnert der honnerte vu Kandidat Genen virausgesot, d'Transkriptiouns activator ass Gli1 vun allem Interessi (Dorënner S1). D'putative Secondaire Struktur vun RNS Hybrid fir Mënscherechter Mir-202-3p an Gli1 ass zu Dorënner S2 gewisen. Gli1 huet am GC héich ausgedréckt [32], gemellt ginn [33]. Et gëtt ugeholl, datt falender Ausdrock vun Gli1 am GC Zell Linnen Wuesstem inhibition an apoptosis schéinen [33]. VerfÜgung Eng weider Uspillung un d'Potential Roll vum Mir-202-3p zu der Regelung vun Gli1 Ausdrock komm aus der Analys vun aacht verschiddene gastric Kriibs Zell Linnen (MKN-45, SGC-7901, AGS, NCI-N87, SNU-1, Kato III, BGC-823 an MKN-28). Statistesch Analyse huet e wesentleche Inverted Musteren Ausdrock tëscht Mir-202-3p an Gli1 ((r = -0,345, P VerfÜgung &Si besteet;.. 0,001, Lalumi 5A) VerfÜgung Fir bewäerten d'Medeziner Relevanz vun dëse Conclusiounen, iwwerpréift mir d'Korrelatioun tëscht der Ausstralung vun Gli1 mat mir-202-3p Ausdrock am GC Stoffer. fonnt mir datt Gli1 an mir-202-3p Collectioun ëmgedréit, et gesäit Ausdrock Muster am GC Stoffer (Table 2). ënnerstëtzen dës Resultater vum Viraussetzung datt downregulation vum Mir-202-3p den Niveau vun Gli1 Gentherapie zu gastric Kriibs vergréissert. VerfÜgung Luciferase reporter assays gesuergt huet en direkten Interaktioun tëscht Mir-202-3p an der 3'UTR vun Gli1 fir z'iwwerpréiwen. Luciferase gemellt huet mat gebaut entweder eng Wild-Typ Gli1 3'UTR Haaptrei dorënner de Bord-202-3p bindend Site (pMIR /Gli1), oder eng mutated Gli1 3'UTR (pMIR /Gli1 /Mut) (Figebam. 5B). d' pMIR /Gli1 an pMIR /Gli1 /Mut luciferase reporter gesond an HEK-293T Zellen transfected goufen, zesumme mat Mir-202-3p oder NC mimics. d'famill luciferase Aktivitéit vun der pMIR /Gli1 reporter Ofstand Verglach opgeléist gouf mat deem vun pMIR /Gli1 /Mut zu engem Mir-202-3p-ofhängeg Manéier (Figebam. 5C). Dëst Resultat beweist staark dass 3'UTR vun Gli1 der direkt bindend Siten vum Mir-202-3p projezéiert. VerfÜgung um mRNA Niveau oder FAQ Mir-202-3p Fir erauszefannen Gli1 verwandelt-reegelen, nogewise mir Gli1 Ausdrock vun qRT-Hinnen alleguer a Western blot. Als zu Lalumi gewisen. 5E, war d'Gli1 FAQ Niveau an Mir-202-3p mimics-transfected MKN-28 Zellen erofgaangen am Verglach mat NC mimics-transfected an Elteren MKN-28 Zellen. Mëttlerweil, gouf et keng Wierkung Mir-202-3p op der Gli1 mRNA Niveau (Figebam. 5D). Dës Resultater proposéiere staark dass Mir-202-3p negatif Gli1 Ausdrock um respektiv Niveau reguléieren. VerfÜgung Vun de Genen gemellt der apoptosis vun GC zu inhibit, γ-catenin (Plakoglobin) an BCL-2 sinn direkt transcriptional Ziler vun Gli1 [34], [35]. Als zu Lalumi gewisen. 5E, d'FAQ Niveau vun γ-catenin an BCL-2 sech an MKN-28 Zellen transfected mat Mir-202-3p mimics. VerfÜgung Zousätzlech Ofstand reduzéiert, mir iwwerpréift Ausdrock vun der Gli1 FAQ zu subcutaneous erhéijen ofgeleet vum RV-Mir-Kontroll a RV-Mir-202-3p an Sauna Mais duerch westlech blot Analyse. D'Gli1 FAQ Niveau vun erhéijen vum RV-Mir-202-3p bewisen downregulation Verglach mat deem am RV-Mir-Kontroll (Figebam. 5F). Dës Resultater proposéiere staark dass Mir-202-3p negatif Gli1 Ausdrock Post-transcriptionally reguléieren. VerfÜgung Overexpression vun Gli1 Marine Effekt vum Mir-202-3p am GC BTS VerfÜgung Well Mir-202-3p downregulated Gli1 Zell Prolifératioun ze inhibit an apoptosis induce, ass et dass overexpression vun Gli1 opgebauten op d'mannst zu engem Deel deem Phänomen Géigendeel kéint. Tatsächlech, wann Gli1 overexpressing plasmid (pcDNA3.1-Gli1) war an MKN-28 oder BGC-823 Zellen agefouert transiently mat Mir-202-3p mimics transfected, déi inhibitory Effet vum Mir-202-3p op Zell Wuesstem war deelweis réckgängeg gemaach, déi vun WST Zell Wuesstem assay observéiert gouf (Figebam. 6A, B). Ausserdeem, war Werdegang Richtung apoptosis och Inspektiounen wann Gli1 zu MKN-28 overexpressed war oder BGC-823 Zellen transiently transfected mat Mir-202-3p mimics (Figebam. 6C, D) .These Donnéeën Beweiser déi dat Wuesstem inhibition an Zell apoptosis entschlof vun mir-202-3p ass op d'mannst deelweis ze seng Wierkung op Gli1 Ausdrock ze dinn. VerfÜgung aktueller dofir dysregulation vun spezifesch miRNA am GC bewisen hunn [4], [13], [36 ]. Mir-202-3p, matzen am 10q26, huet gemellt ginn an Broscht Kriibs [23], [24], colorectal Kriibs [26] an follicular lymphoma [27] disregulated gin. Petrocca et al. dass Mir-202 fonnt gouf zu chronescher gastritis verwandelt-reegelen [28]. Allerdéngs ass d'Roll vum Mir-202-3p am GC Entwécklung an Werdegang nach unkown. An dëser Etude, fanne mir, datt Mir-202-3p Ausdrock vun 68% Echantillon gastric carcinoma vill méi niddereg wéi dat vun reagéiert normal Stoffer war, suggeréiert datt reduzéiert Mir-202-3p Ausdrock engem heefeg Event am GC ass. Wichtegst, sinn Mir-202-3p Niveau erof mat entholl Gréisst vun GC zu Patienten soll. Dës Resultater weist déi inhibitory Roll vum Mir-202-3p zu der Entwécklung an Werdegang vun GC. VerfÜgung Bezug Mir-202 huet verwandelt-reglementéiert gastric Kriibs Stoffer, spekuléieren mir dass overexpression vum Mir-202 der oofgesinn vläicht malignant phenotypes vun gastric Kriibs Zellen. Am Moment studéieren, weisen mir dat Restauratioun vum Mir-202-3p zu MKN-28 an BGC-823 Zellen Zell Prolifératioun vill bremst an induces apoptosis souwuel kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung. Dës Resultater bewisen staark, dass d'Verréngerung Mir-202-3p Ausdrock am GC soll e Facteur fir d'Entwécklung bäidroen ginn anstatt dass als Konsequenz vun GC betraff. Dofir, préziséiert de wesentleche inhibition vun entholl xenografts an Sauna Mais dat therapeutesch Strategien vum Mir-202-3p Kriibsfuerschung Zellen Aféiere kéint fir retarding de Prozess vun tumorigenesis nëtzlech gin. VerfÜgung MiRNAs Gentherapie Ausdrock duerch verwandelt-reegelen regléieren kann Iwwersetzung vun Zil- mRNA oder up-reegelen ofgeschnidden vun Zil- mRNAs [3], [37]. Baséierend op bioinformatic algorithms, identifizéiere mir Gli1 als eng méiglech direkt uschwätzt Gentherapie vum Mir-202-3p. Gli1, e Member vun Gli Famill, war ursprénglech als Kick Gentherapie zu engem malignant glioma identifizéiert [38]. Et ass eng staark positive activator vun afgerappt Zil- Genen an ass selwer e transcriptional Zilscheif vun Pabeiren sécher [39], an et kann och duerch RAS /PKC [40], TGFβ [41] an PI3K sécher [42], an downregulated upregulated ginn vun PKA [42] an p53 sécher [43]. Gli1 Ausdrock vun epithelial Zellen kann Zell Transformatioun induce duerch fräi Prolifératioun a Hafen-onofhängeg Prolifératioun charakteriséiert [35], [44]. Méi Zuel vun Studien weisen dass Gli1 zu verschiddenen Cancers dorënner gastric Kriibs overexpressed ass [32], [33], [45], an den Ausdrock Niveau vun Gli1 sinn positiv mat entholl dat soll [33]. Kierzen Ausdrock vun Gli1 vun cyclopamine oder siRNA schéinen GC Zell Wuesstem inhibition an apoptosis [33]. Mir validéieren weider Gli1 als direkten Zil vum Mir-202-3p, hunn mer dat Mir-202-3p bounding mat onkomplett complementarity zu Gli1 3'UTR, an overexpression vum Mir-202-3p verwandelt-reguléieren Gli1 op d'FAQ Niveau. Ausserdem, huet statistesch Analyse e wesentleche Inverted Musteren Ausdrock tëscht Mir-202-3p an Gli1 am GC Stoffer an Zell Linnen. γ-catenin (Plakoglobin) an BCL-2, direkt transcriptional Ziler vun Gli1, ginn am Rapport vum apoptosis vun GC zu inhibit. Den Ausdrock vun Gli1 afgerappt Zil- Genen γ-catenin (Plakoglobin) an BCL-2 [34], [35] sinn Ofstand reduzéiert wann Mir-202-3p am GC Zellen overexpressed ass. Dëst deit drophin, datt de Wuesstem inhibition vun GC Zellen entschlof vum Mir-202-3p deelweis zu sengem Ennerdréckung op γ-catenin an BCL-2 Ausdrock Zesummenhang kéint, deen duerch déi direkt dÉxistenz Gli1 am Tour waren. Wichtegst, overexpression vun Gli1 Marine huet an der bewosst Wuesstem inhibition an Zell apoptosis vum Mir-202-3p entschlof, weidere Beweis, dass Gli1 engem direkten Zil vum Mir-202-3p ass a proposéiert Iech eng wesentlech Roll fir Gli1 als Vermëttler vum biologesche Auswierkunge vun Mir-202-3p am GC. VerfÜgung am Resumé, Mir-202-3p ass erofgaangen dacks zu Mënsch gastric Kriibs. Restauratioun vum Mir-202-3p bremst GC Prolifératioun mannst deelweis duerch Pinguin Zell apoptosis vun direkten dÉxistenz Gli1 (Figebam. 7). Esou Rollen vun Mir-202-3p am GC proposéiere potenziellen wéi eng therapeutesch microRNA fir gastric Kriibs behandelt, deen am Wäert vu wäit Fuerschung ass. VerfÜgung Aféierung VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Ennerstëtzung Informatiounen VerfÜgung Dorënner S1.
Rot Fleesch auswiesselen fir Planzbaséiert Fleeschalternativen senkt de kardiovaskuläre Risiko
Gutt Bakterien kënne Risiko vu pulmonarer Hypertonie viraussoen
D'Erhéijung vun der Biodefense Risiken aus der synthetescher Biologie
Ëmgank mat der Celiac Krankheet
Darmmikrobiota kéint d'Gravitéit vum COVID-19 viraussoen
Fungi a Bakterien am Darm kënne gläichméisseg mënschlech Gesondheet a Krankheet Gravitéit beaflossen
Mëttelmier Diät fördert e gesonde Alterung mat engem méi gesonde Darmmikrobiom
Eng nei Studie online am Journal publizéiert Gutt am Februar 2020 bericht déi markant gesondheetlech fördert Effekter vum Wiessel op eng mediterran Diät fir nëmmen ee Joer. DResultater ware wéinst e
IBD vill méi heefeg wéi erwaart,
a wäert nëmmen an Zukunft eropgoen Et ginn dräimol sou vill Leit mat der chronescher a schlechter Darmstéierung genannt inflammatoresch Darmkrankheet (IBD) wéi jee geduecht, laut enger neier Etude pre
Bluttest fir mikrobiell DNA kéint vu Kriibs warnen
Eng nei Studie am Journal publizéiert Natur den 11. Mäerz, 2020, kéint déi aktuell gehal Meenungen iwwer Kriibs verursaachen an Diagnos transforméieren. DFuerscher sinn mat enger neier Technik komm