Stathmin1 (STMN1) ass e Kandidat oncoprotein an hätt Bewaacher geflitzt an verschidden Arte vu Cancers. Dës Etude gouf fir säin Ausdrock a biologescher Funktiounen am gastric Kriibs ze analyséieren. Den Ausdrock vun STMN1 war vun qRT-Hinnen alleguer, westlech blot an immunohistochemistry bewäert. Der biologescher Funktioun vun STMN1 war vun MTT Prolifératioun assays, monolayer Kolonie Équipe an Zell Invasioun assays mat klengen Agrëff RNS technique zu gastric Kriibs Zell Linnen alles. Mir lant och d'Regulatioun vun STMN1 Ausdrock vun microRNA-223. STMN1 war zu gastric Kriibs Zell Linnen an alleréischter gastric adenocarcinomas upregulated. STMN1-positiv erhéijen sech méi wahrscheinlech am Alter Grupp an Zesummenhang mat p53 nuklear Ausdrock fonnt ginn. An diffusen Typ gastric adenocarcinomas, war STMN1 Ausdrock mam Alter ( p VerfÜgung = 0.043) soll, T Etapp ( p VerfÜgung = 0.004) an lymph Node Metastasen ( p VerfÜgung = 0.046). Ausdrock vun STMN1 vun diffusen Typ gastric adenocarcinoma war mat aarmséileg Krankheet spezifesch Iwwerliewe vun univariate Analyse ( p VerfÜgung = 0.01) assoziéiert. STMN1 knockdown zu AGS an MKN7 Zell Linnen Trupen Prolifératioun ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.001), reduzéiert monolayer Kolonie Opstellung ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.001), inhibited Zell Invasioun an Migratioun Fähegkeet ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.001) an entschlof G1 Phase verhaft. siSTMN1 kéint och Zell Wuesstem zu VIVO VerfÜgung ( p VerfÜgung &Si besteet.; 0 01) oofgesinn. Mir bestätegt endlech dass STMN1 engem putative afgerappt Zil vum Mir-223 zu gastric Kriibs ass. Eis Conclusiounen ënnerstëtzt eng oncogenic Roll vun STMN1 zu gastric Kriibs. STMN1 kéint als prognostic Bewaacher geflitzt an e Potential therapeutesch Zil fir gastric Kriibs déngen VerfÜgung Fro:. Kang W, Tong JHM, Chan AWH, Lung RWM, Chau SL, Wong QWL, et al. (2012) Stathmin1 Spillt Oncogenic Roll an Ass eng Target vun MicroRNA-223 zu Gastric Cancer. PLoS NËMMEN 7 (3): e33919. Doi: 10.1371 /journal.pone.0033919 VerfÜgung Redakter: Wael El-Rifai, Barnard University Medical Center, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung Arnaque: 17 Oktober 2011; Akzeptéiert: 19. Februar 2012; Publizéiert: 28. Mäerz 2012 VerfÜgung Copyright: © 2012 Kang et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Etude ass vun UGC zesummegeschafft Research Fund (CUHK04 /CRF /08) an der funder senger Websäit ass http://www.ugc.edu.hk/eng/rgc/fund/crf_202011_2012.htm ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Gastric Kriibs ass eent vun de meescht genannten malignancies an der zweeter heefegsten Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang Doud weltwäit. Et ass deen héchste Heefegkeet an China, Japan, Korea an ëstlech Asien. Déi gesamt hätt aarm mat engem 5-Joer Iwwerliewe Taux ënnert 30% vun de meeschte Länner [1]. E puer potentiell Gefor Facteure gehéiert Salz iessen, Fëmmen, niddereg ofgeroden vun Uebst a Geméis, chronescher gastritis mat glandularatrophy an intestinal metaplasia, an Helicobacter pylori (H. pylori) VerfÜgung Wonn. D'Medeziner Resultat vun H. pylori VerfÜgung Wonn gouf duerch verschidde genetesch Faktore ze ginn beaflosst gewisen, besonnesch H. pylori VerfÜgung -virulence verbonne Genen wéi cag VerfÜgung A, VAC VerfÜgung A, Äis VerfÜgung A a bab VerfÜgung A [2]. H. pylori VerfÜgung Wonn ass och den Ausdrock vun der pro-demagogesch cyclooxygenase Aktivitéit (COX-2) ze induce bekannt déi a gastric Kriibs upregulated Ausdrock weist [3]. Virdrun Etuden hunn d'Wichtegkeet vun genetesch a epigenetic hire Restaurant vun oncogenes, entholl suppressor Genen an net fonnt Reparatur Genen an der Entwécklung vun gastric Kriibs dokumentéiert. Protocadherin 10 [4], Doud-verbonne FAQ kinase [5], secreted frizzled-Zesummenhang FAQ [6] a peroxisome proliferator ageschalt receptor ESO [7] goufen am gastric carcinogenesis dës Distanz zu reduzéiert Ausdrock an entholl suppressor Funktioun hunn. Wéinst dem retinoic Seier-reegelen nuklear Matrixentgasung-verbonne FAQ [8] an jo-verbonne FAQ 1 [9] sech béid upregulated an oncogenic Funktioun vun entholl Entwécklung vollt. VerfÜgung Stathmin1 (STMN1), och bekannt wéi oncoprotein 18, ass eng wichteg cytosolic microtubule-destabilizing FAQ déi am Prozess vun mitosis duerch Regulatioun vun microtubule Dynamik, an eng ganz Rei vun anere biologesche Prozesser [10] kritesch Roll spillt. Haut Niveau vun STMN1 Ausdrock ass mat aarmséileg hätt zu verschiddenen malignancies dorënner Broscht Kriibs verbonne [11], [12], Aarbecht Kriibs [13], malignant Vollek [14], cervical Kriibs [15], an esophageal squamous Zell carcinoma [16] . Am Joer 2010, Jeon et al. éischt confirméiert, datt STMN1 iwwer-Ausdrock positiv mat lymph Node Metastasen an fortgeschratt Stadium an wiere Invasioun, an negativ mat Terrain-gratis Iwwerliewe vun diffusen Typ gastric carcinoma [17] soll war. De selwechten Grupp Gewise oncogenic Roll vun STMN1 zu gastric Kriibs vun kënschtlech VerfÜgung inhibition vun Prolifératioun, Migratioun an Invasioun an gastric Zell Verse STMN1 Sax verwandelt benotzt siRNA, an zu VIVO VerfÜgung inhibition vun xenograft entholl Wuesstem an Sauna Mais vun siRNA transfection. VerfÜgung Reglement vun STMN1 Ausdrock vum mir-223 gouf zu hepatocellular carcinoma vun eiser leschter Etude [18] bewisen. Mikro-RNAs sinn eng Klass vu Single-gekëmmert RNS Molekülle vun 21-23 huel Pair zu Längt a regléieren Zil- Genen Ausdrock duerch spezifesch huel-Mariage Interaktiounen tëschent miRNA an untranslated Regioune vun geziilte mRNAs [19]. MiRNAs géif zu Mënsch Cancers als oncogenes oder entholl suppressors Funktioun an déi eventuell als Roman diagnostic an prognostic biomarkers, an therapeutesch Ziler benotzt. An gastric Kriibs, e puer miRNAs dorënner Mir-143 an -145 [20], Mir-141 [21], Mir-31 [22] an Mir-106a [23] ginn downregulated hierkommen puer oncogenetic miRNAs wéi Mir-21 an mir-27a [24] ginn upregulated. VerfÜgung Dës Etude ass fir d'funktionell Roll vun STMN1 zu gastric Kriibs Entwécklung a Mechanisme vun Regulatioun vun STMN1 zu gastric Kriibs ze ermëttelen. VerfÜgung Up-Regulatioun vun STMN1 zu gastric Kriibs Zell Linnen an alleréischter gastric Kriibs Echantillon VerfÜgung den Ausdrock vun STMN1 mRNA war héich an all 9 gastric Kriibs Zell Linnen ewéi de normal gastric Otemschwieregkeeten wéi zu Lalumi gewisen. 1A. Western blot Analys confirméiert de weider-Regulatioun vun STMN1 FAQ zu 11 gastric Kriibs Zell Linnen (Figebam. 1B). Up-reegelen STMN1 FAQ Ausdrock war zu 4 vu 5 Primärschoul gastric adenocarcinomas vergläichen mat den entspriechende Net-tumorous gastric mucosa (Figebam. 1c) observéiert. QRT-Hinnen alleguer war gehaal der STMN1 mRNA Ausdrock Niveau ze ermëttelen. An der Primärschoul gastric adenocarcinoma, 28 vun 50 Fäll (56%) huet méi wéi 1,5-fantastesch up-Regulatioun vun STMN1 mRNA Ausdrock vun entholl Otemschwieregkeeten Verglach mat den entspriechende Net-tumorous mucosa. Déi heeschen Niveau vun STMN1 mRNA Ausdrock war wiesentlech méi héich an entholl Echantillon wéi dat am Net-kriibserreegend garantéieren ( p VerfÜgung = 0,040, Figebam. 1D). VerfÜgung STMN1 Ausdrock deemolegt Weltbild mat aarmséileg hätt an gastric Kriibs VerfÜgung diffusen Typ Immunohistochemistry war standing der STMN1 FAQ Ausdrock vun 111 Primärschoul gastric adenocarcinoma Echantillon ze bewäerten. D'STMN1 FAQ Ausdrock war haaptsächlech am Zytoplasma vun der entholl Zellen en der (Figebam. 2A). Positiv immunoreactivity war zu 96 gastric adenocarcinomas (86.5%) observéiert. Ënnert deenen STMN1-positiv erhéijen, 40 zougedréckt staark (Iwwer 3), 37 Tëscherapport zougedréckt (2+) an 19 zougedréckt schwaach (1+) STMN1 staining. Virdrun Etude huet bewisen, datt de STMN1 Ausdrock negatif vun entholl suppressor Gentherapie TP53 [25] gereegelt gouf. Mir évaluéieren also den Ausdrock vun p53 FAQ vun immunohistochemistry an lant seng Korrelatioun mat STMN1 Ausdrock Niveau. Aberrant nuklear p53 Ausdrock war zu 51 (45.9%) vun gastric adenocarcinomas a méi dacks zu STMN1-positiv entholl (50.0%) wéi STMN1-negativ entholl (20.0%) ( p VerfÜgung = 0,03) fonnt. D'clinicopathologic Charakteristiken vun 111 Patienten mat gastric adenocarcinoma an der Associatioun mat STMN1 Ausdrock sech an Table 1. STMN1-positiv erhéijen gewise goufen méi wahrscheinlech am Alter Grupp fonnt ginn ( p VerfÜgung = 0.07) an Zesummenhang mat p53 nuklear Ausdrock ( p VerfÜgung = 0,03), Univariate Analyse uginn dass Alter ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.036), Histologie mat diffusen Volet ( p VerfÜgung = 0,012), Etapp ( p VerfÜgung &si besteet; 0.0001), T Etapp ( p VerfÜgung = 0,012), N Etapp ( p VerfÜgung &si besteet; 0.0001), M Etapp ( p Silencing vun STMN1 bremst déi aggressiv phenotype kënschtlech heefeg upregulation vun STMN1 mRNA an FAQ zu gastric erhéijen e Potential oncogenic Roll vun dëser Gentherapie ugeholl. Knockdown vun STMN1 duerch kleng RNS Amëschen (siRNA) Ofstand mRNA an FAQ Gang (Lalumi 3A.) An bedeitend reduzéiert Zell Verbreedung zu AGS an MKN7 Zellen als vun MTT assays bewisen ( p VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Figebam. 3B). STMN1 siRNA-mediated Wuesstem suppressive Effekt gouf weider vun Hafen-ofhängeg monolayer Kolonie Opstellung assay confirméiert. Eng bedeitend Reduktioun vun Amphipolis Zuelen an Zellen mat STMN1 siRNA, am Verglach mat Alaister Kontrollen zu monolayer Kultur (reduzéiert zu 49,2% a 68,4% vun Silessia Kontrollen zu AGS an MKN7 bzw. transfected observéiert gouf; p VerfÜgung &Si besteet; 0,001, . Figebam 3C) VerfÜgung an Zell motility assays, en däitleche Minus am invasiv phenotype duerch d'Matrigel-Beschichtete Boyden ëmkomm ( p VerfÜgung &Si besteet;.. 0,001, Figebam 3D) war an STMN1 bewisen siRNA-transfected AGS an MKN7 Zellen (reduzéiert zu 51,6% a 46,8% vun Silessia Kontrollen zu AGS an MKN7 bzw.). An Zell Migratioun assays Transwell Permeable ënnerstëtzt, eng bedeitend Diminutioun vun der Zuel vun Zellen duerch d'microporous Membran wanderen ( p VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Dorënner S1) benotzt gouf zu STMN1 siRNA transfected AGS an MKN7 Zellen fonnt (reduzéiert ze 65,9%, an 42,7% vun de Match kontrolléiert an AGS an MKN7, bzw.), proposéiert siSTMN1 der Migratioun Fähegkeet vun gastric Kriibs Zellen inhibit konnt. VerfÜgung Zënter e Wuesstem inhibitory Effet vun siSTMN1 transfected Zellen observéiert gouf, analyséiert mir der transfectants fir Parameteren Zell Zyklus Flux cytometry benotzt. Twenty-véier Stonnen no transfection, Heefung vun G1 Zellen war zu siSTMN1 transfectants Verglach mat de Match siRNA Kontrollen (Figebam. 4A) observéiert. Zellen am G1 Phas sech vu 47,5% op 53,7% an AGS, 38,0% op 43,4% an MKN7, a 30,1% op 40,1% an SGC7901 Zellen fräi. An dëst huet mat enger Ofsenkung vun S Phase Zellen begleet. An hält mat der Zell Zyklus verhaft an Flux cytometric Analyse fonnt, observéiert mir en däitleche Minus vun phospho-RB (S807 /811) an siSTMN1 transfectants (Figebam. 4B). Ausserdeem, siSTMN1 konnt spéiden apoptosis zu véier gastric Kriibs Zell Linnen getest, AGS, MKN1, BGC823 an SGC7901, déi duerch eng Erhéijung vun eenalecn-PARP (Figebam. 4B) induce vertruede war. Allerdéngs war kee groussen Ënnerscheed zu de Niveau vum p-AKT (S473) a p-Stat3 (T705) tëscht siSTMN1 an negativ Kontroll transfected fonnt. VerfÜgung siSTMN1 bremst den Wuesstem vun gastric entholl zu VIVO fir weider den Effet vun STMN1 ermëttelen op zu VIVO VerfÜgung Wuesstem vun gastric entholl, siSTMN1 an gastric Kriibs Zellen Silessia-transfected bzw.. Zanter AGS an MKN7 Zellen, net xenografts an Sauna Mais Formulaire benotzt mir SGC7901 Zellen fir zu VIVO VerfÜgung studéieren. siSTMN1-transfectant geformt kleng erhéijen op der rietser Säit verleeft wéi Alaister Kontrollen op der lénker däischtere Säit 3 Wochen no Sprëtz ( p VerfÜgung &Si besteet;. 0,01, Lalumi 4C). VerfÜgung STMN1 ass eng matgeholl Zil vum Mir-223 zu gastric Kriibs VerfÜgung Als virausgesot gouf duerch Targetscan, potentiell Mir-223 bindend Site vun der STMN1 3'UTR (Positioun 12-18 vun STMN1 3'UTR) fonnt. Ausdrock vun Mir-223 gouf zu 9 gastric Kriibs Zell Linnen Verglach mat normal gastric epithelium Otemschwieregkeeten (Figebam. 5A) downregulated. Ausdrock vun Mir-223 huet negatif mat STMN1 FAQ Ausdrock ( p VerfÜgung = 0,05) soll. Mir évaluéieren weider der STMN1 FAQ Ausdrock vun immunohistochemistry an de Niveau vum Mir-223 vun qRT-Hinnen alleguer zu 31 Primärschoul gastric Kriibs Echantillon. Erhéijen mat héichen STMN1 immunoreactivity (stoung 2+ a Iwwer 3) zougedréckt engem Net-relevant Trend zu engem nidderegen Mir-223 Ausdrock Niveau ( p VerfÜgung = 0,137, Figebam. 5B). VerfÜgung Fir beweisen d'Potential suppressive Effet vum mir-223 op STMN1 Ausdrock, transfected mir mir-223 zu gastric Kriibs Zell Linnen AGS an MKN7. Mir-223 Trupen STMN1 mRNA an FAQ Ausdrock vun zwou Zell Linnen ( p VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Lalumi 5C.). Derbäi gerett Mir-223 blocker der STMN1 FAQ Ausdrock vun MKN7 Zellen, d'suppressive Effekt suggeréiert speziell vum Mir-223 (Figebam. 5D) entschlof war. Dual luciferase reporter assays sech standing der Interaktioun tëscht Mir-223 an STMN1 3'UTR ze studéieren (Figebam. 5E). De Rapporteur gesond wouvun virausgesot oder mutated bindend Siten sech mat Mir-223 rescht zu MKN28 Zellen Co-transfected, engem gastric Kriibs Zell Linn mat relativ niddreg endogenous STMN1 Ausdrock. Mir-223 Nofolleg staark inhibitory Effekt op STMN1 3'UTR (49.7%, p VerfÜgung &Si besteet; 0.001). D'inhibitory Effekt éliminéiert war wann de Som Regioun (Mann- 1), oder alleviated wann 4 nucleotides op Som Regioun mutated sech geläscht gouf. (67.6%, p VerfÜgung &Si besteet; 0,001, Mann- 2) VerfÜgung an dëser Etude, hien huet mir déi weider-Regulatioun vun STMN1 Ausdrock vun zwou mRNA an FAQ Niveauen am gastric adenocarcinomas Verglach mat normal gastric epithelium. D'Resultat, datt STMN1 oncogenic Funktioun vun gastric tumorigenesis hunn kéinten. STMN1 huet gemellt gouf e prognostic uweist zu puer Cancers dorënner colorectal Kriibs [26], esophageal squamous Zell carcinoma [16], hepatocellular carcinoma ginn [27], [28], [29], [30] a mëndlech squamous-Zell carcinoma [31]. Mir bewisen datt STMN1 Ausdrock mam Alter Grupp, fortgeschratt T Etapp verbonnen, d'Präsenz vun lymph Node Metastasen, an eng kuerz Krankheet-spezifesch Iwwerliewe Zäit vun diffusen Typ gastric adenocarcinoma. An mat dëser fannen hält, Jeon et al. confirméiert datt STMN1 aarmséileg hätt an der diffusen Typ vun gastric Kriibs soe kéint a mat wiere Invasioun [17] vergläichen. VerfÜgung STMN1 reguléieren vun Spur Depolymerisatioun vun microtubules a Präventioun gekräizt vun tubulin heterodimers microtubule Dynamik. Inhibition vun STMN1 Ausdrock féiert zu Heefung vun Zellen an der G2 /M Phasen an ass mat schwéieren mitotic spindle abnormalities a Schwieregkeeten an d'Sortie vun mitosis [10] assoziéiert. STMN1 mediates och d'Auswierkunge vun p27 (Kip1) op Zell motility [32]. An sarcoma Zellen [33] an Net-kleng haett Kriibs Zell [34], stimuléiert STMN1 Zell motility an an duerch de extracellular Matrixentgasung kënschtlech VerfÜgung a fräi metastatic Potential zu VIVO VerfÜgung. An schlecht ënnerscheet gastric Kriibs Zell Linnen SNU638 an SNU16, siRNA-entschlof STMN1 Repressioun Zell Prolifératioun oofgesinn hätt kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung [17]. An dëser Etude, awer mir dass siRNA knockdown vun STMN1 inhibited Zell Prolifératioun a Hafen-ofhängeg Kolonie Opstellung, leider Invasioun an Migratioun ëmmer entschlof G1 verhaft an spéiden apoptosis zu gastric Kriibs Zell Linnen. Mir weider bewisen, dass siSTMN1 inhibited zu VIVO VerfÜgung Wuesstem vun gastric Kriibs Zell Linn SGC7901. Funktionell inhibition vun STMN1 erhale ofgeholl Zell Prolifératioun an invasiv phenotype, engem protumorigenic Roll vun STMN1 zu gastric Kriibs suggeréiert. VerfÜgung Mir-223 ass eng evolutionarily conserved miRNA déi am Ufank zu granulopoiesis a Servicer sinn dat gemellt gouf [35]. Den Ausdrock vun Mir-233 kéinten déi Servicer sinn Transkriptiouns Faktoren, PU.1 an C /EBPs [36] orientéiert ginn. Et kéint verschidden Zil- Genen wéi Mef2c [37], e transcriptive Faktor regléieren datt Servicer sinn Grënner Verbreedung ënnerstëtzt. Et spillt och eng wesentlech Roll während osteoclast dat [38], a konnt esou e Potenzial uweist fir onbekannt spillt Kriibs [39] an sepsis [40] zerwéiert ginn. Mir ginn virdrun dass STMN1 engem putative afgerappt Zil vum Mir-223 zu hepatocellular carcinoma ass [18]. An dëser Etude, observéiert mir eng niddereg Mir-223 Ausdrock Niveau vun gastric Kriibs Zell Versen an en ëmgedréit, et gesäit Relatioun tëscht Mir-223 an STMN1 FAQ Ausdrock. Vun luciferase reporter assays, bestätegt mir de spezifeschen Interaktioun tëscht Mir-223 an STMN1 3'UTR zu gastric Kriibs Zellen. Déi negativ modulation Effet vum Mir-223 gouf weider vun engem bedeitend reduzéiert STMN1 FAQ Niveau vun gastric Kriibs Zell Reien Mir-223 bass-Ausdrock fondéierten. D'Resultater ënnerstëtzt dass STMN1 engem putative Zil vum Mir-223 zu gastric Kriibs Zellen ass. Intriguingly, overexpression vum Mir-223 huet net Zell Prolifératioun an apoptosis ofzeänneren (Dorënner S2A & 2B) mee vill entschlof Zell motility zu gastric Kriibs Zellen (Dorënner S2C). An hält mat dësem fannen, hien huet eng rezent Etude déi Mir-223 Zell motility duerch Post-transcriptional downregulation vun entholl suppressor EPB41L3 zu gastric Kriibs Zellen [41] gefördert. Während enger eenzeger miRNA Multiple Genen Zil- kann, kann een multiple miRNA enger eenzeger Gentherapie regléieren. Déi genau molekulare mechanistic Identifikatioun vun wéi enger bestëmmter miRNA dréit zu der phenotypic Ännerungen bleift Synch. VerfÜgung Inactivation vun entholl suppressor Gentherapie TP53 ass déi gemeinsam an déi dacks am mënschleche Kriibs molekulare Evenementer studéiert. Et ass confirméiert datt p53 der Repressioun vun STMN1 Promoteur Aktivitéit mediated geplatzt negativ Regulatioun vun STMN1 Ausdrock an G2 /M verhaft an der Zell Zyklus [25], [42]. Et ass dat eng relativ kuerz Halschent-Liewen vun immunohistochemistry wëll Typ p53 FAQ net festgestallt gëtt, well et onbestänneg ass an huet allgemeng akzeptéiert. Mann- p53 FAQ am helle ganzt ass relativ stabil an huet eng laang Halschent-Liewen, wat se Magnéitfeld vun immunohistochemistry mécht. Dofir, ass eng staark an diffusen immunoreactivity allgemeng schonns vun Mann- p53 [43]. Mir évaluéieren d'p53 Status vun gastric adenocarcinoma vun immunohistochemistry an fonnt dass aberrant p53 immunoreactivity mat héichen STMN1 Ausdrock assoziéiert. Et ass also plausibel datt overexpression vun STMN1 zu Deel kéint wéinst inactivation vun der Gentherapie p53 entholl suppressor zu gastric Cancers. VerfÜgung An Conclusioun, mir bewisen huet de weider-Regulatioun vun STMN1 zu gastric adenocarcinoma an den Ausdrock mat aarmséileg soll Krankheet-spezifesch Iwwerliewe vun diffusen Typ gastric Kriibs. D'oncogenic Besëtz vun STMN1 zu gastric tumorigenesis war déi funktionell Studie confirméiert. Mir bewisen weider, datt de Begrëff vun STMN1 negatif vum Mir-223 zu gastric Kriibs Zellen reglementéiert ass. Eis Opklärung ugeholl datt STMN1 als prognostic Bewaacher déngen kéinten an e Potential therapeutesch Zil fir diffusen Typ gastric adenocarcinoma. VerfÜgung Zell Linn an Zell Kultur VerfÜgung eelef gastric Kriibs Zell Linnen, MKN28, Kato-III, MKN45, SNU16, SNU1, MKN7, MKN1, NCI-N87, AGS, BGC823, SGC7901, sech aus kritt entweder déi amerikanesch Type Kultur Collection (Rockville, MD, USA), RIKEN Zell Bank (Tsukuba, Japan) oder als e Geschenk vum Institut Digestive Genau (IDD) vum Prince Wales Spidol. Dës Zell Leitungen an RPMI 1640 (GIBCO) ergänzt mat 10% An et Bovine serum (FBS, EU GIBCO) ugebaut, 100 U /ml penicillin an 10 μg /ml streptomycin zu engem humidified Atmosphär vu 5% CO 2 op 37 ° C. VerfÜgung Séminairen gastric adenocarcinoma Echantillon VerfÜgung a Ganzen 111 Echantillon gastric adenocarcinoma aus der Otemschwieregkeeten Bank vun Präparaten a bewosst wirklech, de Prënz vu Wales Spidol, Shatin, Hong Kong Sensor goufen. Aneren 5 Puer Primärschoul erhéijen an bascht Net-tumorous Stoffer goufen während Agrëff vu Patienten ouni neoadjuvant Therapie gesammelt. D'uplanzen sech direkt fir weider molekulare Analyse zu -80 ° C gefruer. Fro uplanzen aus 50 Puer gastric Kriibs an den entspriechende Net-kriibserreegend mucosa sech duerch IDD vum Prënz Wales Hospital Audit gëtt. D'Etude ass déi Gemeinsam Chinese Universitéit vun Hong Kong-New Territoiren Osten Koup Fuerschung IFLA- Comité, Hong Kong guttgeheescht (CREC Refus. Nr 2009.521) an all Participanten Zoustëmmung geschriwwe gëtt fir d'Kollektioun vun Echantillonen an nächster Analyse informéiert. VerfÜgung RNS erauszéien, qRT-Hinnen alleguer an microRNA qRT-Hinnen alleguer VerfÜgung Total RNS Extraktioun war mat Trizol reagent (Invitrogen) standing laut Hiersteller d'Uweisunge. RNS Konzentratioun war vun NanoDrop 1000 (Thermo Fisher Wëssenschaftlech) gemooss. Héich-Kapazitéit cDNA Réckproduktioun Transkriptioun Super (Obwuel Biosystems) huet fir cDNA Synthes benotzt. Fir grouss RT-Hinnen alleguer (qRT-Hinnen alleguer), Taqman Universal Hinnen alleguer Master Mix (Obwuel Biosystems) war fir STMN1 (: GAGGTCACGTGCCTCTGTTTG; Antisense: mier CTGACCACACTCTGAGCACCAA; Studiebäihëllefe: Obwuel Biosystems, 185528556-1, FAM-CGCTTTTGTGCGCGC) applizéiert. Der relativer Ausdrock Niveau war mat glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) normalized a mat der 2∧ (-Delta Delta CT) Method berechent. Taqman miRNA assays (Obwuel Biosystems) waren benotzt den Ausdrock Niveau vun alen Mir-223 zu ofgedonkelt. Total RNS war vun MultiScribe (Obwuel Biosystems) zu Reaktioun Mëschung wouvun Mir-spezifesch Desaccord-Glück ëmgedréint transcriptive primer réckgängeg annescht. All d'Reaktioune waren am triplicates standing a Waasser Coordonnéeën sech als negativ Kontrollen agebaut. VerfÜgung Western blot an immunohistochemistry VerfÜgung Protein ofgebaut gouf aus gastric Kriibs Zell Linnen a vläit Primärschoul Stoffer Ripa benotzt lysis gefiermt mat proteinase inhibitor. Protein Konzentratioun war gemooss vun der Method vun Bradford (Bod-Rad) an 20 μg vun FAQ gemëscht mat 2 × SDS Luede gefiermt war pro Geschäftswelt iwwerlaascht, getrennt vun 12% SDS-polyacrylamide gelies electrophoresis. STMN1 FAQ war mat engem polyclonal anti-STMN1 antibody (Zell sécher,ŏ2, 1:1000) fonnt. Aner antibodies sinn aus Zell kommerziell sécher, eenalecn PARP (Asp214) (κ1, 1:1000), phospho-RB (Ser807 /811) (8, 1:1000), phospho-AKT (S473) (Ο1, 1 :1000) an phospho-Stat3 (T705) (Β5, 1:2000). VerfÜgung Immunohistochemistry war zu 4 μm-décke Sektiounen aus formalin-fix a paraffin-Ënnerbewosstsinn uplanzen gesuergt. No de-zouhuelend zu xylene an graded Ethanol, Rubriken sech zu 3% H 2O 2 Léisung fir 25 Minutten incubated endogenous peroxidase Aktivitéiten ze blockéieren an duerno mécht an citrate Prellbock fir antigen retrieval microwaving. Der Primärschoul antibodies (1:25 fir STMN1 aus Zell sécher an 1:100 fir p53 aus DAKO) waren Nuecht op 4 ° C incubated an chromagen Entwécklung war mat der Stellt System (DAKO) gesuergt. D'cytoplasmic Ausdrock vun STMN1 war vun dorop engem Undeel stoung an eng Intensitéit stoung évaluéieren. Den Undeel stoung et no Undeel vun entholl Zellen mat positive cytoplasmic staining (0, keent; 1, &Si besteet; = 10%; 2, 10 Si besteet bis &; = 25%; 3, > 25 bis 50%; 4, > 50%). D'Intensitéit stoung et fir den Duerchschnëtt Intensitéit vun positive entholl Zellen (0, keent; 1, schwaach, 2, Tëscherapport; 3, staark) gehéiert. D'cytoplasmic Virsprong vun STMN1 war de Produit vun Undeel an Intensitéit ragerullt, rangéiert vun 0 bis 12. D'cytoplasmic Ausdrock an negativ kategoriséiert war (0), 1+ (1 bis 3), 2+ (stoung 4-6), a Iwwer 3 (stoung 7-12). Nuclear p53 Ausdrock vun > 10% vun entholl Zellen war den aberrant overexpression Faarwen VerfÜgung STMN1 funktionell assays VerfÜgung Transfection vun STMN1 siRNA an Alaister Kontroll (QIAGEN) war mat Lipofectamine 2000 Transfection Reagent gesuergt (. Invitrogen). Zell Prolifératioun war mat CellTiter 96 Non-radioaktiv Zell prolifération Assay (Promega) laut Hiersteller d'Uweisunge évaluéieren. Fir Kolonie Opstellung assays zu monolayer Kulturen, mat STMN1 siRNA oder Alaister Kontroll transfected Zellen sech cultured fir 10 Deeg. Zellen sech fir 15 Minutten mat 70% Ethanol fix a mat 2% glaskloer mauve Kierchefënster. Kolonien mat méi wéi 50 Zellen pro Kolonie goufe gezielt. D'Experiment an triplicate widderholl. VerfÜgung der Zell Invasioun assays sech mat BD Biocoat Matrigel Missiounen CHAMBERS (BD Biosciences) gesuergt. Transfected Zellen sech op d'Top Chambre rakommen zu Kultur mëttelfristeg 1% FBS wouvun, mat komplett mëttelfristeg (wouvun 10% FBS) notéiert ze ënnen ëmkomm. No 24 Stonnen incubation bei 37 ° C, Zellen, datt duerch d'matrigel Membran eruewert huet fir 2 Minutte mat 100% methanol fix a mat 1% Toluidine blo fir weider 2 Minutte geschriwwen. Fir Statistiken Analyse, Zellen op der Sypiewski vun der Membran sech aus 5 zoufälleg microscopic Felder (Original Vergréisserung × 400) gezielt. All Experimenter war zu triplicate duerchgefouert, an déi heeschen Wäert war vun 2 onofhängeg Experimenter ausgedréckt. VerfÜgung D'Zell assays Migratioun sech mat Transwell Permeable ënnerstëtzt gesuergt (Corning, NY). Zellen sech aus Kultur Platen 24 Stonnen no transfection recoltéiert, gewäsch dräimol mat Kultur mëttel- a resuspended. Dunn 300 ech vun der Zell Ophiewe (5 × 10 cytometry Analyse Flow fir Zell Zyklus verhaft VerfÜgung Fir Zell Zyklus Analyse, AGS, MKN7 an SGC7901 Zellen sech zu 6 cm Placke bei der Zäit 24 Stonnen no transfection sammelen. Ier transfection, mécht d'Zellen Honger fir 12 Stonnen fir Synchroniséierung. Zellen sech fir Iwwernuechtung fir 10 Minutte bei 37 ° C an 4 ° C a behandelt mat 1 Dummeldéng /ml RNase A benotzt kal PBS an fix zu 70% kal Ethanol recoltéiert. Bewosst DNA war bei 37 ° C an der donkel mat 15 Dummeldéng /ml propidium Kaliumiodid (PI) fir 30 Minutten Kierchefënster. D'Zellen dann vun FACS Calibur Flow Cytometer (Becton Dickinson, CA) an Zell-Zyklus Profiler zortéiert huet sech mat der ModFitLT Software (Becton Dickinson, San Diego, CA) alles. D'Experiment fir zwou getrennte Mol widderholl. VerfÜgung An VIVO VerfÜgung tumorigenicity Etude VerfÜgung SGC7901 Zellen (2 × 10 Luciferase reporter assays an Mir-223 transfection VerfÜgung D'putative Mir-223 bindend Site op den 3 'untranslated Regioun (3'UTR) vun STMN1 war an pMIR-Dobäi Vecteure (Ambion Galaxy) gekloonten. Zwee Mann- gesond waren déi entweder Läschen oder Projet'en vun der ergänzen Som Haaptrei un de Bord-223 bindend Regioun generéiert, wéi virdru beschriwwen [18]. D'Liichtkäfer luciferase bauen war Co-transfected mat Renilla luciferase Vecteure Kontroll an MKN28 Zellen an der Präsenz vun entweder syntheteschen Mir-223 Molekülle oder Alaister miRNA Kontroll. Dual luciferase reporter assays (Promega) huet 36 Stonnen no transfection gesuergt. Lipofectamine 2000 war fir de transfection vum Mir-223 an AGS an MKN7 Zellen benotzt. VerfÜgung statistique Analyse VerfÜgung Déi war Student T Test ze vergläichen der Differenz vun der biologescher gelooss tëscht STMN1 knockdown Zellen an Alaister benotzt siRNA-transfected Zellen, an tëscht Mir-223-transfected an Alaister miRNA Zellen transfected. Korrelatioun tëschent STMN1 Ausdrock an clinicopathologic Parameteren sech duerch nonparametric Spearman d'Rho Geleeënheet Test évaluéieren. D'Kaplan-Meier Method benotzt gouf d 'Iwwerliewe Tariffer fir all eis ze schätzen. D'equivalences vum Survival Kéiren sech duerch umellen-Platz war domatter getest. Fir déi Verännerlechen an der univariate Iwwerliewe Analyse ( p VerfÜgung &Si besteet; 0,05) statistesch relevant fonnt ginn, de Cox proportional Risikoe Modell mat de Chancen Verhältnis domatter beschäftegt war fir weider diskutéieren si fir multivariate Iwwerliewe Analyse. All statistesch Analyse gouf vun SPSS Software (; SPSS INC Versioun 16.0) gesuergt. A zwee-tailed p VerfÜgung -value vu manner wéi 0,05 war statistesch relevant considéréiert an der p VerfÜgung -value manner ewéi 0,001 war absolut wesentleche considéréiert. VerfÜgung Aféierung VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
&Si besteet; 0.0001) an der Präsenz vun lymph Node Metastasen ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.0001) mat aarmséileg Krankheet-spezifesch Iwwerliewe soll. Vun multivariate Cox proportional Risikoe Réckgang Analyse, nëmmen Alter ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.0001) a Etapp ( p VerfÜgung &Si besteet; 0.0001) sech onofhängeg verbonne mat Krankheet-spezifesch Iwwerliewe (Table 2). An diffusen Typ gastric adenocarcinoma, war STMN1 Ausdrock verbonne mam Alter ( p VerfÜgung = 0.043), T Etapp ( p VerfÜgung = 0.004) an der Präsenz vun lymph Node Metastasen ( p VerfÜgung = 0.046). Ausdrock vun STMN1 vun diffusen gastric adenocarcinoma Typ war mat aarmen Krankheet-spezifesch Iwwerliewe vun univariate Analyse verbonne ( p VerfÜgung = 0,01, Figebam. 2B). VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Ennerstëtzung Informatiounen
D'Grondidee S1. VerfÜgung siSTMN1 bremst Zell Migratioun zu gastric Kriibs. Vertrieder Biller vun AGS an MKN7 Zellen, déi mat siSTMN1 an siScramble transfected sech migrated dann duerch eng microporous Membran (**, p VerfÜgung &Si besteet; 0.001) VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0033919. s001 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung Dorënner S2. VerfÜgung Déi funktionell Etude vum Mir-223 zu Linnen gastric Kriibs Zell. (A) MTT proliferative assays vun AGS, MKN7 an SGC7901 der Mir-223 transfection (4 Deeg nom transfection). (B) Western blot Analyse vun eenalecn-PARP zu AGS an MKN7 Zellen op 24 Stonnen nom Mir-223 transfection. (C) Vertriederin Matrigel Invasioun Biller vun AGS, MKN7 an SGC7901 sinn gewisen. Mir-223 verstäerkte der Zell Invasioun Fähegkeet vun gastric Kriibs Zellen (*, p VerfÜgung &Si besteet; 0,01; **, p VerfÜgung &Si besteet; 0.001). D'Zell Zuel gouf vun 3 zoufälleg Vue Felder gezielt an de Feeler Baren representéiert Standard Hitparad VerfÜgung Doi:. 10,1371 /journal.pone.0033919.s002 VerfÜgung (TIF) VerfÜgung
Ongesond Darmmikrobiom reduzéiert de synaptesche Gehir vum Gehir,
Lungemikrobiom viraussoen d'Gravitéit vun der COVID-19 Krankheet
Biologesch Therapie kann de Risiko vu schwéiere COVID-19 erofgoen
Ëmgank mam Reizbaren Darm Syndrom
Rot Fleesch auswiesselen fir Planzbaséiert Fleeschalternativen senkt de kardiovaskuläre Risiko
Oral Hygiène a Gravitéit vum COVID-19-d'Verbindung
Gutt Immunzellen kéinte verantwortlech si fir de Stoffwiessel Ännerungen fënnt Studie
Eng nei Studie huet gewisen datt dImmunzellen am Darm mam Taux vum Metabolismus verbonne kënne sinn. DResultater vun der neier Etude mam Titel, Darm intraepithelial T Zellen kalibréieren de Stoffwiess
Mënschlecht Mikrobiom schneit mucosal Glycanen,
SARS-CoV-2 Infektioun beaflossen En internationalt Team vu Fuerscher huet eng Studie gemaach déi weist datt Differenzen am mënschleche Mikrobiom dFäegkeet vum schwéieren akuten Otemschwier Syndrom Cor
Rot Fleesch auswiesselen fir Planzbaséiert Fleeschalternativen senkt de kardiovaskuläre Risiko
Kardiovaskulär Krankheet ass e Regenschirmbegrëff benotzt fir Konditiounen ze definéieren déi dHäerz a Bluttgefäss beaflossen an ass normalerweis verbonne mat der Opbau vu Fettablagerungen an engem er