PLOS NËMMEN: RhoE förderen Metastasen zu Gastric Cancer duerch e Mechanissem ofhängeg op Geographie Expression vun CXCR4

Wat VerfÜgung

RhoE, e Roman Member vun der Rho FAQ Famill, e Schlëssel regulator vun der cytoskeleton an Zell Migratioun ass. Eis Grupp huet virdrun gewisen, datt RhoE als direkten Zil fir HIF-1α an mediates hypoxia-entschlof epithelial zu mesenchymal Iwwergank zu gastric Kriibs Zellen. Dofir, gemengt mir dass RhoE kéint eng wichteg Roll an gastric Kriibs Metastasen Leeschtung. Am Moment studéieren, hunn mir d'Roll vun RhoE Ausdrock vun gastric Kriibs, Zell Invasioun an Metastasen, an den Afloss vun RhoE op Regulatioun d'Potential Ausdrock vun verwandelt-bäiginn Genen lant. RhoE Ausdrock war zu gastric Kriibs Stoffer nik als Verglach mat normal gastric Stoffer. Mir hunn och eng enk Korrelatioun tëscht der histological Schouljoer an d'Diagnos vun de Patient. Up-Regulatioun vun RhoE bedeitend der Opbau an invasiv Fähegkeeten vun gastric Kriibs Zellen verstäerkte souwuel kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung. Ausserdem verwandelt-Regulatioun vun RhoE manner d'metastatic Potential vun Kriibs Zellen. Hinnen alleguer vill an nächster transwell assay gewisen, datt d'Regelung vun gastric Kriibs Metastasen vun RhoE deelweis duerch CXCR4 mediated war. Dëst observation ugeholl datt CXCR4 kéint ee matgeholl effector fir RhoE ginn. Am Resumé, eiser Etude RhoE als Roman prognostic uweist an metastatic-Spur Gentherapie vun gastric Kriibs identifizéiert VerfÜgung

Fro:. Feng B, Li K, Zhong H, Ren G, Wang H, Shang Y, et al. (2013) RhoE förderen Metastasen zu Gastric Cancer duerch e Mechanissem ofhängeg op Geographie Expression vun CXCR4. PLoS NËMMEN 8 (11): e81709. Doi: 10.1371 /journal.pone.0081709 VerfÜgung

Redakter: Sharmila Shankar, Universitéit vu Kansas Medical Center, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung

Arnaque: 11. Januar 2013; Akzeptéiert: 24 Oktober 2013; Publizéiert: 29. November 2013 VerfÜgung

Copyright: © 2013 Feng et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung

Funding:. Dës Aarbecht ënnerstëtzt gouf vun der National Grondakommes Research plangen vu China (nee: 2009CB521700), d'National High Technology Fuerschung an Entwécklung plangen vu China (nee: 2006AA02A253) an der National Science a Technology plangen Ennerstëtzung während eelefte Fënnef-Joresplang Period (nee: 2006BAI02A14). D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung

Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung

Aféierung VerfÜgung

Gastric Kriibs ass den zweete Spëtzekandidat Ursaach vum Kriibs-Zesummenhang Doud vun der Welt an entholl Metastasen ass de gréissten Hindernis fir seng erfollegräich Behandlung an de grousse Ursaach vum Patient veruerteelt [1,2]. Fir Jorzéngten, hunn ville Studien d'Prozesser an Mechanisme vun Metastasen zu gastric Kriibs ze verstoen envisagéiert. An de leschte Joren ass et fonnt gouf, datt epithelial mesenchymal Transitioun (EMT) ass kruzial an dësem Prozess, an dréit daitlech ze Kriibs Zell Invasioun an Metastasen. Ee Grond ass, dass während EMT, déi cytoskeleton grondsätzléch modulated ass, Spëtzekandidat fir d'Streeung vun entholl Zellen [3]. VerfÜgung

RhoE gehéiert zu engem Sous-Grupp vun der Rho Proteinen, déi zu cytoskeleton Formatioun wichteg Roll spillen , Zell motility, Zell Zyklus a apoptosis [4,5]. Anescht wéi d'typesch Rho Proteinen, déi Zyklus tëschent eng aktiv GTP-gebonnen Staat an enger Rou PIB-gebonnen Staat, Éloquence RhoE Ausriichtung GTPase Aktivitéit an ëmmer Klengegkeeten wéi d'aktiv GTP-gebonnen Form [6]. Dësen eenzegaartegen Fonktioun weist, datt d'Funktioun vun RhoE Fong duerch hiren Ausdrock regulariséiert gëtt amplaz vun hirer Aktivitéit. VerfÜgung

Viru Kuerzem, fonnt Rei Etuden déi anormal Ausdrock vun RhoE mat carcinogenesis verbonne war, an datt RhoE kéint maachen, entweder als entholl suppressor Gentherapie oder eng oncogene, jee op d'Origine vun de Kriibs [7-9]. Den Zerfall, huet RhoE verännerlech Afloss op Metastasen zu verschiddene Cancers. An melanoma, ënnerstëtzt RhoE der Migratioun an invasiveness vun entholl Zellen vun der actin cytoskeleton Regulatioun [10]. Allerdéngs, an hepatocellular carcinoma, stellt RhoE selwer als suppressor FAQ vun entholl Metastasen [11,12]. VerfÜgung

Virdrun, eise Grupp huet fonnt dass RhoE zu gastric Kriibs Zellen vun Aféierungs- vun HIF-1α Ausdrock verstäerkte war ënner hypoxic Konditiounen a gefördert EMT vun gastric Kriibs Zellen [13]. Sou, Hypothes mir dass RhoE e positive Bäitrag zu der Metastasen vun gastric Kriibs hun kann. Am Moment studéieren, ze propagéieren mir vun RhoE op der Metastasen vun gastric Kriibs Zellen an der Basisdaten Mechanismen Afloss op d'. VerfÜgung

spontan a Methode VerfÜgung

Zell Kultur VerfÜgung

De Mënsch gastric adenocarcinoma Zell-Linnen SGC7901, MKN-45, MKN-28, Kato-III an d'normal GES gastric mucosal Zell-Linn huet an eisem Institut [14-16] agekacht. Ausserdeem, d'gastric Kriibs cell- Linn SGC7901-M, déi eng héich metastatic Potential huet, an SGC7901-NM, déi e schlechte metastatic probéiert huet, sech etabléiert an haten an eise Institut [17]. All waren d'Zellen haten an RPMI 1640 mëttelfristeg ergänzt mat 10% An et Bovine serum (GIBCO, Karlsbad CA, USA) an cultured bei 37 ° C an enger komplett humidified Atmosphär vu 5% CO2. VerfÜgung

Ray Singular VerfÜgung

Fir immunostaining Applikatiounen, zwee Otemschwieregkeeten flamenden Ofgrond vum Mënsch gastric Kriibs sech kommerziell kaaft aus géigesäiteg Biotech Co. Ltd (Shanghai, China). One Otemschwieregkeeten lackeleg 90 entholl Otemschwieregkeeten Flecken Texter iwwereneestëmmen bascht Net-entholl Otemschwieregkeeten Flecken déi aus 90 Patiente kritt huet (mat 5.3-6.1 Joer Suivi). D'Produktioun gëtt d'Geschlecht, den Alter, an clinicopathological Parameter vun de Patienten. Wéinst vill Texter 120 Flecken mat 40 Primärschoul Flecken entholl Otemschwieregkeeten, 40 reagéiert bascht Net-entholl Otemschwieregkeeten Flecken, an 40 Flecken Node Investitiounen reagéiert lymph. VerfÜgung

Immunohistochemistry VerfÜgung

Immunohistochemistry war mat Histostain ™ Plus gesuergt Uniforme (Zhongshan Goldenbridge Biotech, China) no der Taktik vum Produzent. D'Maus anti-RhoE antibody (verdënntem 1: 100; Upstate, MA, USA) oder anti-CXCR4 antibody (verdënntem 1: 200; Fläch-Aldrich, MO, USA) sech am IHC assay als éischt antibody benotzt. Mouse IgG gouf amplaz vun der éischter antibody als negativ Kontroll an dës Studien gebraucht. Déi kritt Resultat war semi-quantitativ bewäert vun Fändelen fir d'Intensitéit vun immunoreactivity a fir den Undeel vun Zellen positiv Kierchefënster wéi déi aner beschriwwen dorop. D'Intensitéit vun immunoreactivity gouf an véier Kategorien agedeelt an domatter den feelen (-; stoung: 0), schwaach (+; stoung: 1), moderéiert (++; stoung: 2), oder staark (+++; stoung: 3 laut) zu der staining Intensitéit datt an der Majoritéit vun gastric epithelial Zellen observéiert gouf. Den Undeel vun positive Zellen war an véier Gruppen séiert: (1), 0-25% vun entholl Zellen suer- immunoreactivity; (2), 25-50% vun Zellen; (3), 50-75 Prozent vun Zellen; an (4), 75-100% vun Zellen. Déi gesamt stoung et de Produit vun der zwou [18]. VerfÜgung

Western Blot Analys VerfÜgung

Protein Echantillon vun Zellen oder Stoffer vun sonication zu engem lysis Prellbock (150 mm NaCl, 50 mm Tris ofgebaut goufen -HCl (pH8.8), 0,1% SDS, 2 mm héich, 1 mm PMSF, 1% NP40, 5 μg /ml aprotinin, 1 μg /ml leupeptin) op Äis, dann bei 12.000 Ziichter fir 10 min centrifuged. Proteinen sech duerch SDS-PAGE geléist an electrotransferred zu nitrocellulose Schläimhait (Bio-Rad, CA, USA). Non-spezifesch bindend ass bei Raumtemperatur fir 1 Stonn mat 5% Fett-Mëllech gratis gespaart. D'Membran war dunn getrennt mat anti-RhoE antibody (verdënntem 1: 400; Upstate, MA, USA) incubated, anti-CXCR4 antibody (verdënntem 1: 1000; Fläch-Aldrich, MO, USA), anti-VEGFA antibody (verdënntem 1 : 500; Abcam, MA, USA), antibody anti-CD82 (verdënntem 1: 1000; Abcam, MA, USA), antibody anti-CTSK (verdënntem 1: 1000; Santa Cruz, Texas, USA) oder antibody β-actin ( verdënntem 1: 10000; Fläch-Aldrich, MO, USA) Iwwernuechtung bei 4 ° C. No véier Mëtten mat TBS-T Prellbock, goufen d'Schläimhait mat der horseradish peroxidase-conjugated Secondaire antibody incubated (verdënntem 1: 2000; Santa Cruz, Texas, USA) fir 1 h bei Raumtemperatur. No 4 Mëtten mat TBS-T Prellbock, goufen d'Gruppen mat SuperSignal Chemiluminescent Realitéiten (Thermo Wëssenschaftlech, MA, USA) entwéckelt der Proteinen ze visualiséieren. Blots sech dann analyséiert quantitativ One® Software (Version 4.2. Bio-Rad, CA, USA) folgenden de Guide d'User. Western blot fir β-actin Ausdrock sech als eng intern Kontroll benotzt. VerfÜgung

Ectopic Expression an siRNA-Mediated Silencing VerfÜgung

Fir ectopic Ausdrock vun Zil- Genen, goufen gastric Kriibs Zellen transduced mat lentivirus Vecteure ausdrécken RhoE oder CXCR4 (gëtt duerch GeneChem, Shanghai, China). Kuerz, goufen plated Zellen an ouni Antibiotiken, folgende déi de lentiviral vectors fir d'Zellen am Wuesstem mëttelfristeg wouvun polybrene (2 μg /ml) op enger MOI vum 50. Next ugebaut goufen, fir 75 bis 80% Niewebaach ugebaut, goufen Zellen fir aner cultured 72 h an d'Wonn Effizienz war vun fluorescence microscopy a Western blot Analyse iwwerpréift. Amëschung vun der Mënschheet RhoE oder CXCR4 Ausdrock war mat engem RNS Amëschen Technik erreecht. siRNA duplexes sech duerch Takara Déi (Liaoning, China) Wierderbuch an der geziilte Message vun RhoE oder CXCR4 waren also definéiert: VerfÜgung

RhoE, 5'-GAACGUGAAAUGCAAGAUAUU-3 "; VerfÜgung

CXCR4, 5'-UAAAAUCUUCCUGCCCACC-3 ".

Control siRNA duplexes sech no interrogating Héichuewen Datebank mat Net-spezifesch gezielt Message entworf. Zellen sech mat oligonucleotide duplexes transfected benotzt LipofectamineTM 2000 (Invitrogen, NY, USA) no der Taktik vum Fabrikant, folgende déi se weider 48 h Post-transfection ënnerworf waren ze deiten. VerfÜgung

Meter-Chrëschtdagszäite Assay VerfÜgung

Zell motility, exponential Phase Zellen sech rakommen an 6-gutt Telleren ze entdecken. No der Niewebaach als monolayer vun Zellen op der Plack Realitéiten, eng Plastikstut Pipette Tipp erreecht Zellen war an der Mëtt vun der Schossel Wolleken eng propper 1 mm grouss Wonn Géigend an der mëttel- war ze produzéieren ersaat duerch frësch RPMI1640 1% An et Bovine serum wouvun . No 48 h, Zell Bewegung an d'Wonn gekësst huet mat enger Phas-Kontrast microscope évaluéieren wéi virdru beschriwwen [19,20]. VerfÜgung

Missiounen Assay VerfÜgung

Zell Invasioun assays gesuergt huet e transwell Schossel mat (Corning, NY, USA) bedeckt mat Matrigel (Becton Dickinson, NJ, USA). Kuerz, war Matrigel zu enger Konzentratioun vun 2 verdënntem mg /l, a 50 μl vun dëser Léisung an engem polycarbonate filter a Loft-gedréchent geluecht gouf. No mat PBS falsch, goufen d'Filter- an Wells gesat an 700 μl vun RPMI-1640 Kultur mëttelfristeg mat 10% nà FBS war an der ënneschter Chambre notéiert. Zellen sech am RPMI-1640 mat 1% FBS an 1 × 105 Zellen vun 0,2 ml definéiert mëttelfristeg resuspended sech an der ieweschter Chambre plated. Zellen an der Invasioun CHAMBERS sech zu engem humidified incubator fir 12-48 h incubated. No engem weidere incubation, Zellen, dass d'Pore vun der Membran an verspreet un der ënneschter Uewerfläch vun de Filtere sech Kierchefënster mat 5% glaskloer mauve Léisung fir visualization wäit. Nächst, sech bei enger Vergréisserung vun × 200 aus visualizing fënnef ënnerschiddleche Beräicher ënner engem Liicht microscope (Olympus, Tokyo, Japan) an laachen d'iwwerfale Zellen an all gutt gezielt an averaged wéi vun Albini beschriwwen [21]. Der Invasioun assay gouf 3 Mol widderholl. De Wäert vun de Potto Grafik duerstellt duerchschnëttlech Zuel vun iwwerfale Zellen aus 3 separat Experimenter. VerfÜgung

Schwäif Venekrankheeten Metastatic Assay VerfÜgung

De Schwäif verfeelt metastatic assay alles war wéi virdrun gemellt [22]. Drësseg männlech Sauna Mais sech mat beschte human Praktiken ophuelen an huet fir am Aklang mat NIH Déieren Care an Benotzt Comité Richtlinnen gär. Zellen sech mat trypsin gesammelt an Katakombe dräimol mat PBS. Mais sech dann mat 1 × 106 Zellen vun 0,1 ml PBS duerch Schwäif verfeelt Sprëtz heijen. De Mais sech dann fir Punkto Gesondheet a Ganzen Kierpergewiicht iwwerwaacht. Op de 28. Dag no beim Sprëtzen, huet de Mais geaffert. Lung a Liewer Stoffer sech duerch bloussem A an d'Zuel vun siichtbar erhéijen op der haett an Liewer Uewerfläch sech observéiert laachen. Lung a Liewer Stoffer sech an Serien Rubriken Géigewier, Kierchefënster mat hematoxylin an eosin, dann ënnert engem Liicht microscope observéiert. Experimentell a Kontroll Gruppen aus all 6 Mais. All experimentell Prozedure goufen vun der hun Déierenschutzorganisatiounen an Ethik Comité, dee véierten Military Medical University guttgeheescht. Déier Experiment mat dem Accord vun de Finanzpolitiker Komitee fir Déier Fuerschung, an Konformitéit mat national Richtlinne fir d'Betreiung a Gebrauch vun Labo Déieren gesuergt. VerfÜgung

entholl Metastasen Hinnen alleguer Singular VerfÜgung

Den Ausdrock vun metastasis- laut der Uweisungen d'Fabrikatioun; verbonne Genen sech duerch d'Mënscherechter entholl Metastasen Hinnen alleguer Singular (SuperArray Biosciences, Maryland, USA PAHS-028A) alles. Éischt, war total RNS ofgebaut aus RhoE-lentviral Krankheet SGC7901 Zellen an Liewesniveau Ëmwelt- benotzt Kontroll Zellen, déi dann ëmgerechent war bis éischte-staarkt cDNA. D'cDNA Skelett war mat engem 2 × SuperArray Hinnen alleguer Meeschtesch Mëschung kombinéiert, dobäi op de Wells vun engem Hinnen alleguer Singular Plack (384-gutt) d'Gentherapie-spezifesch primer baut mat, a fir real-Zäit Hinnen alleguer ënnerworf. D'Hinnen alleguer Vëlo ware wéi follegt: 40 Zykle bei 95 ° C fir 15 ass, 60 ° C fir 1 min, an 72 ° C fir 30 ass. Fënnef housekeeping Genen huet wéi intern Kontrollen benotzt. Déi fantastesch-Changement an der Expressioun vun Metastasen-Zesummenhang Genen vun der ΔΔCt Method sech war. VerfÜgung

statistique Analys VerfÜgung

Data Analyse andems der SPSS 17,0 statistesch Analyse Software (Chicago, IL gesuergt huet, USA). De Mann-Whitney U Test benotzt huet sech d'Bedeitung vun Ënnerscheeder an der Heefegkeet vu Ausdrock vun RhoE tëscht gastric Kriibs Stoffer an lymph Node Investitiounen ze diskutéieren. D'Kruskal-Wallis H Test fir Multi-Gruppen, an de Mann-Whitney U Test fir zwee Grupp Vergläicher sech d'Relatioun tëscht deenen zwee RhoE Ausdrock Niveauen a verschidde clinico-pathologic Faktoren vun gastric Kriibs uplanzen ze analyséieren agestallt. Entwéckele Iwwerliewe Zäit war vun der Läschlëscht-Platz Test mat der Kaplan-Meier Iwwerliewe Method an analyséiert berechent. Univariate an multivariate analyséiert goufen op der proportionaler Risikoe Réckgang Modell Cox baséiert. Vergläicher vun grouss Date goufen duerch Student d'T Azeton tëscht zwou Gruppen analyséiert. Korrelatioun Analyse tëscht dem Wëllen vun RhoE an CXCR4 war vun Spearman d'Geleeënheet Korrelatioun Method geschat. Differenzen sech als statistesch relevant wann P &Si besteet; 0,05. VerfÜgung

Resultater VerfÜgung

Während-Ausdrock vun RhoE ass mat der dat Schouljoer an entholl Stadium zu gastric Kriibs Stoffer soll a beweist aarmséileg hätt fir Patiente VerfÜgung

Den Ausdrock vun RhoE zu gastric Kriibs Stoffer, bascht Net-entholl Stoffer an Zesummenhang Stoffer metastatic lymph Node war vun immunohistochemistry (Dorënner 1A) iwwerpréift. RhoE Ausdrock war schwaach ausgedréckt oder souguer feelen an bascht Net-entholl Stoffer (e) fonnt, während seng Ausdrock vill méi héich an gastric Kriibs Stoffer an lymph Node Investitiounen (b-E) gouf. Next, analyséiert mir d'Relatioun tëscht RhoE staining an der clinicopathological Parameter vun gastric Kriibs Patienten (Table 1). D'Resultater weisen, dass weder Geschlecht nach Alter mat dem Wëllen vun RhoE soll war. Allerdéngs, fräi RhoE Ausdrock statistesch mat der mannerwäerteg dat (P = 0.005) an entholl Pheidippides soll war, déi vun entholl Gréisst bestoung (T, P &Si besteet; 0.001), lymph Node Invasioun (N, P = 0.001), an fernen Metastasen (M, P = 0.003). Ausserdeem, zougedréckt Kaplan-Meier Iwwerliewe Analyse dass Patienten mat héije Ausdrock Niveau vun RhoE, mat engem méi globale Iwwerliewe presentéiert als Verglach deene Patienten mat negativen Ausdrock vun RhoE (Dorënner 1B). Multivariate Cox proportional Risikoe Modell Moosnamen uginn, datt de Niveau vun RhoE Ausdrock eng onofhängeg a wesentleche Faktor fir Iwwerliewe vun gastric Kriibs Patienten (Table S1) waren.
Expression Niveau vun RhoE
Kategorie VerfÜgung n VerfÜgung - VerfÜgung + VerfÜgung ++ VerfÜgung +++ VerfÜgung P value
Total9014283216Age0.421≤6041610187>6049818149Gender0.742Male679232213Female2355103Differentiation0.005^{aWell52120Moderately471215146Poorly380121610TNM stageT <0.001aT194320T2175840T347414209T4171367N0.001bN031111073N1-N3593182513M0.003bM08014272811M1100145Table 1. statistique Analys vun Immunohistochemical Assay VerfÜgung en, Kruskal-Wallis H Test. b, Mann-Whitney U Test CSV Luet CSV}

Duerno, mir den Ausdrock Niveau vun RhoE am primäre gastric Kriibs Stoffer an hir gepasst metastatic lymph Node Stoffer studéiert. Den Ausdrock Niveau vun RhoE sech zu 7 gastric Kriibs Stoffer derbäi, schwaach an 16 gastric Kriibs Patienten ausgedréckt, mëttelméisseg zu 11 ausgedréckt, an am héichste zu 6 Kriibs Stoffer ausgedréckt, respektiv. Par contre, an lymph Node war den entspriechende Zuel Investitiounen 3, 12, 14 a 11. Ausserdeem war den Ausdrock vun RhoE däitlech méi héich zu metastatic lymph Node Stoffer wéi dat an der Primärschoul Kriibs Stoffer fonnt. Dës Observatioune uginn dass RhoE Ausdrock mat Metastasen zu gastric Kriibs soll war (Table 2, P &Si besteet; 0,05).
Expression Niveau vun RhoE
Histological Typ VerfÜgung n VerfÜgung - VerfÜgung + VerfÜgung ++ VerfÜgung +++ VerfÜgung P gëllt VerfÜgung primär Kriibs tissues407161160.048 * Lymph Node metastases403121411Table 2. Expression vun RhoE zu primär Cancer Stoffer a reagéiert Lymph Node Investitiounen . VerfÜgung * Mann-Whitney u Test CSV CSV Luet

Expression vun RhoE zu Zell-Linnen vum Western blot (Dorënner 1c) analyséiert huet. Mir hu fonnt, dass am Verglach zu där vun de GES Zell-Linn, déi Ausdrock vun RhoE bedeitend méi héich war zu verschiddenen gastric Kriibs Zell-Linnen. Ausserdem war de Niveau vun RhoE FAQ Ausdrock vill méi héich am héichste invasiv SGC7901-M Zell sub-Linn wéi an der manner invasiv Zell sub-Linn SGC7901-NM. Dofir, sech weider Studie vun entholl Metastasen op bewosst haut kennt mat der SGC7901-M an SGC7901-NM Zell-Linnen gemaach baséiert. VerfÜgung

ënnerstëtzt RhoE den Opbau an invasiv Fähegkeeten vun gastric Kriibs Zellen kënschtlech an VIVO

fir d'Roll vun RhoE zu gastric Kriibs Metastasen beschen, mir seng FAQ Ausdrock vun SGC7901-NM Zellen folgenden transduction mat der RhoE lentivirus Vecteure oder Kontroll Vecteure (genannt SGC7901-NM-RhoE oder SGC7901-NM-Kontroll an-reglementéiert ). Par contre, an SGC7901-M Zellen vun RhoE Ausdrock dampening war folgenden transfection mat siRNA geziilte géint RhoE mRNA erreecht oder mat Kontroll siRNA (genannt SGC7901-M-siRhoE oder SGC7901-M-Kontroll bzw.). Protein Ausdrock Niveauen sech duerch Western blot Analyse no transfection (Dorënner 2A) confirméiert. VerfÜgung

Next, kënschtlech VerfÜgung Wanderung an Invasioun assay gesuergt huet (Dorënner 2B an 2C). Mir fonnt verstäerkte Ausdrock vun RhoE hätt vill weider-regléieren den Opbau an invasiv Fähegkeeten vun de gastric Kriibs Zell-Linn SGC7901-NM, zu Meter Heelung a transwell Invasioun assays. Par contre, huet eng remarquabel inhibition vun Opbau an invasiv Fähegkeeten SGC7901-M Zellen, dampened Ausdrock vun RhoE suer- als Verglach mat Kontroll Zellen. Ze verstoen, ob d'Funktiounen vun RhoE sech gemeinsam Evenementer zu verschiddenen gastric Kriibs Zellen oder SGC7091-spezifeschen Evenementer, déi gastric Kriibs Zell-Linnen MKN45 an MKN28 sech benotzt déi selwecht Experiment fir komplett. D'Resultater vun de Meter-Heelung a transwell Invasioun assays Teamchef RhoE den Opbau an invasiv Fähegkeeten vu béiden MKN45 an MKN28 Zellen (Dorënner S1) gefördert, wat, datt d'Fonctioun vum RhoE ugeholl datt fonnt goufen kënschtlech VerfÜgung ëmfaassend sech fir all Zell-Linnen gastric Kriibs. Mëttlerweil, mir standing och MTT assay streiden Verfall vun RhoE Ausdrock ze Test konnt Zell Wuesstem vun gastric Kriibs an eiser Etude betreffen. Als Dorënner S3A gewisen, weder Bastelen Regulatioun vun RhoE zu SGC7901-NM Zellen nach erof-Regulatioun vun RhoE zu SGC7901-M Zellen verursaache kéint änneren vun Zell Prolifératioun (p > 0,05) markéiert, also ausgeschloss den Effet vun RhoE op Zell Prolifératioun wat géif Duercherneen un eise Resultater bréngt a confirméiert weider dass RhoE Zell motility vun gastric Kriibs Zellen Promotioun kann. VerfÜgung

fir weider z'ënnersichen ob fräi RhoE der ofzeänneren konnt zu VIVO VerfÜgung metastatic Fähegkeet vun gastric Kriibs Zellen , mir standing zu VIVO VerfÜgung Schwäif verfeelt metastatic assays an Sauna Mais SGC7901-NM-RhoE an SGC7901-NM-Kontroll Zell-Linnen benotzen. An sacrified Mais, war et fonnt, datt héich Niveaue vu RhoE Ausdrock ginn Zellen gefouert erhéijen däitlech méi siichtbar liver- an haett-Uewerfläch wéi am Verglach mat Kontroll Zellen (P &Si besteet; 0,05, Dorënner 3). H a E staining zougedréckt datt SGC7901-NM-RhoE Zellen vermeintlech Investitiounen an zwee livers an Longen produzéiert, iwwerdeems Kontroll Zellen nëmme partiell Investitiounen ugewisen. Geholl zesummen, proposéiert dës Donnéeën, déi RhoE eng wichteg Roll gespillt Metastasen vun gastric Kriibs Zellen doran souwuel kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung. VerfÜgung

CXCR4 engem down- kéint bäiginn Gentherapie vun RhoE zu gastric Kriibs VerfÜgung

fir d'méiglech erof-bäiginn Genen duerch déi bestëmmen RhoE kënnen hir Funktioun am Metastasen vun gastric Kriibs Zellen Mediate, standing mir Hinnen alleguer Singular der differentially Ausdrock vun Metastasen-Zesummenhang Genen Loescht tëschent SGC7901-NM-RhoE an SGC7901-NM-Kontroll Zell-Linnen gedeelt. Genen déi fräi oder ofgeholl ≥ 2 fantastesch sech als potentiell RhoE-ofhängeg afgerappt Genen considéréiert. An Zomm, nogewise mir 84 Genen an fonnt schlussendlech 6, déi mat Ofstand geännert huet nom Ausdrock vun RhoE verstäerkte war (Table 3). Ënnert de 6 Genen, 3 (CXCR4, VEGFA, CTSK) sech weider-reegelen, an dräi anerer (MMP7, CD82, CTSL1) waren verwandelt-reglementéiert SGC7901-NM-RhoE Zellen.
Expression Niveau vun mRNA VerfÜgung Gene Numm VerfÜgung Beschreiwung VerfÜgung SGC7901-NM-Kontroll VerfÜgung SGC7901-NM-RhoE VerfÜgung CXCR4Chemokine (CXC Motif) receptor 41.003.30VEGFAVascular endothelial Wuesstem Faktor A1.002.78CTSKCathepsin K1.002.68CTSL1Cathepsin L11.00-2.12CD82CD82 molecule1.00-2.29MMP7Matrix metallopeptidase 71.00-2.47Table 3. Differentially deelgeholl Metastasen-Contenu Genen der Lamb RhoE Expression. VerfÜgung CSV CSV Luet

an dëser Etude, waren déi vun Westeuropa blot Analyse ubelaangt dem Wëllen vun CXCR4, VEGFA, CTSK an CD82 a Spannen, hunn mir déi eenzeg CXCR4 Ausdrock war konsequent mat de Resultater vun Hinnen alleguer vill Analyse kritt. D'FAQ Niveau vun CXCR4 war vun Amëschung vun RhoE opgeléist an par contre, fräi war, wann RhoE ectopically (Dorënner 4A) ausgedréckt huet. Soumat war zu 60 gastric Kriibs vun immunohistochemistry analyséiert d'Korrelatioun tëscht RhoE an CXCR4 Ausdrock Stoffer D'Resultater weisen, datt CXCR4 héich zu Stoffer ausgedréckt huet, wou RhoE positiv Kierchefënster war, iwwerdeems se kaum zu deene Stoffer ausgedréckt huet, wou RhoE op engem niddregen Niveau ausgedréckt huet (Well 4B). Zousätzlech, souwuel RhoE an CXCR4 Ausdrock vun 83,3% (50/60) vun gastric carcinomas uplanzen concordant waren, war d'Spearman R Korrelatioun souguer gemaach 0.80 (P &Si besteet; 0.001) an uginn enger enker Korrelatioun tëscht béide RhoE an CXCR4 Ausdrock vun gastric Cancers (Table 4). Als gemellt, iwwer-ausgedréckt CXCR4 och eng wichteg Roll an Kriibs Metastasen spillt an ass an der EMT Prozess Équipe, déi proposéiert datt CXCR4 kéint ee matgeholl Gentherapie vun RhoE mat Wichtegkeet vun der Metastasen vun gastric Kriibs Zellen [23] ginn.
CXCR4
Spearman d' correlation
RhoE
+
++
+++
Negative
n
p
p
R
+1820060<0.001<0.0010.80++11730+++0270Negative2008Table 4. Korrelatioun tëschend Expression vun RhoE an CXCR4 zu 60 Puer Gastric Cancer Stoffer. VerfÜgung CSV CSV

Eroflueden ass CXCR4 essentiell Pinguin Invasioun vun RhoE zu gastric Kriibs Zellen VerfÜgung

den Effet vun CXCR4 ze ermëttelen op der Fähegkeet vun RhoE an der Metastasen vun gastric Kriibs ze fonktionnéieren, verstäerkte mir den Ausdrock vun CRCR4 zu SGC7901-M-siRhoE Zellen vun lentiviral tranduction an Ugrëff-reegelen hiren Ausdrock an SGC7901-NM-RhoE Zellen vun siRNA agemëscht. D'FAQ Niveau war vun Western blot Analyse (Dorënner S2) alles. An de folgenden transwell assay, hunn mir déi verstäerkte Ausdrock vun CXCR4 konnt de invasiv Fähegkeet vun SGC7901-M-siRhoE Zellen, iwwerdeems par contre silencing endogenous CXCR4 repressed der Invasioun vun SGC7901-NM-RhoE Zellen (Dorënner 5) hirzestellen. Dës Observatioune uginn dass RhoE gastric Kriibs Zell Invasioun entschlof, déi vun CXCR4 deelweis mediated war. Dës Observatioune och weider bewisen, dass CXCR4 engem Ugrëff-bäiginn Zilscheif vun RhoE war. VerfÜgung

Diskussioun VerfÜgung

Aberrantly-ausgedréckt RhoE ass oft mat entholl Werdegang assoziéiert. Allerdéngs, dréint d'Roll o RhoE kann tëschent entholl suppressor an oncogene je op d'Origine vun der entholl [7-9]. Als gemellt, bleift gastric Kriibs ee vun de stäerkste gemeinsam Cancers weltwäit, virun allem am Osten Asien. Virdrun, gouf et dës datt Manque RhoE Ausdrock mat de Werdegang vun gastric Kriibs gutt soll ass. Als Zhou an Li beschriwwen, ginn d'Expressioun vun RhoE ass zu gastric Kriibs vun der Aféierungs- vun HIF-1α fräi, an deem Ausdrock nach méi Lamb hätt wann Kriibs Zellen Resistenz zu Anti-entholl Drogen generéieren. Zousätzlech, verstäerkte Ausdrock vun RhoE ënnerstëtzt Drogenofhängeger Resistenz vun Bax Ausdrock suppressing [13,24]. VerfÜgung

Am Moment studéieren, hunn mir dass RhoE Ausdrock vun gastric Kriibs Stoffer nik war hierkommen et veréiert gouf oder schwaach an bascht Net-tumorous Stoffer ausgedréckt. Ausserdeem, huet de Medeziner Beweiser datt RhoE iwwer-Ausdrock vill mat de Grad vun Kriibs Zell dat an TNM Pheidippides soll war, déi vun entholl Gréisst (T) besteet, lymph Node Invasioun (N) an Metastasen (M). Méi wichteg, sech RhoE Ausdrock Niveauen fir Iwwerliewe vun gastric Kriibs eng onofhängeg a wesentleche Risk Faktor. Desweideren, an-reegelen Ausdrock vun RhoE hätt eng schlecht Resultat an gastric Kriibs Patienten virauszesoen. Geholl zesummen, eis Daten ugeholl staark dass RhoE als oncogene zu gastric Kriibs zerwéiert hunn kéinten a Féierung Werdegang eng positiv Roll an gastric Kriibs, virun allem zu Kriibs Metastasen. Et ass offiziell méiglech datt RhoE engem Roman prognostic Faktor Patienten mat gastric Kriibs ginn hätt. Sou, ass dass Metastasen que ee vun de Grënn fir gastric Kriibs veruerteelt, eis Conclusiounen kéint eng nei Iddi oder neien Zil- déi entholl Metastasen zu gastric Kriibs ze inhibit a vläicht endlech an d'Entwécklung vun therapeutesch Strategien entwéckelt fir d'Iwwerliewe vun de Patienten verlängeren. VerfÜgung

Trotzdem, bleift d'Roll vun RhoE zu Kriibs Metastasen deelweis virweisen. An hepatocellular carcinoma an Zellen mesenchymal entholl, fräi RhoE Ausdrock mat reduzéierter metastatic Fähegkeet deemolegt Weltbild hierkommen an melanoma Zellen, ënnerstëtzt RhoE Zell Wanderung an Invasioun [10,12,25]. Fir d'Roll vun RhoE zu Metastasen vun gastric Kriibs beschen, Uewerschenkel mir RhoE an der SGC7901-M Zell-Linn verwandelt, déi eng héich metastatic Potential huet a mir entschlof hiren Ausdrock an der SGC7901-NM Zell-Linn, déi am Metastasen aarm ass . Duerno, kënschtlech VerfÜgung assays bewisen, datt fräi RhoE bewosst motility an invasiveness gefördert, iwwerdeems ofgeholl RhoE zu engem Net-invasiv Charakter vun gastric Kriibs Zellen gefouert. Dës Resultater goufen bestätegt weider vun der zu VIVO VerfÜgung assay. Et ass bekannt, dass verstäerkte Kriibs Zell Wanderung an Invasioun sinn néideg Schrëtt fir d'Finale Équipe vun Investitiounen. Dofir, an gastric Kriibs Zellen, RhoE kéint eng funktionell Metastasen-Spur Gentherapie ginn. Trotzdem, mir gemierkt och dass d'Zell Wirklechkeet vill nom Verfall vun RhoE Ausdrock geännert. Weider Ermëttlungen fonnt dass dës morphologic Ännerung kéint duerch Ofbau vum Stress Glasfaserkabelen (Dorënner S3B) verursaacht ginn, anstatt Ännerung vun Zell Prolifératioun. VerfÜgung

Als gemellt, reguléieren RhoE Kriibs Metastasen, an heescht sou meeschtens duerch de ROCK /MYPT Passerelle inhibiting [26]. Dës Rubrik gouf an aner Fuerschung Etude vun eisem Grupp propagéieren (Donnéeën net gewisen). An dëser Etude, applizéiert mir Singular Analyse Hinnen alleguer fir d'Identifikatioun vun anere afgerappt Genen vun RhoE zu Metastasen gastric Kriibs, mam Zil vun der Basisdaten Mechanisme vun entholl Metastasen bestëmmend. Suite kritt mir 6 differentially ausgedréckt Metastasen-Zesummenhang Genen folgenden up-Regulatioun vun RhoE (CXCR4, VEGFA, CTSK, MMP7, CD82 an CTSL1). MMP7 (Matrixentgasung metalloproteinase-7) gehéiert zu den MMP Famill vu Proteinen, déi an der Zesummenbroch vun der extracellular Matrixentgasung zu souwuel kierperlech a agebousst Conditioun Équipe ginn [27]. VerfÜgung

Et gouf confirméiert datt nik Ausdrock vun MMP7 der invasiv Fähegkeet vun Kriibs Zellen verstäerkte [28]. An Hinnen alleguer vill Analyse, war MMP7 fonnt an héich invasiv SGC7901-NM-RhoE Zellen verwandelt-regulariséiert ginn, wat virdru Rapporten widderspréchlech ass. Sou, als mir MMP7 vun manner Wichtegkeet vun eiser Etude an net sengem Ausdrock vun Western blot z'iwwerpréiwen. Fir ähnlech Ursaach, hu mer de Beweis vun CTSL1 net kontrolléieren. Fir eis iwwerraschen, ënnert der 4 Genen vun Western blot Analyse fonnt, nëmmen den Ausdrock vun CXCR4 war konsequent mat der Resultat kritt vun Hinnen alleguer Singular Analyse fonnt. Weider Enquête gewisen, datt d'invasiv Fähegkeet deelweis up-Regulatioun vun CXCR4 vun Zellen gastric Kriibs restauréiert konnt, déi vun RhoE hummeren-out opgeléist gouf. Par contre, manner verwandelt-Regulatioun vun CXCR4 der Invasioun vun gastric Kriibs Zellen, déi iwwer-ausgedréckt RhoE entschlof war. Sou, CXCR4 vläicht e Potential verwandelt-bäiginn ginn effector vun RhoE zu gastric Kriibs Metastasen. VerfÜgung

CXCR4, zesummen mat senge ligand CXCL12 (nämlech de CXCL12 /CXCR4 Achs), bekannt ass och zu villen Aspekter vun Équipe ze ginn entholl Werdegang, virun allem zu entholl Metastasen. Et war Rapport virdrun, datt de CXCL12 /CXCR4 Achs essentiel war fir metastatic Kriibs Zellen ze Organer ze disperse an domat entholl Zellen erlaben bewosst Hondshaisecher zu Zougang datt entholl-Zell Iwwerliewe a Wuesstem [29] dofir. Ausser datt, verlaangt zu G-Proteinen ageschalt CXCR4 verbindlech bis Transfermaart extracellular Signaler an der Zell a lancéieren Duden Äntwerte [23]. Ausserdeem, wann een dat RhoE engem Member vun der G-FAQ Famill ass, gehale mir dass RhoE de Repertoire vun CXCL12 /CXCR4 Achs Signaler vun waarden den Ausdrock vun der CXCR4 receptor mell konnt. Par contre, RhoE kéint zu CXCR4 kruet an afgerappt Signal transduction Mediate, deen endlech zu Kriibs Metastasen Resultat kéint. Ausserdeem, mir bewisen virdrun dass RhoE zu hypoxia- entschlof EMT bedeelegt, e Schlëssel Prozess datt zu Kriibs Metastasen dréit, an déi CXCR4 ass och Équipe. Dës enk Verbindungen tëscht RhoE an CXCR4 ugeholl staark dass RhoE Metastasen verstäerkte vun up-Regulatioun CXCR4 zu gastric Kriibs. Déi detailléiert Mechanismen responsabel fir dës Weeër brauch weider studéieren. VerfÜgung

Conclusioun VerfÜgung

Eis Etude bewisen, dass RhoE zu gastric Kriibs overexpressed war a mat Kriibs Werdegang soll. VerfÜgung

• PLOS NËMMEN: Decisioun enger Microarray ënnerschriwwe an engem Diagnostic Test: Eng Optakt vun Benotzerdefinéiert 74 Gene Singular fir Ännerung an Cepheid Iwwregens hätt vun Gastric Cancer
• PLOS NËMMEN: Resveratrol bremst den Wuesstem vun Gastric Cancer vun Pinguin G1 Phase Arrest a Senescence zu engem Sirt1-ofhängeg Manner