Background VerfÜgung
Secreted FAQ dono a räich an cysteine (SPARC) ass eng glycoprotein datt Funktiounen angiogenesis, Prolifératioun, an Invasioun an verschidden Zorte vu Kriibs ze inhibit. D'Kapazitéit vun SPARC neovascularisation zu well et gegleeft an Deel mediated ginn duerch seng Fähegkeet dem Wëllen vun wiere endothelial Wuesstem Faktor (VEGF) an Matrixentgasung metalloproteinases (MMPs) zu well. An dëser Etude, fir mer den Effet vun SPARC Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen op Prolifératioun an angiogenesis kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung. VerfÜgung Language VerfÜgung Resultater VerfÜgung Endogenous SPARC overexpression inhibited den Ausdrock vun VEGF an MMP-7, souwéi d'angiogenesis entschlof vun BGC-SP Zellen. Weltwäit, fräi SPARC silencing den Ausdrock vun VEGF an MMP-7, souwéi d'vun HGC-Ok Zellen entschlof angiogenesis. Nik angiogenesis entschlof vun SPARC zu HGC-Ok Zellen silencing war ofgeholl wann VEGF vun antibodies neutraliséiert war, an MMP-7 war Uewerschenkel kënschtlech VerfÜgung. VerfÜgung Conclusioun VerfÜgung SPARC angiogenesis vun gastric Kriibs Hien vun verwandelt-Regulatioun den Ausdrock vun VEGF an MMP-7 VerfÜgung Fro:. Zhang JL, Chen GW, Liu YC, Wang nëmmen, Wang X, Wan YL, et al. (2012) Secreted Protein dono an Rich zu Cysteine (SPARC) Hien Angiogenesis vun Down-Reguléierung vun de Expression vun VEGF an MMP-7 an Gastric Cancer. PLoS NËMMEN 7 (9): e44618. Doi: 10.1371 /journal.pone.0044618 VerfÜgung Redakter: Rajesh Mohanraj, ▫ Par University, United Arab Emirates VerfÜgung Arnaque: 9. Juni, 2012; Akzeptéiert: 6 August 2012; Publizéiert: 5. September 2012 zu Copyright: © Zhang et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Aarbecht gouf vun der National Natural Science Foundation of China (Nr 30901417 /H1617) finanzéiert. http://www.nsfc.gov.cn/Portal0/default152.htm. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung Vun Kriibs-Zesummenhang Doudesfäll, verléiert gastric Kriibs zweet weltwäit no haett Kriibs; bal zwee-Drëttel vun de Fäll an den Entwécklungslänner geschéien, dorënner 42% aus China [1]. Angiogenesis ass eng kritesch Prozess zu gastric Kriibs; dofir, reglementaresche a sécher Molekülle datt angiogenesis sinn réckelt de Focus vun presentéieren Fuerschung well. Angiogenesis ass net eng aktiv Prozess vun selwer; et ass duerch e puer angiogenic Facteuren an e puer inhibitors vun angiogenesis kontrolléiert haten. VerfÜgung Secreted FAQ dono a räich an cysteine (SPARC), och als Osteonectin oder well-40 bekannt, ass eng Multi-onst secreted glycoprotein déi ausgedréckt gëtt vill verschidden Zorten vun Zellen an ass mat Schanken Opstellung, fibrosis an Otemschwieregkeeten Reparatur assoziéiert. VerfÜgung rezenten Etuden weisen, datt SPARC Prolifératioun, apoptosis, Iwwerfall a angiogenesis zu verschidden Zorte vu Kriibs Zellen modulates, awer, d'Roll vun SPARC zu tumourigenesis ass komplizéiert an schéngt zu engem bestëmmte Mikro-Ëmwelt [2] Zell-Typ spezifesch Wéint sengem verschiddenste Funktiounen ze ginn. SPARC Funktiounen als entholl suppressor an Broscht, neuroblastoma, pancreatic, spillt an haett Cancers [3]. Et spillt Kriibs zu SPARC-automatesch Mais gewuess vill méi grouss wéi dat am Wildwest-Typ Déieren mat Lamb Niveau vun wiere endothelial Wuesstem Faktor (VEGF) an Matrixentgasung metalloproteinases (MMPs) [4]. Vun suppressing entholl vascularity duerch Ennerdréckung vun VEGF Ausdrock an secretion, SPARC inhibited Wuesstem glioma [5]. SPARC Photo'en ze VEGF, also VEGFR phosphorylation, mitogen-ageschalt FAQ kinases (MAPK) Aktivéierung an VEGF-entschlof DNA Synthes inhibiting [6]. d'Roll vun SPARC zu angiogenesis Allerdéngs ass och Zell-Typ spezifesch, déi Evenementer Signal transduction an Äntwert op eemolege bewosst milieus [7]. VerfÜgung VEGF koum angiogenesis Mäe, an ass déi wichtegst Signal FAQ vun Zellen produzéiert [8]. MMPs Leeschtung wichteg Roll an entholl Entwécklung, net nëmme vun der extracellular Matrixentgasung onwiirdeg mä och angiogenesis zu Regulatioun. MMP-7, déi de klengste molekulare Gewiicht vun all MMP Familljememberen ass, ass d'Prolifératioun vu mënschlechen umbilical verfeelt endothelial Zellen (HUVECs) zu enger Portioun-ofhängeg Manéier kënschtlech VerfÜgung [9] dës Distanz ze accéléréieren. VerfÜgung D'Primärschoul Funktioun vun SPARC zu angiogenesis vun gastric Kriibs Zell Linnen bleift onkloer. Dofir, an dëser Etude, Hypothes mir dass SPARC Prolifératioun an angiogenesis vun Regulatioun VEGF an MMP-7 Ausstralung an gastric Kriibs Zellen well kéint. Fir dës hypotheses Test, mir getest Ausdrock vun SPARC zu siwen gastric Kriibs Zell Linnen. Dunn, den Effet vun verännert SPARC op gastric Kriibs Zellen ze bewäerten, gegrënnt mir eng BGC-SP Klon déi SPARC overexpressed an enger HGC-Ok Klon an deem d'endogenous SPARC war Uewerschenkel. VerfÜgung Expression vun SPARC zu Cultured gastric Cancer BTS VerfÜgung Mir bewäert Ausdrock vun SPARC zu puer Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen. Western blotting gewisen, datt d'SPARC war undectable zu AGS, MKN45, NCI-N87 an BGC-823 Zell Linnen Ee SGC-7901 Zell Linn ausgedréckt niddereg Niveau vun SPARC an HGC-27, MGC-803 Zell Linnen ausgedréckt héijen Niveau vun SPARC ( Figur 1A). VerfÜgung Overexpression an Inhibition vun Endogenous SPARC zu Gastric Cancer Zell zesummeféieren VerfÜgung Western blotting gewisen, datt de 43 kDa Band un der SPARC FAQ entspriechend vill an BGC-SP (BGC Zellen fräi war ausdrécken SPARC cDNA) Zellen am Verglach mat den Elteren (BGC-P) a Kontroll Zellen mat den eidelen Vecteure transfected (BGC-Print) (P &Si besteet; 0,05); der SPARC war vun bal zwee-Drëttel vun de HGC-Ok Zellen (HGC Zellen ausdrécken SPARC-shRNA) am Verglach mat HGC-P an HGC-Print Zellen inhibited (P &Si besteet; 0,05, Dorënner 1B). RT-Hinnen alleguer uginn dass SPARC mRNA Ausdrock vun BGC-SP Zellen fräi war als Verglach mat BGC-P an BGC-Print Zellen (P &Si besteet; 0,05); der SPARC mRNA Ausdrock vun HGC--head vun bal 80% erofgaangen als Verglach mat HGC-P an HGC-Print Zellen (P &Si besteet; 0,05, Dorënner 1B). VerfÜgung SPARC Overexpression Verloschter Zouhuelen vun Gastric Cancer Zell zesummeféieren fir erauszefannen, ob verännert SPARC Ausdrock d'Prolifératioun vu gastric Kriibs Zell Linnen betraff, huet de Wuesstem vun transfected Zellen mat deene vun den Elteren an eidel Vecteure Kontrollen Verglach. D'Daten huet, datt de Wuesstem vun BGC-SP Zellen am Verglach mat BGC-P an BGC-Print Zellen no 8 Deeg vu Kultur (P &Si besteet; 0,05) inhibited war; (; 0,05, Dorënner 1c P &Si besteet). VerfÜgung SPARC Overexpression zu Gastric Cancer Zell zesummeféieren Verloschter Angiogenesis kënschtlech den Effet vun verännert SPARC Ausdrock op angiogenesis zu gastric Kriibs Zell Zeilen ze verstoen, sech HUVECs zu bedingt Medien incubated. D'BGC-SP supernatant entschlof HUVECs differenzéiert an capillary-wëll Strukturen 36 h (2564.5 ± 553,1 μm, P &Si besteet; 0,05) zu enger grousser Distanz Mooss wéi d'supernatant aus BGC-Print Zellen (5002.4 ± 665,7 μm) a BGC-P Zellen (5417.3 ± 784,25 μm, Dorënner 2A). D'HGC-Ok supernatant entschlof HUVECs differenzéiert an capillary-wëll Strukturen 36 h (7024.9 ± 923,1 μm, P &Si besteet; 0,05) zu engem staark Mooss wéi d'supernatant aus HGC-Print Zellen (4456.2 ± 554,2 μm) a HGC-P Zellen (4023.4 ± 665,2 μm, Dorënner 2A). Quantification vun der Moyenne Rouer Längt uginn, datt de Rouer Längt vun HUVECs zu bedingt Medien aus BGC-SP vun ongeféier 52,7% erofgaangen war als Verglach mat Kontroll Zellen; Kielech Längt vun HUVECs zu bedingt Medien aus HGC-Ok clones 74,6% mat Kontroll Zellen (Dorënner 2A) als Verglach fräi war. VerfÜgung De Modell däischtere Fënster awer dass BGC-SP Zellen zu tumour- engem 40,4% erofgoen Équipe entschlof microvessels wéi mat Kontroll Zellen am Verglach (P &Si besteet; 0,05). HGC-Ok Zellen am däischtere Haut-fantastesch Chamber e schéinen 73,2% Erhéijung vun entholl-entschlof microvessels, mat enger grousser Zuel vu kleng Hals Flecken als Verglach mat Kontroll Zellen (P &Si besteet; 0,05 Dorënner 2B). Dës Resultater kloer gewisen dass SPARC overexpression zu gastric Kriibs angiogenesis inhibited kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung. VerfÜgung D'MAPKs Material Passerelle an Expression vun VEGF an MMP-7 sinn Inhibited vun SPARC Overexpression VerfÜgung fir d'Wierkung vun SPARC overexpression op MMP-7 an VEGF, grouss ass real-Zäit Hinnen alleguer a westlech blotting assays sech standing bestëmmen. D'Resultater weisen, datt MMP-7 an VEGF Ausdrock negatif vun SPARC Ausdrock reglementéiert ass. An BGC-SP Zellen, Niveaue vun MMP-7 mRNA, MMP-7 FAQ, VEGF mRNA, an VEGF FAQ sech vun 87,2% inhibited, 68,9%, 48,4%, an 58,6%, respektiv, wéi mat eidelen Vecteure transfected Zellen Verglach. An HGC-Ok Zellen, fräi MMP-7 mRNA Niveau 11.6-fantastesch, den MMP-7 FAQ fräi 8.1-fantastesch, 8,8-fantastesch, an der VEGF FAQ der VEGF mRNA Niveau fräi als Verglach 3,2-fantastesch fräi mat eidelen Vecteure Zellen (Dorënner 3A, B). Fir festzestellen, ob de MAPK sécher Passerelle vun SPARC reglementéiert war, SAPK /JNK, ERK1 /2 an p-38 Niveauen sech duerch westlech blotting évaluéieren. D'Resultater weisen, dass den Niveau vum p-ERK1 /2 waren ofgeholl bedeitend an BGC-SP Zellen an HGC-Ok Zellen am Verglach mat hirer Kontroll Zellen (Dorënner 3C) erhuewen. VerfÜgung Knock-Ugrëff vun SPARC Expression zu HGC-27 BTS förderen Angiogenesis via Up-reegelen VEGF an MMP-7 Expression VerfÜgung fir ze bestätegen, datt de pro-angiogenic Effekter gesin mat ofgeholl SPARC Ausdrock si wéinst fräi MMP-7 an VEGF Ausdrock an net fir den Niveau vun SPARC selwer, HUVECs sech zu bedingt Medien recoltéiert aus HGC-Ok Zellen incubated mat exogenous recombinant Mënsch SPARC (rhSPARC, 0.3 μg /ml) ugebaut. Eis Donnéen uginn, datt Schan exogenous SPARC net capillary-wëll Strukture vun HUVECs Verglach mat HGC-Ok (Dorënner 4) inhibit huet, am Géigesaz zu den anti-angiogenic Äntwert mat endogenous Ausdrock vun SPARC gesinn an BGC823 Zellen (Dorënner 2). VerfÜgung fir weider Markenzeeche vun der Roll vun VEGF an MMP-7 an SPARC-mediated angiogenesis modulation, MMP-7-shRNA an 1 μg /ml neutralizing VEGF antibody (Chemicon, Temacula, CA, USA) sech fir HGC-Ok clones benotzt fir antagonize d'Funktiounen vun MMP-7 an VEGF. VerfÜgung Mir iwwerpréift d'Fähegkeet vun MMP-7 Ausdrock vun HGC-Ok Zellen zu well angiogenesis kënschtlech VerfÜgung vun stably transfecting MMP-7-shRNA an HGC-Ok Zellen. Figur 4A beweist, datt de Begrëff vun MMP-7 an HGC-Ok + MMP7-Ok Zellen war verwandelt-reegelen stably ausdrécken MMP-7-head-RNS zu engem Niveau vergläichbar mat deem vun HGC-P an HGC-Print Zellen. Fir d'Roll vun MMP-7 an hummeren-verwandelt SPARC-mediated Promotioun vun entholl Zell-entschlof angiogenesis entschlësselen, standing mir capillary Opstellung Analyse mat bedingt Medien vun HGC-Ok Zellen an HGC-Ok + MMP7-Ok Zellen. Als zu Dorënner 4B gewisen, weg Resultater datt MMP-7 Ausdrock vun HGC-Ok + MMP7-Ok Zellen ofgeholl zu engem gefouert vill rofgaang capillary Opstellung vun HUVECs kënschtlech VerfÜgung (HGC-Ok + MMP7-Ok vs VerfÜgung HGC-Ok, P &Si besteet;. 0,05) VerfÜgung d'Funktioun vun nik VEGF Ausdrock vun SPARC silencing, VEGF an der bedingt Medien vun HGC-Ok an HGC-Ok + MMP7-Ok entschlof ze bestëmmen Zellen war vun VEGF antibody (1 μg /ml) neutraliséiert. Resultater weisen, datt vun HUVECs capillary Opstellung vill zu der HGC-Ok supernatant ofgeholl huet de VEGF wouvun antibody neutralizing als Verglach mat supernatant aus HGC-Ok Zellen eleng (HGC-Ok + anti-VEGF vs VerfÜgung HGC-Ok, P &Si besteet; 0,05 Dorënner 4B). Capillary Équipe vun HUVECs gouf bal komplett inhibited wann cultured zu bedingt Medien vun HGC-Ok + MMP7-Ok Zellen plus dobäi VEGF neutralizing antibody ( vs VerfÜgung HGC-Ok, P &Si besteet; 0,05 Dorënner 4B). VerfÜgung Serum-gratis bedingt recoltéiert Medien aus HGC-P, HGC-Print, HGC-Ok mat oder ouni rhSPARC (0.3 μg /ml) an HGC-Ok + MMP7-Ok Zellen sech duerch ultrafiltration Rouer Konzentratioun (Millipore, Bedford, MA , USA) ënnert de selwechte Bedingungen. Western blotting gewisen, datt d'Konzentratioun vun SPARC zu HGC-Ok Zellen mat 0.3 μg /ml rhSPARC inmedium fir datt vun der HGC-P supernatant (Dorënner 4A) Gläichbehandlung gouf. VerfÜgung Overexpression vun SPARC zu Gastric Cancer BTS bremst Tumourigenicity am gewaltege Sträit Mais VerfÜgung fir Bewäert goufen d'therapeutesch Efficacitéit vun SPARC Ausdrock, BGC-P, BGC-Print, BGC-SP Zellen oder HGC-P, HGC-Print, HGC-Ok Zellen subcutaneously an Sauna Mais heijen. Et war kee groussen Ënnerscheed zu Gréisst tëscht BGC-P (n = 6; mengen entholl Volumen = 2004 ± 63 mm fir bewäerten SPARC, VEGF, MMP-7 Ausstralung zu VIVO VerfÜgung, xenograft Rubriken huet mat enger monoclonal antibody géint Mënscherechter SPARC, VEGF oder MMP-7 Kierchefënster . Figur 5A beweist dass BGC-SP erhéijen méi SPARC auszedrécken wéi BGC-P, BGC-Print erhéijen, iwwerdeems concomitantly VEGF, MMP-7 däitlech ofgeholl ginn (P &Si besteet; 0,05, Figur 5A). Sektiounen aus HGC-Ok erhéijen auszedrécken manner SPARC wéi HGC-P, HGC-Print erhéijen iwwerdeems concomitantly VEGF, MMP-7 Ausstralung fräi sinn (P &Si besteet; 0,05, Dorënner 5A). CD31 ass virun allem ze beweisen d'Präsenz vun wiere endothelial Zellen zu histological Otemschwieregkeeten Rubriken benotzt, déi d'Ausmooss vun entholl angiogenesis diskutéieren hëllefe kann. Ze evaluéieren, ob verännert SPARC Ausdrock der microvessel Dicht (MVD) mediated, mir analyséieren angiogenesis zu xenografts vun histological Analyse vun CD-31. Et war kee groussen Ënnerscheed zu MVD tëscht BGC-P (12.5 ± 2,3 microvessels /0,145 mm Fir d'Roll vun SPARC zu gastric Kriibs ze ermëttelen, mir éischt dem Wëllen vun SPARC zu siwen Zell Linnen vun gastric Kriibs getest. Déi meescht Zell Linnen huet ausdrécklech net, oder ausgedréckt nëmmen niddereg Niveau vun SPARC. Fir d'Roll vun SPARC an de Wuesstem an angiogenesis vun gastric Kriibs festzestellen, gegrënnt mir de BGC-SP Klon déi stably mat engem SPARC cDNA Vecteure transfected war, an der HGC-Ok Klon déi stably mat engem shRNA Vecteure gezielt SPARC mRNA transfected war. SPARC Ausdrock geklomme vun BGC-SP Klon an Verréngerung vun HGC-Ok Klon am Verglach mat hirer jeeweileger Kontroll clones, wéi déi westlech blotting an RT-Hinnen alleguer alles gebueden. Zell Prolifératioun Taux niddreg zu BGC-SP Klon, a war méi héich an HGC-Ok Klon wéi an hir jeeweileg Kontroll clones vun MTT Method. Mir hunn och déi overexpression vun SPARC inhibited entholl Zell-entschlof capillary Équipe vun HUVECs kënschtlech VerfÜgung an angiogenesis an däischtere Fënster assay zu VIVO VerfÜgung. Wéinst dem verwandelt-Regulatioun vun SPARC vun mRNA Amëschen gefördert capillary Opstellung kënschtlech VerfÜgung an angiogenesis zu VIVO VerfÜgung. VerfÜgung Blood Offshore essentiel nährstoffaarme zu Stoffer ze liwweren . Dofir, ass neovascularisation zu der Entwécklung vun zolidd entholl onverzichtbar. Virdrun Studien hu bewisen, datt SPARC eng Roll an angiogenesis spillt [7]. Eis Resultater weisen, datt overexpression vun SPARC angiogenesis inhibited kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung zu Associatioun mat der Ofsenkung vun MMP-7, VEGF an phosphorylated ERK1 /2, iwwerdeems verwandelt-Regulatioun vun SPARC gefördert angiogenesis kënschtlech VerfÜgung a zu VIVO VerfÜgung zu Associatioun mat der Erhéijung vun MMP-7, VEGF an phosphorylated ERK1 /2. VerfÜgung Mir weider Studien ëmgesat zu der Roll ermëttelen vun VEGF an MMP-7 an SPARC-mediated angiogenesis modulation. Wann recombinant FAQ Mënsch SPARC zu bedingt mëttelfristeg ugebaut aus HGC-Ok Klon SPARC Konzentratioun ze sanéieren, dat bedingt mëttelfristeg ofzesécheren rauszesichen der capillary Équipe vun HUVECs vun kënschtlech VerfÜgung assay Verglach zu der capillary Équipe vun HUVECs incubated zu der Konditioun mëttelfristeg ouni exogenous rhSPARC. Mir ginn dann MMP-7-shRNA bis erof-regléieren MMP-7 Ausdrock vun HGC-Ok Klon, an /oder anti-VEGF antibody VEGF zu bedingt mëttelfristeg aus HGC-Ok Klon ze neutraliséieren. Capillary Équipe vun HUVECs war vill inhibited wann se an der bedingt Medien mat manner MMP-7 an /oder blockéiert VEGF incubated. Dës Experimenter hindeit datt SPARC verwandelt-Reglement gehalen genuch ass fir de Aféierungs- vun neovascularisation, an aner Facteure muss an dësem Prozess bedeelegt sinn. VerfÜgung VEGF spillt eng wichteg Roll an angiogenesis, an ass néideg fir d'Iwwerliewe vun endothelial Zell [8]. An glioma, entholl Wuesstem SPARC inhibited duerch seng Mikro-Ëmwelt Wou muss ech an suppressing seng angiogenesis duerch d'inhibition vun VEGF Ausdrock an secretion [5]. Et kann en negativen Relatioun tëscht SPARC an VEGF däitlech ginn, dat heescht, déi méi SPARC, déi manner VEGF oder vice versa VerfÜgung [13], [14]. VerfÜgung MMP-7 ass erwisen onwiirdeg Keller Membran oder connective Otemschwieregkeeten ronderëm den Offshore. Et koum och DNA Sythese zu cultured wiere endothelial Zellen, an induces angiogenesis um Site wou Colon Kriibs Zellen zu enger Maus Modell implanted sech [15]. VEGF an aner angiogenic Faktoren Funktioun haaptsächlech duerch MAPK sécher Weeër, déi zu erhéijen an der neovascularisation Prozesser Équipe wichteg transduction Weeër ze ginn [8] gegleeft ginn. Eis rezent Etude gewisen, datt MMP-7 Ausdrock via d'Aktivatioun vun MAPK sécher Weeër modulated war [16]. Puer Studien bewisen, och dass SPARC negatif der Aktivatioun vun MAPK Weeër [17] modulated. Demno, kann SPARC Ausdrock der angiogenic Gläichgewiicht an erhéijen vun verwandelt-Regulatioun ofzeänneren enger Serie vun neovascularisation Faktoren Spur. VerfÜgung Fir d'Funktioun vun SPARC zu der Regelung vun gastric Kriibs Wuesstem zu VIVO VerfÜgung ermëttelen, BGC-SP an HGC-Ok Zell clones sech fir hir Géigner mat hirer Kontroll clones Verglach erhéijen an engem subcutaneous Modell ze Form. SPARC overexpression reduzéiert bedeitend der Gréisst vun xenografted entholl mat reduzéierter MVD, verwandelt-Regulatioun vun SPARC vun RNS Amëschen de Wuesstem vun xenografted entholl mat fräi MVD gefördert. Dofir, an gastric Kriibs xenografts, ass SPARC Ausdrock negatif mat angiogenesis soll. Virdrun Studien uginn dass SPARC zu der Regelung vun entholl Équipe bäigedroen, obwuel seng Roll war Zell-Typ spezifesch ze ginn. An hepatocellular Kriibs Zell-Linn xenografts, SPARC overexpression vill entholl Opstellung Verspéidung, entholl Gréisst reduzéiert, an erofgaangen MVD am Verglach mat Kontroll xenografts [18]. An Colon Kriibs Stoffer, SPARC Ausdrock war negatif mat VEGF Ausdrock an MVD [19] soll. An medulloblastoma Zellen, inhibited SPARC overexpression angiogenesis fir de Verloscht vun entholl Wuesstem Virwaat [11]. Am Mënsch microvascular endothelial Zellen, inhibited SPARC DNA Synthes kënschtlech VerfÜgung [6]. An neuroblastoma xenografts, SPARC peptides angiogenesis an entholl Wuesstem inhibited zu VIVO VerfÜgung [20]. Dës Resultater bestätegt SPARC als inhibitor vun entholl angiogenesis zu VIVO VerfÜgung. VerfÜgung SPARC äussert zu normal gastric epithelial Zellen, gastric Kriibs Zellen, an déi stromal Zellen Ëmfeld gastric Kriibs bei engem méi nidderegen Niveau [21 ]. An immunohistochemistry Etude gewisen, datt SPARC haaptsächlech zu stromal Zellen ronderëm den entholl ausgedréckt [22]. Dës Vigel kann net Zäitche ginn. SPARC Ausdrock kënnt op histological Typ vun der entholl hänkt, oder vice versa VerfÜgung. Rezent immunohistochemistry Etude fonnt dass SPARC Ausdrock negatif mat dem Ausdrock vun VEGF an MVD zu gastric Kriibs Stoffer soll war, an SPARC Ausdrock Verréngerung vun gastric Kriibs mat héichen Schouljoer vun malignancy [23]. VerfÜgung Am Resumé, de Wuesstem inhibition vun SPARC vun gastric Kriibs schéngt duerch seng Ennerdréckung Auswierkungen op MMP-7 an VEGF Ausstralung mediated ze ginn, wat dann kann microvessel einfach an erhéijen inhibit. Mir schléissen dass verwandelt-Regulatioun vun SPARC vläicht mat de Fortschrëtter vun gastric Kriibs Associé, an de Weltraum ze regléieren SPARC Ausdrock dofir eng sënnvoll Approche ginn kann gastric Kriibs Behandlung ze verbesseren. VerfÜgung Antibodies an Reagents VerfÜgung Antibodies géint SPARC (Santa Cruz Déi, Santa Cruz, CA, USA), (p-) SAPK /JNK, (p-) ERK1 /2, (p-) p-38, MMP-7 (Zell sécher Technologie, Danvers, MA, USA), VEGF, an CD31 (ABcam, Cambridge, MA, USA) sech fir westlech blotting an immunohistochemistry benotzt. D (är ganz Famill, Punktzuel, USA); de rhSPARC war vun R &Pleséier. Ëmgekéierte Transkriptiouns-Hinnen alleguer Kit war vun Promega (Garmin, allem, USA) geliwwert. MMP-7-shRNA (KH00809P, SuperArray Bioscience Corp. Friedrich, MD, USA) war fir d'verwandelt-Regulatioun vun MMP-7 an der Zell clones benotzt. β-Casein (C-6905, Fläch-Aldrich Corporation, Natick, MA, USA) war an β-casein zymography benotzt. All anere reagents sech vun analytesch Schouljoër oder besser. VerfÜgung Zell Kultur VerfÜgung Mënscherechter gastric Kriibs Zell Linnen AGS, MKN-45, NCI-N87, BGC823, MGC803, HGC27, SGC7901 sech aus der kritt Cancer Institut vun der chinesescher Academy vun Medical Science. All Zellen sech am RPMI 1640 mëttelfristeg ergänzt mat 10% An et Bovine serum (FBS) ugebaut. BGC-Print (mat eidelen Vecteure transfected), BGC-SP (overexpressing SPARC cDNA), HGC-Print (ausdrécken, eidel Vecteure) an HGC-Ok (ausdrécken SPARC shRNA) huet an komplett RPMI 1640 mat G418 (50 μg /ml) ugebaut . All Zellen sech am monolayer Kulturen bei 37 ° C an humidified Loft mat 5% CO 2 haten. VerfÜgung Grënnung vun BGC-SP, HGC-Ok Clones an HGC-head-MMP7-Ok Clones Ongeféier 150.000 BGC-823 Zellen sech zu enger sechs-gutt zappen an RPMI 1640 mat 10% FBS an erlaabt pro gutt plated Iwwernuechtung zu befestegt. Equimolar Montanten vun pcDNA3.1 mat voller-Längt SPARC cDNA Vecteure oder d'Linn drécke Vecteure (Invitrogen, San Diego, CA, USA) sech mat Lipofectamine-2000 Transfection Reagent (Invitrogen, San Diego, CA, USA) incubated. Validéiert SureSilencing Mënsch SPARC shRNA an eidel Kontroll Vecteure sech aus SuperArray Bioscience Corp. (Friedrich, MD, USA) kritt. HGC-27 Zellen sech ëmschriwwen transfected virdrun [24]. Kuerz, goufen Zellen zu enger stabiler Manéier benotzt lipofectamine transfected. Transfected Zellen sech mat G418 (100 μg /ml fir BGC-SP an HGC-Ok clones) erausgewielt fir 14 Deeg virun der Isolatioun vun eenzelne clones. HGC-head-MMP7-Ok Varianten etabléiert sech wéi uewen beschriwwen, HGC-Ok Klon Zellen sech transfected mat MMP-7-shRNA (KH00809P, SuperArray Bioscience Corp. Friedrich, MD, USA) benotzt lipofectamine. Dunn, goufen transfected Zellen vun puromycin (1 μg /ml) fir 10 Deeg ausgewielt. VerfÜgung Zell prolifération Assay VerfÜgung Zell Verbreedung vun engem 3- (4,5-Dimethylthiazol-2- alles war yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay wéi virdru beschriwwen [24]. Kuerz, goufen 500 Zellen cultured pro gutt am 96-gutt Placken a fir 8 Deeg incubated, an dann, MTT (R & D, är ganz Famill, Punktzuel, USA) war fir d'Zellen notéiert. Absorbance Wäerter bei 550 nm huet mat enger microplate Lieser gemooss. D'Resultater goufen als mengen absorbance bei 550 nm an d'Moyenen (± Fils) vun quadruplicate alles aus sechs separat Experimenter gewisen. VerfÜgung Western Blotting Analys VerfÜgung Total Zell lysates sech duerch westlech blotting virbereet an analyséiert wéi virdru beschriwwen [24]. Kuerz, benotzt goufen antibodies zu SPARC, MMP-7, an VEGF (1:1000 dilution) SPARC, MMP-7, an VEGF z'entdecken, respektiv, iwwerdeems antibodies un (p-) SAPK /JNK, (p-) ERK1 /2 a (p-) p-38 (1:800 dilution) waren z'entdecken Aktivatioun vun der MAPK sécher Passerelle benotzt. Bound antibodies benotzt ECL (Promega, Madison, allem, USA) visualized op enger Kodak Image Station 4000 mm Pro System (Kodak, Rochester, NY, USA). D'Dicht vun der Bande war vun densitometric Analyse mat dem Image Tool (Versioun 3.0) System zum laachen. VerfÜgung RT-Hinnen alleguer an Chemeschen Real-Zäit Hinnen alleguer VerfÜgung Total RNS aus stably transfected entholl Zellen isoléiert war Hëllef Trizol reagent (Invitrogen, San Diego, CA, USA) a fir 45 min bei 37 ° C mat RQ1 DNase (Promega, Madison, allem, USA) traitéiert. RNS war ëmgedréint ausserdeem benotzt AMV Réckproduktioun Transcriptase (A3500, Promega, Madison, allem, USA). Chemeschen real-Zäit Hinnen alleguer war an eng Abi Prism7300 liichtkraaftarm Detektioun System (Obwuel Biosystems, Beverly, MA, USA) mat engem GoTaq qPCR Master Mix A6001 Kit (Promega, Madison, allem, USA) gesuergt. Primers fir grouss real-Zäit benotzt Hinnen alleguer sech wéi follegt zesummen: MMP-7, 5'-GGAGATGCTCACTTCGATGA-3 "(Senn) an 5'-ATACCCAAAGAATGGCCAAG-3" (antisense); an VEGF, 5'-AGGAGGAGGGCAGAATCATCA-3 "(Senn) an 5'-CTCGATTGGATGGCAGTAGCT-3" (antisense). Primers fir Hinnen alleguer benotzt sech wéi follegt zesummen: SPARC, 5'-CTCGAGATGAGGGCCTGGATCTTC-3 "(Senn) an 5'-GGATCCCGGATCACAAGATCCTTGTCG-3" (antisense); an glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), 5'-GGAGTCCACTGGCGTCTTC-3 "(Senn) an 5'-GCTGATGATCTTGAGGCTGTTG-3" (antisense). VerfÜgung β-casein Zymography VerfÜgung D' funktionell Aktivitéit vun MMP-7 gouf duerch β-casein zymography op 10% polyacrylamide gels Ënnerbewosstsinn mat 1 mg /ml β-casein bewäert. Gläich Montanten vun den serum-gratis bedingt Medien aus Zellen fir 24 Stonnen ugebaut goufen electrophoresed. No electrophoresis, goufen d'gels fir eng Stonn an 2,5% Triton X-100 Katakombe SDS ze läschen. D'gels sech dann fir 18 Stonnen incubated bei 37 ° C an 50 mm Tris /HCl mat 10 mm CaCl 2 an 0,02% Nan 3, Kierchefënster mat coomassie schéi blo an dann destained. Proteolytic Aktivitéite vun Uklang MMP-7 an ageschalt MMP-7 sech als Bande mat molekulare Sonnemassen Siicht vun 28 an 19 kDa, bzw.. VerfÜgung bedingt Media Collection fir trotzdeem VerfÜgung Am Ganzen, 2 × 10 Endothelial Zell Capillary-wëll Tube Formatioun Assay VerfÜgung den Effet vun SPARC op ze iwwerpréifen an kënschtlech VerfÜgung angiogenesis, war e capillary Opstellung assay gesuergt. An dëser assay, war matrigel pipetted an Pré-ausklénge 96-gutt Plaque (75 μl matrigel pro gutt) an polymerised fir 30 min bei 37 ° C. Fir erauszefannen, ob verännert SPARC Ausdrock angiogenesis, HUVECs (5000 Zellen pro gutt) regléieren géif sech zu 100 μl vun bedingt Medien aus verschidden Arte vun Zellen recoltéiert incubated. No 36 h vu incubation, goufen Bléien Strukturen fotografeschen. All assay Zoustand war zu quadruplicate alles aus dräi separat Experimenter évaluéieren. Biller waren mat engem Cannon Power Shot A640 Kamera op eng Olympus Inverted microscope mat enger 100 × Vergréisserung ageholl; Hëllef IPP war de Rouer Längt laachen (Versioun 6.0, Media Cybernetics, Silver Fréijoer, MD). VerfÜgung däischtere Skin-fantastesch Chamber Model VerfÜgung Déi Etüden sech am Aklang mat engem Protokoll vun der guttgeheescht gesuergt Déier Care an Benotzt Comité vun der Korea University (ethesch Applikatioun averstaane Zuel Nr J201155). D' zu VIVO VerfÜgung Prozedure goufen an Iwwerteneestëmmung mat de Recommandatiounen am Guide fir d'Fleeg an Uwendung vun schafft Déieren vun der National Instituter Gesondheetsminister. Athymic Sauna Mais (6 Wochen al, weiblech, 26-28 g, n = 3 pro Grupp) sech bannent engem meeschten-gratis Ëmwelt flegelhaft an haten. D'ofgestouss Technik ass virdrun [11] beschriwwen. E verleeft Loft Referendum um nationale war an der Maus duerch iergendee 10 ml vu Loft subcutaneously no der Déier Nodeel war komplett gemaach. Diffusion CHAMBERS (Millipore, Bedford, MA, USA) sech duerch aligning 0.45-mm Millipore Schläimhait op béide Säiten vun der Kraterrand vun der "O" Ring mat zweckméisseg virbereet. BGC-P, BGC-Print an BGC-SP; HGC-P, HGC-Print oder HGC-Ok Zellen (1 × 10 Xenograft Models an Immunohistochemistry VerfÜgung D'athymic Sauna Mais sech op verschiddene Gruppen zoufälleg (n = 6 pro Grupp). Mais sech subcutaneously am ënneschten hënneschter Säit mat mënschlechen BGC-P inoculated, BGC-Print, BGC-SP oder HGC-EP, HGC-Print, HGC-Ok Zellen (2 × 10 Aféierung VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Aart vun ieweschte Loftwee Bakterien kéint d'Asthma Schwieregkeet beaflossen
Wat Dir ësst kann de Wee änneren wéi Antibiotike Ären Darm beaflossen
Iessen beaflosst selektiv Darmmikroben fënnt Studie
Mamm-a-Puppelchen SARS-CoV-2 Iwwerdroung an der Schwangerschaft méiglech awer selten,
Wëssenschaftler entwéckelen Peptiden déi d'Gläichgewiicht an den Darmbakterien restauréieren an d'Atherosklerose ëmgoen
Apoptose ass e wichtege Mediateur vun der Pathogenese bei der Déierekoronavirus Infektioun
Fuerscher manipuléieren Bakterienaarten am Darm mat Diät
Wëssenschaftler vun der Stanford University School of Medicine hu gewisen datt andeems dDiät an engem Mausmodell manipuléiert gëtt, et ass méiglech dEngraftment vun engem spezifesche Bakteriestamm iww
Thiopurine kéinte hëllefen eng viral Replikatioun a mënschleche Coronavirus ze stoppen
Fuerscher vum Departement Mikrobiologie &Immunologie, Dalhousie Universitéit, Universitéit vu Calgary, an Departement fir Biochemie a Molekularbiologie, Universitéit vu British Columbia, Kanada, huet
Maach weider,
Eat the Camera - Kapsel Endoskopie Wann och ëmmer e grousse Great White Shark gefaang gëtt an hie gëtt geduecht hannert enger Attack ze sinn, gëtt de Fësch de Mo opgeschnidden. All Zort vu Saachen kë