Manque Aktivatioun vun der Sonic Kéiseker (Pabeiren) Passerelle huet zu enger grousser Villfalt vu mënschlechen Cancers an zu Kriibs Stammzellen (CSCs), awer beschriwwe gouf, huet d'Roll vun Pabeiren Passerelle an gastric CSCs net gemellt goufen. An dëser Etude, ze propagéieren mir d'Méiglechkeet, datt Manque Aktivatioun vun der Pabeiren Passerelle d'Charakteristiken vun gastric CSCs haten. Éischt, mir identifizéiert Kriibs Desaccord-wëll Zellen (CSLCs) vu Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen (HGC-27, MGC-803 an MKN-45) benotzt tumorsphere Kultur. Verglach mat Operstéiungszeen Zellen, déi de Wénkel gekäppt tumorsphere Zellen méi Self-oofgedicht Muecht an chemoresistance. D'Zellen CSCs lues (CD44, CD24 an CD133) waren och vill méi an tumorsphere Zellen wéi zu Operstéiungszeen Zellen ausdrécken. Méi wichteg, awer am VIVO xenograft Studien dass erhéijen mat 2 × 10 Fro:. Song Z, Yue W, Wei B, Wang N, Li T, Guan L, et al. (2011) Sonic Däreldéier Passerelle Ass Néideg fir Fligerei vun Cancer Stammzellefuerschung-Like BTS an Human Gastric Cancer. PLoS NËMMEN 6 (3): e17687. Doi: 10.1371 /journal.pone.0017687 VerfÜgung Redakter: Mikhail Blagosklonny, Roswell Park Cancer Institut, Vereenegt Staate vun Amerika VerfÜgung Arnaque: 27. November 2010; Akzeptéiert: 10. Februar 2011; Publizéiert: 4. Mäerz 2011 VerfÜgung Copyright: © 2011 Song et al. Dëst ass eng oppen-Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz BY Creative Commons verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt d'Original Auteur an d'Quell Kaiser sinn VerfÜgung Funding:. Dës Aarbecht gouf vun der National High Technology Fuerschung an Entwécklung plangen vu China (È6AA402A04,È6AA02A107), de Major Staat Grondakommes Research plangen vu China (È9CB521704), an der National Natur Science Foundation of China (Ĵ72468,Ĵ73031) ënnerstëtzt. D'funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisioun, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft ze publizéieren VerfÜgung Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung CSCs spillen eng wichteg Roll an Kriibs Entwécklung, dat subpopulation bannent entholl leie d'Charakteristiken vun Self-oofgedicht Muecht, chemoresistance an tumorigenic Muecht also eng wichteg Roll an der Initiatioun, Werdegang an um Terrain vun Kriibs spille kann. Waat a manipuléiert der biochemical Weeër an déi Charakteristiken Équipe ass eent vun de beschte Manéiere fir ze CSCs matmaacht, Spëtzekandidat bei der Entwécklung vum Roman Drogen a Behandlung Prozeduren. An fir déi Pabeiren Passerelle spillt enger kritescher Roll an vill CSCs, wéi Gehirtumoren Stammzellen [1], [2], CD34 + leukemic Zellen [3], [4] an Broscht CSCs [5], an ausserdem, et ass wichteg fir d'Entwécklung an homeostasis vun gastric drüs [6], Manque Aktivatioun vun der Pabeiren Passerelle an gastric Kriibs Resultat kéint [7], [8], awer, d'Roll vun Pabeiren Passerelle an gastric CSCs net kloer ass. VerfÜgung an fir déi Pabeiren Passerelle an mammalian Zellen ass vun ligands Pabeiren mediated [9]. An d'Flichte vun Pabeiren, bremst de transmembrane receptor Material (Ptch) d'Aktivitéit vun engem anere transmembrane FAQ, smoothened (Smo), geplatzt inactivation vun Pabeiren Passerelle [9], [10]. Verbindlech vun Pabeiren ze Ptch abrogates der inhibitory Effet vun Ptch, an Smo ass derepressed, doduerch activating Transkriptiouns Faktor Gli (Gli1, Gli2 an Gli3) [9], [10]. Gli1 ass eng staark positive activator vun afgerappt Zil- Genen an ass selwer e transcriptional Zilscheif vun Pabeiren Passerelle [11]. Dofir, ass Gli1 engem Bewaacher vun Pabeiren Passerelle Manque Aktivéierung als [10], [12] VerfÜgung Viru Kuerzem, verschidden Zorte vun CSCs oder CSLCs goufen aus malignant erhéijen identifizéiert an isoléiert [13] -. [25]. An gastric Kriibs, methodologically, ass et schwéier CSCs aus Zell Linnen oder entholl Otemschwieregkeeten uplanzen ze isoléieren an Meenungsfreiheet nennt. Am Moment, CD44 den nëtzlechsten Bewaacher fir mèi Offäll vun gastric CSCs ze ginn ebenfalls, awer, et ass net ganz spezifesch fir gastric CSCs [26]. VerfÜgung An dëser Etude, isoléiert mir CSLCs vum Mënsch gastric Kriibs Zell Linnen (HGC-27, MGC-803 an MKN-45) tumorsphere culturing zu serum-gratis mëttelfristeg benotzt an de Self-Erneierung Muecht, chemoresistance an tumorigenic Muecht vun der tumorsphere Zellen identifizéiert; nächst, mir den Ausdrock vun Pabeiren Passerelle-Zesummenhang Molekülle, dorënner déi Pabeiren, Ptch, Smo, Gli1 an Gli2 zu tumorsphere Zellen an Operstéiungszeen Zellen, virun allem den Ausdrock vun Ptch an Gli1.Then iwwerpréift, blockéiert mer déi Pabeiren Passerelle vun cyclopamine oder Kontroll tomatidine, 5E1 oder Kontroll PBS ze ermëttelen, ob d'Charakteristiken vun CSLCs zu tumorsphere Zellen vun Manque Aktivatioun vun der Pabeiren Passerelle haten goufen. Endlech, et geheescht mir Primärschoul Echantillon gastric Kriibs der funktionell Aspekter vun Pabeiren Passerelle an gastric CSLCs ze analyséieren. VerfÜgung Cyclopamine ass eng Zell-permeable steroidal alkaloid. Et desorganiséieren Cholesterol Bio-Synthes an antagonizes speziell fir déi Pabeiren sécher Passerelle duerch direkt dÉxistenz Smo (smoothened), enger wäiter famill vum G-FAQ-Koppel kenne. Et ass e wäertvollen Outil d'Bedeelegung vun Pabeiren sécher an der Entwécklung vun verschiddenen erhéijen fir ënnersicht. Tomatidine ass eng steroidal alkaloid datt strukturell cyclopamine gläicht, mee Éloquence Kapazitéit fir déi Pabeiren sécher ze inhibit. Et kann als negativ Kontroll benotzt ginn. 5E1 ass eng Anti-hh monoclonal antibody, déi d'Pabeiren an IHH Aktivitéit neutralizes. VerfÜgung 1. Tumorsphere Zellen haat d'Charakteristiken vun CSLCs VerfÜgung Mir gewuess HGC-27, MGC-803 an MKN-45 Operstéiungszeen Zellen zu serum-gratis mëttel- an der Rubrik Methoden beschriwwen. No 7 Deeg, huet tumorspheres vun aus ongeféier 50 bis 100 Zellen observéiert (Figebam. 1A). VerfÜgung D'Self-oofgedicht Kapazitéit vun dësen tumorspheres hinnen an eenzeger Zell évaluéieren war vun dissociating a wiisst op engem clonal Dicht vun 1000 Zellen pro Milliliter. No 2 Wochen, Équipe eenzel Zell ofgeleet vun HGC-27 tumorsphere Zellen entsteet sub-tumorspheres op 41,83% ± 3,13% am Verglach mat 8,17% ± 2,40% vun Operstéiungszeen Zellen, Saunaen, vun MGC-803 an MKN-45, d'Sous-tumorspheres Taux vun tumorsphere Zellen sech och méi héich wéi déi vun Operstéiungszeen Zellen. (Figebam. 1B). Dës Donnéeë ugeholl, datt de Self-oofgedicht Kapazitéit vun tumorsphere Zellen war méi héich wéi déi vun Operstéiungszeen Zellen. Tumorsphere Zellen och eng fräi Fähegkeet zougedréckt Kolonien ënner Hafen-onofhängeg Konditiounen zu engem normale mëll Agar assay no 14 Deeg am HGC-27 an MKN-45 (Figebam. 1c) zu Form. VerfÜgung Mir standing och eng limitéieren dilution HGC-27 tumorsphere Zellen an Operstéiungszeen Zellen assay fir spheroids Opstellung benotzt, bzw.. Wéi an Table S1 gewisen, ongeféier 27-35% vun tumorsphere Zellen konnt spheroids produzéiere, iwwerdeems manner wéi 5% vun Operstéiungszeen Zellen spheroids no 3 Wochen Kultur produzéiert hätt. Dofir, an der HGC-27 tumorsphere Zellen, kéint mir schätzen, datt d'spheroids-administrativ Zellen Populatioun engem Maximum vun 35% aus. VerfÜgung Chemoresistance aner Eegenheet vun CSCs ass, sou propagéieren mer, ob en Ënnerscheed zu chemoresistance vierdrun tëscht tumorsphere Zellen an Operstéiungszeen Zellen. D'Resultater weisen, datt, no 48 Stonnen, tumorsphere Zellen am Verglach mat Operstéiungszeen Zellen ënnert de selwechte Bedingungen wiesentlech gréisseren Resistenz zu Drogen bewisen (Figebam. 1D). Mir och chemoresistance vun HGC-27 tumorsphere Zellen an Operstéiungszeen Zellen zu verschiddene Konzentratioune vun Drogen évaluéieren, awer, souwuel tumorsphere Zellen an Operstéiungszeen Zellen weisen hutt net vill chemoresistance zu Drogen an enger Portioun-ofhängeg Moud (Figebam. S1). VerfÜgung Next, iwwerpréift mir den Ausdrock vun CD44 zu dissociated tumorsphere Zellen an Operstéiungszeen Zellen mat immunofluorescent assay a westlech blot. D'Resultater weisen, dass d'Zellen CD44 sech vill méi an tumorsphere Zellen wéi zu Operstéiungszeen Zellen (Figebam. 2A) ausdrécken. Ausserdeem, war déi westlech blot iwwerpréift den Ausdrock vun anere CSCs lues (CD24 an CD133) zu tumorsphere Zellen an Operstéiungszeen Zellen, am Verglach mat tumorsphere Zellen, war den Ausdrock vun CD24 vill manner an Operstéiungszeen Zellen, iwwerdeems den Ausdrock vun CD133 ähnlech war (Lalumi 2B.). Weider, mir HGC-27 Zell vun FACS fir CD44 zortéieren fractionated, fonnt mir dass CD44 (+) Zell Ëmwandlung méi spheroid Kolonien am Verglach mat CD44 produzéiert hätt (-) Zell Ëmwandlung, Saunaen, d'Gréisst vun spheroid Kolonien aus CD44 (+) Zellen war méi grouss wéi CD44 déi aus (-) (. Lalumi 2C). Zellen VerfÜgung 2. Tumorsphere Zellen erhéijen op xenotransplantation VerfÜgung Fir xenograft Studien, gläich Zuel produzéiert hätt (2 × 10 H &. E Ënnersichung vum ofgeleet xenografts HGC-27 tumorsphere Zellen gewisen, datt dës erhéijen enk Beruff vum original Mënsch entholl, haaptsächlech ënnerscheet Zellen (Figebam. 3C) mat. Wichtegst, tumorspheres du-ofgeleet vun der xenotransplanted erhéijen (Figebam. 3D) ginn hätt, a si konnt entholl Form erëm (Figebam. 3). Dës Donnéeë uginn dofir, datt d'tumorsphere Zellen CSLCs representéiert datt tumorigenic Muecht haten. VerfÜgung 3. An fir déi Pabeiren Passerelle war héich an tumorsphere Zellen ausgedréckt wéi am Operstéiungszeen Zellen VerfÜgung Fir de Lien tëscht Pabeiren Passerelle an CSLCs Charakteristiken vun tumorsphere Zellen ermëttelen, mir éischter der mRNAs Ausdrock vun Pabeiren Passerelle-Zesummenhang Molekülle iwwerpréift, dorënner déi Pabeiren, Ptch, Smo, Gli1 an Gli2 vun RT-Hinnen alleguer. D'Resultater weisen, datt all vun der mRNAs héich zu HGC-27 ausgedréckt huet tumorsphere Zellen. Verglach mat tumorsphere Zellen, den Ausdrock Niveau vun Pabeiren, Ptch, Smo an Gli1 sech wesentlech méi an Operstéiungszeen Zellen, iwwerdeems den Ausdrock Niveau vun Gli2 ähnlechen sech Zellen ze tumorsphere. An MGC-803 an MKN-45, den Ausdrock Niveau vun Pabeiren, Ptch an Gli1 waren och vill manner an Operstéiungszeen Zellen wéi an tumorsphere Zellen, iwwerdeems den Ausdrock Niveau vun Smo an Gli2 kee groussen Ënnerscheed tëscht Operstéiungszeen Zellen Équipe an tumorsphere Zellen (Lalumi . 4A). VerfÜgung an fir déi Pabeiren Passerelle, Zil- Genen Ptch an Gli1 sinn, gi si als wichteg lues vun Pabeiren Passerelle Manque Aktivéierung considéréiert. Also, iwwerpréift mir weider de Ausdrock Niveau vun Ptch an Gli1 vun Western blot a grouss real-Zäit Hinnen alleguer. VerfÜgung Wann Western blot Hëllef, hunn mir datt de Ausdrock Niveau vun Ptch an Gli1 goufen och héich an tumorsphere Zellen wéi zu Operstéiungszeen Zellen (Figebam. 4B). Mir évaluéieren nächst der Ausdrock Niveau vun Ptch an Gli1 zu xenografts aus HGC-27 vun grouss real-Zäit Hinnen alleguer. Chemeschen real-Zäit Hinnen alleguer Analysë vun Pabeiren Zil- Genen (PTCH an GLI1) huet d'selwecht Resultater vun uewen semi-grouss RT-Hinnen alleguer (Figebam. 4C). VerfÜgung 4. An fir déi Pabeiren Passerelle erauszesichen reduzéiert der Self-oofgedicht Muecht an chemoresistance vun HGC-27 tumorsphere Zellen VerfÜgung fir eng méiglech Roll vun Pabeiren Passerelle an Self-oofgedicht Kapazitéit vun tumorsphere Zellen ze testen, mir benotzt cyclopamine oder Kontroll tomatidine, 5E1 oder Kontroll PBS der Passerelle ze blockéieren. VerfÜgung d'Resultater weisen, datt cyclopamine Behandlung fir d'Équipe vun sub-tumorspheres zu HGC-27 tumorsphere Zellen an enger Portioun-ofhängeg Moud fir eng bedeitend Reduktioun vun Pouvoir gefouert, mee keng esou Effet war an Operstéiungszeen Zellen (Figebam. 5A) observéiert. Mir weiderhin ob Behandlung mat cyclopamine de Kolonien Opstellung Kapazitéit vun HGC-27 tumorsphere Zellen vum Hafen -independent Wuesstem assay Afloss hätt. Den Zerfall, gouf de Pouvoir Kolonien ze Form méi an der tumorsphere Zellen an enger Portioun-ofhängeg Moud relativ zu der Operstéiungszeen Zellen reduzéiert (Figebam. 5B). VerfÜgung Next, ze propagéieren mir den Effet vun Pabeiren Passerelle op chemoresistance vun HGC -27 tumorsphere Zellen, behandelt mir de dissociated Zellen mat cyclopamine oder Kontroll tomatidine fir 48 Stonnen, an dann Drogenofhängeger Resistenz vun tumorsphere Zellen bewäert huet. Wann cyclopamine vun Drogen gefollegt war, schéinen der Behandlung vun engem groussen Ensembel Zell Doud Taux gestäerkt. Bescht Resultater kritt, wann cyclopamine mat Oxaliplatin plus Mitomycin kombinéiert war (Figebam. 5C). Nee sou synergistic Effekt war zu Operstéiungszeen Zellen der aussetzt Drogen mat cyclopamine fir 48 Stonnen (Figebam. 5D). VerfÜgung observéiert Mir assayed och den Effet vun verschidden Konzentratioune vun cyclopamine (2,5 UM, 5 UM, 10 UM) op Zell Doud. Resultater weisen, datt cyclopamine dësen Zellen ze tumorsphere eng kleng awer konsequent Ofsenkung vun der liewensfäeg Zell Nummer maachen kéint. Verglach mat HGC-27 tumorsphere Zellen, war den Effet vun cyclopamine op Zell Doud ze Operstéiungszeen Zellen méi Bedeitung (Figebam. 5C, D). VerfÜgung Wann déi Pabeiren Passerelle war vun 5E1 blockéiert oder PBS Kontroll, d'Resultater vun der Autonomie -renewing Muecht an chemoresistance vun tumorsphere Zellen an Operstéiungszeen Zellen sech gläicht deenen virbildlech cyclopamine oder Kontroll tomatidine (Figebam. S2). VerfÜgung 5. An fir déi Pabeiren Passerelle erauszesichen verstäerkte entholl Äntwert op Drogen zu VIVO VerfÜgung Fir Test dëser Hypothes an VIVO, mir analyséieren ob déi Pabeiren Passerelle verstäerkte Chimiotherapie Efficacitéit erauszesichen, cyclopamine oder Kontroll tomatidine benotzt gouf fir déi Pabeiren Passerelle Äntwerte inhibit. HGC-27 tumorsphere Zellen sech erlaabt huet souwuel hënneschter Säite vun Sauna Mais ze wuessen bis de groussen Duerchmiesser vun entholl ronn 2 mm erreecht. Mais sech dann fir 3 Wochen mat cyclopamine oder Kontroll tomatidine 24 Stonnen ier Oxaliplatin Liwwerung zweemol d'Woch traitéiert. An all behandelt Mais, mat Oxaliplatin behandelt erhéijen sech vill méi kleng wéi déi kee mat Oxaliplatin behandelt. Desweideren, erhéijen wiesentlech gréisseren entholl Wuesstem inhibition zougedréckt a wann se mat Oxaliplatin a Kombinatioun mat cyclopamine behandelt goufen, déi entholl Äntwert ze chemotherapeutic Drogenofhängeger vun cyclopamine verstäerkte war (Figebam. 6A, B). Mir propagéieren och ob déi Pabeiren Passerelle vun 5E1 blockéiert oder Kontroll PBS zu VIVO Chimiotherapie Efficacitéit coopération, d'Resultater weisen, datt 10 μg /ml 5E1 Behandlung zu engem vill méi entholl Wuesstem inhibition wéi déi nëmmen gefouert behandelt mat Oxaliplatin (Figebam. 6A, B). VerfÜgung Dës Donnéeë ugeholl, datt obwuel Standard chemotherapeutic Drogen entholl outgrowth während der Behandlung Verspéidung kritt, wann se mat cyclopamine oder 5E1 kombinéiert huet, war d'Efficacitéit vun Chimiotherapie wesentlech gestäerkt an och méi nohalteg der Behandlung Ënnerbriechung. VerfÜgung Next, z'ënnersichen, ob an VIVO Pabeiren Passerelle erauszesichen op HGC-27 tumorsphere Zellen e spezifeschen Wierkung haten. Mais waren nëmmen cyclopamine op der rietser hënneschter Säit oder Kontroll tomatidine op der lénker hënneschter Säit (zweemol an der Woch fir 3 Wochen) behandelt wann erhéijen aus HGC-27 tumorsphere Zellen ronn 2 mm erreecht, no 3 Wochen, standing mir eng limitéieren dilution assay fir spheroids Opstellung mat tomatidine mat cyclopamine behandelt entholl Zellen a behandelt, bzw.. Wéi an Table S2 gewisen, ongeféier 9-15% vun Zellen aus xenotransplanted mat tomatidine behandelt entholl konnt spheroids produzéiere, iwwerdeems manner wéi 2,5% vun Zellen aus xenotransplanted mat cyclopamine behandelt entholl spheroids produzéiert hätt. Dofir, erauszesichen Pabeiren Passerelle an VIVO konnt den Zuelen vun gastric CSLCs reduzéieren. VerfÜgung 6. An fir déi Pabeiren Passerelle der gastric CSLCs Charakteristiken vun tumorsphere Zellen aus der Primärschoul entholl Echantillon haten VerfÜgung Fir erauszefannen, ob déi Pabeiren Passerelle an der gastric CSCs Charakteristiken vun tumorsphere Zellen aus gastric Kriibs Otemschwieregkeeten Équipe ginn hätt, et geheescht mir Primärschoul gastric Kriibs Echantillon der Analys vum funktionell Aspekter vun Pabeiren Passerelle an gastric CSLCs. VerfÜgung éischt, opgewues mir frësch Gros Zellen aus gastric Kriibs uplanzen an serum-gratis mëttelfristeg dissociated vun der Methode Rubrik beschriwwen, no 10 Deeg, tumorspheres observéiert goufen (Figebam. 7A, B). Dunn propagéieren mir chemoresistance an tumorigenic Muecht vun der tumorsphere Zellen aus gastric Kriibs Otemschwieregkeeten. D'Resultater weisen, datt tumorsphere Zellen aus gastric Kriibs Otemschwieregkeeten zu Drogen wéi normaler Zellen ënnert de selwechte Bedingungen (Figebam. 7C) wesentlech méi grouss Resistenz bewisen. Desweideren, frësch dissociated Gros Zellen aus gastric Kriibs uplanzen op 2 heijen × 10 CSCs deelen vill Charakteristiken mat Otemschwieregkeeten Stammzellen, wéi de Self-Erneierung, Prolifératioun, chemoresistance, a sinn de Wuesstem vun erhéijen [27] fir verletzt, haaptsächlech responsabel [28]. Vill Enquêteuren hun zortéieren fluorescence-ageschalt Zell fir ze identifizéieren an CSCs isoléieren a sech, datt dësen Zellen Adelskreesser a spezialiséiert serum-gratis mëttelfristeg Form kann. An dëser Etude, dee mer de Géigendeel Approche vun tumorsphere Zellen entwéckelt an dann Bestëmmung ob dësen Zellen CSCs Charakteristiken chrétienne. VerfÜgung Mir ginn eng definéiert serum-gratis mëttelfristeg aus EGF, FGF-2, B-27 Zousaz an N-2 Zousaz gastric Kriibs Zell Zeilen ze erhalen. Bedingungen déi benotzt ginn, ier endogenous Mä Desaccord /progenitors an entholl Desaccord Zelle vu mënschlechen erhéijen an entholl Zell Zeilen ze erhalen. Zum Beispill, Kondo et al. [24] zeechent de C6 Grenzwäerter entholl Zell Linn kënschtlech an VIVO an observéiert aus de gutt-Zeeche Säit Populatioun ofgeleet eng kleng Bevëlkerung vun Desaccord-wëll Zellen. Setoguchi et al. [29] bewisen Kriibs Desaccord-wëll Zell Potential an aner Kriibs Zell Linnen, dorënner de MCF7 Broscht Kriibs Linn, B104 neuroblastoma, an Hela adenocarcinoma. VerfÜgung Op eise Experimenter, déi mir dräi gastric Kriibs Zell Linnen (HGC- 27, MKN-45 an MGC-803) bis Kultur tumorspheres. HGC-27 Zell Linn war vun der Kultur vun der metastatic lymph Node aus engem gastric Kriibs Patient festgestallte histological als Strenz carcinoma etabléiert. MKN-45 gouf vun der Pro ënnerscheet adenocarcinoma vun de Mo. vun engem 62-Joer-ale Fra etabléiert. MGC-803 ass eng epithelial schlecht ënnerscheet Mënsch gastric muco-adenocarcinoma Zell Zeil aus engem 74-Joër-alen Mann. VerfÜgung zwee verschidde Approche hunn normalerweis benotzt ginn CSCs zu publizéiert Etuden [30], [31] zu z'identifizéieren . One ass eng kënschtlech Method als "spheroid Kolonie Opstellung," an anere ass zu VIVO Method sensibiliséieren ofgestouss vum Kandidat CSCs ënnert d'Haut vun immunodeficient Mais. VerfÜgung De fréiere bezitt zu Kultur Platen Kandidat CSCs culturing speziell Beschichtete fir noncell stark mat serum-fräi Medien wouvun epidermal Wuesstem Faktor an elementar fibroblast Wuesstem Faktor. De Wuesstem vun der Kugelgestalt Kolonien no e puer Wochen ass dorunner schonns vun Self-Erneierung Fähegkeet, a géif mat engem CSC phenotype konsequent ginn. Déi Method-Wuesstem vun Zellen zu immunodeficient Mais-gestalten richteg tumorigenicity ze beweisen an ass meeschtens als Gold Standard erauskoum fir Existenz vun CSCs attestéiert. Eng Rei vu Studien hu proposéiert, datt dës zwee Approche déi allgemeng ähnleche Resultater am CSCs Kandidat fir vill staark erhéijen bewäert. VerfÜgung Am Moment, gastric CSCs net spezifesch Uewerfläch Approchen hun, also, mir tumorsphere Zellen entwéckelt an dann alles ob dësen Zellen CSCs Charakteristiken Qualifikatiounen, dorënner Self-oofgedicht Muecht, chemoresistance an tumorigenic Muecht. VerfÜgung Eis Donnéeë gewisen, datt gastric Kriibs Zell Linnen (HGC-27, MGC-803, MKN-45) an eng definéiert serum- ugebaut gratis mëttelfristeg kéint tumorspheres Form datt Zellen wëll CSLCs behuelen Texter. Kënschtlech, zougedréckt tumorsphere Zellen eng fräi Fähegkeet Kolonien an mëll Agar ënner Hafen-onofhängeg Konditiounen an eng fräi Fähegkeet Form sub-tumorspheres zu Form. Mir weisen awer och, datt de Self-Erneierung Fäegkeet hat um Passage 2 bis 8 (vu 44,5% bis zu 70,5%), eng Erhéijung sub-tumorspheres vun HGC-27 tumorsphere Zellen ze Form an dann haten se eng relativ stabil Undeel no 8 oder méi Passage wéi um clonal Dicht (Figebam. S3) ugebaut. Dës Donnéeë ugeholl, datt d'proliferative Potential vun tumorsphere Zellen war no verlängert Passage haten. Zousätzlech, proposéiert tumorsphere Zellen kënschtlech sech méi resistent Oxaliplatin an Mitomycin Verglach mat Operstéiungszeen Zellen, dës Donnéeën, déi tumorsphere Zellen vun beräichert Zuelen vun CSLCs besteet, déi potenziell huet si manner ufälleg fir d'Aktiounen vun béid Oxaliplatin an Mitomycin. An VIVO, konnt tumorsphere Zellen erhéijen op xenotransplantation op engem héichen Taux wéi Operstéiungszeen Zellen generéieren. Desweideren, tumorsphere Zellen entsteet subcutaneous erhéijen mat grousst Volumen a kuerz Zäit am Verglach mat deene vun Operstéiungszeen Zellen entsteet, Fazit vun der Virronn, tumorspheres du-ofgeleet vun der xenotransplanted erhéijen ginn hätt, a si konnt entholl erëm Form, proposéiert dës Donnéeën, déi tumorspheres zu CSLCs beräichert huet . VerfÜgung An eiser Etude, Operstéiungszeen Zellen enthale viraussiichtlech eng relativ niddereg Prozentsaz vun CSCs, well keng Method fir Isolatioun oder Entfernung vun deenen Zellen benotzt gouf. Et kann argumentéiert ginn, dass et dës kleng Bevëlkerung vun CSCs ass dat fir entholl Formatioun responsabel ass. Egal, méi CSCs an der tumorsphere Zellen evident waren, déi hir méi aggressive Verhalen erkläre kann. VerfÜgung Next, ze propagéieren mir ob d'Charakteristiken vun CSLCs zu tumorspheres vun Manque Aktivatioun vun der Pabeiren Passerelle haten goufen. Éischt, hien huet mir dat mRNA Ausdrock Niveau vun Pabeiren Passerelle-Zesummenhang Molekülle (Pabeiren, Ptch an Gli1) zu tumorsphere Zellen bedeitend méi héich waren, wéi am Operstéiungszeen Zellen, iwwerdeems Gli2 héich an zwou Zellen ausgedréckt huet. Mir weider de Ausdrock Niveau vun Pabeiren Passerelle Zil- Genen iwwerpréift (Ptch an Gli1) vun Western blot a grouss real-Zäit Hinnen alleguer, goufen d'Resultater gläicht deenen vun RT-Hinnen alleguer. Zweet, inhibition vun Pabeiren Passerelle Aktivitéit vun cyclopamine oder 5E1 Nerve Self-Erneierung Muecht ofgeholl a fräi Sensibilitéit fir Drogen an HGC-27 tumorsphere Zellen, mä dës Auswierkunge goufen net an Operstéiungszeen Zellen nozekommen. An VIVO, an all behandelt Mais, mat Oxaliplatin behandelt erhéijen sech vill méi kleng wéi déi kee mat Oxaliplatin behandelt, an der Behandlung mat cyclopamine oder 5E1, war d'entholl Äntwert ze chemotherapeutic Drogen gestäerkt. Dës Donnéeë ugeholl, datt obwuel Standard chemotherapeutic Drogen entholl outgrowth während der Behandlung Verspéidung kritt, wann se mat cyclopamine kombinéiert huet, war d'Efficacitéit vun Chimiotherapie wesentlech gestäerkt an och méi nohalteg der Behandlung Ënnerbriechung. VerfÜgung Endlech, mir Primärschoul gastric Kriibs geheescht Echantillon der funktionell Aspekter vun Pabeiren Passerelle an gastric CSLCs ze analyséieren. Resultater weisen, datt tumorsphere Zellen aus gastric Kriibs specimen haten och chemoresistance an tumorigenic Muecht, besonnesch Passerelle erauszesichen Pabeiren reduzéiert der chemoresistance vun tumorsphere Zellen an verstäerkte entholl Äntwert op Drogen zu VIVO. VerfÜgung Als fir chemoresistance, verschidde Funktiounen vun CSCs vläicht si schwéier maachen eliminéiert. CSCs sinn relativ quiescent an dat erlaabt hinnen aus chemotherapeutic regimens ze entzéien, datt generell aktiv Vëlos Zellen viséieren. Desweideren, well fir hir normal Amtskolleg gewisen, hunn CSCs gi proposéiert héijen Niveau Ausdrock vun multidrug Fernsehn Famill Genen ze weise, wahrscheinlech an méi efficace efflux vun chemotherapeutic Drogen a Leitmotiv multidrug Resistenz doraus, Zousätzlech, wéi sécher Weeër, wéi Wnt, Däreldéier oder top, sinn zu CSCs Virwaat ze entholl Entwécklung dysregulated. Der Entwécklung vun enger effizienter therapeutesch Approche géif brauchen also d'Identifikatioun vun ënnerscheed molekulare Weeër aktiv an CSCs an d'Identifikatioun vun Agenten datt entweder Prolifératioun Spär CSC kann oder CSC dat induce, also Empfindlechkeet op chemotherapeutic Drogen Tempo. Also, wichteg Facteure der chemoresistance vun CSCs sinn Ausriichtung Faktoren betrëfft. D'microenvironment, oder gratis Sproochenunterricht, kann d'Fähegkeet vun CSCs Afloss ze proliferate, opgeholl oder violéieren. Déi gratis Sproochenunterricht ass eng Verankerung Site fir CSCs, an Haftung Molekülle oder microenvironmental soluble Molekülle, dorënner Wuesstem Facteuren an cytokines, ka vill zu der refractoriness zu Therapie bäidroen. Obwuel inhibition vun Pabeiren Passerelle vun cyclopamine oder 5E1 eng nëtzlech Trainer wier, an eise studéieren, hien huet mir dat receptor Komponent Ptch an Transkriptiouns Faktor Gli1 waren héich och an tumorsphere Zellen ausgedréckt. Also, Ptch oder Gli1 vläicht eng Alternativ Zil fir Behandlung vun gastric Kriibs ginn. Eng méiglech Strategie ass kleng interfering RNS (siRNA) oder shRNA spezifesch fir Ptch oder Gli1, mä gastric CSLCs zu tumorsphere Zellen ze benotzen muss net komplett sidd ginn, mir brauchen fir weider der gastric CSLCs wesssen, datt dëst Wierk och an eis weider gemaach ginn studéieren. VerfÜgung an Conclusioun, awer mir déi Pabeiren Passerelle an der Self-Erneierung, Prolifératioun, Drogen- Resistenz an tumorigenic vun tumorsphere Zellen Équipe kéint a virschloen, datt bei inhibiting Pabeiren Édouard e rationale therapeutesch Approche vertriede ze viséieren fir Strategien gastric CSCs. VerfÜgung Déieren IFLA- breakpoint VerfÜgung Männlech athymic Sauna Mais (Nu /Nu), 6 bis 8 Wochen al, sech aus Peking Vital-River kritt Labo Déieren Technology Co. Ltd (SCXK JING 2007-0001) an huet sech ënnert pathogen-gratis Konditiounen an d'Barriär Déier Gebei waren. All Mais goufen ënner guttgeheescht Richtlinnen vun schafft Déieren Center vun der Academy of Military Medical Sciences (SYXK juni 2002-001) gehaal. VerfÜgung Kultur vun Operstéiungszeen Zellen, tumorspheres an Ënner-tumorspheres VerfÜgung Mënscherechter gastric Kriibs Zell Linnen (HGC-27, MGC-803 an MKN-45) aus Korea Unioun Medical College kritt huet an 1640 mëttelfristeg cultured 10% an et Bovine serum (FBS) mat an der Dicht vun 1 × 10 No der Primärschoul tumorspheres der Gréisst vun ongeféier 200-500 Zellen pro Sphär erreecht, déi tumorspheres sech bei der Dicht vun 1000 Zellen pro Milliliter an 100 μL eenzel Zell Ophiewe war an all gutt vun 24-gutt ultra-niddereg Unhang Plack (Corning) zu serum-gratis mëttelfristeg beschriwwen virun rakommen dissociated. All gutt war fir eenzel Zell iwwerpréift, an nëmmen de Wells datt eenzel Zell enthale sech markéiert. 2 Woche méi spéit, Wells sech fir sub-tumorspheres Formatioun analyséiert. Normal Operstéiungszeen Zellen sech als Kontroll fir d'Muecht ze Form sub-tumorspheres benotzt. Fir de Lien tëscht Pabeiren Passerelle Test an der Opstellung vu Sous-tumorspheres, behandelt mir de dissociated Zellen mat cyclopamine (2,5 μM, 5 μM, 10 μM) oder Kontroll tomatidine, 5E1 (10 ug /ml) oder Kontroll PBS an observéiert der Équipe vun sub-tumorspheres. VerfÜgung gastric Kriibs Otemschwieregkeeten specimen VerfÜgung de Mënsch frësch, steril uplanzen gastric Kriibs Otemschwieregkeeten sech am Aklang mat der ethesch Normen vun der institutioneller Comité op Mënsch trotzdeem vun 15 Patiente kritt (Alter Gamme 70-85 Joer) mat engem gastric Kriibs resection Jongen, no Awëllegung vun de Patienten (Table S3) Maîtrise. VerfÜgung Da kontaminéierte ze verhënneren der uplanzen sech zu 95% Ethanol fir 2-3 sec Beweegung, an Katakombe mat phosphate-gefiermt Salins (PBS) an Antibiotiken puer Mol d'Blutt ze läschen. No dësen, war d'Surface vun de Kriibs Otemschwieregkeeten uplanzen ofgegruewen an d'bannenzegt Deeler goufen an 1-3 mm Géigewier Anchorage-onofhängeg Wuesstem assay VerfÜgung Fir Observatioun de Self-oofgedicht Muecht weider, mëll Pleséier incubated Agar assay war benotzt de Kolonien Équipe vun tumorsphere Zellen an Operstéiungszeen Zellen ënner Hafen-onofhängeg Konditiounen ze bestëmmen. All gutt vun enger sechs-gutt Plack war mat 1 ml vu 10% FBS 1640 mëttelfristeg mat 1% agarose bedeckt. No 20 min vu incubation bei 37 ° C, gläichberechtegt Zuelen (500) vun tumorsphere Zellen oder Operstéiungszeen Zellen sech am 1 ml vu 10% FBS 1640 mëttelfristeg mat 0,5% agarose notéiert. Fir de Lien tëscht Pabeiren Passerelle Test an de Kolonien Équipe ënnert Hafen-onofhängeg Konditiounen, mir behandelt der dissociated Zellen mat cyclopamine (2,5 μM, 5μM, 10μM) oder Kontroll tomatidine, 5E1 (10 ug /ml) oder PBS Kontroll.
Aféierung VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
spontan a Methode VerfÜgung
Gas detektéiert elektronesch Pille fir Diagnos vu Magen -Darm -Krankheeten
Änneren iewescht respiratorescht Mikrobiom bei Kanner am Zesummenhang mat der SARS-CoV-2 Empfindlechkeet
Fuerscher identifizéieren eng Bakterie mat Anti-SARS-CoV-2 Aktivitéit in vitro:Dolosigranulum pigrum
Wéi Mass Screening Efforten gehollef hunn méi Fäll vun Zöliakie bei Kanner z'identifizéieren
Darmbakterien verbonne mat metabolesche Verännerungen an Autismus an enger neier Studie
Fungi a Bakterien am Darm kënne gläichméisseg mënschlech Gesondheet a Krankheet Gravitéit beaflossen
Ëmgank mam Reizbaren Darm Syndrom
Irritabel Darm Syndrom (IBS) gëtt ugeholl datt se iwwerall vu 25 op 45 Milliounen Amerikaner beaflossen, meeschtens Fraen aus hire spéiden Teenager bis an de fréien 40er. DKonditioun ass eng Mëschung
Lungemikrobiom viraussoen d'Gravitéit vun der COVID-19 Krankheet
En neit Virdruck Fuerschungspabeier gepost op medRxiv * Server fonnt Ännerungen am Lungemikrobiom wärend engem schwéieren akuten respiratoresche Syndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) Infektioun beaflos
Wat ass den Deal mat Hepatitis C?
Hep C. Dës Deeg, Dir gesitt vill Fernsehs kommerziell iwwer Testen a Screening dofir. Et ass einfach unzehuelen datt Hepatitis eng Bedingung ass nëmme Suerg fir déi, déi Nolen beim Drogenverbrauch ged