Zell Invasioun ass e wichtege Mechanismus vun Kriibs Metastasen an malignancy. MATRIX metalloproteinase-9 (MMP-9) ass eng wichteg an der Kriibsfuerschung Zell Invasioun Prozess Équipe proteolytic Aktivitéit. Héich Ausdrock Niveau vun MMP-9 zu gastric Kriibs vergläichen positiv mat entholl aggressiveness an hunn en däitleche negativ Korrelatioun mat Patienten Iwwerliewe Mol. Kuerzem, Mechanismen suppressing MMP-9 vun phytochemicals ëmmer propagéieren muss ginn. Chrysin, eng natierlech vir chemeschen an Planzen, gouf confirméiert entholl Metastasen ze oofgesinn. Allerdéngs hunn d'Auswierkunge vun chrysin op MMP-9 Ausdrock vun gastric Kriibs net gutt studéiert ginn. Am Moment studéieren, getest mir d'Effete vun chrysin op MMP-9 Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen, an alles seng Basisdaten Mechanismus. Mir iwwerpréift d'Auswierkunge vun chrysin op MMP-9 Ausdrock an Aktivitéit via RT-Hinnen alleguer, zymography, Promoteur studéieren, a westlech blotting zu Mënsch gastric Kriibs AGS Zellen. Chrysin inhibited bor-12-myristate 13-acetate (PMA) -induced MMP-9 Ausdrock vun enger Portioun-ofhängeg täteg. Benotzt AP-1 decoy oligodeoxynucleotides, confirméiert mir dat AP-1 entscheedende transcriptional Faktor fir MMP-9 Ausdrock war. Chrysin blockéiert AP-1 via Ennerdréckung vun de phosphorylation vun c-Jun an c-Erhëtzung duerch d'JNK1 /2 an ERK1 /2 Weeër erauszesichen. Ausserdeem, mat PMA pretreated AGS Zellen zougedréckt Ofstand invasiveness coopération, déi deelweis vun chrysin an MMP-9 antibody abrogated war. Eis Resultater hindeit, datt chrysin kann op d'mannst en Deel vun hirem anticancer Effekt vollt vun via eng Spär vun der JNK1 /2 an ERK1 /2 sécher Weeër an gastric Kriibs AGS Zellen MMP-9 Ausdrock duerch Ennerdréckung vun AP-1 Aktivitéit kontroléieren. VerfÜgung
Fro: Xia Y, Lian S, Khoi PN, Yoon Hj, Joo Ye, Chay KO, et al. (2015) Chrysin bremst entholl Promoter-entschlof MMP-9 Expression vum erauszesichen AP-1 via Herzogtum vun Erk an JNK Weeër an Gastric Cancer BTS. PLoS NËMMEN 10 (4): e0124007. Doi: 10.1371 /journal.pone.0124007 VerfÜgung
Akademesch Redakter: Pankaj K. Singh, Universitéit vun Nebraska Medical Center, USA VerfÜgung
Arnaque: Oktober 5, 2014; Akzeptéiert: 9 Mäerz 2015; Publizéiert: April 15, 2015 VerfÜgung
Copyright: © 2015 Xia et al. Dëst ass eng oppen Zougang Artikel ënnert de Bedingunge vun der Lizenz CC BY verdeelt, déi bereet benotzen Genehmegungen, Distributioun, an Reproduktioun vun all mëttelgrouss, gëtt si vum original Auteur an d'Quell Kaiser VerfÜgung
Data Disponibilitéit: All Daten bannent de Pabeier sinn VerfÜgung
Funding:. Dës Aarbecht vun engem Research heimat (0720570) aus der National Cancer Center (www.ncc.re.kr), Grondakommes Science Research plangen Subventiounen duerch d'National Research Foundation ënnerstëtzt gouf vun Korea (NRF) duerch den Edukatiounsministère finanzéiert, Science, an Technology (2010-0009910, www.moe.go.kr), an enger Medical Research Center (2012-000-9442) Zouschoss aus der koreanesch Science a Engineering Foundation ( www.nrf.re.kr). All uewen funders hu keng Roll am Etude Design, Daten Kollektioun an Analyse, Décisiounen ze publizéieren, oder Virbereedung vun der mëttelalterlech Handschrëft VerfÜgung
Wettsträit Interessen:.. D'Auteuren hunn deklaréiert, datt keng Competitioun Interessen existéieren VerfÜgung
Gastric Kriibs Moment geklommen zweet zu global Kriibs veruerteelt, mat engem geschate 990.000 nei Fäll an 738.000 Kriibs Doudesfäll weltwäit jäerlech doraus, obwuel d'Heefegkeet vun Mo. carcinoma an de leschte Jorzingte ofgeholl huet [1,2]. Wäit Uergel oder Otemschwieregkeeten Metastasen ass en Zeechen vun aarme hätt an Patienten mat gastric Kriibs. Metastasen ass déi fatale Charakteristik vun malignant erhéijen, fir méi wéi 90% vun entholl-Zesummenhang mortalities Comptabilitéit [2]. Et gouf gewisen, datt Chimiotherapie an Stralung Therapie kann net vill verlängeren an d'Liewensqualitéit vun de Patienten an deene Momenter [3,4] verbesseren. Entholl Zellen Metastasen engem ganz komplexe Prozess ass mat vun Prolifératioun, Migratioun, Invasioun, an der nächster Haftung an angiogenesis an aner Organer oder Stoffer [3]. VerfÜgung
Well Invasioun eent vun de fundamentale Eegeschafte vun malignant Kriibs Zellen ass, Invasioun kontroléieren, ass eng wichteg therapeutesch viséieren. Zell-extracellular Matrixentgasung (ECM) Interaktiounen, disconnection vun intercellular Haftung, ofgeschnidden vun der ECM, an der Invasioun vu lymph a Blutt kritt si wichteg Schrëtt an Kriibs Invasioun an Metastasen [5]. Entholl Invasioun verlaangt eng fräi Meenungsäusserung vun Matrixentgasung metalloproteinases (MMPs) [6]. MMPs, eng Famill vun Zénk-ofhängeg endopeptidases déi Kriibs Zell Invasioun an verbreet, Leeschtung entscheedende Rollen an Metastasen duerch ofgeschnidden vun der ECM an der basal Membran [7] induce. MATRIX metalloproteinase-9 (MMP-9), bekannt als 92 kDa Typ-IV collagenase oder gelatinase B, ass eent vun de wichtegste MMPs, an ass vun den MMP-9 Gentherapie zu Mënschen [8] encoded. Et ass confirméiert datt overexpression vun MMPs entholl Zell huele an Metastasen Erhéijung kann, dee mat malignancy an aarme Medeziner Resultater vun verschiddenen Cancers dorënner gastric Kriibs verbonne sinn [9,10]. VerfÜgung
Duerch d'Funktioun vun MMP- 9 am Laf vun malignancy, ass d'Ophiewe vu MMP-9 Niveauen eng wichteg Strategie fir Kontrollen Kriibs. An de leschte Joer, méi a méi Opmierksamkeet huet op Opklärung eng MMP-9 inhibitor, virun allem aus der natierlech vir Material do ass. Kim et al. entdeckt, datt silibinin bremst PMA-entschlof MMP-9 Ausdrock duerch Ennerdréckung vun Erk phosphorylation zu MCF-7 Mënsch Broscht Kriibs Zellen [11]. Méi kuerzem, Khoi et al. datt gemellt (-) - Epigallocatechin-3-gallate Bleck Nikotin-entschlof MMP-9 Ausdrock an invasiveness duerch d'Ennerdréckung vun NF-κB an AP-1 zu endothelial ECV304 Zellen [12]. Chrysin, 5,7-dihydroxyflavone, eng Zort vun natierleche Preretraite flavonoid, gouf angiogenesis an Metastasen ze inhibit bekannt [13,14]. Lin et al. bewisen, datt chrysin-IL-6 entschlof angiogenesis duerch verwandelt-Regulatioun vun der soluble IL-6 receptor /gp130 /JAK1 /STAT3 /VEGF sécher Passerelle [13] Hien. Kuerzem ass et confirméiert, datt chrysin der caspase-ofhängeg apoptosis vun Trail zu HCT 116 Zell Linn an CNE1 Zellen [15] gereegelt verbesseren kéint. Yang et al. entdeckt, datt chrysin Zell Invasioun an enger Portioun-ofhängeg Fassong TNBC Zellen opgeléist. Desweideren, Verloschter chrysin Metastasen-Zesummenhang Molekülle vimentin, Schleek an slug, an spären den Akt sécher Passerelle [16]. Allerdéngs, d'inhibitory Auswierkunge vun chrysin op MMP-9, souwéi de Mechanismus, hunn net gutt studéiert ginn, virun allem am gastric Kriibs Zellen. Am Moment studéieren, ze propagéieren mir chrysin d'Effekter op PMA-entschlof MMP-9 Ausdrock vun gastric Kriibs, a réischt seng Basisdaten Mechanismus. VerfÜgung
Zell Kultur a Kultur Konditiounen VerfÜgung
d'AGS Mënsch gastric Kriibs Zell Linn war vun der American Type Kultur Collection (Manassas, VA, USA) kritt. D'Zellen sech cultured zu RPMI-1640 mat 10% An et Bovine serum nà (FBS) an 0.6% penicillin-streptomycin bei 37 ° C an eng Atmosphär mat 5% CO 2. Fir d'Auswierkunge vun chrysin op PMA entschlof MMP-9 Ausdrock festzestellen, goufen d'Zellen mat verschiddene Konzentratioune vun chrysin pretreated an duerno mam PMA behandelt. Den Niveau vun MMP-9 Messenger RNS (mRNA) war vun ëmgedréint Transkriptiouns-polymerase Kette Reaktioun (RT-Hinnen alleguer) Analyse alles. D'Roll vun der spezifesch sécher Weeër an der PMA-entschlof MMP-9 Ausdrock sech duerch pretreating der AGS Zellen mat der Erk 1/2 inhibitor PD98059 (New England Biolabs, Beverly, MA), de JNK inhibitor SP600125 (Calbiochem, La Jolla iwwerpréift , CA), de p38 MAPK inhibitor SB203580 (Calbiochem, La Jolla, CA), an chrysin (Fläch Aldrich, USA) fir 1 Stonn virum Stimulatioun mat PMA. VerfÜgung Zell Nuetsvolen VerfÜgung BTS ( 5 × 10 gelatin zymography VerfÜgung BTS pretreated mat oder ouni fir 1 Stonn chrysin goufen behandelt mat 100 nm PMA fir 20 Stonnen. No incubation, fänke mer de Medien supernatant an standing gelatin zymography den MMP-9 Aktivitéit ze kontrolléieren. Duerno, war de Medien mat gläicher Volume vun 2P-9 activityrazolium b [62,5 mm Tris-HCl (pH6.8), 25% glycerol, 4% SDS, an 0,01% bromophenol blo] gemëscht an huet e acrylamide 7.5% iwwerlaascht: bisacrylamide (29: 1; Bio-Rad, USA) gelies wouvun 625 μg /ml gelatin (Fläch). No electrophoresis, war d'gelies mat 2,5% Triton X-100 dräi Mol gewäsch (20 Minutten pro Zäit), da fir 24 Stonnen op 37 ° C incubated, an der incubation gefiermt [50 mm Tris (pH 7.5), 100 mm NaCl, 5 mm CaCl 2, an 1 μM ZnCl 2]. Gels sech mat Coomassie Brilliant Blue R250 (Bio-Rad, USA) fir 3 Stonnen geschriwwen, an dann rinsed. Proteolytic Aktivitéit war wéi kloer Bands géint den bloen Hannergrond vun der Kierchefënster gelatin reflektéiert. Loading Kontroll fir gelatin zymography: Coomassie Brilliant Blue R-250 stain fir 10% Natrium dodecyl sulfate polyacrylamide gelies ouni gelatin, dee selwechte Montant vun supernatant ze weisen war op all Geschäftswelt iwwerlaascht VerfÜgung Réckproduktioun Transkriptiouns-Hinnen alleguer VerfÜgung <. p> Total RNS war vun der AGS Zellen mat TRIzol reagent (Invitrogen) ofgebaut. One μg vun insgesamt RNS war fir éischt-staarkt ergänzen DNA Synthes mat ënnerschiddleche primers an M-MLV transcriptase (Promega) benotzt. D'ergänzen DNA war bis Hinnen alleguer amplification mat primer baut ënnerworf fir GAPDH an MMP-9 engem Hinnen alleguer Meeschtesch Mëschung Léisung (iNtRON, Korea) benotzt. Déi spezifesch primers Message sech wéi follegt zesummen: GAPDH Sënn, 5'-TTG TTG CCA TCA ATG zu Enn CC-3 'an GAPDH antisense, 5'-Name CAA Agt GGT CGT Name GG-3 "(836 BP); an MMP-9 Sënn, 5'- AAG TGG CAC CAC CAC AAC OP -3 "an MMP-9 antisense, 5'-Eenzelzäitfueren CCC ATC AGC ATT GCC GT-3" (497 BP); c-Jun Sënn, 5'-GGA AAC GAC CTT cta Name CGA TGC CCTCAA-3 ", an c-Jun antisense, 5'- GAA CCC CTC CTG CTC ATC TGT CAC GTT CTT-3" (287bp); c-Erhëtzung Sënn, 5'-CAG TCA Gat CAA GGG AAG CCA CAG ACA TCT-3 'an c-Erhëtzung antisense, 5'-GAA TAA Gat GGC TGC AGC CAA ATG CCG CA-3 "(246bp). D'Hinnen alleguer ware wéi follegt zesummen:. Denaturation bei 94 ° C fir 30 Sekonnen, annealing bei 52 ° C fir 20 Sekonnen an Extensioun bei 72 ° C fir 30 Sekonnen VerfÜgung Kilometréierung vun MMP-9 Promoteur Aktivitéit VerfÜgung d'transcriptional Regulatioun vun MMP-9 war vun der flüchteg transfection vun enger MMP-9 Promoteur-luciferase reporter bauen (pGL4-MMP-9) iwwerpréift. D'plasmid pGL4-MMP-9 Promoteur (Rennsport nucleotides vun -925 bis +13) war zur Dr. Young-Han Lee (Konkuk University, Korea) Audit gëtt. AGS Zellen sech rakommen an ugebaut bis si 70% Niewebaach erreecht. Dunn, goufen d'pGL4-MMP-9 Promoteur plasmids an d'Zellen transfected benotzt FuGENE 6 (Promega, USA) no de Protokoll d'Hiersteller. Praxis-TkLanguage war wéi eng intern Kontroll transfected. Zellen sech fir 12 Stonnen an der transfection mëttelfristeg incubated an duerno mam PMA fir 4 Stonnen behandelt. D'Auswierkunge vun chrysin op MMP-9 Promoteur Aktivitéit sech duerch pretreating Zellen mat chrysin fir 1 Stonn virum Zousätzlech vun PMA alles. De Co-transfection Studien huet an der Presenz oder Feele vun der Ausdrock Vecteure Zeechesaatz d'dominant negativ Mann- MEK-1 (pMCL-K97M), dominant negativ Mann- JNK (pMCL-TAM67), oder dominant negativ Mann- p38 MAPK (pMCL-mP38 gesuergt ) wat duerch Dr. NG Audit gëtt sech On (Universitéit vu Colorado-Boulder, CO), déi Dr. M.J. Birrer (NCI, Rockville, MD), an vum Dr. J. Han (Scripps Research Institut, CA), bzw.. D'Zellen sech mat enger Zell Kultur lysis reagent (Promega, USA) gesammelt, an der luciferase Aktivitéite sech mat engem luminometer (CENTRO XS lb960 microplate luminometer, Berthold Technologies, USA) sech no de Protokoll d'Hiersteller. VerfÜgung flüchteg transfection vun AP-1 reporter VerfÜgung Den AP-1 luciferase reporter plasmid war vun Clontech (gekësst Alto, CA, USA) kaaft. Wann AGS Zellen 60-70% Niewebaach erreecht, waren se mat Opti-Mem mëttelfristeg gewäsch a transfected mat engem pGL-3 Vecteure der AP-1 reporter benotzt FuGENE 6 (Promega) laut den Hiersteller d'Protokoll mat. Reporter-transfected Zellen sech mat chrysin fir 1 Stonn pretreated an dann mat 100 nm PMA behandelt fir 4 Stonnen an der luciferase Aktivitéite sech mat engem luminometer gemooss. VerfÜgung Transfection vun AP-1 decoy oligodeoxynucleotides VerfÜgung baséiert op der AP-1 bindend Site ATGAGTCAT, entworf mir der AP-1 decoy phosphorothioated double-gekëmmert oligo deoxynucleotide (ODNs) als Konsequenz, 5'-CGsT CTT CTG Agt CAT GAA TTC ATG ACT CAG AAG ACsG-3 ", an 3 "-GsCA GAA GAC TCA GTA CTT AAG TAC Name GTC TTC TsGC-5". Wann der AGS Zellen zu 60-70% Niewebaach gewuess, AP-1 ODNs an pGL4-MMP-9 Promoteur plasmids sech Co-transfected an Zellen mat Lipofectamine 2000 (Invitrogen, USA) no de Protokoll d'Hiersteller. No incubating fir 20 Stonnen, waren d'transfected Zellen fir 4 Stonnen mam PMA behandelt an der luciferase Aktivitéite sech mat engem luminometer gemooss. VerfÜgung Western blot Analyse VerfÜgung AGS mat PMA behandelt Zellen zu phosphate zou sech gefiermt Salins (PBS), ugebauten Trypsin-héich ass mat, an op -70 ° C gespäichert bis waren. D'bewosst FAQ war mat engem Ripa gefiermt [1% NP-40, 0,5% Natrium deoxycholate, 0,1% Natrium dodecyl sulfate (SDS)] ofgebaut an protease inhibitors (aprotinin, leupeptin, phenylmethanesulfonylfluoride (PMSF), benzamidine, trypsin inhibitor, Natrium orthovanadate ). Fofzeg micrograms vun de Proteinen war dann déi 10% SDS-polyacrylamide gelies electrophoresis getrennt a transferéiert ze Hybond-P Schläimhait (Amersham Pharmacia Biotech). D'Schläimhait sech zu engem TBST Léisung mat 5% z'iesse Mëllech, incubated mat enger Primärschoul antibody zu engem Outil Léisung Nuecht op 4 ° C blockéiert, an Katakombe dräimol mat 0,1% Tween-20 zu Tris um 10 Minutte Intervalle Salins (TBST) gefiermt . Horseradish peroxidase-conjugated Secondaire antibody (Amersham, konnt kee mer Heights, IL, USA) war fréier d'immunoreactive Proteinen vun chemiluminescence z'entdecken. Déi folgend antibodies sech benotzt: Anti-phospho-p44 /42 MAPK (Erk-1/2) (Zell sécher Technology, Danvers, MA, USA), anti-phospho-JNK /SAPK (Zell sécher Technology), anti-MMP- 9 (Zell sécher Technology), anti-phospho-c-Erhëtzung (Zell sécher Technology), an anti-phospho-c-Jun (Zell sécher Technology). D'total FAQ Niveauen sech duerch während der blotted Membran mat engem ufänkt Léisung 2-mercaptoethanol, 2% komponéiert vun 100 mm SDS assayed, a 62,5 mm Tris-HCl (pH 6,7) fir 30 Minutte bei 50 ° C, an der Membran war dann du-Komedie mat entweder d'Anti-β-actin (Zell sécher Technology), anti-total ERK1 /2 (Zell sécher Technology), anti-total JNK /SAPK (Zell sécher Technology), anti-c-Erhëtzung (Santa Cruz déi Galaxy, CA, USA) oder anti-c-Jun (Santa Cruz). VerfÜgung assay VerfÜgung Matrigel Invasioun d'Zell Invasioun assay war de 10-gutt chemotasis Chamber mat gemaacht (Neuro Studiebäihëllefe, Gaithersburg, Maryland, USA) mat 8 μM pore Membran (Neuro Studiebäihëllefe) mat 10% FBS RPMI wéi d'chemoattractant am ënneschten Chamber mat. AGS Zellen (10 Statistics VerfÜgung Data sinn als mengen ± Fils gewisen, a vertrieden heescht vun op d'mannst dräi separat Experimenter zu triplicate gesuergt. Ënnerscheeder tëscht all zwou Donnéeën baut sech vun T-Tester alles. Ënnerscheeder als bedeitendst am Text beschriwwen sëlwecht P VerfÜgung &Si besteet;. 0,05 VerfÜgung Inhibitory Effet vun chrysin op PMA stimuléiert MMP-9 Ausdrock VerfÜgung fir d'suppressive Effet vun chrysin géint d'upregulation vun MMP-9, AGS Zellen pretreated mat chrysin ermëttelen sech mat PMA incubated, an gelatin zymography an RT-Hinnen alleguer Analyse waren gesuergt. Als zu Lalumi 1A gewisen, PMA-stimuléiert MMP-9 vun chrysin an enger Portioun-ofhängeg Manéier via de gelatin zymography assay als illustréiert inhibited war. Virum eis Experimenter, ob chrysin inhibited direkt d'Aktivitéit vun MMP-9 oder inhibited den Ausdrock vun MMP-9 war nach onbekannt. Fir dës Fro äntweren, mir Co-incubated der AGS-secreted MMP-9 mat chrysin fir 3 Stonnen, an gelatin zymography war standing der Finale Niveau vun MMP-9 Aktivitéit ze kontrolléieren. Als Lalumi 1B weist, chrysin net MMP-9 Aktivitéiten secreted Afloss hätt. Also, Hypothes mir dass d'inhibition vun chrysin géint MMP-9 via Ennerdréckung vun MMP-9 Ausdrock kann. Fir dëst Hypothes z'iwwerpréiwen, ëmgedréint transcriptional Hinnen alleguer an MMP-9 Promoteur assays sech standing dem MMP-9 Transkriptiouns Niveauen kontrolléieren. Als zu Lalumi 1c gewisen, no mat chrysin behandelt ginn, ofgeholl der PMA-entschlof MMP-9 mRNA an enger Portioun-ofhängeg täteg. Doriwwer eraus, war MMP-9 Promoteur luciferase Aktivitéit inhibited déi an enger Portioun-ofhängeg Manéier chrysin (Lalumi 1D). A westlech blotting zougedréckt och de inhibitory Effet vun chrysin op MMP-9 Ausdrock (Lalumi 1E). D'Konzentratioun vun chrysin am Moment Etude benotzt rauszesichen Zell Nuetsvolen (Lalumi 1F) betreffen. Dës Resultater weisen, datt chrysin bremst MMP-9 Aktivitéit zu AGS Zellen via eng Reduktioun vun der transcriptional Effizienz. VerfÜgung Roll vum AP-1 am PMA-entschlof MMP-9 Ausdrock VerfÜgung Als déi virdrun am Rapport Literatur, AP-1 ass de wichtegste Transkriptiouns Faktor MMP-9 Ausdrock [17]. An dëser Etude, confirméieren datt AP-1 kritesch zu deem Cours verlaangt gëtt, beschäftegt mir eng AP-1 decoy phosphorothioated double-gekëmmert oligodeoxynucleotide (ODNs) an pGL3-AP-1 luciferase plasmid fir Co-transfect an der AGS Zellen. De Co-transfected Zellen sech mat PMA behandelt, an der luciferase Aktivitéite sech mat engem luminometer alles. Als zu Lalumi 2A gewisen, huet d'PMA-entschlof MMP-9 Promoteur luciferase Aktivitéiten vun der AP-1 decoy inhibited. Konsequent, inhibited AP-1 decoy och-PMA entschlof MMP-9 mRNA Ausdrock (Lalumi 2B). Et gouf gewisen, dass den AP-1 Komponent c-Erhëtzung Sax verwandelt an c-Jun och PMA-entschlof MMP-9 Ausdrock (Lalumi 2C) ofgeholl. Desweideren, curcumin, eng AP-1 inhibitor, war och ze kontrolléieren op d'Roll vun AP-1 am PMA-entschlof MMP-9 Ausdrock agestallt. Wéi d'RT-Hinnen alleguer Donnéeën illustréiert, inhibited curcumin-PMA entschlof MMP-9 Ausdrock vun enger Portioun-ofhängeg Manéier (Lalumi 2D). D'virun Donnéen uginn, datt AP-1 wichtegen Faktor MMP-9 Ausdrock ass. No Musiktherapie- déi enorm wichteg Roll vun AP-1 an den héijen Niveau vun MMP-9 Ausdrock, Hypothes mir datt de Mechanismus vun chrysin inhibition vun MMP-9 Ausdrock duerch d'Ennerdréckung vun AP-1 Aktivitéit war. Duerno, transfected AGS Zellen mat AP-1 luciferase reporter plasmids sech mat chrysin pretreated, an duerno vun PMA stimuléiert. Als zu Lalumi 2E gewisen, chrysin Trupen PMA-entschlof AP-1lucifease Aktivitéit an enger Portioun-ofhängeg Manéier, déi uginn datt chrysin eng Fähegkeet Aktivitéit geloss AP-1 huet. VerfÜgung Chrysin bremst PMA-entschlof MMP-9 Ausdrock vun Transkriptiouns Faktor AP-1 via d'Ennerdréckung vun c-Jun an c-Erhëtzung phosphorylation VerfÜgung inhibiting Et ass bekannt, datt c-Jun an c-Erhëtzung sinn Komponente vun der AP-1 Passerelle [18]. Mir wollten de Mechanismus hannert chrysin d'inhibitory Effekt op AP-1, fir festzestellen a propagéieren ob chrysin Nofolleg tatsächlech seng Wierkung op c-Jun an c-Erhëtzung. Mir gemooss de Montant vun insgesamt mRNA souwuel c-Jun an c-Erhëtzung vun RT-Hinnen alleguer. Als zu Lalumi 2F gewisen, huet chrysin net den Ausdrock Niveau vun c-Jun an c-Erhëtzung mRNA inhibit. Next, ze testen ob chrysin der Aktivatioun vun c-Jun an c-Erhëtzung bremst, war westlech blotting standing der phosphorylated c-Jun an c-Erhëtzung ze kontrolléieren. Figebam 2G an 2F weist dass chrysin huet d'PMA-entschlof c-Jun an c-Erhëtzung phosphorylation an enger Portioun-ofhängeg Manéier oofgesinn. VerfÜgung Chrysin bremst c-Jun an c-Erhëtzung phosphorylation vun JNK Spären an Erk sécher Passerelle VerfÜgung Mir propagéieren nächst wéi chrysin Trupen c-Jun an c-Erhëtzung phosphorylation. Wéinst der wichteg Roll MAPK spillt an der Aktivatioun vun AP-1, ze propagéieren mir d'Roll vun der MAPK Passerelle an MMP-9 Ausdrock. Als zu Lalumi 3A gewisen, ënnert der MAPKs inhibitors, PD98059 (ERK1 /2 inhibitor), SP600125 (JNK1 /2 inhibitor), an SB203580 (p38 MAPK inhibitor), nëmmen PD98059 an SP600125 konnt PMA-entschlof MMP-9 Ausdrock ze inhibit déi uginn, datt d'ERK1 /2 an JNK1 /2 Weeër fir entscheedende kann MMP-9 Ausdrock PMA-entschlof. Weider, mat der MEK-dominant negativ plasmid pMCL-K97M, JNK-dominant negativ plasmid pMCL-TAM67 an p38 MAPK-dominant negativ plasmid pMCL-mP38, bestätegt mir de kriteschen Rollen vun Erk an JNK zu MMP-9 Ausdrock vun gastric Kriibs AGS Zellen (Lalumi 3B). Ausserdem, sin kritesch fir AP-1 Aktivatioun vun PMA néideg wéi an Lalumi 3C, ERK1 /2 an JNK1 /2 gewisen, hien huet duerch eis Experimenter mat MEK an JNK dominant negativ plasmids. Mir als nächst d'Rollen vun JNK1 /2 an ERK1 /2 an c-Jun an c-Erhëtzung Aktivéierung. Als zu Lalumi 3D gewisen, SP600125 an PD98059 Trupen PMA-entschlof c-Jun an c-Erhëtzung phosphorylation, respektiv, wat beweist, datt JNK1 /2 vun c-Jun kritesch Offloss ass, iwwerdeems ERK1 /2 kritesch Offloss vun c-Erhëtzung ass. Well mir dat JNK1 /2 an ERK1 /2 gespillt wesentleche Rollen vun MMP-9 Ausdrock via AP-1 entdeckt, Hypothes mir dass chrysin duerch eng inhibition vun JNK1 /2 oder ERK1 /2 schaffen kann MMP-9 Ausdrock ze oofgesinn. Fir eis Hypothesen, westlech blotting z'iwwerpréiwen war standing den Effet vun chrysin op JNK1 /2 oder ERK1 /2 phosphorylation ze bestëmmen. Als Lalumi 3 an 3F weisen, ugefouert vun der PMA Behandlung fir eng bemierkenswäert Erhéijung vun JNK1 /2 an Erk p42 /44 phosphorylation; awer, an der Präsenz vun chrysin, PMA-entschlof JNK1 /2 an ERK1 /2 phosphorylation war an enger Portioun-ofhängeg Manéier inhibited. VerfÜgung Effekt vun chrysin op Zell invasiveness VerfÜgung Et ass bekannt déi héich Niveaue vu MMP-9 Ausdrock si fir d'invasiv phenotype vun Kriibs Zellen wichteg. Fir d'Wierkung vun chrysin op PMA-entschlof Zell Invasioun iwwerpréifen, iwwerpréift mir Zell Invasioun duerch eng geännert Boyden Invasioun ëmkomm. AGS Zellen am PMA incubated duerchgesat an eng grouss Zuel vun iwwerfale Zellen, déi duerch d'kënschtlech matrigel batter. Allerdéngs, an der Präsenz vun chrysin oder eng MMP-9 antibody, ofgeholl d'Zuel vun iwwerfale Zellen, chrysin besot kann d'PMA-entschlof Zell invasiveness vun inhibiting MMP-9 Ausdrock (Lalumi 4A an 4B) oofgesinn. Lalumi 4C Zousätzlech, zougedréckt chrysin ofgeholl PMA-entschlof AGS Invasioun an enger Portioun-ofhängeg täteg. Next, ze propagéieren mir den Effet vun der sécher inhibitor op PMA-entschlof AGS Zell Invasioun. Als zu Lalumi 4D gewisen, chrysin, curcumin, PD98059 an SP600125 inhibited Invasioun Zell vun PMA entschlof, wat beweist, datt chrysin wahrscheinlech bremst MMP-9 via AP-1 Ennerdréckung PMA-Bewegung, déi vun erauszesichen der JNK1 /2 an ERK1 /2 Weeër Resultater mat entholl Entwécklung an de Werdegang vun Kriibs. VerfÜgung Natierlech awer mat Anti-Kriibs Aktivitéite vir Amëschung vun verschidde Mechanismen dorënner Zell Migratioun, Invasioun, an Metastasen inhibiting. Chrysin, engem natierlechen flavonoid dicht an vill Planz dovu, Hunneg fonnt, an propolis, huet chemopreventive Eegeschafte wéi Anti-proliferative a pro-apoptosis Aktivitéite géint verschidde Cancers [19,20]. Allerdéngs hunn d'Anti-Invasioun Eegeschafte vun chrysin net gutt gewiescht an gastric Kriibs Zellen studéiert. Et ass bekannt, datt MMPs d'Kraaft hannert der Zerstéierung vun der extracellular Matrixentgasung, souwéi der Haaptrei inducers vun Zell invasiveness sinn. Mir propagéieren der inhibitory Auswierkunge vun chrysin op MMPs Ausdrock vun gastric Kriibs Zellen. Chrysin inhibited MMP-9 Ausdrock (Lalumi 1) an aner MMPs wéi MMP-2 an MMP-7 (Donnéeën net gewisen). D'Regulatioun Mechanismus vun chrysin kann op all MMP Ofhängegkeet ginn, an an dëser Etude stelle mer op den MMP-9 regualtion. VerfÜgung PMA, bor-12-myristate 13-acetate, e Protein kinase activator, ass oft benotzt als biomedical Fuerschung Outil zu Modeller vun carcinogenesis. An dëser Etude, entdeckt mir MMP-9 Aktivitéit duerch upregulation vun hiren Ausdrock Niveau PMA fräi. An der Presenz vun chrysin, ofgeholl der PMA-entschlof MMP-9 an engem chrysin-Portioun-ofhängeg Manéier (Lalumi 1A). Allerdéngs, schéngt et, datt chrysin bremst MMP-9 net well vun inhibition vun MMP-9 Aktivitéit Aktivitéit, mee wéinst hirer Ennerdréckung vun MMP-9 Ausdrock. Fir de Mechanismus z'ënnersichen déi chrysin bremst PMA-entschlof MMP-9 Ausdrock, probéiert mir den essentiel transcriptional Faktor (s) an der PMA- entschlof MMP-9 Ausdrock Passerelle ze entdecken. Et ass confirméiert datt AP-1 ass de positiven regulator vun MMPs: den AP-1 Element läit tëscht -72 an -66 eng grouss Roll an der transcriptional Regulatioun vun MMP-1 Gentherapie Ausdrock spillt, an Projet'en vun dësem Element Trainer d'reduzéieren basal Aktivitéit an Réceptivitéit vun der MMP-1 Promoteur ze externen stimuli [21]. An der MMP-9 Promoteur Offloss Regulatioun Haaptrei, ginn et zwou AP-1 bindend Siten (-533 an -79) deen am Caski Zellen Mënsch wesentleche Rollen vun MMP-9 Ausdrock Leeschtung [22]. An eiser Etude, AP-1 decoy oligodeoxynucleotides, AP-1 inhibitor curcumin, c-Jun an c-Erhëtzung siRNA gestéiert mat PMA-entschlof MMP-9 Ausdrock (Lalumi 2A-2D), déi direkt Beweiser gëtt, datt AP-1 ass kritesch néideg MMP-9 Transkriptiouns zu gastric Kriibs Zellen ze erhéijen. Baséiert op der uewen Resultater, opgrond mir dass chrysin vun Ennerdréckung vun AP-1 Aktivitéit MMP-9 Ausdrock bremst. Figebam 2E weist der Préifung vun eiser Spekulatioun: chrysin kann zu enger Portioun-ofhängeg Manéier AP-1 Aktivitéit däitlech erofgoen. An Aklang mat eisem presentéieren Entdeckung datt chrysin bremst AP-1 geziilte Gentherapie MMP-9 via suppressing AP-1 Aktivitéit, et gouf och confirméiert, dass chrysin aner AP-1 geschoss Genen inhibited wéi VEGF, COX-2 an ICAM-1 [ ,,,0],23-25]. Konsequent mat anere Conclusiounen, huet et entdeckt gouf, datt luteolin, eng Planz flavonoid mat enger ähnlecher Struktur ze chrysin, bremst bedeitend der LPe-entschlof DNA bindend Aktivitéit vun AP-1 [26]. der inhibitory Fähegkeet an Mechanismus vun chrysin op AP-1 gouf awer net voll virun dëser Etude propagéieren. Dofir, studéiert mir nächsten de Mechanismus vun deem chrysin bremst AP-1. VerfÜgung Nieft mediating MMP-9 Ausdrock, AP-1 och souwuel den Ausdrock vun Invasioun activators induces an represses Invasioun suppressors. Wéi sou, ass AP-1 e wesentleche transcriptional Faktor fir d'Regulatioun vun invasiv-Zesummenhang Genen [27]. AP-1 besteet aus entweder homodimers vun Jun Familljememberen oder heterodimers tëschent Memberen vun der c-Erhëtzung an c-Jun Familljen. Béid c-Jun an c-Erhëtzung sinn phosphorylated a vun der Erk, p38 ausgeléist, an JNK kinase Systemer [28-30]. Fir de Mechanismus vun chrysin inhibition vun AP-1, mir propagéieren c-Jun an c-Erhëtzung, déi zwee Haaptgrënn Komponente vun AP-1 ze ermëttelen. Mir entdeckt datt chrysin inhibited c-Jun an c-Erhëtzung Aktivatioun vun hirem respektiven phosphorylation erauszesichen. Konsequent mat eis bruet, e puer Joer virdrun Literatur confirméiert och, datt aner flavones e.g. quercetin, ofgeholl AP-1 Aktivitéit duerch suppressing c-Jun d'br an den helle [31]. VerfÜgung Mir waren interesséiert weider an chrysin d'inhibitory bäisëtzt c-Jun an c-Erhëtzung. JNK (c-Jun N-Uschloss kinase), e Member vun der MAPK (mitogen-ageschalt FAQ kinase) Famill, datt eng Rei vu biologesche Prozesser reguléieren an tumorigenesis agebonne, ass als d'Grondlinne kinase vun c-Jun Aktivéierung ginn [32] . Erk, extracellular sécher-reegelen kinase, spillt eng wichteg Roll an der Regulatioun vun verschiddenen bewosst Prozesser wéi Prolifératioun, dat, an Entwécklung [33], an huet confirméiert gouf de wichteg kinase Regulatioun c-Erhëtzung Aktivéierung [34] gin. Am Moment studéieren, fanne mir direkte Beweis vun gastric Kriibs AGS Zellen datt JNK kritesch fir c-Jun Aktivéierung néideg ass, iwwerdeems Erk der kritescher kinase fir c-Erhëtzung Aktivéierung (dës Distanz an Lalumi 3D). VerfÜgung Basis ass op der uewen Conclusioun, fir z'ënnersichen chrysin de Mechanismus vun suppressing MMP-9, mir entdeckt ze wäit datt chrysin eng Fähegkeet JNK1 /2 an ERK1 /2 phosphorylation (Lalumi 3 an 3F) ze blockéieren haten. An Aklang mat dëser fannen, déi inhibitory Auswierkunge vun anere flavones op ERK1 /2 och gemellt goufen. VerfÜgung Liu et al. confirméiert datt apigenin, engem polyphenolic flavone (4,5,7-trihydroxyflavone), an eng ganz Rei vu Kraider a gréng Geméiszort Geméis fonnt, Zell Wanderung duerch d'Ennerdréckung vun ERK1 /2 phosphorylation zu Mënsch BBC glat Muskel Zellen [35] bremst. Et ass och duerch Ishikawa et al entdeckt gouf. datt H 2O 2 Majoratiounen d'rapid phosphorylation vun JNK, ERKs, an p38 MAPK apoptosis, Spëtzekandidat, iwwerdeems quercetin der Aktivatioun vun dësen dräi MAPKs an Äntwert ze H 2O 2 [abrogate kann ,,,0],36]. VerfÜgung am Moment studéieren, ze propagéieren mir de inhibitory Effet vun chrysin op MMP-9 Ausdrock a réischt dem Basisdaten Mechanismus zu gastric Kriibs AGS Zellen fir d'éischt Kéier. Baséierend op eise Conclusiounen, beschreiwen mir eng hypothetesch Sënn Modell de Mechanismus vun chrysin inhibiting MMP-9 Ausdrock z, wéi soll wann et ze ermëttelen land gin an Lalumi 5. Weider Studie gewisen eng essentiel Aktivitéit ass souwuel Offloss vun JNK1 /2 an ERK1 /2, kritesch ze kontroléieren JNK1 /2 an ERK1 /2 phosphorylation. Wann also kann, chrysin direkt mat der Haaptsaach Aktivitéit zesummekomm, déi grëndlech therapeutesch als potentiell Anti-Kriibs propagéieren soll. VerfÜgung Verschidde adjuvant therapeutesch Strategien entholl Metastasen ze oofgesinn an entholl Terrain verhënneren goufen vill Méiglechkeeten lant an déi fir Patienten selbstverständlech. Viru Kuerzem, huet d'Benotzung vun natierleche phytochemicals extensiv Etude fir Kriibs Préventioun scho [37]. Desweideren, Nahrungszousaz ofgeroden phytochemicals huet Opmierksamkeet an gastric Kriibs Préventioun kuerzem scho [38]. An dëser Etude, fonnt mir dass chrysin-behandelt Zellen Kriibs invasiveness via inhibiting MMP-9 Ausdrock duerch d'Ennerdréckung vun de JNK /c-Jun an Erk /c-Erhëtzung sécher Weeër ofhuelen kann. Dës Conclusiounen kann nëtzlech Beweiser fir Zukunft Anti-Kriibs therapeutics fir gastric Kriibs entwéckelt. VerfÜgung
Resultater VerfÜgung
Diskussioun VerfÜgung
Cryptosporidiosis verschlechtert duerch allgemeng benotzt Probiotik
Entdeckung vun 100 nei Genen kann d'Fuerschung iwwer Pigmentéierungskrankheeten hëllefen
Planzbaséiert Diät kéint Är rheumatoide Arthritis heelen
Gas detektéiert elektronesch Pille fir Diagnos vu Magen -Darm -Krankheeten
Darmbakterien verbonne mat méi staarke Muskelen bei eelere Leit
Ganz Vibratioun hëlleft Entzündung ze reduzéieren,
Fuerscher fannen neie Wee fir géint Krankheet am MS Modell ze schützen
Fuerscher am Brigham a Womens Hospital hunn eng nei an onerwaart Manéier fonnt fir Krankheet an engem preklinesche Modell vu Multiple Sklerose (MS) ze vermeiden. Bildkreditt:Lightspring / S
Eng Multi-Omics Approche fir d'Entwécklung vun Drogen géint COVID-19
Eng nei Studie verëffentlecht um Pre -Print Server medRxiv* am Mee 2020 bericht eng Multi-Omics Approche déi et méi einfach maache kann Drogen zentwéckelen déi effektiv géint COVID-19 sinn. Multi-Om
Lungemikrobiom viraussoen d'Gravitéit vun der COVID-19 Krankheet
En neit Virdruck Fuerschungspabeier gepost op medRxiv * Server fonnt Ännerungen am Lungemikrobiom wärend engem schwéieren akuten respiratoresche Syndrom Coronavirus 2 (SARS-CoV-2) Infektioun beaflos