PLoS ONE: ATOH1 gali reguliuoti skrandžio vėžio ląstelių tumorogeniš- sukeliant vėžio diferenciacijos Kamieninių Cells

Anotacija

Vėžys kamieninių ląstelių (CSCS) buvo įrodyta, kad tarpininkauti tumorogeniš-, Chemoterapija atsparumą, radijo ATSPARUMAS ir metastazių, kuris rodo, kad jos turi būti laikomos terapinių tikslų. Nes jų diferencijuoti dukterinių ląstelių nebėra tumorogeniškas, indukuoti CSCS diferenciacija gali būti viena iš strategijų, kurios gali išnaikinti CSCS. Čia mes parodome, kad ATOH1 gali sukelti skrandžio vėžio kamieninių ląstelių (GCSCs) diferenciaciją. Realaus laiko PGR ir Vakarų dėmė analizė parodė, kad ATOH1 buvo sukeltas per GCSCs diferenciacijos. Be to, lentivirus sukeltos padidėjusią ATOH1 į GCSCs ir skrandžio vėžio ląstelių linijas gerokai sukeltos diferenciaciją, sumažino platinimu ir rutulys formavimas ir sumažino vivo
naviko formavimasis į poodį ir kepenų metastazių ksenografiniuose modelių. Šie rezultatai rodo, ATOH1 būti laikomas už diferenciacija terapijos plėtros skrandžio vėžio

nurodomoji dalis:. Han ME Baek SJ Kim SY, Kanas CD, oh so (2015) ATOH1 gali reguliuoti skrandžio vėžio tumorogeniš- ląstelių paskatinti vėžio kamieninių ląstelių diferenciaciją. PLoS ONE 10 (5): e0126085. Doi: 10,1371 /journal.pone.0126085

Akademinė redaktorius: Gianpaolo Papaccio, Antra universitetas Napolis, Italija

Įstojo: rugsėjo 3, 2014; Priėmė: Kovo 30, 2015 m Paskelbta: Gegužės 7, 2015

Visos teisės saugomos: © 2015 Han et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų Prieinamumas: Visi susiję duomenys yra per popieriaus išskyrus RNR sekos duomenis, kurie buvo deponuota viešojo saugykloje. (GEO prisijungimas numeris: GSE46597)

finansavimas: Šis darbas buvo remiamas Bio ir medicinos technologijų plėtros programa (2012M3A9C6050213) ir pagrindinio mokslo tyrimų fondas (2012R1A1A3010521) Nacionalinės mokslinių tyrimų fondo (NRF), finansuojamą iš Korėjos valdžiai (mest) ir, dotacijos iš nacionalinio mokslinių & d vėžio kontrolės programa ministerijos sveikatos, gerovės ir šeimos reikalų, Korėjos Respublika (0.920.050) , Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Po vėžio kamieninės ląstelės (CSCS) iš pradžių buvo izoliuotas nuo leukemija sergantiems pacientams, jie buvo izoliuoti nuo daugelio vėžio rūšių, įskaitant skrandžio vėžio [1,2,3,4,5,6]. CSCS buvo siūloma, kad gydomąjį tikslą, nes jie gali tarpininkauti tumorogeniš-, Chemoterapija atsparumą, radijo atsparumą ir metastazių [7,8,9]. Tradiciniai vėžio gydymas daugiausia tikslus plinta non-CSCS, kuris paaiškina Dažną [9] vėžiu. Prasta prognozė pacientams, sergantiems didesnio CSC gyventojų, taip pat skatina terapijos, kurie skirti CSCS [10] vystymąsi.

Vienas iš savybių CSCS, kad jie gali atskirti į dukterinių ląstelių, kurios nebėra tumorogeniškas, pavyzdžiui , CSCS iš storosios žarnos ir skrandžio vėžio buvo sukeltas atskirti pagal kraujo serume [5,6]. Tai reiškia, kad "CSC hipotezė iš esmės skiriasi nuo tradicinio klonų plėtimosi hipotezę. Be to, hierarchinis ryšys tarp CSCS ir jų dukterinių ląstelių galima paaiškinti epigenetinių mechanizmų, kad būtų galima taikyti normaliomis kamieninių ląstelių [11,12]. Be to, mikroaplinka gali turėti įtakos CSCS [13] diferenciaciją, ir šis charakteristikos gali būti išnaudojamos terapijos vystymosi.

Todėl, diferenciacijos indukcija yra strategija, kuri gali būti naudojama siekiant panaikinti CSCS. Epigenetiniai reguliatoriai buvo siūloma skatinti jų diferenciaciją, pavyzdžiui, histono deacetilazės (HDAC) inhibitoriais buvo įrodyta, kad sukelti diferenciaciją CSCS į leukemija, kuris sukėlė sulietų baltymų, tokių kaip, AML1-ETO ir PDL-RARα [14,15 ]. Be to, visi trans-retinolio rūgštis (ATRA) gali sukelti diferenciaciją CSCS ūminio promielocitine leukemija (APL) per C /EBP veiksnių [16,17], laukinių tipo transkripcijos faktorius, kaip antai, C /EBPα, gali sukelto diferenciacijos žmogaus ŪML ir plaučių vėžio ląstelių linijų ir pelių vivo
modeliai [17,18,19,20]. Skrandžio vėžio, suramin buvo įrodyta, kad sukelti diferenciaciją žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijos [21].

ATOH1 yra pagrindinis Helix-kilpa-spiralė (bHLH) transkripcijos faktorius homologiczne Drosophila atonali [22]. Jis aktyvuoja El langelį priklauso nuo transkripcijos bendradarbiaujant su E47 [23]. HES1, molekulė pagal Notch signalinio kelio, gali slopinti jo išraišką [24]. Knock-out pelės tyrimai parodė, kad ATOH1 vaidina svarbius vaidmenis smegenėlių granulių neuronų, vidinės ausies plaukuotųjų ląstelių, nugaros smegenų interneurons Merkel ląstelių odos ir žarnyno sekrecijos ląstelių [25] generacija. Įdomu tai, kad ATOH1 buvo susijęs su įvairių rūšių vėžio, įskaitant gaubtinės žarnos vėžio [25].

Jei parengti naują diferenciacijos gydymo skrandžio vėžio, mes analizuojami išraiška pakeitimus mRNR lygio per skrandžio vėžio kamieninių diferenciacijos ląstelės (GCSCs). Buvo nustatyta, kad per GCSCs, ekspresijos lygio ATOH1, diferenciacijos, kuri yra svarbu, kad epitelinių ląstelių diferenciacijos [26,27], buvo žymiai padidėjęs. Be to, ATOH1 indukcija skrandžio vėžio ląstelių linijų ir GCSCs žymiai sumažino savo tumorogeniš- poodinės injekcijos ir metastazių kepenyse modelių

Medžiagos ir stiprintuvą.; Metodai

Skrandžio vėžio kamieninių ląstelių kultūrų

skrandžio vėžio audiniuose buvo paimti gavusi rašytinį informuoto sutikimo iš pacientų, kad operuota rezekcija esant Pusano nacionalinio universiteto ligoninės (PNUH) ir Pusano nacionalinio universiteto Yangsan ligoninės (PNUYH ). Tyrimo protokolas buvo patvirtintas Pusano nacionalinio universiteto ligoninė institucijų priežiūros valdyba (PNUH-IRB) ir Pusano nacionalinio universiteto Yangsan ligoninė institucijų ekspertizės valdyba (PNUYH-IRB). Skrandžio vėžio kamieninės ląstelės buvo auginamos kaip aprašyta anksčiau [6], ir buvo sukeltas atskirti pridedant 5% FCS žiniasklaidos vietoj augimo veiksnių.

Kultūra skrandžio vėžio ląstelių linijų

Skrandžio vėžys ląstelės (SNU1, SNU16, SNU216, SNU620, SNU638, NVI-N87) buvo auginamos RPMI1640 papildytas 10% vaisiaus galvijų serumo (FBS) ir 100, mikrogramų
/ml penicilino /streptomicino 37 ° C 5% CO _{2 sudrėkintas inkubatorius. Šios ląstelių linijos buvo gauti iš Korėjos ląstelių linijos bankas (Seulas, Korėja).}

Kultūra 293FT ląstelių linijos

293FT ląstelės išliko DMEM papildytas 10% vaisiaus galvijų serumo ir 0,1 mm MEM neesminėmis amino rūgštys (NEAA), 1 mM MEM natrio piruvato (tiek iš SIGMA, Sigma-Aldrich, St Louis, MO, JAV), 6 mm, L-glutaminas (Life technologies ", Grand Island, NY, JAV) ir 1% Pen STREP į 5% CO _{2 sudrėkintas inkubatoriaus.}

RNR sekos ir duomenų analizė

Biblioteka buvo parengta naudojant IlluminaTruSeq RNR mėginį Prep Kit ir sekvenuo- naudojant ILLUMINA genomas analizatorius IIx (San Diegas, CA, JAV) generuoti 76 bp suporuotas pabaiga rašoma. Sekos skaito buvo suderinta su žmogaus atskaitos genomo 19 naudojant Tophat 2 [PubMed id 19289445]. iRNR raiška buvo vertinama kaip RPKM (Skaityta už Kilobase milijoninės susieto skaito) iš unikaliai priskirti skaito naudojant hg19 RefSeq modelis ir HTSeq paketas (http://www-huber.embl.de/users/anders/HTSeq/). Nakvynė failai buvo pagaminti naudojant Tophat 2. Visi RNR sekos duomenys buvo deponuota viešojo saugyklai (GEO prisijungimas numeris: GSE46597)

Realaus laiko PGR

gavyba RNR ir realiu laiku PGR buvo gabenamos. naudojant Power SYBR Žalioji PCR Master Mix ir aBI PRISM 7500 sekos detektorių (abu iš "Applied Biosystems, Foster City, CA, JAV), kaip aprašyta anksčiau [28]. Grunto sekas (pirmyn ir atgal, atitinkamai) buvo taip: diferenciacijos žymekliai; CA1, 5'-TBS GAG PVG KTG GCA CAA TTC CV -3 "ir 5'-BMT TBS GAG GTT ggg TTG GGC G -3"; SSTR2, 5'-CCA GGA ACC CCA AAC GTC CV -3 "ir 5'-PVG TGT VPK, ATC TTT GCT TTT CCG, C -3"; CHGA, 5'-GCA AAC CGC "AGA CCA GAG GAA C -3" ir 5'-TGT BTK AGC BMK Persijos GTA GT -3 "; PGC2, 5'-TGG BMT ACC KTG BTK TGT CCG -3 "ir 5'-ACT CCA GGA CCA GGT TGC TGA VS -3"; MUC5AC, 5'-TBS ŠMC GGT BMT Persijos ŠMC AGA G -3 "ir 5'-ACC BMT GCA TCT PVG AGC BMK -3"; ATP4B, 5'-GAA "AGC CCA Persijos CCA CTA APG, C -3" ir 5'-TGC TCC Persijos ATG ACC TTG ŠMC -3 "; Stemness žymekliai; CD44, 5'-GCC TGG GGA BTK TGC BTK GT -3 "ir 5'-AGC CTT GCA GAG GTC" AGC VS -3 "; LGR5, 5'-GAG KTG BMT TCC AAC BTK AG "-3" ir 5'-BMK GCA AGA CGT AAC TCC TC -3 "; BMI1, 5'-TGG TTG BMK PGS GAA "AGC VS -3" ir 5'-AAA AAT BMK GGA ARG AGC AGC CV -3 "; ir C-Myc, 5'-PPK BMK GAG CAA GGA CGC GA -3 "ir 5'-CGC ggg AGG KTG KTG GTT TTC -3"; ATOH1, 5'-BMK CTT CCA GCA AAC AGG, TG -3 "ir 5'-ACG GGA TPI CAT TGC GCA GC -3"; GAPDH 5'-GAG TCC AKTAS GGC GTC TTC AC -3 "ir 5'-ATG ACG AAC ATG ggg GCA TC -3". GAPDH buvo standartizuoti kDNR įvesties lygį

Vakarų dėmė analizė

Vakarų dėmė analizė buvo atliekama kaip aprašyta anksčiau [24], taikant šiuos antikūnus. ATOH1 (LSBio, Sietlas, WA, USA ); CD44, LGR5, ATP4B, CA1, PGC, MUC5AC (Sigma-Aldrich Co, St Louis, MO, JAV); C-Myc, kaspazės-3 (Santa Krusas Biotechnologijos, CA, JAV); suskaldyti kaspazės-3, kaspazės-9, suskaldyti kaspazės-9 (Mobilusis Signalizacijos technologijos, M., JAV); P21, β-aktino antikūnas (Abcam, Cambridge, MA, JAV) ir HRP konjuguoto vidurinė antikūnas (Jacksonas ImmunoResearch Laboratorijos, Vakarų Grove, Pensilvanija, JAV).

lentiviruso konstruktai ir aktyvaus viruso

"Norėdami sukurti išraiška klonas, seka patikrino virusinės ORF klonai (ATOH1, IOH34744; Gyvosios technologijos, Grand Island, NY) Gateway įėjimo vektorių buvo perkelti į pLenti7.3-DEST vektoriaus (pLenti7.3/V5-DEST Gateway Vektorius rinkinys, gyvenimas technologijos, Grand Island, NY, JAV), naudojant LR rekombinacijos reakcijos (LR Clonase II fermentų derinys, gyvenimas technologijas, Grand Island, NY, JAV). Transformacijos, buvo naudojamas Vienas šūvis Stbl3 Kompetentinga E.coli (Life Technologies "). Po kontransfekcijai ekspresijos klonas ir ViraPower Pakuotė Mix (Life Technologies) į 293FT ląstelių linija (Life Technologies) gaminti lentivirus, lentiviruso supernatantai buvo nuimta. Šie lentiviruso atsargos buvo naudojamos transduce GCSCs ir skrandžio vėžio ląstelių linijas.

Virusas rinkimas ir dauginimas buvo atliekamas pagal gamintojo nurodymus (Life technologies "). Valdymo virusas buvo sukurtas tuo pat metu be ATOH1 įtraukimo.

Statybos RASSF4-reporteris ląstelių linijų ir liuciferazės bandymo

Gluc-ON Rėmėjas Žurnalistė Klonai, pEZX-PG02 (HPRM11834-PG02 , GeneCopoeia, Rokvilis, MD, JAV) buvo naudojami statyti RASSF4-liuciferazė Reporter ląstelių linijas (NVI-N87 ir SNU216 ląsteles) ir puromicino (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, JAV) buvo naudojamas atrankos. Aukščiau aprašyta lentivirus buvo naudojami siekiant didesnio ATOH1. Liuciferazės veikla buvo matuojamas naudojant išskirti poros Gaussia liuciferazės Analizės rinkinį (GeneCopoeia, Rockville, MD, JAV) pagal gamintojo instrukcijas esant 72 h po perdavime.

ksenografiniuose tyrimas

Ląstelės buvo atskiesti iki tinkamas dozės injekcijos (1x10 ^{6 ląstelių), sumaišyti su BD Matrigel (BD biomokslų, CA, USA) ne santykiu 1: 1, ir sušvirkšti po oda ant nugaros pusėje kiekvieno krašto sunkus kombinuotas imunodeficitas (SCID) pelės (n = 5 /grupė). Siekiant sumažinti eksperimentinę kintamumą, dėl individualių skirtumų gaunančiose pelių ląstelių populiacijos, kad būtų palyginti buvo suleistas priešingose ​​šonuose tų pačių gyvūnų. Navikai buvo nukirsta po 4 savaičių ir naviko Svoriai matuojamas. Dėl metastazių kepenyse modelio SCID pelėms buvo anestezuoti viduje pilvaplėvės injekcijos Ketamino /Ksilazinas derinys. Tada pelėms buvo įpjauti maždaug 10 mm kairėje subcostal, blužnis buvo patvirtinta pagal pilvaplėvės, pilvaplėvės buvo atidarytas apie 8mm ir blužnis buvo veikiami per pilvaplėvę. Ląstelės (5x10 4 ląstelių /100, mikrol
) buvo lėtai švirkščiamas į pelių blužnies per 27-ojo dydžio adata (n = 5 /grupė), o tada blužnis buvo grąžintas į pilvo ertmę , pilvaplėvės ir žaizda buvo susiūta. 4 savaites po to, kai buvo suleistas su ląstelėmis, pelės buvo paaukotos [37]. Šis tyrimas buvo atliktas griežtai laikantis vadove už rūpestį rekomendacijų ir naudojimo laboratorinių gyvūnų Nacionalinio sveikatos instituto išleistų. Pusano nacionalinis universitetas-Institucinis Gyvūnų priežiūros ir naudojimo komitetas (PNU-IACUC) patvirtino visas eksperimentines procedūras, kuriose naudojami gyvūnai.}

ląstelių proliferacija tyrimas

penkias dienas nuo perdavime su lentiviruso, 10, mikrol
iš anksto sumaišyti vandenyje tirpus tetrazolio druskos-1 (WST-1 "," Roche, Indianapolis, IN, JAV) buvo įtraukta į šulinius. tada Šios ląstelės buvo inkubuojami dvi valandas ir ląstelių gyvybingumas buvo nustatomas matuojant optinį tankį esant 450 nm, naudojant ELISA skaitytuvu (TECAN, Mannedorf, Šveicarija).

Sfera formavimas tyrimas

sferos buvo atskirta į vieniši ląstelės ir padengtą 96 duobučių plokšteles 0,2 ml apimtis žiniasklaidoje. Kiekvienas iš 96-šulinėlių plokštelės gerai pateikta mažiau nei 10 ląsteles. Ląstelės buvo tada kultūringas ir stebimi 5-7 dienas. Sferos didesnis nei 25 mkm buvo skaičiuojami naudojant apverstą mikroskopą ir sferos formavimo efektyvumą buvo lyginamas.

Duomenų analizė

neparametrinis Mann-Whitney U testas arba Stjudento t-testas (neporiniai palyginimai) buvo naudojamos siekiant nustatyti skirtumų tarp vidurkiams dvi grupes reikšmes ir vienpusį dispersinė analizė (ANOVA), po Tukey anketa daugeliui lyginimų buvo siekiama nustatyti skirtumų tarp vidutinių reikšmių iš trijų ar daugiau grupių significances , * Rodo, kad p reikšmė, atitinkančią < 0,05, kuris buvo laikomas reikšmingumo kriterijų. Duomenys buvo analizuojami naudojant SPSS programinę įrangą, versijos 12.0 (SPSS Inc., Chicago, IL, JAV). Rezultatai pateikiami kaip reiškia ± SDS.

Rezultatai

indukcija ATOH1 per GCSCs
diferenciacijos

iš GCSCs diferencijavimas serume buvo įrodytas anksčiau [6]. Nustatyti veiksnius, susijusius su diferenciacijos, mes palyginti mRNR ekspresijos profilius kamieninių ląstelių ir ląstelių į diferencijuotų ląstelių narėse RNR sekos. Daugelis vėžinių slopintuvas genų buvo sukeltas per diferenciacijos (duomenys neparodyti). Įdomu tai, kad ATOH1, transkripcijos faktorius, kritinis už epitelinių ląstelių diferenciacijos, taip pat buvo sukeltas. Norėdami patvirtinti šią ATOH1 indukcijos diferenciacijos metu, mes išnagrinėjo pokyčius ekspresijos lygį ATOH1 Real Time PCR ir Vakarų dėmė analizė. Mes nustatėme, kaip GCSCs kreipėsi terminalo etapus diferenciacijos, kad ATOH1 išraiška padidėjo (1 pav).

Padidėjusi ATOH1 sukeltas į GCSCs
diferenciaciją

Jei nustato ATOH1 vaidmenis metu GCSC diferenciacijos, mes ekspresija jį GCSCs naudojant lentivirus. Norėdami patikrinti diferencijavimo būsenas, mes išnagrinėjome raiškos lygius įvairių žymenų diferenciacijos ar stemness. Pažymėtina, kad ATOH1 ekspresija GCSCs padidino išraiška lygį įvairiose diferenciacijos žymekliai, bet sumažėjo ekspresijos lygį įvairiose stemness žymekliai (2 pav).

Kitas mes ištirti, ar ATOH1 gali reguliuoti platinimu ar rutulys išsidėstymą. Įdomu tai, kad ATOH1 raiška gerokai sumažėjo įvairių tipų skrandžio vėžio ląstelių linijų ir sferos formavimuisi dauginimasis iki GCSCs (3 pav).

ATOH1 raiška sumažinta vivo
tumorogeniškumo

Norėdami nustatyti, ar ATOH1 gali reguliuoti in vivo
tumorogeniš- skrandžio vėžio ląsteles, mes panaudojome metastazių kepenyse modelį pagamintą įpurškiant skrandžio vėžio ląsteles į blužnis (vėliau ląstelės migravo į kepenis). Pažymėtina, kad ATOH1 raiška žymiai sumažino naviko susidarymą kepenyse GCSCs ir NVI-N87 skrandžio vėžio ląstelių (4 pav). Be to, kai mes padarėme poodinio ksenoimplantai, panašūs rezultatai buvo pastebėti (4 pav).

ATOH1 padidėjo RASSF4 rengėjas veikla

Norėdami patvirtinti, ar GCSCs pagal ATOH1 diferenciacija tarpininkaujant per savo transkripcijos veiklos mes išnagrinėjo promotoriaus aktyvumą yra ATOH1 taikinio geno (RASSF4) naudodami liuciferazės tyrimus, atliekamus [29]. Po RASSF4 rengėjas, kuris buvo sujungtas su lucifease geno, buvo stabiliai pristatė į skrandžio vėžio ląstelių linijas (NVI-N87 ir SNU216 ląstelių), mes išnagrinėjo poveikį ATOH1 apie liuciferazės veikla. Transduction su ATOH1 žymiai padidino liuciferazės aktyvumą RASSF4 rengėjas. (5 pav).

apoptozės ir ląstelinio ciklo kelius dalyvavimas ATOH1

poveikio Ankstesnės ataskaitos pranešta Apoptozė ir ląstelės ciklo keliai dalyvauja apie ATOH1 poveikio navikų tinklainės [30] ir storosios žarnos [25]. Taigi, mes nagrinėjo, ar susiję baltymai taip pat dalyvauja apie ATOH1 poveikį platinimu (pav 3A) ir rutulio formavimo (pav 3b) šiame tyrime. Į platinimu ir sferos formavimuisi kaita gali būti dėl to, lėčiau ląstelės ciklo, padidėjusia apoptozės norma, arba abu.

Mes radome perdavime su ATOH1 padidino suskaldyti-kaspazė-3 ir-kaspaze 9 lygis į GCSCs ir skrandžio vėžio ląstelių linijas (pav 6), o tai rodo, kad vidinė apoptozė kelias gali būti įtraukti. Be to, mes taip pat nustatė, iki-reguliavimo p21 ant ATOH1 raiškos (pav 6).

Diskusijos

Šiame tyrime mes parodome, kad ATOH1 A HLH transkripcijos faktorius, gali paskatinti diferenciaciją iš GCSCs, ir tai veda prie tumorogeniš- praradimo. ATOH1 raiškos anksčiau buvo įrodyta, kad sukelti žarnyno kamieninių ląstelių diferenciaciją į sekrecijos ląstelių [24], ir ATOH1 null pelių, sekrecijos ląstelės nebuvo sukurtas žarnyne [26]. Šis ATOH1 poveikis diferenciacijos taip pat buvo pastebėta, kad gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio ląstelių, kuriose ji veikė kaip auglio slopinamojo. Be to, maždaug 70% storosios žarnos vėžio, jo išraiška buvo pranešta, kad sumažėjo genetinių ir epigenetinių mechanizmų [25,31]. Be storosios žarnos vėžinių ląstelių, ATOH1 raiška sumažinta platinimu ir augimą minkštu agaro ir audiniuose, [31], ir ištrynimo ATOH1 sustiprintas tumorogeniš- pelėms [25]. Šie rezultatai rodo, kad kartu ATOH1 gali būti naudojamas kaip diferenciacijos terapija virškinimo trakto vėžio.

priešingai jo poveikio diferencijavimas, ATOH1 taip pat gali skatinti kamieninių ląstelių ir navikų susidarymo platinimu. Per smegenėlių plėtros pelių, ATOH1 buvo nustatyta inicijuoti diferenciacijos programą smegenėlių granulių neuronų pirmtakų ankstyvame etape (P0). Tačiau vėlesniame etape (P5), skatino pirmtakų [32,33,34] platinimu. ATOH1 išbraukta ne P0, stipriai slopina diferenciaciją, tačiau jo išbraukta ne vėliau lėmė išėjimo iš ląstelės ciklo ir diferenciacijos [35]. Šie skirtingi vaidmenys ATOH1 skirtingais etapais galima paaiškinti skirtingais targetomes [35]. ATOH1 skatinamas medulloblastoma formavimas kartu su Ša ežys signalinio kelio [36,37]. Be to, buvo nustatyta jo išraiška būtų žymiai padidėjusi mucinous adenokarcinoma, antspaudo žiedas karcinoma, ir žarnyno neuroendokrininės neoplazijos [38]. Todėl, kad būtų galima panaudoti ATOH1 diferenciacijos terapija, jos tiesioginiai tikslai, kurie sužadina diferenciaciją reikia nustatyti.

Nors Išsiskiriantis statusai ATOH1 buvo pranešta apie normalų skrandžio gleivinės ir skrandžio vėžio, jos vaidmenys yra prastai būdinga. ATOH1 yra išreikštas įprastais žmogaus skrandžio epitelinių ląstelių žemo lygio [39,40], bet jo išraiška buvo nesilaikoma normaliomis skrandžio epitelinių ląstelių pelės skrandžio [26]. Be to, pelės ir žmogaus metaplastic skrandžio gleivinė parodė ATOH1 išraišką [41], tačiau jos išraiška nebuvo pastebėta skrandžio vėžio ląstelių linijų, įskaitant MKN74, MKN45, KATOIII ir HSC58 [40]. Kai skrandžio vėžiu sergantiems pacientams, ji yra aktyvuojami [39]. Jos patofiziologiniai vaidmenys niekada nebuvo ištirta skrandžio vėžio. Šioje studijoje, mes nustatėme, kad ATOH1 raiškos indukcijos gali sumažinti proliferaciją, invazija, ir tumorogeniš- skrandžio vėžio ląsteles. Mes taip pat nustatė galimą dalyvavimą p21 ir apoptozė keliu į ATOH1 poveikį.

Mūsų stebėjimai rodo galimybę, kad ATOH1 genas turėtų būti vertinamas kaip galimos gydymo tikslo skrandžio vėžio. Mažos molekulės, kurios sukelia jo išraiškos ar genų terapiją, naudojant virusas ar kamieninės ląstelės gali būti sukurta. Visų pirma, ATOH1 buvo nustatyta, kad sukelti skrandžio vėžio kamieninių ląstelių diferenciaciją, todėl, terapija skirtos ATOH1 galėtų išnaikinti vėžio kamienines ląsteles.

• PLoS ONE: Fas Signalizacijos Skatina skrandžio vėžio metastazių per stat3 priklausomas ląstelę Fascin
• PLoS ONE: NOD1 ir NOD2 genetiniai variantai kartu su rizikos skrandžio vėžio bei jo pirmtakų Kinijos gyventojų