PLoS ONE: Padidėjusi eukariotinių Vertimas inicijavimas faktorius 5A2 (EIF5A2) koreliuoja su ląstelių agresyvumas ir vargšų Išgyvenimo skrandžio vėžio

Anotacija

eukariotinių vertimas inicijavimas veiksnys 5A2 (EIF5A2) vaidina svarbų vaidmenį navikų progresavimo ir prognozės įvertinimo. Tačiau mažai informacijos apie savo vaidmens skrandžio vėžio. Šis tyrimas buvo siekiama ištirti EIF5A2 funkciją naviko progresavimo ir jos potencialių mechanizmus. EIF5A2 išraiška buvo matuojamas žmogaus skrandžio vėžio ląstelių linijas, įamžinimu skrandžio gleivinės epitelio ląstelių linija (GES-1) ir žmogaus skrandžio vėžio audiniuose ir partrenkė RNR trukdžių arba aktyvinama iki EIF5A2 plazmidžių transfekciją. Ląstelių proliferaciją, migraciją ir invazija buvo vertinami in vitro
. Tolesni tikslai EIF5A2 išnagrinėjo Imunoblotingo. EIF5A2 ir jos potencialiu metastazės susijęs baltymas 1 (MTA1) išraiška buvo išnagrinėti 160 porų žmogaus skrandžio vėžio ir gretimų ne vėžinių egzempliorių naudojant imunohistocheminis (IHC) dėmių ir buvo tiriamas jo koreliacija su klinikos funkcijų ir išlikimui. Nokdaunas iš EIF5A2
arba MTA1
sukelia akivaizdų slopinimo HGC27 ląstelių proliferaciją, migraciją ir invazijos. Po triuškinantis iš EIF5A2
HGC27 ląstelių E-cad koncentracija buvo aktyvinama ir vimentin, cikloniniai D1 cikloniniai D3, C-MYC ir MTA1 koncentracija downregulated. Ląstelę EIF5A2 į MKN45 ląstelių lėmė Converse. IHC rezultatai parodė teigiamą koreliaciją tarp EIF5A2 ir MTA1 išraiškos skrandžio vėžio ( P
< 0,001). Tiek EIF5A2 ir MTA1 raiška buvo susijęs Pt etape ( P
= 0,018 ir P
= 0,042) PN etapas ( P
= 0,037 ir , p
= 0,020) ir lymphovascular invazija ( P
= 0,016 ir P
= 0,044). EIF5A2 arba MTA1 raiška buvo reikšmingai susijęs su prasta bendro išgyvenamumo ir išgyvenimą iki ligos progresavimo (visi P, pervežimas < 0,05). Daugiamatė analizė nustatė EIF5A2 kaip nepriklausomas prognostinis tiek bendro išgyvenamumo ( P
= 0,012) ir išgyvenimą iki ligos progresavimo ( P
= 0,008) skrandžio vėžiu sergantiems pacientams. Mūsų išvados rodo, kad EIF5A2 ląstelę vaidina svarbų onkogeninio vaidmenį skrandžio vėžio. EIF5A2 gali atstovauti naują Predictor už prastos išlikimo ir yra potencialus terapinis taikinys skrandžio vėžio

nurodomoji dalis:. Meng K-B Kanas W, M, J. J-C Liu Y K Ma Z Klausimas Zhou L et al. (2015) Padidėjusi eukariotinių vertimo inicijavimo Factor 5A2 (EIF5A2) koreliuoja su ląstelių agresyvumas ir vargšų Išgyvenimo skrandžio vėžio. PLoS ONE 10 (3): e0119229. Doi: 10,1371 /journal.pone.0119229

Akademinė redaktorius: Jun Li Sun Yat-sen Universiteto medicinos mokykla, KINIJA

Įstojo: sausio 22, 2014; Priėmė: Sausis 29, 2015 m Paskelbta: Kovo 20, 2015

Visos teisės saugomos: © 2015 Meng et al., Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Finansavimas: Šis darbas buvo remiamas dotacijomis iš Pekino savivaldybės gamtos mokslo fondo (Nr 7.132.209), Hubei provincijos sveikatos ir šeimos planavimo mokslinio tyrimo projekto (Nr WJ2015MB137), didelis mokslo ir technologijų projektus Beijing city (Nr D141100000414004). Į finansuotojai neturėjo vaidmenį studijų dizainas, duomenų rinkimo ir analizės, sprendimų skelbti, ar ruošiant rankraštį

konkuruojančių interesų.. Autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja

Įvadas

Skrandžio vėžys (GC) yra labai metastazės ir vienas iš labiausiai mirtinų virškinimo piktybinių navikų. [1] Nepaisant pažangos chirurginių ir citotoksinių terapijos GC, dabartiniai gydymo prieinama pacientams, sergantiems progresavusia GC yra labai ribotas. [2, 3] Norėdami sukurti naujas gydymo strategijas, labai svarbu išsiaiškinti molekulinius mechanizmus, kurie skatintų invazinių ir metastazavusiu savybes GC ląsteles.

eukariotinių vertimas inicijavimas veiksnys 5A2 (EIF5A2) yra ne žmogaus chromosoma 3q26.2, ir yra EIF5A
genų šeimos narys. [4] Padidėjusi EIF5A2
iRNR tam tikrais žmogaus vėžinių ląstelių, priešingai raiškos ribotų žmonių sėklidžių ir dalys smegenis, siūlo, EIF5A2
yra potencialus onkogeno [4]. Ankstesni tyrimai nustatė, kad EIF5A2 buvo ekspresija daugelyje žmogaus vėžio, pavyzdžiui, kasos latakų adenokarcinoma, kiaušidžių vėžio, kepenų vėžys, plaučių vėžys, gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio ir melanomos ir buvo susijęs su prasta išlikimo vėžiu sergantiems pacientams ir /ar vėžio ląstelių agresyvumą. parodė [5-11] Naujausi tyrimai, EIF5A2 turi kancerogeninių gebėjimus per savo aktyvacijos EIF5A2-MTA1 /C-MYC ašį. [8] Tačiau, mažai informacijos apie EIF5A2 baltymų raiškos, jos prognostinės reikšmės ir galimos onkogeninių vaidmenį žmogaus GC.

Taigi, mes pirmą kartą tyrė EIF5A2 pervežimas žmogaus GC ląstelių linijų ir savo vaidmens išraiška ląstelių dauginimosi, migracijos ir invazijos. Be to, mes nustatyti galimus pasroviui tikslines baltymus išsiaiškinti apie EIF5A2 išeikvojimu ar ląstelę poveikį korinio funkcijų GC ląsteles. Galiausiai, mes išanalizavo EIF5A2 koreliaciją ir MTA1 išraišką žmogaus GC ir jo tiesioginė sąsaja klinikos veiksnių ir išlikimas GC pacientams.

Medžiagos ir metodai

Etika pareiškimas

tyrimas buvo patvirtintas etikos komiteto PUMCH, Kinijos mokslų akademijos medicinos mokslo ir Pekino Sąjungos medicinos koledžo, Pekinas, Kinija, ir raštu informuoti sutikimas buvo gautas iš kiekvieno paciento.

Pacientai ir jų pavyzdžiai

GC audinių ir suderinti gretimų ne naviko audinio mėginiai buvo imami iš 160 pacientų eilės, kuriems buvo atlikta chirurginė rezekcija pirminės GC tuo Pekino Sąjungos medicinos koledžo ligoninės (PUMCH) nuo 2002 sausio ir 2006 m gruodžio pacientai gavo indukcinę chemoterapiją ar radioterapiją. Gautos išgyvenamumo duomenys, remiantis abiejų pacientų įrašus ir telefono tolesnių. Mediana tolesnių laikas buvo 53 mėnesiai (diapazonas, 1-113 mėnesių). Dar dvi poros šviežių GC audinių ir noncancerous skrandžio gleivinės audiniuose buvo gauti iš pacientų, kuriems buvo atlikta chirurginė rezekcija dėl blogai diferencijuota adenokarcinoma skrandį PUMCH 2014

apibrėžta lymphovascular invazija kaip naviko ląstelių embolija akivaizdoje per erdvėse apsuptas aiškiai vizualizuojami endotelio sienelės į naviko skyriuose periferijoje. [12, 13] Pacientai buvo pastatytas pagal 7-osios redakcijos AJCC TNM klasifikaciją pagal karcinoma, skrandžio. [14] Laura histotype buvo padalintas į žarnyno ir diffuse- mišraus tipo kategorijos [15].

Mobilusis kultūra

Penki tipų žmogaus ląstelių linijų GC buvo gauti iš ląstelių centro Shanghai institutai biologijos mokslų (AGS ir MGC803, Šanchajus, Kinija) ir Cell centras instituto pagrindinės medicinos mokslų (MKN45, SGC7901 ir HGC27, Pekinas, Kinija). Imortalizuotų skrandžio gleivinės epitelio ląstelių linija GES-1 buvo gauta iš Pekino ComWin Biotech Co., Ltd "(Pekinas, Kinija). Visos ląstelės buvo auginamos RPMI 1640 vidutinės papildytas 10% vaisiaus galvijų serumo (FBS; Life "technologijas, Carlsbad, CA, USA), esant 37 ° C temperatūroje, drėgmėje, atmosferos orą, kurio sudėtyje yra 5% CO _{2. Ląstelės logaritminis augimo fazėje buvo naudojami tolesniems eksperimentams.}

triuškinantis EIF5A2 arba MTA1 mažų-kištis RNR (siRNAs)

siRNA konkrečiai prieš EIF5A2 ir MTA1 [16] ir jų ne orientacija kontrolė siRNR (Life Technologies ", Karlovi Varai, CA, JAV) buvo chemiškai susintetinti šiame tyrime. Kad EIF5A2 siRNA sekas buvo taip:
: 5'-GGAUCUUAAACUGCCAGAATT-3 ', 5'-UUCUGGCAGUUUAAGAUCCTT-3';: 5'-GGUUCACCUUGUUGGAAUUTT-3 ', 5'-AAUUCCAACAAGGUGAACCTT-3; ir: 5'-GCUUCCAGCACUUACCCUATT-3 ', 5'-UAGGGUAAGUGCUGGAAGCTT-3; Ne orientacija kontrolę (NC1) siRNR: 5'-UUC UCC GAA PGV GUC ACG UTT-3 "; 5'-ACG UGA ŠMC GUU CGG AGA PGS-3 "). Į MTA1 siRNA sekas (TARGET 2 siRNA, T2 siRNR) buvo: 5'-GCUGAGAGCAAGUUAAAGCdTdT-3 ', 5'-GCUUUAACUUGCUCUCAGCdTdT-3) ir FAM žymėto siRNR (AM4620) buvo naudojamas kaip ne nukreipimo kontrolės siRNA (NC2 ).

Dvidešimt keturias valandas po padengimo šešių duobučių lėkštelėse, GC ląstelės buvo pernešta su 100pmol EIF5A2-siRNA, MTA1-siRNA arba kontroliuoti siRNA naudojant Lipofectamine 2000 transfekcijq reagentą (Life Technologies ", Karlovi Varai, CA, JAV ) pagal gamintojo instrukcijas. Ląstelės buvo paruošta Imunoblotingo 48 h po transfekciją.

plazmidžių statybos ir trumpalaikis transfekcija

EIF5A2 ekspresijos vektorius (PIRES2-EGFP-EIF5A2) buvo susintetintas Life technologies ". Ląstelės buvo pernešta su PIRES2-EGFP-EIF5A2 arba valdymo plazmidžių naudojant Lipofectamine 2000 (Life Technologies) pagal gamintojo instrukcijas.

Realaus laiko kiekybine PGR

Viso RNR buvo išskirta naudojant TRIzol reagentas (Life Technologies ") pagal gamintojo protokolą. PGR buvo atliekama naudojant už EIF5A2 sekas: pirmyn: 5'-AACTGCCAGAAGGTGAACTAGG-3 "; Reversas: 5'-GTTTCCGTTTATTTGCAGGGT-3 "ir už MTA1 sekas: pirmyn: 5'-CCGGGCCTGCGAGAGCTGTTACAC-3"; Reversas: 5'-CACGGCTTCCAGCGGCTTGCGTAC-3 ". PGR buvo atliekama naudojant UltraSYBR mišinys (CWbio.Co.Ltd) pagal gamintojo protokolą. Atvirkštinės transkripcijos buvo atliekama naudojant PrimeScript RT magistras Mix komplektas (TAKARA Biotechnologijos Co Ltd, Dalianas, Kinija). KDNR produktai buvo atliktas realaus laiko PGR naudojant SYBR Pašaro ex Taq II komplektą (TAKARA Biotechnologijos Co Ltd). Realaus laiko PGR buvo atliekama StepOnePlus realaus laiko PGR sistemos (Applied Biosystems, Carlsbad, CA), naudojant šią programą: 95 ° C temperatūroje 10 minučių, po to 40 ciklų 95 ° C temperatūroje 15 sekundžių, ir 60 ° C 1 minutę. GAPDH
iRNR kiekviename mėginyje buvo įvertintas kaip endogeninio kontrolę.

imunoblotingu

Baltymų koncentracija buvo įvertintas naudojant BCA baltymų Bandymo rinkinį (Thermo Scientific Pierce). Natrio laurilsulfatas poliakrilamido gelio elektroforezės (SDS-PAGE) buvo naudojamas atskirti ląstelių fragmentai. Baltymai buvo perkelti į PVDF membranų ir užblokuotas su Tris-druskų buferinio tirpalo ir 0,1% Tween 20 (TBST), kuriame yra 5% galvijų serumo albumino, ir tada inkubuojami su šių pagrindinių antikūnų, esant 4 ° C temperatūroje per naktį: triušio anti-EIF5A2 arba -C- MYC (1: 1000; Epitomics, JAV, katalogasȪ9-1 arba 1472-1), triušių anti-MTA1, -E-cad arba -vimentin (1: 1000; Mobilusis signalizacijos, JAV, katalogasȴ7, 3195 arba 5741 ) arba pelės anti-GAPDH (1: 1000; Santa Krusas, katalogas # SC-25.778). Membranos buvo tris kartus plaunamos TBST ir inkubuojami su krienų peroksidazės (HRP) konjuguoto anti-triušio ar anti-pelės antrinių antikūnų (1: 3000; Santa Cruz, JAV, Katalogas # SC-2004 arba SC-2005) 1 val kambario temperatūroje. Baltymų juostos buvo ryškinamos naudojant ECL aptikimo reagentai (Pierce, JAV). Santykiniai baltymo ekspresija lygis buvo normalizuotas GAPDH.

ląstelių proliferacija tyrimas

iš HGC27 ir MKN45 ląstelių proliferacija buvo tiriama naudojant Mobilusis skaičiavimas komplektas-8 (CCK-8) (Dojindo, Japonija ) pagal gamintojo instrukcijas. Trumpai, po 24 valandų transfekciją su siRNA arba plazmidžių, ląstelės buvo pasėjamos esant tankio 1 × 10 ^{4 ląstelių /gerai, esantys 96-duobučių lėkštelėse ir kultivuojamos 0, 24, 48 ir 72 h. Tada, bent skirtingu laiku taškų, 10μL CCK-8 tirpalas buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį ir inkubuojami 2 h. Absorbcija buvo skaityti 450nm ant plokštelės skaitytuvą.}

Transwell tyrimai

migracijos ir invazinės gebėjimas GC ląstelių buvo aptikta naudojant 24 šulinėlių transwell ląstelių kultūrų rūmų (8.0μm porų dydį, Costar Cambridge, MA, JAV) pagal gamintojo instrukcijas. Dėl ląstelių invazija tyrimą, įdėklą membranos buvo iš anksto padengta Matrigel (BD, San Diego, CA, JAV). Už ląstelių migracijos tyrime, buvo naudojamas ne Matrigel. Po 24 val po transfekcijos, ląstelės buvo pasėjamos į atitinkamą tankio (HGC27, 5 × 10 ^{5 /ml, kuri MKN45, 1 × 10 7 /ml) viršutiniame kambaryje ir kultivuojamos OPTI-MEM (GIBCO, JAV) be FBS dėl dar 24 h. Ląstelės buvo leidžiama migruoti link RPMI 1640 terpėje, turinčioje 20% FBS apatiniame kameroje. Kad ne-migracijos ląstelės ant viršutinio membranos paviršiaus buvo pašalinta su medvilnės galiuko, ir kad migracijos ląstelės pritvirtinamas prie apatinio membranos paviršiaus buvo nustatyti su 4% paraformaldehido ir nudažomi su H & El. Į įsiveržė ląstelių skaičius buvo skaičiuojami iš penkių atsitiktinai pasirinktose srityse mikroskopu.}

imunohistocheminis (IHC) dažymo ir vertinimas

IHC dažymo buvo atliktas 5μm storio sekcijų iš parafino įterptųjų egzempliorių. Monokloninis triušio prieš žmogaus EIF5A2 antikūnas (Epitomics, JAV, katalogasȪ9-1), triušių anti-žmogaus MTA1 antikūnas (Mobilusis signalizacijos, JAV, katalogasȴ7) ir PV-6000 Polimeras aptikimo sistema (ZSBG-BIO, Kinija) buvo naudojami dažymo pagal gamintojo instrukcijas. Trumpai tariant, skaidres su parafino skyriuose buvo deparaffinized su ksileno ir rehidrataciją etanolio. Endogeninės peroksidazės aktyvumas buvo užblokuotas su 3% vandenilio peroksido 10 min. Antigeno gavimą, skaidres buvo mikrobangų apdoroto ir virti 0,01M citratas buferio (pH 6.0) 10 min, o po to inkubuojamos su 0,1% tripsino 37 ° C temperatūroje 5 min. Skaidres buvo inkubuojamos su monokloninis triušio anti-žmogaus EIF5A2 arba MTA1 antikūno (1: 100 praskiedimo) 1,5 h, esant 37 ° C temperatūroje, drėgnoje kameroje. Kaip neigiamas dažymo kontrolės, pirminis antikūnas buvo pakeistas su nespecifinio triušio IgG. Du nepriklausomi patologai įvertino imunohistocheminės dažymas EIF5A2 ir MTA1. Pusiau kiekybiniai testo atsakomają metodas buvo naudojamas su nuoroda į ankstesniame tyrime [7].

Statistinė analizė

Visi tyrimai buvo atliekami naudojant SPSS 12.0 programinę įrangą (Čikaga, IL, JAV). McNemar testas buvo naudojamas lyginant EIF5A2 ar MTA1 dažymo žmonijos GC ir gretimų ne vėžinių egzempliorių. Chi-kvadrato testas buvo naudojamas palyginti skirtumus tarp kategorinių kintamųjų, o suporuotas, du-tailed Studento , T
-tests buvo naudojamas palyginti skirtumus tarp kategorinių kintamųjų. Tarp EIF5A2 ir MTA1 koreliacija buvo analizuojamas naudojant Spearman rank testas. Dėl pagal vieną požymį išgyvenamumo analizė, išgyvenimo kreivės buvo pastatyti naudojant Kaplan-Meier metodą ir lyginant pagal log-rank testą. Cox proporciniai pavojai modelis su daugiamatis analizių buvo ištirti nepriklausomus prognozinius veiksnius. Viskas, P
vertės buvo dvipusiai, ir P
vertės < buvo laikoma 0,05 statistiškai reikšmingas. Visi eksperimentai buvo atliekami bent techninių ir biologinių trimis egzemplioriais.

Rezultatai

EIF5A2 raiška GC ląstelių ir audinių ir įteisinimo intervencinė

tyrė EIF5A2 išraišką penki GC ląstelių linijos ir įamžino skrandžio gleivinės epitelio ląstelių linija GES-1 in vitro
tiek KRL-PCR (pav. 1A) ir Imunoblotingo (pav. 1B). EIF5A2 baltymas žmogaus GC audinių buvo didesnis nei, kad iš suporuotas tolimas ne-navikų audiniuose (1C pav.). Dėl didelio endogeninio ekspresijos lygį EIF5A2 ir santykinai aukštas transfekciją efektyvumo HGC27, mes pasirinkote šią mobilųjį liniją RNAi analizę ir parinkti MKN45 ląsteles EIF5A2 ląstelę eksperimentų, nes jos gana mažos EIF5A2 raiškos ir aukštos transfekciją efektyvumą.

Visi trys siRNAs gali efektyviai slopinti EIF5A2 išraišką HGC27 ląstelių (pav. 1D, E). Mes naudojome siRNA
kaip EIF5A2-tikslingai siRNA (T1-siRNA) vėlesniu eksperimentams. EIF5A2 išraiška buvo žymiai aktyvinama laikinu transfekciją EIF5A2 plazmidžių į MKN45 ląstelių (1f pav., G). T2 siRNR galėtų efektyviai slopinti MTA1 išraišką HGC27 ląstelių (pav. 1H, aš).

EIF5A2 arba MTA1 ekspresijos lygis įtakojo GC ląstelėse in vitro

triuškinantis iš EIF5A2 iki T1- agresyvumą siRNR žymiai slopinamas ląstelių proliferacija (pav. 2A), migracija ir invazija (2B pav.) į HGC27 ląstelių, palyginti su tais, kurie iš motininių ląstelių. Ląstelę EIF5A2 iki EIF5A2 plazmidžių išraiškos skatino padidėjęs platinimu (2C pav.), Migracijos ir invazija (2d pav.) Iš MKN45 ląsteles. Nokdaunas iš MTA1 pagal T2-siRNA smarkiai slopino ląstelių proliferacija (. 2E pav), migracijos ir invazija (pav. 2f) HGC27 ląstelių, palyginti su tais, iš tėvinės ląstelės.

įmanomos naikintinos genų ekspresijos po EIF5A2 triuškinantis arba raiška

Po triuškinantis iš EIF5A2 į HGC27 ląsteles, buvo aktyvinama epitelio žymeklio E-cad lygiai, tuo tarpu mezenchimos žymeklio vimentin koncentracija downregulated ir lydi platinimo susijusių baltymų cikloniniai D1 ir cikloniniai D3 ir metastazių -associated, C-MYC ir MTA1 downregulation (. 3A pav). Priešingai, po EIF5A2 raiškos į MKN45 ląsteles, e-cad išraiška buvo downregulated, o vimentin lygis buvo aktyvinama ir lydi ciklino D1, ciklino D3, C-MYC ir MTA1 ląstelę (3b pav.). Nokdaunas ar padidėjusią EIF5A2 neturėjo reikšmingos įtakos MMP9 raiškos HGC27 ir MKN45 ląstelių (pav. 3A, B).

asociacija EIF5A2 ir MTA1 išraiška su klinikos funkcijų pacientams, sergantiems GC

teigiami signalai EIF5A2 buvo daugiausia yra citoplazmoje ir branduolio naviko ląstelių, o MTA1 signalai iš esmės buvo lokalizuotas naviko ląstelių branduolio (4 pav.). Mes apibrėžė imunodažymu vertybes 0-3 kaip normalų reiškinį lygio EIF5A2 ar MTA1, o imunodažymu vertės 4-12 buvo apibrėžtas kaip Padidėjusi EIF5A2 ar MTA1. EIF5A2 raiška buvo rastas 75 naviko egzempliorių, palyginti su tik septyni 160 suderintų gretimų ne auglys gleivinės audinių ( P
< 0,001). Atstovas IHC dažymo EIF5A2 į moderately- ar blogai diferencijuotu skrandžio adenokarcinoma, laivų invazija vėžinių ląstelių ir ne naviko audinyje yra parodyta pav. 4A, B, C ir D, atitinkamai. Iš 160 ištirtų atvejų 70 (43,75%) buvo teigiamas MTA1, Statistikos analizė išraiškos būdus parodė, kad ten buvo teigiama koreliacija tarp EIF5A2 ir MTA1 išraiškos (r = 0,510, P
< 0,001) , Tipiškas dažymo vaizdus Padidėjusi EIF5A2 ir MTA1 skrandžio adenokarcinoma buvo parodyta pav. 4E ir 4F.

Kaip parodyta 1 lentelėje, tiek EIF5A2 ir MTA1 raiška buvo teigiamai koreliuoja su daugiau pažangių pT etape ( P
= 0,018 ir P
= 0,042) PN etapas ( P
= 0,037 ir P
= 0,020) ir teigiamas lymphovascular invazija ( P
= 0,016 ir P
= 0,044), kadangi jos nebuvo susijęs su kitais klinikos funkcijų.

Padidėjęs EIF5A2 arba MTA1 išraiška koreliuoja su prastesne išlikimo GC pacientai

per paskutinį tolesnių, 75 160 pacientai mirė. Iš jų 73 žmonių mirė nuo auglio augimą. Kaplan-Meier analizė parodė, kad tiek 5 metų bendras išgyvenamumas (OS) ir išgyvenimo be ligos (DFS) už EIF5A2 raiška grupėje buvo trumpesnis nei normaliai EIF5A2 išraiška grupės ( P
< 0,001 ir P
= 0,001, pav. 4G H). Nuosekliai, pacientai, sergantys MTA1 raiškos rodomas prastas prognozes OS ir DFS ( P
< 0,001 ir P
= 0,001)

Kintamieji reikšmę pagal vieną požymį analizės. Kaplan-Meier metodai buvo įtraukti į matricų Cox regresinės analizės. Kaip parodyta S1 lentelėje ir S2 lentelėje, daugiamatis analizė nustatė, kad padidėjusią EIF5A2 buvo nepriklausoma veiksnys, darantis įtaką tiek OS (rizikos santykis 1,831, 95% PI 1,135 iki 2.857 P
= 0,012 S1 lentelė) ir DFS (rizikos santykis 1,880, 95% CI1.177 į 3.002, P
= 0,008, S2 lentelė) pacientų, vartojusių gydomasis rezekcija GC. Tačiau MTA1 raiškos negamino nepriklausomą prognostinę reikšmę OS ir DFS į Dispersinės analizės.

Diskusijos

eukariotinių inicijavimas veiksnys 5A 2 (EIF5A2) yra lokalizuota ne chromosomų regione dažnai pažymėta chromosominio nestabilumo GC ir daugelis kitų vėžio, 3q. [17-20] EIF5A2, kaip vienas iš nedaugelio dviejų izoformų apie EIF5A šeima, yra patvirtinta kaip onkogeninių baltymų, taip pat gali būti svarbus biologinis už prognozės ir gydymo tikslo daug rūšių žmogaus navikų. [21] Nors ankstesnis tyrimas buvo išnagrinėta, EIF5A2
genų ekspresijos pirminėje GC, dabartinis tyrimas suteikia pirmą įrodymus klinikinė reikšmė EIF5A2 išraiška žmogaus GC ir jos galimą vaidmenį GC ląstelių agresyvumo reglamentas [22].

Mes pirmą kartą atlikta EIF5A2 triuškinantis ir raiška eksperimentai in vitro
. Rezultatai parodė, kad slopinimas EIF5A2 į HGC27 ląstelių ir dėl to labai sumažėja ląstelių proliferaciją, migraciją ir invazijos, o jo ląstelę į MKN45 ląstelių lėmė Converse. Šie rezultatai atitinka ankstesnių tyrimų išvadas kitų navikų. [8, 10, 23] Mes taip pat nustatė, kad MTA1 triuškinantis į HGC27 ląstelių smarkiai slopino ląstelių dauginimosi, migracijos ir invazijos. Bet mechanizmas, pagal kurį EIF5A2 pagerina GC mobilųjį agresyvumą vis dar nežinoma.

Todėl mes atliekame tolesnius tyrimus dėl galimų taikinių EIF5A2 in vitro
. Mūsų rezultatai parodė, kad EIF5A2 teigiamai reglamentuoja ciklino D1 ir ciklino D3, kuris vaidina svarbų vaidmenį GC ląstelių proliferaciją ir ląstelės ciklo reguliavimas. [24, 25] Visi šie rezultatai patvirtino hipotezę, kad EIF5A2 skatina GC ląstelių proliferaciją per ląstelę ciklino D1 ir CIKLONAS D3. Tuo pačiu metu, ankstesni tyrimai parodė, kad EIF5A2 skatina ląstelių invazija /metastazes ir epitelio-mezenchiminių perėjimą (EMT), per aktyvavimo MTA1 /C-MYC gaubtinės ir tiesiosios žarnų vėžio. [8] MTA1 ir C-MYC, taip pat EMT programos, taip pat buvo įtraukti į reglamento GC metastazių. [26-28] Todėl išnagrinėjo MTA1 C-MYC ir du EMT susijęs žymekliai, El cad ir vimentin. Mūsų tyrimai parodė, kad EIF5A2 teigiamai reglamentuoja MTA1 C-MYC ir vimentin ir neigiamai reguliuojama El cad. Visi šie rezultatai rodo, kad EIF5A2 gali reguliuoti ląstelių migraciją ir invazija reguliavimo MTA1 C-MYC ir EMT in vitro
, tačiau tolesni tyrimai reikalingi tirti tikslius mechanizmus.

rezultatus dabartinės tyrimas taip pat parodė, kad EIF5A2 baltymas teigiamai koreliuoja pt etape ir pn etape. Panašūs rezultatai, taip pat pastebėtas žmogaus kiaušidžių vėžio. [5] Šie rezultatai rodo, kad EIF5A2 gali būti susijęs su naviko invazija ir limfmazgių metastazių tam tikros rūšies žmogaus vėžio, įskaitant GC. Dar įdomiau, dabartiniame tyrime EIF5A2 raiška taip pat buvo rasta užplūsta vėžines ląsteles (laivo invazija) ir raiška iš EIF5A2 baltymų pirminės GC audinio koreliavo su lymphovascular invazijos akivaizdoje. Pagal rasti ankstesniuose tyrimuose kitų žmogaus navikais, įskaitant epitelio kiaušidžių navikų, šlapimo pūslės karcinomos, plaučių vėžio, ir gaubtinės ir tiesiosios žarnos vėžio, raiškos nuo EIF5A2 dabartinės tyrimo rezultatais buvo susietas su prastos išlikimo pacientams, sergantiems GC. [5, 8, 29] Be to, daugiamatis analizė parodė, kad EIF5A2 baltymas yra nepriklausoma prognozuoti prastos išlikimo pacientams, kuriems atliekama operacija GC.

MTA1, kaip kandidatės metastazių susijusių genų, buvo įrodyta, kad žaisti lemiamą vaidmenį skrandžio vėžio ląstelių agresyvumas. [27] Padidėjusi MTA1 yra reikšmingai susijęs su prasta prognoze pN0 GC pacientams. [30] Šiuo metu tyrimas parodė, kad EIF5A2 išraiška buvo teigiamai koreliuoja su MTA1 išraiška žmogaus GC audiniuose. Imunohistocheminis analizė derinama tyrimų in vitro metu nustatyta, kad EIF5A2-MTA1 ašis gali vaidinti svarbų vaidmenį skrandžio vėžio agresyvumą.

Apibendrinant, dabartinės tyrimo rezultatai parodė, kad EIF5A2 raiška buvo glaudžiai susijusi su GC ląstelių proliferaciją, migraciją ir invazija per metastazių susijusių baltymų MTA1. Tuo pačiu metu, EIF5A2 gali būti svarbūs EMT reguliavimo GC. Padidėjusi EIF5A2 galėtų būti nepriklausomas faktorius, prognozuoja prastą išlikimą ir patrauklią gydomąjį tikslą GC, bet reikalingi tolesni tyrimai.

Pagalbinė informacija
S1 lentelę. Analizė veiksnių, susijusių su bendro išgyvenamumo (OS)
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0119229.s001
(DOC)
S2 lentelė. Analizė veiksnių, susijusių su ligos reiškinių išgyventas (DFS)
Doi:. 10,1371 /journal.pone.0119229.s002
(DOC)

Padėka

autoriai norėtų padėkoti G. De-Tian Wang, MS Yu-Feng Luo ir profesorius Pei Gu jų techninių atramų.

• PLoS ONE: poveikis naviką Expression Lygiai fluoropirimidino metabolizmą fermentų gydymo rezultatus pagalbinių medžiagų S-1 terapijos skrandžio Cancer
• PLoS ONE: Aberrant CCR4 išraiška dalyvauja naviko invazija limfmazgių neigiamas žmogaus skrandžio Cancer