PLOS ONE: surexpression de eucaryote Traduction Initiation Factor 5A2 (EIF5A2) corrèle avec cellule Agressivité and Poor survie dans le cancer gastrique

Résumé

eucaryote initiation de la traduction facteur 5A2 (EIF5A2) joue un rôle important dans la progression tumorale et l'évaluation du pronostic. Cependant, peu d'informations sont disponibles au sujet de son rôle potentiel dans le cancer gastrique. Cette étude visait à étudier la fonction de EIF5A2 dans la progression tumorale et de ses mécanismes potentiels. expression EIF5A2 a été mesurée dans des lignées cellulaires de cancer gastriques humaines, la ligne immortalisés muqueuse gastrique des cellules épithéliales (GES-1) et les tissus de cancer gastrique humain et renversé par l'interférence ARN ou augmentée par EIF5A2 plasmide transfection. La prolifération cellulaire, la migration et l'invasion ont été évalués in vitro
. Les cibles en aval de EIF5A2 ont été examinés par western blot. EIF5A2 et sa cible métastases-associated protein 1 (MTA1) expression potentielle ont été examinés en 160 paires de cancer gastrique humain et des échantillons non tumorales adjacentes par immunohistochimie (IHC), la coloration, et sa corrélation avec les caractéristiques clinico-pathologiques et leur survie a été étudiée. Knockdown de EIF5A2
ou MTA1
a provoqué une suppression apparente de HGC27 la prolifération cellulaire, la migration et l'invasion. Après knockdown de EIF5A2
en HGC27 cellules, les niveaux E-cadhérine ont été régulée à la hausse et la vimentine, la cycline D1, cycline D3, C-MYC et les niveaux de MTA1 ont été downregulated. La régulation positive de EIF5A2 dans les cellules MKN45 a donné lieu à l'inverse. les résultats IHC ont montré une corrélation positive entre EIF5A2 et d'expression de MTA1 dans les cancers gastriques ( P
< 0,001). Les deux EIF5A2 et MTA1 surexpression ont été corrélés avec le stade pT ( P
= 0,018 et P
= 0,042), le stade pN ( P
= 0,037 et P
= 0,020) et l'invasion lymphovasculaire ( P
= 0,016 et P
= 0,044). EIF5A2 ou MTA1 surexpression était significativement associée à une survie médiocre globale et la survie sans maladie (tous P
< 0,05). Les analyses multivariées identifié EIF5A2 comme un facteur prédictif indépendant pour les deux la survie globale ( P
= 0,012) et la survie sans maladie ( P
= 0,008) chez les patients atteints de cancer gastrique. Nos résultats indiquent que EIF5A2 surexpression joue un rôle oncogénique important dans le cancer gastrique. EIF5A2 peut représenter un nouveau prédicteur de faible taux de survie et est une cible thérapeutique potentielle pour le cancer gastrique

Citation:. Meng Q-B, Kang W-M, Yu J-C, Liu Y-Q, Ma Z-Q, Zhou L, et al. (2015) La surexpression de eucaryote Traduction Initiation Factor 5A2 (EIF5A2) corrèle avec cellule Agressivité and Poor survie dans le cancer gastrique. PLoS ONE 10 (3): e0119229. doi: 10.1371 /journal.pone.0119229

Academic Editor: Jun Li, Sun Yat-sen University Medical School, CHINE

Reçu le 22 Janvier 2014; Accepté: 29 Janvier 2015; Publié 20 Mars, 2015

Droit d'auteur: © 2015 Meng et al. Ceci est un article en accès libre distribué sous les termes de la licence Creative Commons Attribution, qui permet une utilisation sans restriction, la distribution et la reproduction sur tout support, pourvu que l'auteur et la source originelle sont crédités

Financement: Ce travail a été soutenu par des subventions de la Fondation municipale de Beijing Natural science (n ° 7132209), la province du Hubei santé et planification familiale projet de recherche scientifique (n ° WJ2015MB137) et les projets scientifiques et technologiques majeurs à Beijing City (No. D141100000414004). Les bailleurs de fonds ont joué aucun rôle dans la conception de l'étude, la collecte et l'analyse des données, la décision de publier, ou de la préparation du manuscrit

Intérêts concurrents:.. Les auteurs ont déclaré aucun conflit d'intérêts existent

Introduction

le cancer gastrique (GC) est une maladie hautement métastatique et l'une des plus meurtrières des tumeurs malignes gastro-intestinales. [1] en dépit des progrès dans les thérapies chirurgicales et cytotoxiques pour GC, les traitements actuels disponibles pour les patients avec GC avancée sont très limité. [2, 3] pour développer de nouvelles stratégies thérapeutiques, il est crucial d'élucider les mécanismes moléculaires qui favorisent les propriétés invasives et métastatiques de cellules GC.

traduction eucaryote facteur d'initiation 5A2 (EIF5A2) est situé à chromosome humain 3q26.2, et est un membre de la EIF5A
famille de gènes. [4] la surexpression de EIF5A2
ARNm dans certaines cellules cancéreuses humaines, contrairement à surexpression limité à testiculaire humain et parties du cerveau, suggère EIF5A2
est un oncogène potentiel. [4] des études antérieures ont constaté que EIF5A2 était surexprimée dans de nombreux cancers humains tels que l'adénocarcinome pancréatique canalaire, cancer de l'ovaire, le cancer hépatocellulaire, le cancer du poumon, le cancer colorectal et le mélanome et a été corrélée à une faible survie des patients atteints d'un cancer et /ou l'agressivité des cellules cancéreuses. [5-11] des études récentes ont démontré que EIF5A2 a des capacités cancérigènes grâce à son activation de l'axe EIF5A2-MTA1 /C-MYC. [8] Cependant, peu d'informations sont disponibles sur l'expression des protéines EIF5A2, sa signification pronostique et le rôle potentiel oncogène GC humain.

Par conséquent, nous avons d'abord étudié l'expression de EIF5A2
dans des lignées cellulaires de GC humaines et son rôle potentiel dans la prolifération cellulaire, la migration et l'invasion. Ensuite, nous avons identifié des protéines cibles en aval possibles pour élucider l'impact de EIF5A2 épuisement ou surexpression sur les fonctions cellulaires de cellules GC. Enfin, nous avons analysé la corrélation des EIF5A2 et d'expression de MTA1 en GC humaine et sa pertinence pour les facteurs clinicopathologiques et la survie chez les patients du GC.

Ethique Déclaration
Matériels et méthodes

Le étude a été approuvée par le comité d'éthique de PUMCH, Académie chinoise des sciences médicales et de Peking Union Medical College, Beijing, Chine, et le consentement éclairé a été obtenu à partir de chaque patient.

patients et spécimens

tissus GC et des échantillons appariés de tissus non tumoraux adjacents ont été obtenus à partir de 160 patients consécutifs ayant subi une résection chirurgicale pour GC primaire à Pékin Union Medical College Hospital (PUMCH) entre Janvier 2002 et Décembre 2006. Aucun patient n'a reçu de la chimiothérapie ou de la radiothérapie néoadjuvante. Les données de survie ont été obtenus sur la base de deux dossiers »des patients et un suivi téléphonique. La durée médiane de suivi était de 53 mois (extrêmes, 1-113 mois). Deux autres paires de tissus GC frais et les tissus de la muqueuse gastrique noncancerous ont été obtenus chez des patients ayant subi une résection chirurgicale de l'adénocarcinome peu différencié de l'estomac à PUMCH en 2014.

Nous avons défini l'invasion lymphovasculaire que la présence de cellules tumorales embolies dans les espaces entouré par une doublure endothéliale clairement visualisées dans la périphérie de sections tumorales. [12, 13] les patients ont été mis en scène en fonction de la 7e édition de la classification TNM de l'AJCC pour le carcinome de l'estomac. [14] Lauren histotype a été divisé en intestinale et diffuse- catégories de type mixte. [15]

culture
Cell

Cinq types de lignées cellulaires GC humaines ont été obtenues à partir du Centre de cellule des instituts de Shanghai des sciences biologiques (AGS et MGC803, Shanghai, Chine) et le Centre cellulaire de l'Institut des sciences médicales de base (MKN45, SGC7901 et HGC27, Beijing, Chine). La muqueuse lignée de cellules épithéliales gastriques immortalisés GES-1 a été obtenu à partir de Beijing COMWIN Biotech Co., Ltd (Beijing, Chine). Toutes les cellules ont été cultivées dans un milieu RPMI 1640 additionné de 10% de sérum de veau fœtal (FBS; Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) à 37 ° C dans une atmosphère d'air humidifié contenant 5% de CO _{2. Les cellules en phase de croissance logarithmique ont été utilisés pour d'autres expériences.}

Knockdown EIF5A2 ou MTA1 par de petits-ARN interférents (siRNA)

Le siRNA spécifiquement contre EIF5A2 et MTA1 [16] et leur non-ciblage siRNA contrôle (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) ont été synthétisés chimiquement pour cette étude. Les séquences EIF5A2 cARNi étaient les suivantes: N ° 1: 5'-GGAUCUUAAACUGCCAGAATT-3 ', 5' UUCUGGCAGUUUAAGAUCCTT-3 '; N ° 2: 5'-GGUUCACCUUGUUGGAAUUTT-3 ', 5' AAUUCCAACAAGGUGAACCTT-3; et N ° 3: 5'-GCUUCCAGCACUUACCCUATT-3 ', 5'-UAGGGUAAGUGCUGGAAGCTT-3; le (NC1) siRNA non ciblant le contrôle: 5'-UUC UCC UGT GAA GUC ACG UTT-3 '; 5'-ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT-3 '). Les séquences MTA1 siRNA (Target 2 siRNA, T2-siRNA) étaient les suivants: 5'-GCUGAGAGCAAGUUAAAGCdTdT-3 ', 5'-GCUUUAACUUGCUCUCAGCdTdT-3') et a été utilisé FAM marqué siRNA (AM4620) comme un contrôle non-ciblage siRNA (NC2 ).

Vingt-quatre heures après placage dans des plaques à six puits, les cellules de GC ont été transfectées avec 100pmol EIF5A2-siRNA, MTA1-siRNA ou siRNA contrôle utilisant Lipofectamine 2000 réactif de transfection (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA ) selon les instructions du fabricant. Les cellules ont été récoltées pour western blot à 48 h après la transfection.

Construction de plasmide et transfection transitoire

vecteur d'expression de EIF5A2 (pIRES2-EGFP-EIF5A2) a été synthétisé par Life Technologies. Les cellules ont été transfectées avec pIRES2-EGFP-EIF5A2 ou le plasmide témoin utilisant de la Lipofectamine 2000 (Life Technologies) selon les instructions du fabricant.

en temps réel RT-PCR quantitative

ARN total a été isolé en utilisant le réactif Trizol (Life Technologies) selon le protocole du fabricant. PCR a été réalisée en utilisant les séquences pour EIF5A2: forward: 5'AACTGCCAGAAGGTGAACTAGG-3 '; inverse: 5'GTTTCCGTTTATTTGCAGGGT-3 'et les séquences pour MTA1: forward: 5'-CCGGGCCTGCGAGAGCTGTTACAC-3'; inverse: 5'-CACGGCTTCCAGCGGCTTGCGTAC-3 '. La PCR a été réalisée en utilisant UltraSYBR mélange (CWbio.Co.Ltd) selon le protocole du fabricant. La transcription inverse a été réalisée en utilisant un kit PrimeScript RT Master Mix (TAKARA Biotechnology Co. Ltd, Dalian, Chine). Les produits d'ADNc ont été soumis à une PCR en temps réel en utilisant un kit SYBR Premix Ex Taq II (TAKARA Biotechnology Co. Ltd.). PCR en temps réel a été réalisée dans un système StepOnePlus PCR en temps réel (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) en utilisant le programme suivant: 95 ° C pendant 10 minutes, suivie de 40 cycles de 95 ° C pendant 15 secondes, et 60 ° C pendant 1 minute. GAPDH de l'ARNm dans chaque échantillon a été quantifiée comme un contrôle endogène.

Western blot

La concentration en protéine a été quantifiée en utilisant un kit de dosage de protéines BCA (Thermo Scientific Pierce). Sodium électrophorèse sur gel de polyacrylamide dodécyl sulfate (SDS-PAGE) a été utilisée pour séparer les lysats cellulaires. Les protéines ont été transférées sur des membranes de PVDF et bloquées avec du tris une solution saline tamponnée et 0,1% de Tween 20 (TBST) contenant 5% de sérum albumine bovine, puis mis en incubation avec les anticorps primaires suivants à 4 ° C pendant la nuit: lapin anti-EIF5A2 ou -C- MYC (1: 1000; Epitomics, États-Unis, CatalogȪ9-1 ou 1472-1), de lapin anti-MTA1, -E-cadhérine ou -vimentin (1: 1000; Cell Signaling, États-Unis, Catalogȴ7, 3195 ou 5741 ) ou de souris anti-GAPDH (1: 1000; Santa Cruz, sc-Catalogā78). Les membranes ont été lavées trois fois avec du TBST et mises en incubation avec la peroxydase de raifort (HRP) conjuguée à des anticorps secondaires anti-lapin ou anti-souris (1: 3000; Santa Cruz, USA, catalogue # sc-2004 ou sc-2005) pendant 1 h à température ambiante. Les bandes de protéines ont été visualisées en utilisant ECL détection des réactifs (Pierce, USA). Les niveaux relatifs d'expression de protéines ont été normalisées à GAPDH.

La prolifération cellulaire test

La prolifération des cellules HGC27 et MKN45 a été examinée à l'aide d'une cellule de comptage Kit-8 (CCK-8) (Dojindo, Japon ) selon les instructions du fabricant. Brièvement, 24 h après la transfection avec l'ARNsi ou un plasmide, les cellules ont été ensemencées à une densité de 1 x 10 ^{4 cellules /puits dans des plaques à 96 puits et cultivées pendant 0, 24, 48 et 72 h. Ensuite, les différents points de temps, la CCK-8 10 ul solution a été ajoutée à chaque puits et mis en incubation pendant 2 h. L'absorbance a été lue à 450nm sur un lecteur de plaque.}

Transwell essais

La capacité migratoire et invasive des cellules du GC a été détectée en utilisant 24 puits Transwell chambres de culture cellulaire (taille des pores de 8.0μm, Costar , Cambridge, MA, USA) selon les instructions du fabricant. Pour le dosage de l'invasion des cellules, les membranes d'insertion ont été pré-revêtues de Matrigel (BD, San Diego, CA, USA). Pour la détermination de la migration cellulaire, sans Matrigel a été utilisé. 24 h après la transfection, les cellules ont été ensemencées à une densité appropriée (HGC27, 5 × 10 ^{5 /ml; MKN45, 1 × 10 7 /ml) dans la chambre supérieure et cultivées dans OPTI-MEM (GIBCO, USA) sans FBS pendant encore 24 h. Les cellules ont été laissées migrer vers le milieu RPMI 1640 contenant 20% de FBS dans la chambre inférieure. Les cellules non migratoires sur la surface supérieure de la membrane ont été enlevées avec un embout de coton, et les cellules migratrices fixées à la surface inférieure de la membrane ont été fixées avec du paraformaldehyde à 4% et colorées avec H & E. Le nombre de cellules envahies ont été comptées dans cinq champs choisis au hasard sous un microscope.}

immunohistochimie (IHC) coloration et de l'évaluation

IHC coloration a été effectuée sur des coupes de 5 um d'épaisseur à partir d'échantillons de paraffine. lapin monoclonaux anti-humain anticorps EIF5A2 (Epitomics, États-Unis, CatalogȪ9-1), anticorps MTA1 anti-humain de lapin (Cell Signaling, États-Unis, Catalogȴ7) et PV-6000 Système de détection Polymer (ZSBG-BIO, Chine) étaient utilisé pour la coloration conformément aux instructions du fabricant. En bref, des diapositives avec des sections de paraffine ont été déparaffinées avec du xylène et réhydratées avec de l'éthanol. une activité de peroxydase endogène a été bloquée avec 3% de peroxyde d'hydrogène pendant 10 min. Pour la récupération des antigènes, les lames ont été traitées par micro-ondes et on fait bouillir dans un tampon de citrate 0,01 M (pH 6,0) pendant 10 minutes, et ensuite mises en incubation avec 0,1% de trypsine à 37 ° C pendant 5 min. Les lames ont été incubées avec un anticorps monoclonal de lapin anti-humain EIF5A2 ou un anticorps MTA1 (dilution 1: 100) pendant 1,5 h à 37 ° C dans une chambre humidifiée. En tant que témoin de coloration négative, l'anticorps primaire a été remplacé par IgG de lapin non spécifique. Deux pathologistes indépendants ont évalué la coloration immunohistochimique de EIF5A2 et MTA1. Une méthode de notation semi-quantitative a été utilisé en référence à l'étude précédente. [7]

L'analyse statistique

Toutes les analyses ont été effectuées en utilisant SPSS 12.0 logiciel (Chicago, IL, USA). Le test McNemar a été utilisé pour la comparaison des EIF5A2 ou MTA1 coloration en GC humaine et les échantillons non-tumorales adjacentes. Le test du chi carré a été utilisé pour comparer les différences entre les variables catégoriques, alors que le appariés, deux tailed Student t
-Tests ont été utilisés pour comparer les différences entre les variables catégorielles. La corrélation entre EIF5A2 et MTA1 a été analysée en utilisant le test de rang de Spearman. Pour l'analyse de survie univariée, les courbes de survie ont été construites en utilisant la méthode de Kaplan-Meier et comparées par le test log-rank. Le modèle de Cox proportionnel avec des analyses multivariées a été utilisé pour étudier les facteurs pronostiques indépendants. Tous P
valeurs étaient des deux côtés, et Les valeurs P
de < 0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives. Toutes les expériences ont été réalisées au moins en triple techniques et biologiques.

Résultats

EIF5A2 expression dans des cellules et des tissus GC et la validation de l'intervention

Nous avons étudié l'expression de EIF5A2 dans cinq lignées de cellules GC et la muqueuse lignée de cellules épithéliales gastriques immortalisés GES-1 in vitro
fois par qRT-PCR (Fig. 1A) et western blot (Fig. 1B). EIF5A2 protéine dans les tissus humains GC est supérieure à celle des tissus non tumoraux appariés éloignés (fig. 1c). En raison du niveau élevé d'expression endogène de EIF5A2 et l'efficacité relativement élevé de transfection dans HGC27, nous avons choisi cette lignée cellulaire pour l'analyse RNAi, et sélectionné MKN45 cellules pour EIF5A2 expériences de régulation positive en raison de sa relativement faible expression de EIF5A2 et une grande efficacité de transfection.

Les trois siRNA pourraient efficacement supprimer l'expression de EIF5A2 dans les cellules HGC27 (Fig. 1D, E). Nous avons utilisé siRNA
EIF5A2 ciblées siRNA (T1-siRNA) dans les expériences ultérieures. expression EIF5A2 a été significativement augmentée par transfection transitoire de EIF5A2 plasmides dans MKN45 cellules (Fig. 1F, G). T2-siRNA pourrait efficacement supprimer l'expression de MTA1 dans HGC27 cellules (Fig. 1 H, I).

EIF5A2 ou expression MTA1 niveaux influencé l'agressivité des cellules GC vitro

knockdown dans des EIF5A2 par T1- ARNsi la prolifération cellulaire inhibée de façon significative (fig. 2A), la migration et l'invasion (fig. 2B) dans HGC27 cellules par rapport à celles des cellules parentales. La régulation positive de EIF5A2 par expression EIF5A2 plasmidique promu augmentation de la prolifération (Fig. 2C), la migration et l'invasion (Fig. 2D) de cellules MKN45. Knockdown de MTA1 par T2-ARNsi la prolifération cellulaire inhibée de façon significative (fig. 2E), la migration et l'invasion (Fig. 2F) dans HGC27 cellules par rapport à celles des cellules parentales.
Expression

gène cible possible après EIF5A2 effet de choc ou
surexpression

Après inactivation de HGC27 EIF5A2 dans les cellules, les niveaux du marqueur E-cadhérine épithéliale ont été régulés à la hausse, tandis que les niveaux de marqueur mésenchymateux vimentine ont été régulés à la baisse et accompagnés par des protéines liées à la prolifération et à la cycline D1 cycline D3 et les métastases -Associated C-MYC et MTA1 régulation négative (Fig. 3A). En revanche, après EIF5A2 surexpression dans des cellules MKN45, l'expression de la E-cadhérine a été régulée à la baisse, tandis que le niveau de la vimentine a été régulée à la hausse et accompagné de la cycline D1, la cycline D3, c-myc et une régulation positive MTA1 (Fig. 3B). surexpression Knockdown ou EIF5A2 n'a eu aucun effet significatif sur l'expression de MMP9 dans les cellules HGC27 et MKN45 (Fig. 3A, B).

Association des EIF5A2 et d'expression de MTA1 avec des caractéristiques clinico chez les patients avec GC

des signaux positifs de EIF5A2 étaient principalement localisés dans le cytoplasme et le noyau des cellules tumorales, tandis que les signaux de MTA1 étaient principalement localisés dans le noyau des cellules tumorales (fig. 4). Nous avons défini les valeurs de immunocoloration de 0-3 en tant que niveau d'expression normal de EIF5A2 ou MTA1, tandis que les valeurs immunocoloration de 12/04 a été définie comme la surexpression de EIF5A2 ou MTA1. EIF5A2 surexpression a été trouvé dans 75 des échantillons de tumeurs, comparativement à seulement sept des 160 tissus de la muqueuse non-tumorale adjacents appariés ( P
< 0,001). Représentant la coloration IHC de EIF5A2 dans les adénocarcinomes gastriques moderately- ou mal différenciées, des cellules tumorales d'invasion des vaisseaux et du tissu non tumoral est représentée sur la Fig. 4A, B, C et D, respectivement. Sur les 160 cas analysés, 70 (43,75%) étaient positifs pour MTA1, l'analyse statistique des profils d'expression a montré qu'il y avait une corrélation positive entre EIF5A2 et d'expression de MTA1 (r = 0,510, P
< 0,001) . Les images de coloration typiques pour la surexpression de EIF5A2 et MTA1 dans les adénocarcinomes gastriques ont été représentés sur la Fig. 4E et 4F.

Comme le montre le tableau 1, à la fois EIF5A2 et MTA1 surexpression étaient positivement corrélés avec le stade plus avancé pT ( P
= 0,018 et P
= 0,042) , le stade pN ( P
= 0,037 et P
= 0,020) et de l'invasion lymphovasculaire positive ( P
= 0,016 et P
= 0,044), alors qu'ils ne sont pas associés à d'autres caractéristiques clinico.

Augmentation EIF5A2 ou l'expression de MTA1 en corrélation avec la survie chez les patients les plus pauvres

Lors du dernier suivi GC, 75 de 160 patients étaient décédés. Parmi ceux-ci, 73 personnes sont mortes de récidive de la tumeur. L'analyse de Kaplan-Meier a montré que tant la survie globale à 5 ans (OS) et sans maladie de survie (DFS) pour le groupe de surexpression EIF5A2 étaient plus courts que ceux du groupe d'expression EIF5A2 normale ( P
< 0,001 et P
= 0,001, Fig. 4G, H). Constamment, les patients avec MTA1 surexpression affichent un mauvais pronostic pour OS et DFS ( P
< 0,001 et P
= 0,001)

Variables ayant une signification dans l'analyse univariée par. les méthodes de Kaplan-Meier ont été inclus dans les analyses multivariées de régression de Cox. Comme le montre le S1 Table et S2 Tableau, analyse multivariée a identifié que la surexpression de EIF5A2 était un facteur indépendant influençant à la fois OS (rapport de risque 1,831, IC à 95% de 1,135 à 2,857, P
= 0,012, S1 Tableau) et DFS (hazard ratio 1.880, 95% CI1.177 à 3.002, P
= 0,008, S2 Table) des patients recevant une résection curative pour GC. Cependant, la surexpression de MTA1 n'a pas produit une signification pronostique indépendante pour OS et DFS dans l'analyse multivariée.

Discussion

facteur d'initiation eucaryote 5A 2 (EIF5A2) est localisée dans une région chromosomique souvent noté pour l'instabilité chromosomique dans le CPG et de nombreux autres cancers, 3q. [17-20] EIF5A2, comme l'une des deux seules isoformes de la famille EIF5A, est confirmée en tant que protéine oncogène et peut également être un marqueur biologique important pour le pronostic et la cible thérapeutique de nombreux types de tumeurs humaines. [21] Bien qu'une étude précédente avait examiné EIF5A2
expression génique dans GC primaire, l'étude fournit la première preuve de la signification clinique d'expression EIF5A2 en GC humaine et son rôle éventuel dans la régulation de l'agressivité des cellules GC. [22]

Nous avons d'abord effectué EIF5A2 knockdown et expériences de surexpression in vitro
. Les résultats ont montré que la suppression de EIF5A2 dans HGC27 cellules conduit à une diminution significative de la prolifération cellulaire, la migration et l'invasion, tandis que sa surexpression dans des cellules MKN45 a donné lieu à l'inverse. Ces résultats sont cohérents avec les résultats précédents dans d'autres tumeurs. [8, 10, 23] Nous avons également constaté que MTA1 knockdown dans HGC27 cellules inhibé de manière significative la prolifération cellulaire, la migration et l'invasion. Mais le mécanisme par lequel EIF5A2 améliore GC cellule agressivité est encore inconnue.

Par conséquent, nous avons effectué d'autres études sur les cibles possibles de EIF5A2 in vitro
. Nos résultats ont montré que EIF5A2 régulée positivement la cycline D1 et cycline D3, qui jouent un rôle important dans la prolifération des cellules GC et la régulation du cycle cellulaire. [24, 25] Tous ces résultats confirment l'hypothèse selon laquelle EIF5A2 favorise GC prolifération cellulaire par l'intermédiaire d'une régulation positive de la cycline D1 et de la cycline D3. Dans le même temps, des études antérieures ont montré que EIF5A2 favorise l'invasion des cellules /métastases et l'épithélium-mésenchyme transition (EGE) par l'intermédiaire MTA1 activation /c-myc dans les cancers colorectaux. [8] MTA1 et c-myc, ainsi que le programme d'EMT, ont également été impliqués dans la régulation de la GC métastase. [26-28] Nous avons donc examiné MTA1, C-MYC et deux marqueurs de EMT-associé, E-cadhérine et vimentine. Nos études ont démontré que EIF5A2 MTA1 régulée positivement, C-MYC et vimentine et régulée négativement E-cadhérine. Tous ces résultats suggèrent que EIF5A2 pourrait réguler la migration cellulaire et l'invasion par règlement du MTA1, C-MYC et EMT in vitro
, mais des études supplémentaires sont nécessaires pour enquêter sur les mécanismes exacts.

Les résultats de l'étude a également montré que la protéine EIF5A2 était positivement corrélée avec le stade pT et le stade pN. Des résultats similaires ont également été observées dans le cancer de l'ovaire humain [5]. Ces résultats suggèrent que EIF5A2 peut être associée à une invasion tumorale et les métastases des ganglions lymphatiques dans certains types de cancers humains, y compris les CPG. Plus intéressant, dans l'étude actuelle, EIF5A2 surexpression a également été trouvé dans l'invasion des cellules cancéreuses (invasion des navires), et la surexpression de la protéine EIF5A2 dans le tissu GC primaire en corrélation avec la présence de l'invasion lymphovasculaire. Conformément aux résultats trouvés dans les études précédentes d'autres tumeurs malignes humaines, y compris les tumeurs épithéliales de l'ovaire, cancer de la vessie, le cancer du poumon et le cancer colorectal, la surexpression de EIF5A2 dans l'étude actuelle a été corrélée avec une faible survie des patients atteints de GC. [5, 8, 29] en outre, l'analyse multivariée a montré que la protéine EIF5A2 est un facteur prédictif indépendant pour une faible survie chez les patients subissant une intervention chirurgicale pour GC.

MTA1, comme un gène métastase associé candidat, il a été démontré à jouer le rôle essentiel dans gastrique agressivité des cellules cancéreuses. [27] La ​​surexpression de MTA1 est significativement associée à un mauvais pronostic chez les patients pN0 GC. [30] L'étude a montré que l'expression EIF5A2 était positivement corrélée avec l'expression de MTA1 dans les tissus GC humaines. L'analyse immunohistochimique combinée des études in vitro montre que le-MTA1 axe EIF5A2 peut jouer un rôle important dans l'agressivité du cancer gastrique.

En résumé, les résultats de l'étude ont montré que la surexpression de EIF5A2 était étroitement liée à GC la prolifération cellulaire, la migration et l'invasion par des métastases associées à des protéines MTA1. Dans le même temps, EIF5A2 peut être important dans la régulation EMT en GC. La surexpression de EIF5A2 pourrait être un facteur indépendant de prédire une survie et une cible thérapeutique intéressante pour les GC, mais d'autres études sont nécessaires.

Informations complémentaires
Tableau S1. Analyse des facteurs associés à la survie globale (OS)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0119229.s001
(DOC)
S2 Table. Analyse des facteurs associés à la survie sans maladie (DFS)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0119229.s002
(DOC)

Remerciements

Les auteurs souhaitent à remercier M. de-Tian Wang, Mme Yu-Feng Luo et professeur Pei Gu pour leurs supports techniques.

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