PLOS ONE: A superexpressão de Eukaryotic Tradução Fator de Iniciação 5A2 (EIF5A2) correlaciona-se com celular Agressividade e pior sobrevida no câncer gástrico

Abstract

Eukaryotic iniciação da tradução fator 5A2 (EIF5A2) desempenha um papel importante na progressão tumoral e avaliação do prognóstico. No entanto, há pouca informação disponível sobre o seu papel potencial no câncer gástrico. Este estudo teve como objetivo investigar a função de EIF5A2 na progressão tumoral e seus potenciais mecanismos. expressão EIF5A2 foi medido em linhas celulares de cancro gástrico humano, a linha imortalizada gástrico mucosa das células epiteliais (GES-1) e tecidos de câncer gástrico humano e derrubado por interferência de RNA ou regulada pelo EIF5A2 plasmídeo transfecção. A proliferação celular, migração e invasão foram avaliadas in vitro
. Os alvos a jusante de EIF5A2 foram examinados por transferência Western. EIF5A2 e o seu potencial de proteína de uma expressão alvo associada ao metástase (MTA1) foram examinados em 160 pares de cancro gástrico humano e amostras não-tumorais adjacentes usando imuno-histoquímica de coloração (IHC), e a sua correlação com características clinicopatológicas e sobrevivência foi investigada. Knockdown de EIF5A2
ou MTA1
causou uma aparente supressão da proliferação celular HGC27, migração e invasão. Depois de knockdown de EIF5A2
em HGC27 células, os níveis de E-caderina foram regulada e vimentina, ciclina D1, ciclina D3, C-MYC e níveis mta1 foram reprimidos. Regulação positiva de EIF5A2 em células MKN45 resultou no inverso. resultados IHC mostraram uma correlação positiva entre EIF5A2 e expressão MTA1 em cancros gástricos ( P Art < 0,001). Ambos EIF5A2 e MTA1 superexpressão foram correlacionados com a fase pT ( P = 0,018
e P
= 0,042), estádio pN ( P
= 0,037 e P
= 0,020) ea invasão linfática ( P = 0,016
e P
= 0,044). EIF5A2 ou superexpressão MTA1 foi significativamente associada com pior sobrevida global ea sobrevida livre de doença (All P Art < 0,05). A análise multivariada identificou EIF5A2 como preditor independente tanto para a sobrevida global ( P
= 0,012) e sobrevida livre de doença ( P
= 0,008) em pacientes com câncer gástrico. Nossas descobertas indicam que EIF5A2 regulação positiva desempenha um papel oncogênico importante no câncer gástrico. EIF5A2 pode representar um novo preditor para a sobrevivência pobre e é um potencial alvo terapêutico para câncer gástrico

Citation:. Meng Q-B, Kang W-M, Yu J-C, Liu Y-Q, Ma Z-Q, Zhou L, et al. (2015) sobre-expressão de Eukaryotic Tradução Fator de Iniciação 5A2 (EIF5A2) correlaciona-se com celular Agressividade e pior sobrevida no câncer gástrico. PLoS ONE 10 (3): e0119229. doi: 10.1371 /journal.pone.0119229

Editor do Academic: Jun Li, Sun Yat-sen University Medical School, CHINA

Recebido: 22 Janeiro, 2014; Aceito: 29 de janeiro de 2015; Publicação: 20 de março de 2015

Direitos de autor: © 2015 Meng et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento: Este trabalho foi apoiado por doações do Beijing Municipal Natural Science Foundation (No. 7.132.209), Província de Hubei saúde e planejamento familiar projecto de investigação científica (No. WJ2015MB137) e grandes projetos de ciência e tecnologia em Pequim City (No. D141100000414004). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

o câncer gástrico (GC) é uma doença altamente metastático e um dos mais letal das neoplasias gastrointestinais. [1] Apesar dos avanços nas terapias cirúrgicas e citotóxicos para GC, os tratamentos atuais disponíveis para pacientes com GC avançada são muito limitadas. [2, 3] para desenvolver novas estratégias terapêuticas, é crucial para elucidar os mecanismos moleculares que promovem as propriedades invasivas e metastáticas de células GC.

factor de iniciação da tradução eucariótica 5A2 (EIF5A2) está localizado na cromossoma humano 3q26.2, e é um membro da eIF5A
família de genes. [4] a superexpressão do EIF5A2
mRNA em determinadas células cancerosas humanas, em contraste com superexpressão limitada aos testículos humanos e partes do cérebro, sugere EIF5A2
é um oncogene potencial. [4] estudos anteriores descobriram que EIF5A2 foi sobre-expresso em muitos cancros humanos tais como adenocarcinoma pancreático ductal, câncer de ovário, câncer hepatocelular, câncer de pulmão, câncer colorretal e melanoma e se correlacionou com pior sobrevida de pacientes com câncer e /ou agressividade de células cancerígenas. [5-11] estudos recentes têm demonstrado que EIF5A2 tem habilidades cancerígenas através da sua ativação do eixo EIF5A2-MTA1 /C-MYC. [8] no entanto, há pouca informação disponível sobre a expressão da proteína EIF5A2, seu significado prognóstico e potencial papel oncogênico em GC humano.

Assim, foram investigados pela primeira vez a expressão de EIF5A2
em linhas celulares GC humanos e seu papel potencial na proliferação celular, migração e invasão. Em seguida, foram identificados possíveis proteínas alvo a jusante para elucidar o impacto de depleção EIF5A2 ou supra-regulação das funções celulares de células de GC. Por fim, analisamos a correlação de EIF5A2 e expressão MTA1 em GC humana e sua relevância para os fatores clínico-patológicos e sobrevida em pacientes GC.

Materiais e Métodos

Ética Declaração

A estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética da PUMCH, da Academia chinesa de Ciências Médicas e Peking Union Medical College, Beijing, China, e consentimento informado por escrito foi obtido de cada paciente.

pacientes e espécimes

tecido GC e amostras de tecidos não tumorais adjacentes combinados foram obtidas de 160 pacientes consecutivos submetidos a ressecção cirúrgica para GC primário em Peking Union Medical College Hospital (PUMCH) entre janeiro de 2002 e dezembro de 2006. Nenhum paciente recebeu quimioterapia neoadjuvante ou radioterapia. Os dados de sobrevivência foram obtidas com base em ambos os registros dos pacientes e acompanhamento por telefone. O tempo médio de acompanhamento foi de 53 meses (variação, 1-113 meses). Outros dois pares de tecidos GC frescas e tecidos da mucosa gástrica não cancerosos foram obtidas de pacientes submetidos à ressecção cirúrgica de adenocarcinoma pouco diferenciado do estômago em PUMCH em 2014.

Nós definimos a invasão linfovascular como a presença de êmbolos de células tumorais dentro de espaços rodeado por um revestimento endotelial claramente visualizado na periferia das secções de tumor. [12, 13] os pacientes foram classificados de acordo com a 7ª edição da classificação AJCC TNM para o carcinoma do estômago. [14] Lauren histotipo foi dividido em intestinal e diffuse- Categorias tipo misto. [15]

cultura celular

Cinco tipos de linhas celulares GC humanos foram obtidos a partir do Centro de celular de Institutos de Xangai de Ciências Biológicas (AGS e MGC803, Xangai, China) e o Centro de celular do Instituto de Ciências Médicas básicas (MKN45, SGC7901 e HGC27, Beijing, China). A linha de mucosa gástrica imortalizado células epiteliais GES-1 foi obtido a partir de Pequim ComWin Biotech Co., Ltd (Pequim, China). Todas as células foram cultivadas em meio RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal de bovino (FBS; Life Technologies, Carlsbad, CA, EUA) a 37 ° C numa atmosfera de ar humidificado contendo 5% de CO _{2. As células em fase logarítmica de crescimento foram utilizados para novas experiências.}

Knockdown EIF5A2 ou MTA1 por pequenos-interferindo RNAs (siRNAs)

O siRNA especificamente contra EIF5A2 e MTA1 [16] e sua não-alvo ARNsi de controlo (Life Technologies, Carlsbad, CA, EUA) foram quimicamente sintetizados para este estudo. As sequências EIF5A2 siRNA foram como se segue:
: 5'-GGAUCUUAAACUGCCAGAATT-3 ', 5'-UUCUGGCAGUUUAAGAUCCTT-3';: 5'-GGUUCACCUUGUUGGAAUUTT-3 ', 5'-AAUUCCAACAAGGUGAACCTT-3; e: 5'-GCUUCCAGCACUUACCCUATT-3 ', 5'-UAGGGUAAGUGCUGGAAGCTT-3; o não-alvo de controle (NC1) siRNA: 5'-UUC UCC GAA CGU GUC ACG UTT-3 '; 5'-ACG CAC GUU UGA CGG AGA ATT-3 '). As sequências MTA1 siRNA (siRNA Target 2, T2-siARN) foram: 5'-GCUGAGAGCAAGUUAAAGCdTdT-3 ', 5'-GCUUUAACUUGCUCUCAGCdTdT-3') e marcado com FAM siRNA (AM4620) foi usada como um controlo não segmentação de siRNA (NC2 ).

Vinte e quatro horas após o plaqueamento em placas de seis poços, as células foram transfectadas com CG 100 pmol EIF5A2 siRNA, MTA1-ou ARNsi de controlo usando o reagente de transfecção Lipofectamine 2000 (Life Technologies, Carlsbad, CA, EUA ) de acordo com as instruções do fabricante. As células foram recolhidas por transferência de Western às 48 h após a transfecção.

construção do plasmídeo e a transfecção transiente

vector de expressão EIF5A2 (pIRES2-EGFP-EIF5A2) foi sintetizado pela Life Technologies. As células foram transfectadas com o plasmídeo de controlo utilizando Lipofectamina 2000 (Life Technologies) pIRES2-EGFP-EIF5A2 ou de acordo com as instruções do fabricante.

em tempo real quantitativa de RT-PCR

O ARN total foi isolado utilizando Trizol reagentes (Life Technologies) de acordo com o protocolo do fabricante. A PCR foi realizada usando as sequências para EIF5A2: para a frente: 5 'AACTGCCAGAAGGTGAACTAGG-3'; reversa: 5'GTTTCCGTTTATTTGCAGGGT-3 'e as sequências para MTA1: frente: 5'-CCGGGCCTGCGAGAGCTGTTACAC-3'; reverso: 5'-CACGGCTTCCAGCGGCTTGCGTAC-3 '. A PCR foi realizada utilizando UltraSYBR Mistura (CWbio.Co.Ltd) de acordo com o protocolo do fabricante. A transcrição reversa foi realizada utilizando um kit de RT PrimeScript Master Mix (Takara Co., Ltd. Biotecnologia, Dalian, China). Os produtos de ADNc foram sujeitas a PCR em tempo real utilizando um kit SYBR Premix Ex Taq II (Takara Biotechnology Co. Ltd.). PCR em tempo real foi realizada em tempo real do sistema StepOnePlus PCR (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) utilizando o seguinte programa: 95 ° C durante 10 minutos, seguido por 40 ciclos de 95 ° C durante 15 segundos, e 60 ° C durante 1 minuto.
GAPDH mRNA em cada amostra foi quantificada como um controle endógeno.

Western blotting

A concentração de proteína foi quantificada utilizando um kit de ensaio de proteína BCA (Pierce Thermo Scientific). De sódio dodecil sulfato de electroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE) foi usado para separar os lisados ​​celulares. As proteínas foram transferidas para membranas de PVDF e bloqueadas com solução salina tamponada com Tris-e 0,1% de Tween 20 (TBST) contendo 5% de albumina de soro de bovino, e, em seguida, incubadas com os anticorpos primários seguintes a 4 ° C durante a noite: de coelho anti-EIF5A2 ou -C- MYC (1: 1000; Epitomics, EUA, CatálogoȪ9-1 ou 1472-1), de coelho anti-MTA1, -E-caderina ou -vimentin (1: 1000; Cell Signaling, EUA, Catálogoȴ7, 3195 ou 5741 ), ou de ratinho anti-GAPDH (1: 1000; Santa Cruz, sc-Catalogā78). As membranas foram lavadas três vezes com TBST e incubadas com peroxidase de rábano (HRP) -conjugated anticorpos secundários anti-coelho ou anti-ratinho (1: 3000; Santa Cruz, EUA, Catálogo # SC-2004 ou SC-2005) durante 1 h à temperatura ambiente. As bandas de proteína foram visualizadas usando reagentes de detecção ECL (Pierce, EUA). Os níveis de expressão relativa de proteína foram normalizadas para GAPDH.

proliferação celular ensaio

A proliferação de células MKN45 HGC27 e foi examinada utilizando um kit de contagem celular-8 (CCK-8) (Dojindo, Japão ) de acordo com as instruções do fabricante. Resumidamente, 24 horas após a transfecção com plasmídeo ou siRNA, as células foram semeadas a uma densidade de 1 x 10 ^{4 células /poço em placas de 96 poços e cultivadas durante 0, 24, 48 e 72 h. Em seguida, para os diferentes pontos de tempo, 10 � CCK-8 solução foi adicionada a cada poço e incubou-se durante 2 h. A absorvância foi lida a 450 nm num leitor de placas.}

Transwell ensaios

A capacidade migratória e invasiva das células foi detectada utilizando GC de 24 poços de cultura de células Transwell câmaras (tamanho de poro 8.0μm, Costar , Cambridge, MA, EUA) de acordo com as instruções do fabricante. Para o ensaio de invasão de células, as membranas de inserção foram pré-revestidos com Matrigel (BD, San Diego, CA, EUA). Para o ensaio de migração celular, foi usada sem Matrigel. Às 24 h pós-transfecção, as células foram semeadas a uma densidade adequada (HGC27, 5 × 10 ^{5 /ml; MKN45, 1 × 10 7 /ml) na câmara superior e cultivadas em OPTI-MEM (Gibco, EUA) sem FBS durante mais 24 h. As células foram deixadas migrar para o meio RPMI 1640 contendo FBS a 20% na câmara inferior. As células não migratórias na superfície superior da membrana foram removidos com uma ponta de algodão, e as células migratórias ligados à superfície inferior da membrana foram fixadas com paraformaldeído a 4% e coradas com H & E. Os números de células invadidas foram contadas em cinco campos seleccionados aleatoriamente sob um microscópio.}

A imuno-histoquímica (IHC) coloração e avaliação
coloração

O IHC foi realizada em secções de 5 um de espessura dos espécimes embebidos em parafina. coelho monoclonal anti-humana anticorpo EIF5A2 (Epitomics, EUA, CatálogoȪ9-1), o anticorpo anti-humano MTA1 de coelho (Cell Signaling, EUA, Catálogoȴ7) e PV-6000 Sistema de Detecção de polímero (ZSBG-bio, China) foram utilizado para a coloração de acordo com as instruções do fabricante. Em resumo, lâminas com cortes de parafina foram desparafinados com xilol e reidratados com etanol. A actividade da peroxidase endógena foi bloqueada com peróxido de hidrogénio a 3% durante 10 min. Para recuperação de antigénios, e lâminas foram fervidas em tampão de citrato 0,01 M um (pH 6,0) durante 10 min tratados por microondas, e em seguida incubada com 0,1% de tripsina, a 37 ° C durante 5 min. As lâminas foram incubadas com anticorpo monoclonal de coelho anti-humano EIF5A2 ou anticorpo MTA1 (diluição 1: 100) durante 1,5 h a 37 ° C numa câmara humidificada. Como um controlo negativo de coloração, o anticorpo primário foi substituído com IgG de coelho não-específica. Dois patologistas independentes avaliaram a coloração imuno-histoquímica de EIF5A2 e MTA1. Um método de pontuação semi-quantitativa foi usado com referência ao estudo anterior. [7]

A análise estatística

Todas as análises foram realizadas utilizando o programa SPSS 12.0 (Chicago, IL, EUA). O teste de McNemar foi utilizado para comparação de EIF5A2 ou coloração MTA1 em GC humana e amostras não tumorais adjacentes. O teste do qui-quadrado foi usado para comparar as diferenças entre as variáveis ​​categóricas, enquanto o emparelhado, bicaudal de Student t
-Testes foram usadas para comparar as diferenças entre as variáveis ​​categóricas. A correlação entre EIF5A2 e MTA1 foram analisados ​​utilizando teste de classificação de Spearman. Para análise de sobrevida univariada, curvas de sobrevida foram construídas pelo método de Kaplan-Meier e comparadas pelo teste de Log-rank. O modelo de riscos proporcionais de Cox, com análise multivariada foi utilizada para investigar os fatores prognósticos independentes. Todos P valores
foram em frente e verso, e valores P
de < 0,05 foram considerados estatisticamente significativos. Todos os experimentos foram realizados pelo menos em triplicado técnicos e biológicos.

Resultados

EIF5A2 Expressão em células de GC e tecidos e validação do
intervenção

Nós investigamos a expressão de EIF5A2 em cinco linhas de células GC e da linha da mucosa gástrica imortalizado células epiteliais GES-1 in vitro
tanto por qRT-PCR (Fig. 1A) e western blot (Fig. 1B). EIF5A2 proteína em tecidos humanos GC foi maior do que a dos tecidos não tumorais distantes emparelhados (Fig. 1C). Por causa do alto nível de expressão endógena de EIF5A2 e a eficiência de transfecção relativamente elevada em HGC27, que esta linha de células seleccionada para análise de RNAi, e seleccionado para células MKN45 EIF5A2 upregulation experiências, devido à sua relativamente baixa expressão EIF5A2 e alta eficiência de transfecção.

Todos os três siRNAs poderiam eficientemente suprimir a expressão em células EIF5A2 HGC27 (Fig. 1D, E). Utilizou-se como siRNA
EIF5A2-alvo ARNsi (T1-siARN) nas experiências subsequentes. EIF5A2 expressão foi significativamente regulada positivamente por transfecção transitória de EIF5A2 plasmídeos em células MKN45 (Fig. 1F, L). T2-siRNA poderia eficientemente suprimir a expressão MTA1 em HGC27 células (Fig. 1 H, I).

EIF5A2 ou expressão MTA1 níveis influenciou a agressividade das células GC in vitro

Knockdown de EIF5A2 por T1- siRNA proliferação celular significativamente inibida (Fig. 2A), migração e invasão (Fig. 2B) em HGC27 células em comparação com os das células parentais. Regulação positiva de EIF5A2 por expressão EIF5A2 plasmídeo promoveu aumento da proliferação (Fig. 2C), migração e invasão (Fig. 2D) de células MKN45. Knockdown de MTA1 por T2-siRNA proliferação celular significativamente inibida (Fig. 2E), a migração e invasão (Fig. 2F) em HGC27 células em comparação com os das células parentais.

Possível expressão do gene alvo ou knockdown após EIF5A2 superexpressão

Depois de knockdown de EIF5A2 HGC27 em células, os níveis do marcador de e-caderina epitelial foram regulados positivamente, enquanto que os níveis de vimentina marcador mesenquimais foram regulados negativamente e acompanhada de proteínas relacionadas com a proliferação de ciclina D1 e ciclina D3 e metástase -associated C-MYC e MTA1 regulação negativa (Fig. 3A). Em contraste, após EIF5A2 sobreexpressão em células MKN45, a expressão de E-caderina foi regulada negativamente, enquanto que o nível de vimentina foi regulada positivamente e acompanhada por ciclina D1, ciclina D3, C-MYC e regulação positiva MTA1 (Fig. 3B). superexpressão knockdown ou de EIF5A2 não teve efeito significativo sobre a expressão MMP9 em células HGC27 e MKN45 (Fig. 3A, B).

Associação de EIF5A2 e expressão MTA1 com características clínico-patológicas em pacientes com GC

os sinais positivos de EIF5A2 foram predominantemente localizado no citoplasma e núcleo das células tumorais, enquanto os sinais mta1 foram localizadas principalmente no núcleo de células de tumor (Fig. 4). Nós definimos os valores de positividade de 0-3 como o nível de expressão normal de EIF5A2 ou MTA1, enquanto os valores imunocoramento 4-12 foi definida como superexpressão de EIF5A2 ou MTA1. EIF5A2 superexpressão foi encontrado em 75 das amostras de tumor, em comparação com apenas sete dos 160 tecidos da mucosa não tumoral adjacentes correspondentes ( P Art < 0,001). Representante de coloração IHC EIF5A2 no adenocarcinoma gástrico moderately- ou pobremente diferenciadas, células tumorais e invasão de vasos não-tecido do tumor é mostrada na Fig. 4A, B, C e D, respectivamente. Dos 160 casos analisados, 70 (43,75%) foram positivas para MTA1, análise estatística dos padrões de expressão mostraram que houve uma correlação positiva entre EIF5A2 e expressão MTA1 (r = 0,510, P Art < 0,001) . As imagens típicas de coloração para a sobre-expressão de EIF5A2 MTA1 e no adenocarcinoma gástrico foram mostrados na Fig. 4E e 4F.

Como mostrado na Tabela 1, tanto EIF5A2 e superexpressão MTA1 foram positivamente correlacionada com a mais avançada fase pT ( P = 0,018
e P
= 0,042) , estágio pN ( P
= 0,037 e P
= 0,020) ea invasão linfática positivo ( P = 0,016
e P
= 0,044), enquanto eles não foram associados com outras características clínico-patológicas.

Aumento EIF5A2 ou expressão MTA1 correlacionados com pior sobrevida em pacientes GC

no último follow-up, 75 de 160 pacientes morreram. Destes, 73 pessoas morreram de recorrência do tumor. A análise Kaplan-Meier mostrou que tanto a sobrevida global em 5 anos (OS) e sobrevida livre de doença (DFS) para o grupo superexpressão EIF5A2 eram mais curtos do que aqueles do grupo de expressão EIF5A2 normal ( P Art < 0.001 e P
= 0,001, Fig. 4G, H). Consistentemente, os pacientes com superexpressão MTA1 exibido um prognóstico pobre para OS e DFS ( P Art < 0.001 e P
= 0,001)

As variáveis ​​com significância na análise univariada por. os métodos de Kaplan-Meier foram incluídos na análise multivariada de regressão de Cox. Como mostrado na Tabela S1 e S2 Mesa, análise multivariada identificou que a superexpressão de EIF5A2 era um fator independente influenciando tanto OS (taxa de risco 1,831, IC 95% 1,135-2,857, P
= 0,012, S1 Table) e DFS (hazard ratio 1.880, 95% CI1.177 para 3.002, P
= 0,008, S2 Table) dos doentes tratados com ressecção curativa para GC. No entanto, a superexpressão de MTA1 não produziu significado prognóstico independente para OS e DFS na análise multivariada.

Discussão

Eukaryotic fator de iniciação 5A 2 (EIF5A2) está localizada em uma região cromossômica frequentemente observado para instabilidade cromossómica em GC e muitos outros cancros, 3q. [17-20] EIF5A2, como um dos dois únicos isoformas da família eIF5A, confirma-se como uma proteína oncogénica e pode também ser um biomarcador importante para o prognóstico e terapêutico de alvo muitos tipos de tumores humanos. [21] Apesar de um estudo anterior havia examinado EIF5A2
expressão gênica em GC principal, o presente estudo fornece a primeira evidência do significado clínico de expressão EIF5A2 em GC humana e seu possível papel na a regulação da agressividade de células GC. [22]

em primeiro lugar, realizada EIF5A2 knockdown e experiências superexpressão in vitro
. Os resultados mostraram que a supressão de EIF5A2 em HGC27 células levaram a uma diminuição significativa da proliferação celular, migração e invasão, enquanto que a sua regulação positiva em células MKN45 resultou no inverso. Estes resultados são consistentes com os achados anteriores em outros tumores. [8, 10, 23] Também descobrimos que knockdown MTA1 em HGC27 células inibiu significativamente a proliferação celular, migração e invasão. Mas o mecanismo pelo qual EIF5A2 aumenta a agressividade de células GC ainda é desconhecida.

Por isso, realizamos mais estudos dos possíveis alvos de EIF5A2 in vitro
. Os nossos resultados mostraram que EIF5A2 regulada positivamente ciclina D1 e ciclina D3, que desempenham papéis importantes na proliferação de células de GC e regulação do ciclo celular. [24, 25] Todos estes resultados suportam a hipótese de que EIF5A2 promove a proliferação de células GC através de regulação positiva de ciclina D1 e ciclina D3. Ao mesmo tempo, estudos anteriores mostraram que EIF5A2 promove a invasão de células /metástase e epitelial-mesenquimal transição (EMT) através da activação MTA1 /C-MYC em cancro colo-rectal. [8] MTA1 e C-MYC, bem como o programa de EMT, foram também envolvido na regulação de metástase GC. [26-28] Estudámos, portanto, MTA1, C-MYC e dois marcadores associados a EMT, e-caderina e vimentina. Nossos estudos demonstraram que EIF5A2 MTA1 regulada positivamente, C-MYC e vimentina e regulado negativamente E-caderina. Todos estes resultados sugerem que EIF5A2 pode regular a migração e invasão celular pelo Regulamento de MTA1, C-MYC e EMT in vitro
, mas são necessários mais estudos para investigar os mecanismos exatos.

Os resultados do presente estudo também mostrou que a proteína EIF5A2 foi positivamente correlacionada com a fase pT e estágio pN. Resultados semelhantes foram também observados no cancro do ovário humano. [5] Estes resultados sugerem que EIF5A2 pode ser associado com a invasão tumoral e metástases nos linfonodos em certos tipos de cancros humanos, incluindo GC. Mais interessante, no estudo atual, EIF5A2 superexpressão foi também encontrada em invadir células cancerosas (invasão de vasos) e superexpressão da proteína EIF5A2 no tecido GC primária correlacionada com a presença de invasão linfática. De acordo com os resultados encontrados em estudos anteriores de outros tumores malignos humanos, incluindo tumores epiteliais do ovário, carcinoma da bexiga, cancro do pulmão e cancro colorectal, a superexpressão de EIF5A2 no estudo atual foi correlacionada com a pobre sobrevida de pacientes com GC. [5, 8, 29] Além disso, a análise multivariada mostrou que a proteína EIF5A2 é um preditor independente de pobre sobrevida em pacientes submetidos à cirurgia para GC.

MTA1, como um gene associado a metástases candidato, foram demonstradas para desempenhar o papel crítico na agressividade de células de câncer gástrico. [27] A superexpressão de MTA1 é significativamente associada com mau prognóstico em pacientes pN0 GC. [30] O presente estudo mostrou que a expressão EIF5A2 foi positivamente correlacionada com a expressão MTA1 em tecidos GC humanos. A análise imuno-histoquímica combinada em estudos in vitro mostraram que o eixo-MTA1-EIF5A2 pode desempenhar um papel importante na agressividade do cancro gástrico.

Em resumo, os resultados do presente estudo demonstraram que a sobre-expressão de EIF5A2 estava intimamente relacionado com CG proliferação celular, migração e invasão via associada à metástase proteínas MTA1. Ao mesmo tempo, EIF5A2 pode ser importante na regulação EMT em GC. Superexpressão de EIF5A2 poderia ser um fator independente prevendo uma pior sobrevida e um alvo terapêutico atractivo para GC, mas mais estudos são necessários.

Informações de Apoio
Tabela S1. Análise de fatores associados à sobrevida global (OS)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0119229.s001
(DOC)
S2 Table. Análise de fatores associados à sobrevida livre de doença (DFS)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0119229.s002
(DOC)

Reconhecimentos

Os autores gostariam de agradecer ao Sr. de-Tian Wang, Ms Yu-Feng Luo e Professor Pei Gu para seus suportes técnicos.

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