PLoS ONE: Overekspression af eukaryote translationsinitiering Factor 5A2 (EIF5A2) korrelerer med Cell Aggressivitet og ringe overlevelse i Gastric Cancer

Abstrakt

Eukaryot translationsinitiering faktor 5A2 (EIF5A2) spiller en vigtig rolle i tumor progression og prognose evaluering. Men lidt information til rådighed om dens potentielle rolle i mavekræft. Denne undersøgelse havde til formål at undersøge funktionen af ​​EIF5A2 i tumor progression og dens potentielle mekanismer. EIF5A2 udtryk blev målt i humane gastrisk cancer cellelinjer, den udødeliggjort maveslimhinden epitelial cellelinje (GES-1) og human mavekræft væv og slået ned af RNA-interferens eller opreguleret af EIF5A2 plasmid transfektion. Celleproliferation, migration og invasion blev vurderet in vitro
. Downstream mål for EIF5A2 blev undersøgt ved western blotting. EIF5A2 og dens potentielt mål metastase-associeret protein 1 (MTA1) udtryk blev undersøgt i 160 par menneskelige mavekræft og tilstødende ikke-tumor prøver vha immunhistokemisk (IHC) farvning, og dets overensstemmelse med klinisk-patologiske funktioner og overlevelse blev undersøgt. Knockdown af EIF5A2
eller MTA1
forårsagede en tilsyneladende undertrykkelse af HGC27 celleproliferation, migration og invasion. Efter knockdown af EIF5A2
i HGC27 celler, E-cadherin niveauer blev opreguleret og vimentin blev cyklin D1, cyclin D3, C-MYC og MTA1 niveauer nedreguleres. Opregulering af EIF5A2 i MKN45 celler resulterede i det omvendte. IHC Resultaterne viste en positiv korrelation mellem EIF5A2 og MTA1 udtryk i gastrisk kræft ( P
< 0,001). Både EIF5A2 og MTA1 overekspression blev korreleret med pT etape ( P
= 0,018 og P
= 0,042) PN etape ( P
= 0,037 og P
= 0,020) og lymphovascular invasion ( P
= 0,016 og P
= 0,044). EIF5A2 eller MTA1 overekspression var signifikant forbundet med dårlig samlet overlevelse og sygdomsfri overlevelse (alle P
< 0,05). Multivariat analyser identificeret EIF5A2 som en uafhængig prædiktor for både samlet overlevelse ( P
= 0,012) og sygdomsfri overlevelse ( P
= 0,008) i gastrisk kræftpatienter. Vores resultater viser, at EIF5A2 opregulering spiller en vigtig rolle i onkogen gastrisk cancer. EIF5A2 kan repræsentere en ny indikator for ringe overlevelse og er et potentielt terapeutisk mål for mavekræft

Henvisning:. Meng Q-B, Kang W-M, Yu J-C, Liu Y-Q, Ma Z-Q, Zhou L, et al. (2015) Overekspression af eukaryote translationsinitiering Factor 5A2 (EIF5A2) korrelerer med Cell Aggressivitet og ringe overlevelse i Gastric Cancer. PLoS ONE 10 (3): e0119229. doi: 10,1371 /journal.pone.0119229

Academic Redaktør: Jun Li, Sun Yat-sen University Medical School, KINA

Modtaget 22. januar 2014 Accepteret: 29 januar 2015; Udgivet: 20 Marts 2015

Copyright: © 2015 Meng et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Finansiering: Dette arbejde blev støttet af tilskud fra Beijing Municipal Natural Science Foundation (nr 7.132.209), Hubei-provinsen sundhed og familieplanlægning videnskabeligt forskningsprojekt (nr WJ2015MB137) og Major videnskabelige og teknologiske projekter i Beijing City (nr D141100000414004). De finansieringskilder havde ingen rolle i studie design, indsamling og analyse af data, beslutning om at offentliggøre, eller forberedelse af manuskriptet

Konkurrerende interesser:.. Forfatterne har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser

Introduktion

Gastrisk cancer (GC) er en yderst metastatisk sygdom og en af ​​de mest dødbringende af de gastrointestinale maligniteter. [1] trods fremskridt i kirurgisk og cytotoksiske terapier til GC, de nuværende behandlinger til rådighed for patienter med fremskreden GC er meget begrænset. [2, 3] for at udvikle nye terapeutiske strategier, er det afgørende at belyse de molekylære mekanismer, der fremmer de invasive og metastatiske egenskaber af GC celler.

eukaryot translationsinitiering faktor 5A2 (EIF5A2) er placeret på menneskelige kromosom 3q26.2, og er medlem af EIF5A
genfamilien. [4] overekspression af EIF5A2
mRNA i visse humane cancerceller, i modsætning til overekspression begrænset til menneskelige testikel og dele af hjernen, foreslår EIF5A2
er en potentiel onkogen. [4] Tidligere undersøgelser viste, at EIF5A2 blev overudtrykt i mange humane kræftformer såsom pancreas duktalt adenokarcinom, kræft i æggestokkene, hepatocellulær cancer, lungecancer, kolorektal cancer og melanom og blev korreleret til ringe overlevelse af cancerpatienter og /eller cancerceller aggressivitet. [5-11] Nyere undersøgelser har vist, at EIF5A2 har kræftfremkaldende evner gennem dens aktivering af EIF5A2-MTA1 /C-MYC-aksen. [8] dog lidt information til rådighed om EIF5A2 proteinekspression, dens prognostisk betydning og potentiale onkogenisk rolle i menneskets GC.

Derfor vi først undersøgt udtryk for EIF5A2
i humane GC cellelinjer og dens potentielle rolle i celleproliferation, migration og invasion. Dernæst vi identificeret mulige nedstrøms målproteiner at belyse effekten af ​​EIF5A2 udtømning eller opregulering på de cellulære funktioner GC celler. Endelig har vi analyseret korrelationen af ​​EIF5A2 og MTA1 udtryk i menneskelig GC og dets relevans for klinisk-patologiske faktorer og overlevelse i GC patienter.

Materialer og metoder

Etik Statement

undersøgelsen blev godkendt af den etiske komité i PUMCH, Chinese Academy of Medical Science og Peking Union Medical College, Beijing, Kina, og skriftligt informeret samtykke blev opnået fra hver patient.

Patienter og prøver

GC væv og matchede tilstødende ikke-tumor vævsprøver blev opnået fra 160 konsekutive patienter, som gennemgik kirurgisk resektion for primær GC på Peking Union Medical College Hospital (PUMCH) mellem januar 2002 december 2006. Ingen patienter fik neoadjuverende kemoterapi eller strålebehandling. blev opnået De overlevelsesdata baseret på både patienternes journaler og telefon opfølgning. Den mediane follow-up tid var 53 måneder (interval, 1-113 måneder). Yderligere to par friske GC væv og noncancerous maveslimhinden væv blev opnået fra patienter, som gennemgik kirurgisk resektion for dårligt differentieret adenocarcinom i maven på PUMCH i 2014.

Vi definerede lymphovascular invasion som tilstedeværelse af tumor celle emboli inden for rum, omgivet af en klart visualiseret endothelbeklædning i periferien af ​​tumorsektioner. [12, 13] Patienterne blev iscenesat ifølge den 7. udgave af AJCC TNM klassifikation for carcinom i maven. [14] Lauren histotype blev delt i tarm og diffus blandet type kategorier. [15]

Cell kultur

Fem typer af humane GC cellelinjer blev opnået fra Cell center of Shanghai Institutes for Biologisk Institut (AGS og MGC803, Shanghai, Kina) og Cell center Institut for Basic Medical Sciences (MKN45, SGC7901 og HGC27, Beijing, Kina). Den udødeliggjort maveslimhinden epitelial cellelinje GES-1 blev opnået fra Beijing ComWin Biotech Co., Ltd (Beijing, Kina). Alle celler blev dyrket i RPMI 1640 medium suppleret med 10% føtalt bovint serum (FBS; Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) ved 37 ° C i en fugtig atmosfære af luft indeholdende 5% CO _{2. Celler i logaritmisk vækstfase blev anvendt til yderligere forsøg.}

Knockdown EIF5A2 eller MTA1 af små-forstyrrende RNA (siRNA'er)

siRNA specifikt mod EIF5A2 og MTA1 [16] og deres ikke-targeting kontrol siRNA (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) blev kemisk syntetiseret til denne undersøgelse. De EIF5A2 siRNA-sekvenser var som følger:
: 5'-GGAUCUUAAACUGCCAGAATT-3 ', 5'UUCUGGCAGUUUAAGAUCCTT-3';: 5'-GGUUCACCUUGUUGGAAUUTT-3 ', 5'AAUUCCAACAAGGUGAACCTT-3; og: 5'-GCUUCCAGCACUUACCCUATT-3 ', 5'-UAGGGUAAGUGCUGGAAGCTT-3; den ikke-targeting kontrol (NC1) siRNA: 5'-UUC UCC GAA CGU GUC ACG UTT-3 '; 5'-ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT-3 '). De MTA1 siRNA-sekvenser (Target 2 siRNA, T2-siRNA) var: 5'-GCUGAGAGCAAGUUAAAGCdTdT-3 ', 5'-GCUUUAACUUGCUCUCAGCdTdT-3') og FAM-mærket siRNA (AM4620) blev anvendt som en ikke-targeting kontrol siRNA (NC2 ).

Fireogtyve timer efter udpladning i seks-brønds plader, blev GC-celler transficeret med 100 pmol EIF5A2-siRNA, MTA1-siRNA eller kontrol siRNA under anvendelse af lipofectamin 2000 transfektionsreagens (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA ) ifølge producentens instruktioner. Cellerne blev høstet for western blotting på 48 timer efter transfektion.

Plasmidkonstruktion og forbigående transfektion

EIF5A2 ekspressionsvektor (pIRES2-EGFP-EIF5A2) blev syntetiseret af Life Technologies. Celler blev transficeret med pIRES2-EGFP-EIF5A2 eller kontrol plasmidet under anvendelse af Lipofectamine 2000 (Life Technologies) ifølge producentens instruktioner.

Real-time kvantitativ RT-PCR

Samlet RNA blev isoleret under anvendelse TRlzol-reagens (Life Technologies) ifølge fabrikantens protokol. PCR blev udført under anvendelse sekvenserne for EIF5A2: forward: 5'- AACTGCCAGAAGGTGAACTAGG-3 '; omvendt: 5'- GTTTCCGTTTATTTGCAGGGT-3 'og sekvenserne for MTA1: fremad: 5'-CCGGGCCTGCGAGAGCTGTTACAC-3'; omvendt: 5'-CACGGCTTCCAGCGGCTTGCGTAC-3 '. PCR blev udført under anvendelse UltraSYBR Mixture (CWbio.Co.Ltd) ifølge fabrikantens protokol. Omvendt transskription blev udført ved hjælp af en PrimeScript RT Master Mix kit (TAKARA Biotechnology Co. Ltd., Dalian, Kina). CDNA-produkter blev underkastet realtids-PCR under anvendelse af en SYBR Premix Ex Taq II kit (TAKARA Biotechnology Co. Ltd.). Real-time PCR blev udført i en StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) under anvendelse af følgende program: 95 ° C i 10 minutter, efterfulgt af 40 cykler ved 95 ° C i 15 sekunder, og 60 ° C i 1 minut. GAPDH
mRNA i hver prøve blev kvantificeret som en endogen kontrol.

Western blotting

Protein koncentrationen blev kvantificeret ved hjælp af en BCA protein assay kit (Thermo Scientific Pierce). Natriumdodecylsulfat polyacrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE) blev anvendt til at adskille cellelysater. Proteiner blev overført til PVDF-membraner og blokeret med tris-bufret saltvand og 0,1% Tween 20 (TBST) indeholdende 5% bovint serumalbumin og derefter inkuberet med de følgende primære antistoffer ved 4 ° C natten over: kanin anti-EIF5A2 eller -C- MYC (1: 1000; Epitomics, USA, CatalogȪ9-1 eller 1472-1), kanin-anti-MTA1, -E-cadherin eller -vimentin (1: 1000; Cell Signaling, USA, Catalogȴ7, 3195 eller 5741 ) eller muse-anti-GAPDH (1: 1000; Santa Cruz, Catalog # sc-25.778). Membranerne blev vasket tre gange med TBST og inkuberet med peberrodsperoxidase (HRP) -konjugeret anti-kanin eller anti-mus-sekundære antistoffer (1: 3000; Santa Cruz, USA, Catalog # sc-2004 eller sc-2005) i 1 time ved stuetemperatur. Proteinbåndene blev visualiseret under anvendelse af ECL-påvisningsreagenser (Pierce, USA). De relative protein ekspressionsniveauerne blev normaliseret til GAPDH.

Cell proliferation assay

spredning af HGC27 og MKN45 celler blev undersøgt ved hjælp af en Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (Dojindo, Japan ) ifølge producentens instruktioner. Kort fortalt, 24 timer efter transfektion med siRNA eller plasmid blev cellerne podet ved en tæthed på 1 x 10 ^{4 celler /brønd i 96-brønds plader og dyrket i 0, 24, 48 og 72 timer. Derefter, på de forskellige tidspunkter, blev 10 gl CCK-8-opløsning tilsat til hver brønd og inkuberet i 2 timer. Absorbansen blev aflæst ved 450 nm på en pladelæser.}

Transwell assays

vandrende og invasive evne GC-celler blev påvist under anvendelse 24 brønde transwell cellekultur kamre (8.0μm porestørrelse, Costar , Cambridge, MA, USA) ifølge producentens anvisninger. For celleinvasion assayet blev insert membraner pre-coatet med Matrigel (BD, San Diego, CA, USA). For cellemigrationsassay blev intet Matrigel anvendes. Ved 24 timer efter transfektion blev cellerne podet ved en passende densitet (HGC27, 5 × 10 ^{5 /ml; MKN45, 1 x 10 7 /ml) i det øvre kammer og dyrket i OPTI-MEM (GIBCO, USA) uden FBS i yderligere 24 timer. Cellerne fik lov til at migrere mod RPMI 1640 medium indeholdende 20% FBS i nederste kammer. De ikke-migrerende celler på den øvre membranoverflade blev fjernet med en vatpind, og de migrerende celler fastgjort til den nedre membranoverflade blev fikseret med 4% paraformaldehyd og farvet med H &E. Antallet af invaderede celler blev talt i fem tilfældigt valgte felter under et mikroskop.}

Immunhistokemi (IHC) farvning og vurdering

IHC-farvning blev udført på 5 um tykke snit fra paraffinindlejrede prøver. Monoklonalt kanin anti-human EIF5A2 antistof (Epitomics, USA, CatalogȪ9-1), kanin anti-human MTA1 antistof (Cell Signaling, USA, Catalogȴ7) og PV-6000 Polymer Detection System (ZSBG-BIO, Kina) var anvendes til farvning i overensstemmelse med producentens anvisninger. Kort fortalt blev objektglassene med paraffinsnit afparaffiniseret med xylen og hydreret med ethanol. Endogen peroxidaseaktivitet blev blokeret med 3% hydrogenperoxid i 10 min. For antigen hentning, dias var mikrobølge-behandlede og kogt i en 0,01 M citratpuffer (pH 6,0) i 10 minutter, og derefter inkuberet med 0,1% trypsin ved 37 ° C i 5 min. Objektglassene blev inkuberet med monoklonalt kanin-anti-humant EIF5A2 eller MTA1 antistof (1: 100 fortynding) i 1,5 timer ved 37 ° C i et fugtigt kammer. Som en negativ farvning kontrol blev primært antistof erstattet med ikke-specifik kanin IgG. To uafhængige patologer evaluerede immunhistokemisk farvning af EIF5A2 og MTA1. En semikvantitativ scoring metode blev anvendt med henvisning til den tidligere undersøgelse. [7]

Statistisk analyse

Alle analyser blev udført ved anvendelse af SPSS 12.0 software (Chicago, IL, USA). Den McNemar test blev anvendt til sammenligning af EIF5A2 eller MTA1 farvning i menneskelig GC og tilstødende ikke-tumor prøver. Chi-square test blev anvendt til at sammenligne forskellene mellem kategoriske variable, mens parret, to-halet Students t
-tests blev anvendt til at sammenligne forskellene mellem kategoriske variable. Sammenhængen mellem EIF5A2 og MTA1 blev analyseret ved hjælp af Spearman rang test. For univariat overlevelse analyse blev overlevelseskurver konstrueret ved anvendelse af Kaplan-Meier-metoden og sammenlignet ved log-rank test. Cox proportional hazard model med multivariate analyser blev anvendt til at undersøge de uafhængige prognostiske faktorer. Alle P
værdier var tosidet, og P
værdier af < 0,05 blev betragtet som statistisk signifikant. Alle forsøg blev udført mindst i de tekniske og biologiske tre eksemplarer.

Resultater

EIF5A2 Expression i GC celler og væv og validering af interventionen

Vi undersøgte udtryk for EIF5A2 i fem GC cellelinier og den immortaliserede maveslimhinden epitelcellelinie GES-1 in vitro
af både QRT-PCR (fig. 1A) og western blotting (fig. 1B). EIF5A2 protein i humane GC væv var højere end for de parrede fjerne ikke-tumorvæv (fig. 1C). På grund af den høje endogene ekspressionsniveau af EIF5A2 og den relativt høje transfektionseffektivitet i HGC27, valgte vi denne cellelinie til RNAi analyse, og udvalgte MKN45 celler til EIF5A2 opregulering eksperimenter på grund af sin relativt lave EIF5A2 ekspression og høj transfektionseffektivitet.

Alle tre siRNAs kunne effektivt undertrykke EIF5A2 ekspression i HGC27 celler (fig. 1D, E). Vi brugte siRNA
som EIF5A2 målrettet siRNA (T1-siRNA) i de efterfølgende eksperimenter. EIF5A2 ekspression blev signifikant opreguleret ved transient transfektion af EIF5A2 plasmider i MKN45 celler (fig. 1 F, G). T2-siRNA kunne effektivt undertrykke MTA1 udtryk i HGC27 celler (fig. 1 H, I).

EIF5A2 eller MTA1 ekspressionsniveauerne påvirket aggressivitet GC celler in vitro

Knockdown af EIF5A2 af T1 siRNA signifikant inhiberede celleproliferation (fig. 2A), migration og invasion (fig. 2B) i HGC27 celler sammenlignet med dem af de parentale celler. Opregulering af EIF5A2 ved EIF5A2 plasmid ekspression fremmes øget proliferation (fig. 2C), migration og invasion (fig. 2D) i MKN45 celler. Knockdown af MTA1 af T2-siRNA signifikant inhiberede celleproliferation (fig. 2E), migration og invasion (fig. 2F) i HGC27 celler sammenlignet med dem af de parentale celler.

Mulig målgenekspression efter EIF5A2 knockdown eller overekspression

efter knockdown af EIF5A2 i HGC27 celler, niveauerne af epitel markør E-cadherin blev opreguleret, mens niveauerne af mesenkymale markør vimentin blev nedreguleret og ledsaget af spredningsrelaterede proteiner cyclin D1 og cyclin D3 og metastase associeret C-MYC og MTA1 nedregulering (fig. 3A). I modsætning hertil efter EIF5A2 overekspression i MKN45 celler blev ekspressionen af ​​E-cadherin nedreguleret, mens niveauet af vimentin blev opreguleret og ledsaget af cyclin D1, cyclin D3, C-MYC og MTA1 opregulering (fig. 3B). Knockdown eller overekspression af EIF5A2 havde ingen signifikant effekt på MMP9 udtryk i HGC27 og MKN45 celler (Fig. 3A, B).

Foreningen af ​​EIF5A2 og MTA1 udtryk med klinisk-patologiske træk hos patienter med GC

positive signaler af EIF5A2 blev overvejende placeret i cytoplasmaet og kernen af ​​tumorceller, mens MTA1 signaler hovedsagelig lokaliseret i kernen af ​​tumorceller (fig. 4). Vi definerede Immunofarvningen værdier 0-3 som den normale ekspressionsniveauet af EIF5A2 eller MTA1, mens immunfarvning værdier på 4-12 blev defineret som overekspression af EIF5A2 eller MTA1. EIF5A2 overekspression blev fundet i 75 af de tumor prøver, sammenlignet med kun syv af 160 matchede tilstødende ikke-tumor slimhinde væv ( P
< 0,001). Repræsentant IHC-farvning af EIF5A2 i moderately- eller dårligt differentieret gastrisk adenocarcinom invasion fartøj tumorceller og ikke-tumorvæv er vist i fig. 4A, B, C og D, henholdsvis. Af de 160 analyserede sager, 70 (43,75%) var positive for MTA1, Statistisk analyse af de ekspressionsmønstre viste, at der var en positiv korrelation mellem EIF5A2 og MTA1 udtryk (r = 0,510, P
< 0,001) . De typiske farvende billeder til overekspression af EIF5A2 og MTA1 i gastrisk adenocarcinom blev vist i fig. 4E og 4F.

Som vist i tabel 1, blev både EIF5A2 og MTA1 overekspression positivt korreleret med mere avancerede pT stadium ( P
= 0,018 og P
= 0,042) PN etape ( P
= 0,037 og P
= 0,020) og positiv lymphovascular invasion ( P
= 0,016 og P
= 0,044), mens de ikke var forbundet med andre klinisk-patologiske træk.

Øget EIF5A2 eller MTA1 udtryk korreleret med dårligere overlevelse i GC patienter

på det sidste opfølgning, havde 75 af 160 patienter døde. Af disse 73 mennesker døde af tumor tilbagefald. Kaplan-Meier analyse viste, at både 5-års samlet overlevelse (OS) og sygdomsfri overlevelse (DFS) for EIF5A2 overekspression gruppen var kortere end for den normale EIF5A2 udtrykket gruppe ( P
< 0.001 og P
= 0,001, fig. 4G, H). Konsekvent, patienter med MTA1 overekspression vises en dårlig prognose for OS og DFS ( P
< 0,001 og P
= 0,001)

Variabler med betydning i univariate analyser af. Kaplan-Meier metoder blev medtaget i den multivariate Cox regressionsanalyser. Som vist i S1 Bord og S2 Table, multivariat analyse identificeret, at overekspression af EIF5A2 var en uafhængig faktor både OS (hazard ratio 1,831, 95% CI 1,135-2,857, P
= 0,012, S1 Table) og DFS (hazard ratio 1,880, 95% CI1.177 til 3,002, P
= 0,008, S2 Table) af patienter, der får helbredende resektion for GC. Men overekspression af MTA1 ikke producere selvstændig prognostisk betydning for OS og DFS i den multivariate analyse.

Diskussion

Eukaryot indvielse faktor 5A 2 (EIF5A2) er lokaliseret på en ofte bemærket kromosomal region for kromosomal ustabilitet i GC og mange andre kræftformer, 3q. [17-20] EIF5A2, som en af ​​de eneste to isoformer af EIF5A familie, bekræftes som en onkogent protein og kan også være en vigtig biomarkør for prognosen og terapeutiske mål for mange slags humane tumorer. [21] Selv om en tidligere undersøgelse havde undersøgt EIF5A2
genekspression i primær GC, den aktuelle undersøgelse giver den første bevis på den kliniske betydning af EIF5A2 udtryk i menneskelig GC og dens mulige rolle i regulering af GC celle aggressivitet. [22]

Vi uropført EIF5A2 knockdown og overekspression eksperimenter in vitro
. Resultaterne viste, at suppression af EIF5A2 i HGC27 celler førte til et signifikant fald i celleproliferation, migration og invasion, mens dens opregulering i MKN45 celler resulterede i det omvendte. Disse resultater er i overensstemmelse med tidligere resultater i andre tumorer. [8, 10, 23] Vi fandt også, at MTA1 knockdown i HGC27 celler signifikant hæmmede celleproliferation, migration og invasion. Men den mekanisme, hvormed EIF5A2 forbedrer GC celle aggressivitet er stadig ukendt.

Derfor har vi foretaget yderligere undersøgelser af de mulige mål for EIF5A2 in vitro
. Vores resultater viste, at EIF5A2 reguleres positivt cyclin D1 og cyclin D3, som spiller vigtige roller i GC celleproliferation og cellecyklusregulering. [24, 25] Alle disse resultater understøttede den hypotese, at EIF5A2 fremmer GC-celleproliferation via opregulering af cyclin D1 og cyclin D3. Samtidig viste tidligere undersøgelser, at EIF5A2 fremmer celleinvasion /metastase og epithelial-mesenchymal overgang (EMT) gennem aktivering MTA1 /C-MYC i colorektal cancer. [8] MTA1 og C-MYC, samt EMT program, var også involveret i reguleringen af ​​GC metastaser. [26-28] Vi undersøgte derfor MTA1, C-MYC og to EMT-associerede markører, E-cadherin og vimentin. Vore undersøgelser viste, at EIF5A2 reguleres positivt MTA1, C-MYC og vimentin og negativt reguleret E-cadherin. Alle disse resultater antyder, at EIF5A2 kunne regulere celle migration og invasion ved regulering af MTA1, C-MYC og EMT in vitro
, men yderligere undersøgelser er nødvendige for at undersøge de nøjagtige mekanismer.

Resultaterne af den aktuelle undersøgelse viste også, at EIF5A2 protein var positivt korreleret med pT scene og pN scenen. Lignende resultater blev også observeret i human ovariecancer. [5] Disse resultater antyder, EIF5A2 kan være forbundet med tumorinvasion og lymfeknudemetastaser i visse typer humane cancere, herunder GC. Mere interessant, i den aktuelle undersøgelse, EIF5A2 overekspression blev også fundet i invaderende cancerceller (fartøj invasion) og overekspression af EIF5A2 protein i primære GC væv korreleret med tilstedeværelsen af ​​lymphovascular invasion. I overensstemmelse med resultater fundet i tidligere undersøgelser af andre menneskelige maligniteter, herunder epiteliale tumorer i æggestokkene, blære karcinom, lungecancer og kolorektal cancer, overekspression af EIF5A2 i den aktuelle undersøgelse blev korreleret med dårlig overlevelse af patienter med GC. [5, 8, 29] Desuden multivariat analyse viste, at EIF5A2 protein er en uafhængig prædiktor for ringe overlevelse i patienter, der undergår kirurgi for GC.

MTA1, som kandidat metastase-associerede gen, har vist sig at spille den afgørende rolle i mavekræft celle aggressivitet. [27] Overekspression af MTA1 er signifikant associeret med dårlig prognose i PN0 GC patienter. [30] Den nuværende undersøgelse viste, at EIF5A2 udtryk var positivt korreleret med MTA1 udtryk i humane GC væv. Immunohistokemisk analyse kombineret in vitro-undersøgelser vist, at EIF5A2-MTA1-aksen kan spille en vigtig rolle i gastrisk cancer aggressivitet.

Sammenfattende resultaterne af den aktuelle undersøgelse viste, at overekspression af EIF5A2 var nært beslægtet med GC celleproliferation, migration og invasion via metastase-associerede proteiner MTA1. Samtidig kan EIF5A2 være vigtige i EMT regulering i GC. Overekspression af EIF5A2 kunne være en uafhængig faktor forudsige dårlig overlevelse og et attraktivt terapeutisk mål for GC, men er behov for yderligere undersøgelser.

Støtte Information
S1 Table. Analyse af faktorer i forbindelse med den samlede overlevelse (OS)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0119229.s001
(DOC)
S2 Table. Analyse af faktorer forbundet med sygdomsfri overlevelse (DFS)
doi:. 10,1371 /journal.pone.0119229.s002
(DOC)

Tak

Forfatterne vil gerne takke hr de-Tian Wang, fru Yu-Feng Luo og professor Pei Gu for deres tekniske understøtter.

• PLoS ONE: Konsekvenserne af intratumorale Expression Niveauer af fluoropyrimidinbaseret enzymer på behandlingsresultaterne af Adjuverende S-1 Terapi i Gastric Cancer
• PLoS ONE: Afvigende CCR4 Expression er involveret i Tumor Invasion af lymfeknuder-Negative menneskelige Gastric Cancer