PLoS One: túltermelése eukarióta Translation megindítása Factor 5A2 (EIF5A2) korrelál a Cell agresszivitás és rossz túlélés Gyomor Cancer

absztrakt katalógusa

Az eukarióta transzlációs kezdő tényező 5A2 (EIF5A2) fontos szerepet játszik a progresszió és a prognózis értékelés. Ugyanakkor kevés információ áll rendelkezésre a potenciális szerepe a gyomorrák. Ezen tanulmány célja, hogy vizsgálja meg a működését EIF5A2 a progresszió és a lehetséges megoldásokat. EIF5A2 expressziót mértünk a humán gyomor rákos sejtvonalak, az immortalizált gyomornyálkahártya epiteliális sejtvonalat (GES-1) és a humán gyomorrák szövetek és leütött RNS interferencia vagy serkentett által EIF5A2 plazmid transzfekció. Sejtburjánzást, migrációs és behatolás értékelték in vitro katalógusa. A downstream célpontjai EIF5A2 vizsgáltuk Western blot. EIF5A2 és annak lehetséges célpont metasztázis-asszociált protein 1 (MTA1) expressziós vizsgáltunk 160 párokat a humán gyomorrák és a szomszédos nem-tumoros minták immunhisztokémiai (IHC) festést, valamint annak kapcsolatát a klinikopatológiai jellemzői és a túlélést vizsgáltuk. Kiütése EIF5A2 katalógusa vagy MTA1 katalógusa okozott látszólagos elnyomása HGC27 sejtburjánzást, migrációs és behatolás. Miután kiütése EIF5A2
HGC27 sejtek, E-cadherin szinteket serkentett és vimentint ciklin D1 ciklin D3, c-myc és MTA1 szintek downregulált. Felfokozását EIF5A2 a MKN45 sejtek csak a fordítottja. IHC eredmények azt mutatták, pozitív korrelációt EIF5A2 és MTA1 kifejezést gyomorrák ( P katalógusa < 0,001). Mindkét EIF5A2 és MTA1 overexpresszió korrelál pT stádium ( P katalógusa = 0,018 és P katalógusa = 0,042), pN stádium ( P katalógusa = 0,037 és P
= 0.020) és lymphovascularis invázió ( P katalógusa = 0,016 és P katalógusa = 0,044). EIF5A2 vagy MTA1 túltermelése szignifikáns összefüggést az általában gyenge túléléssel és betegségmentes túlélés (mind P katalógusa < 0,05). A többváltozós elemzések azonosított EIF5A2 mint független előrejelzője mind a teljes túlélés ( P katalógusa = 0,012), valamint a betegségmentes túlélés ( P katalógusa = 0,008) a gyomorrákos betegek. Eredményeink azt mutatják, hogy EIF5A2 upreguláció fontos onkogén szerepe a gyomorrák. EIF5A2 jelenthet új prediktor szegény túlélés és egy potenciális terápiás célpontot gyomorrák.

bevezető hivatkozás: Meng Q-B, Kang W-M, Yu J-C, Liu Y-Q, Ma Z-Q, Zhou L, et al. (2015) túltermelése eukarióta Translation megindítása Factor 5A2 (EIF5A2) korrelál a Cell agresszivitás és rossz túlélési gyomorrákban. PLoS ONE 10 (3): e0119229. doi: 10,1371 /journal.pone.0119229 katalógusa

Akadémiai Kiadó: június Li, Szun Jat-szen University Medical School, Kína katalógusa

Beérkezett: január 22, 2014; Elfogadva: január 29, 2015; Megjelent: március 20, 2015 katalógusa

Copyright: © 2015 Meng et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra katalógusa

Forrás: A kutatómunkát támogatásokból, a pekingi Városi Természettudományi Alapítvány (No. 7132209), Hubei tartomány egészségügyi és családtervezési tudományos kutatási projekt (No. WJ2015MB137) és Major tudományos és technológiai projektek Beijing City (No. D141100000414004). A finanszírozók nem volt szerepe a tanulmány tervezés, adatgyűjtés és elemzés, döntés, hogy közzéteszi, vagy a készítmény a kézirat. Katalógusa

Érdekütközés: A szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. Katalógusa

Bevezető

Gyomorrák (GC) egy rendkívül áttétes betegség és az egyik leginkább halálos a gastrointestinalis daganatok. [1] a haladás ellenére, sebészeti és citotoxikus terápiák GC, a jelenlegi kezelésekkel elérhető betegek előrehaladott GC nagyon korlátozott. [2, 3] új terápiás stratégiák, nagyon fontos, hogy megvilágítsák az molekuláris mechanizmusokat, amelyek elősegítik az invazív és metasztatikus tulajdonságai GC sejteket. katalógusa

az eukarióta transzlációs kezdő tényező 5A2 (EIF5A2) található emberi kromoszóma 3q26.2, és tagja a EIF5A
gén család. [4] túlexpressziója EIF5A2
mRNS bizonyos emberi rákos sejtek, ellentétben a túlzott mértékű expressziója korlátozódik emberi herében és részei agy, sugallja EIF5A2
potenciális onkogén. [4] a korábbi vizsgálatok megállapították, hogy EIF5A2 ben túlexpresszálódik számos emberi rákos megbetegedések, például a hasnyálmirigy-vezeték adenokarcinóma, petefészekrák, hepatocelluláris rák, tüdőrák, colorectalis rák és melanoma volt, és korrelál a gyenge túlélését rákos betegek és /vagy a rákos sejt agresszivitás. [5-11] a legújabb vizsgálatok kimutatták, hogy a EIF5A2 van rákkeltő képességei révén aktiválása a EIF5A2-MTA1 /c-myc tengelyen. [8] Mindazonáltal, kevés információ áll rendelkezésre EIF5A2 fehérje expresszió, prognosztikai jelentősége és lehetséges onkogén szerepe az emberi GC. katalógusa

Ennek megfelelően először vizsgáltuk kifejezése EIF5A2 katalógusa humán GC sejtvonalak és lehetséges szerepére sejtburjánzás, migrációs és behatolás. Ezután azonosítottuk lehetséges downstream célpontja fehérjék megvilágítására hatását EIF5A2 kimerülése vagy upreguláció a celluláris funkcióit GC sejteket. Végül elemeztük a korreláció EIF5A2 és MTA1 expresszió humán GC és jelentősége klinikopatológiai faktorok és a túlélés GC betegeknél. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Etikai Nyilatkozat katalógusa

A jóváhagyta a vizsgálatot az etikai bizottság a PUMCH, kínai Orvostudományi Akadémia Tudomány és Peking Unió Medical College, Peking, Kína, és írásos beleegyezésüket adták a betegnél. katalógusa

a betegek és a példányok

GC szövet és kiegyenlített szomszédos nem tumoros szövetet vettünk 160 egymást követő beteg átesett sebészi eltávolítását az elsődleges GC Peking Unió Medical College Hospital (PUMCH) között 2002. január és 2006. december No beteg kapott neoadjuváns kemoterápia vagy sugárkezelés. A túlélési adatok alapján kapott mind a betegek nyilvántartása és telefon nyomon követése. A medián követési idő 53 hónap volt (tartomány: 1-113 hónap). A másik két pár friss GC szövetek és jóindulatú gyomornyálkahártya szöveteket szereztünk átesett betegek sebészi eltávolítását a rosszul differenciált adenocarcinoma gyomorban PUMCH 2014. katalógusa

definiált lymphovascularis invázió jelenléte a tumorsejtek embólusok belül terek körülvéve egy világosan láthatóvá endothel bélés perifériáján tumor szakaszok. [12, 13] a betegeket rendeztek szerint a 7. kiadás a AJCC TNM osztályozás carcinoma a gyomor. [14] Lauren Szövettípus osztották bél- és diffuse- vegyes típusú kategóriában. [15] katalógusa

Sejtkultúra katalógusa

Öt típusú humán GC sejtvonalak nyert Cell Center Shanghai Institutes for Biological Sciences (AGS és MGC803, Shanghai, Kína), valamint a Cell Center Intézet Basic Medical Sciences (MKN45, SGC7901 és HGC27, Peking, Kína). A halhatatlanná gyomor nyálkahártya epiteliálissejtvonalából GES-1 kaptuk a pekingi ComWin Biotech Co., Ltd. (Peking, Kína). Minden sejteket tenyésztettünk RPMI 1640 tápközegben, amelyet 10% magzati borjúszérummal (FBS; Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) 37 ° C-on, nedvesített levegő atmoszférában, amely 5% CO _{2. A sejteket logaritmikus növekedési fázisban használtuk a további kísérletekben. Katalógusa}

Knockdown EIF5A2 vagy MTA1 kis interferáló RNS-ek (siRNS) hotelben

Az siRNS konkrétan ellen EIF5A2 és MTA1 [16], valamint a nem-célzott kontroll siRNS (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) kémiailag szintetizált ebben a vizsgálatban. A EIF5A2 siRNS-szekvenciák a következők voltak:
: 5'-GGAUCUUAAACUGCCAGAATT-3 ', 5'-UUCUGGCAGUUUAAGAUCCTT-3';: 5'-GGUUCACCUUGUUGGAAUUTT-3 ', 5'-AAUUCCAACAAGGUGAACCTT-3; és a: 5'-GCUUCCAGCACUUACCCUATT-3 ', 5'-UAGGGUAAGUGCUGGAAGCTT-3; A nem célzott ellenőrzés (NC1) siRNS 5'-UUC UCC GAA alegységei GUC ACG UTT-3 '; 5'-ACG UGA CAC GUU CGG AGA ATT-3 '). A MTA1 siRNS-szekvenciákat (Target 2 siRNS, T2-siRNS) a következők voltak: 5'-GCUGAGAGCAAGUUAAAGCdTdT-3 ', 5'-GCUUUAACUUGCUCUCAGCdTdT-3') és a FAM-jelölt siRNS (AM4620) használtunk, mint egy nem-célzási kontroll siRNS (NC2 ).

Huszonnégy órával a szélesztés után hat-mérőhelyes lemezeken, a GC-sejteket transzfektáltunk 100pmol EIF5A2-siRNS, MTA1-siRNS vagy kontroll siRNS Lipofectamine 2000 transzfekciós reagenssel (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA ) a gyártó utasításai szerint. A sejteket a Western blot 48 órával a transzfekció után.

Plazmid építési és tranziens transzfekciós

EIF5A2 expressziós vektorba (PIRES2-EGFP-EIF5A2) szintetizálunk Life Technologies. A sejteket transzfektáltuk PIRES2-EGFP-EIF5A2 vagy a kontroll plazmid Lipofectamine 2000 (Life Technologies) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint.

Valós idejű kvantitatív RT-PCR

Teljes RNS-t izoláltunk TRIzol reagenssel (Life Technologies) alkalmazásával a gyártó protokollja. A PCR-t a szekvenciákat EIF5A2: Forward: 5'AACTGCCAGAAGGTGAACTAGG-3 '; reverz: 5'GTTTCCGTTTATTTGCAGGGT-3 ', és a szekvenciákat MTA1: Forward: 5'-CCGGGCCTGCGAGAGCTGTTACAC-3'; reverz: 5'-CACGGCTTCCAGCGGCTTGCGTAC-3 '. A PCR-t UltraSYBR Keverék (CWbio.Co.Ltd) alkalmazásával a gyártó protokollja szerint. A reverz transzkripciót végeztünk PrimeScript RT Master Mix reagenskészlet (Takara Biotechnology Co. Ltd., Dalian, Kína). A cDNS-termékeket vetettük alá a valós idejű PCR-rel egy SYBR Premix Ex Taq II reagenskészlet (Takara Biotechnology Co., Ltd.). Real-time PCR-t végeztünk egy StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) alkalmazásával, a következő program: 95 ° C-on 10 percig, majd 40 ciklus 95 ° C-on 15 másodpercig és 60 ° C 1 percig. GAPDH
mRNS mindegyik mintában mennyiségileg, mint egy endogén kontroll.

Western blot

A fehérje koncentrációját mennyiségileg BCA protein assay kit (Thermo Scientific Pierce). Nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gélelektroforézis (SDS-PAGE) használtunk elválasztására sejtlizátumok. A fehérjéket átvittük PVDF-membránokra, és blokkoltuk Tris-pufferolt sóoldattal és 0,1% Tween 20-at (TBST), amely 5% szarvasmarha szérum albumin, majd inkubáljuk a következő primer antitestekkel 4 ° C hőmérsékleten egy éjszakán: nyúl anti-EIF5A2 vagy -C- MYC (1: 1000; Epitomics, USA, katalógusszámȪ9-1 vagy 1472-1), nyúl anti-MTA1, -E-cadherin vagy -vimentin (1: 1000; Cell Signaling, USA, katalógusszámȴ7, 3195 vagy 5741 ), vagy az egér anti-GAPDH (1: 1000; santa Cruz, katalógusszám # SC-25778). A membránokat háromszor mossuk TBST-vel, és inkubáltuk torma-peroxidázzal (HRP) konjugált anti-nyúl vagy anti-egér szekunder antitesttel (1: 3000; Santa Cruz, USA, katalógusszám # SC-2004 vagy SC-2005) 1 órán át szobahőmérsékleten. A fehérje sávokat láthatóvá felhasználásával ECL detektáló reagens (Pierce, USA). A relatív fehérje expressziós szintje normalizálódott GAPDH. Katalógusa

Cell proliferációs assay katalógusa

A elterjedése HGC27 és MKN45 sejtek segítségével vizsgáltuk a Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (Dojindo, Japán ) a gyártó utasításai szerint. Röviden, 24 órával a transzfekció után a siRNS vagy plazmid, a sejteket oltottunk sűrűségben 1 × 10 ^{4 sejt /lyuk 96 lyukú lemezeken tenyésztettük 0, 24, 48 és 72 órán át. Ezután a különböző időpontokban, 10 pl CCK-8-oldatot adunk az egyes lyukakhoz, és 2 órán keresztül inkubáljuk. Az abszorbanciát 450 nm-en egy lemezleolvasóval.}

Transwell assay

A migrációs és invazív képességét GC sejtek alkalmazásával detektáltuk 24 lyukú transwell sejttenyésztő kamrák (8.0μm pórusméret, Costar , Cambridge, MA, USA), a gyártó utasításai szerint. A sejt-inváziós vizsgálati eljárás, a betét membránokat előre bevont Matrigel (BD, San Diego, CA, USA). A sejt migrációs vizsgálattal, nem Matrigel használtunk. 24 óra transzfekció után a sejteket leoltottuk megfelelő sűrűséggel (HGC27, 5 × 10 ^{5 ng /ml; MKN45, 1 × 10 7 /ml) a felső kamrába, és tenyésztettük OPTI-MEM (GIBCO, USA) FBS nélküli további 24 órán át. A sejteket hagytuk vándorolni felé RPMI 1640 közegben, amely 20% FBS-t az alsó kamrában. A nem-vándorló sejtek a felső membrán felületén eltávolítottuk egy pamut tip, valamint a vándorló sejtek kapcsolódik az alsó membrán felületén fixáltuk 4% paraformaldehid és megfestettük H &E. A számok megszállták sejteket megszámoljuk, öt, véletlenszerűen kiválasztott mezőt a mikroszkóp alatt.}

immunhisztokémiai (IHC) festést és értékelése

IHC festést végeztünk 5 um vastag metszeteket paraffinba ágyazott mintákat. Monoklonális nyúl anti-humán EIF5A2 antitest (Epitomics, USA, katalógusszámȪ9-1), nyúl anti-humán MTA1 antitesttel (Cell Signaling, USA, katalógusszámȴ7), és a PV-6000 Polimer Detection System (ZSBG-BIO, Kína) voltak használtunk a festéshez összhangban a gyártó utasításai. Röviden, csúszdák paraffin metszeteket paraffint xilollal eltávolítjuk és rehidratált etanollal. Az endogén peroxidáz aktivitást blokkoltuk 3% -os hidrogén-peroxid 10 percig. Az antigén-visszanyerés, tárgylemezeket mikrohullámú-kezelt és a főtt egy 0,01 M citrát-puffer (pH = 6,0) 10 percig, majd azt követően inkubáltuk 0,1% tripszint 37 ° C-on 5 percig. A metszeteket monoklonális nyúl anti-humán EIF5A2 vagy MTA1 antitesttel (1: 100 hígítás) 1,5 órán át 37 ° C-on, nedvesített kamrában. Ennek negatív festési kontroll, primer antitest helyett nem-specifikus nyúl IgG-vel. Két független patológusok értékelte immunhisztokémiai festésével EIF5A2 és MTA1. Szemikvantitatív pontozási módszert alkalmaztuk, hivatkozással a korábbi tanulmány. [7]

Statisztikai analízis

Minden analízist SPSS 12.0 szoftver (Chicago, IL, USA). A McNemar tesztet alkalmaztunk összehasonlítás EIF5A2 vagy MTA1 festődés a humán GC és a szomszédos nem tumoros minták. A chi-négyzet próbát alkalmaztunk összehasonlítani különbség kategorikus változók, míg a páros, két mintás Student t katalógusa -tests használták összehasonlítani különbség kategorikus változók. A korreláció EIF5A2 és MTA1 elemeztük a Spearman tesztet. Mert egyváltozós túlélési analízis túlélési görbéket vettünk a Kaplan-Meier-módszerrel, és összehasonlítottuk a Log-rank teszt. A Cox-féle arányos kockázati modellt többváltozós elemzés vizsgálatára alkalmaztuk független prognosztikai tényezők. Minden P katalógusa értékek kétoldalas, és P katalógusa értékei < 0,05 tekintettük statisztikailag szignifikánsnak. Minden kísérletet legalább a technikai és biológiai háromszoros ismétlésben. Katalógusa

Eredmények katalógusa

EIF5A2 Expression GC sejtek és szövetek és validálása az intervenciós katalógusa

Megvizsgáltuk a kifejezés EIF5A2 a öt GC sejtvonalak és az immortalizált gyomornyálkahártya epiteliális sejtvonal GES-1 in vitro
mind qRT-PCR (ábra. 1A) és Western-blot (ábra. 1B). EIF5A2 fehérje a humán GC szövetekben magasabb volt, mint a párosított távoli nem tumoros szövetekben (ábra. 1C). Mivel a magas endogén expressziós szintje EIF5A2 és a viszonylag magas transzfekciós hatékonyságot HGC27, kiválasztottunk ez a sejtvonal az RNSi elemzés, és a kiválasztott MKN45 sejtek EIF5A2 upreguláció kísérletek miatt viszonylag alacsony EIF5A2 expresszióját és magas transzfekciós hatékonyság.

a három siRNS lehetne hatékonyan elnyomja EIF5A2 kifejezést HGC27 sejtek (ábra. 1D, E). Mi használt siRNS
, mint EIF5A2 célzott siRNS (T1-siRNS) az ezt követő kísérletekben. EIF5A2 expresszió szignifikánsan emelkedett tranziens transzfekciójával EIF5A2 plazmidok MKN45 sejtek (ábra. 1F, G). T2-siRNS lehetne hatékonyan elnyomja MTA1 kifejezést HGC27 sejtek (ábra. 1 H, I). Katalógusa

EIF5A2 vagy MTA1 expressziós szint befolyásolja az agresszivitás a GC-sejtek in vitro katalógusa

kiütése EIF5A2 által T1 siRNS szignifikánsan gátolta a sejtproliferációt (2A.), a migrációt és inváziót (ábra. 2B) HGC27 sejtekben képest a szülői sejtekben. Felfokozását EIF5A2 által EIF5A2 plazmid kifejező támogatni fokozott proliferáció (ábra. 2C), migrációs és behatolás (ábra. 2D) a MKN45 sejteket. Kiütése MTA1 T2-siRNS jelentősen gátolta sejtburjánzás (ábra. 2E), migrációs és behatolás (ábra. 2F) a HGC27 sejtek képest a szülői sejtek. Katalógusa

Lehetséges génexpresszió után EIF5A2 hatást vagy overexpressziója

Miután kiütése EIF5A2 a HGC27 sejtekben, a szintek a epithelialis marker E-cadherin arra serkentett, miközben a szintje a mesenchymális marker vimentin arra downregulált és kíséri proliferáció kapcsolódó fehérjék cyclin D1 és ciklin D3 és metasztázis -asszociált c-myc és MTA1 alulszabályozottsághoz (3A.). Ezzel szemben, miután EIF5A2 overexpresszió MKN45 sejtekben, a kifejezés az E-cadherin-ben downregulált, míg a szint a vimentin volt túlszabályozott és kíséri ciklin D1, ciklin D3, c-myc és MTA1 upreguláció (ábra. 3B). Kiütés vagy túltermelése EIF5A2 nem volt jelentős hatása a MMP9 expressziója HGC27 és MKN45 sejtek (3A., B). Katalógusa

Szövetsége EIF5A2 és MTA1 kifejezés klinikopatológiai jellemzők betegeknél GC katalógusa

Pozitív jeleket EIF5A2 túlnyomórészt található a citoplazmában és a sejtmagban a tumorsejtek, míg MTA1 jelek elsősorban a sejtmagban a tumorsejtek (ábra. 4). Mi határozza meg a immunfestődést értékei 0-3, mint a normális expressziós szintje EIF5A2 vagy MTA1, míg immunfesté értékei 4-12 definiáltuk túltermelése EIF5A2 vagy MTA1. EIF5A2 overexpresszió találtak 75 a tumor minták, szemben a csak hét 160 párosított szomszédos, nem-tumor nyálkahártyaszövetek ( p
< 0,001). Reprezentatív IHC festéssel EIF5A2 a moderately- vagy gyengén differenciált gyomor adenokarcinóma, hajó invázió tumorsejtek és nem tumoros szövetet ábrán látható. 4A, B, C és D, ill. A 160 elemzett esetekben, 70 (43,75%) volt pozitív MTA1, statisztikai elemzése expressziós mintázat azt mutatta, hogy a pozitív korreláció EIF5A2 és MTA1 kifejezés (r = 0,510, P katalógusa < 0,001) . A tipikus festődés kép overexpressziója EIF5A2 és MTA1 a gyomor adenokarcinóma arra ábrán látható. 4E és 4F. Katalógusa

Mivel az 1. táblázatban látható, mind EIF5A2 és MTA1 túltermelése pozitívan korrelál a fejlettebb pT stádium ( P katalógusa = 0,018 és P katalógusa = 0,042) , pN stádium ( P katalógusa = 0,037 és P katalógusa = 0,020), és pozitív lymphovascularis invázió ( P katalógusa = 0,016 és P katalógusa = 0,044), mivel ezeket nem társul más klinikopatológiai jellemzői. katalógusa

fokozott EIF5A2 vagy MTA1 kifejezés korrelál rosszabb túlélési GC betegek katalógusa

az utolsó utánkövetés 75 160 beteg halt meg. Ezek közül 73 ember halt meg a daganat kiújulásának. A Kaplan-Meier analízis azt mutatta, hogy mind az 5 éves teljes túlélés (OS) és betegségmentes túlélés (DFS) az EIF5A2 túltermelése csoportban rövidebb, mint a normál EIF5A2 kifejezés csoport ( P katalógusa < 0,001 és P katalógusa = 0,001, Fig. 4G, H). Következetesen, betegeknél MTA1 túltermelése megjelenik a rossz prognózist az OS és DFS ( P katalógusa < 0,001 és P katalógusa = 0,001). Katalógusa

változók szignifikancia egyváltozós elemzés a Kaplan-Meier módszer bekerült a többváltozós Cox regressziós analízissel. Amint az S1 és S2 táblázat Table, többváltozós elemzés megállapította, hogy túltermelése EIF5A2 volt önálló befolyásoló tényező mind az OS (kockázati arány 1,831, 95% CI 1,135-2,857, P katalógusa = 0,012, S1 táblázat) és DFS (kockázati arány 1,880, 95% CI1.177 a 3,002, P katalógusa = 0,008, S2 táblázat) kapó betegek kuratív rezekció GC. Azonban a túlzott kifejeződése MTA1 nem termel független prognosztikai jelentősége OS és DFS többváltozós elemzés. Katalógusa

Vita katalógusa

Az eukarióta iniciációs faktor 5A 2 (EIF5A2) lokalizálódik kromoszómális régió gyakran megjegyezte a kromoszóma instabilitás GC és sok más rákos megbetegedések, 3q. [17-20] EIF5A2, mint az egyik csak két izoformái EIF5A család, megerősítik a onkogén protein, és ugyancsak fontos biomarker a prognózis és terápiás cél sokféle emberi daganatok. [21] Bár a korábbi tanulmány is vizsgálta EIF5A2 katalógusa gén expressziója primer GC, a jelenlegi tanulmány, az első bizonyíték a klinikai jelentősége EIF5A2 kifejezés humán GC és lehetséges szerepe szabályozásának GC sejt agresszivitás. [22] katalógusa

ősbemutatója EIF5A2 kiütése és túltermelése kísérletek in vitro katalógusa. Az eredmények azt mutatták, hogy elnyomása EIF5A2 a HGC27 sejtekben vezetett jelentős csökkenését a sejtproliferációt, migrációt és invázió, míg a upreguláció a MKN45 sejtekben eredményezte az ellenkezője. Ezek az eredmények összhangban vannak a korábbi megállapításaival más tumorok. [8, 10, 23] Azt is megállapították, hogy MTA1 knockdown a HGC27 sejtek szignifikánsan gátolta a sejtproliferációt, a migrációt és inváziót. De a mechanizmus, amellyel EIF5A2 fokozza GC sejt agresszivitás még ismeretlen. Katalógusa

Ezért végeztünk további vizsgálatok a lehetséges célpontjait EIF5A2 in vitro katalógusa. Eredményeink azt mutatták, hogy EIF5A2 pozitívan szabályozza a ciklin D1 és ciklin D3, amely fontos szerepet játszik a GC sejtproliferáció és a sejtciklus szabályozásában. [24, 25] Mindezek az eredmények támogatják azt a hipotézist, hogy a EIF5A2 elősegíti GC sejtproliferációt keresztül fokozza a ciklin D1 és ciklin D3. Ugyanakkor, a korábbi tanulmányok azt mutatták, hogy EIF5A2 elősegíti a sejtek invázióját /metasztázis és epithelialis-mesenchymalis átmenet (EMT) aktiválásával MTA1 /c-myc vastagbélrákban. [8] MTA1 és c-Myc, valamint az EMT program is részt vettek szabályozásában GC áttét. [26-28] ezért megvizsgálták MTA1, c-myc és két EMT-kapcsolt markerek, E-cadherin és vimentin. A vizsgálatok kimutatták, hogy EIF5A2 pozitívan szabályozza MTA1, c-myc és vimentin és negatívan szabályozott E-cadherin. Mindezek az eredmények arra utalnak, hogy EIF5A2 lehet szabályozni a sejtek migrációját és inváziója szabályozása MTA1, c-myc és EMT in vitro katalógusa, de további vizsgálatok szükségesek, hogy vizsgálja meg a pontos hatásmechanizmus. Katalógusa

Az eredmények a jelenlegi tanulmány azt is kimutatta, hogy EIF5A2 fehérje pozitívan korrelál a pT stádium és pn színpadon. Hasonló eredményeket figyeltek meg a humán petefészekrák. [5] Ezek az eredmények azt sugallják, hogy EIF5A2 összefüggésben lehet a tumor invázió és a nyirokcsomó-metasztázis bizonyos típusú humán rákok, beleértve a GC. Még érdekesebb, hogy a jelenlegi vizsgálatban, EIF5A2 overexpresszió is találtak betörő rákos sejtekben (tartály invázió) és overexpressziója EIF5A2 fehérje elsődleges GC szövetben korrelált jelenlétében lymphovascularis invázió. Összhangban a találat a korábbi tanulmányok más humán rosszindulatú betegségek, beleértve a epithelialis petefészek-tumorok, húgyhólyag- karcinóma, tüdőrák, és a kolorektális rák, túlexpressziója EIF5A2 a jelenlegi vizsgálatban korrelációt mutatott a szegény betegek túlélési GC. [5, 8, 29] Ezen túlmenően, többváltozós elemzés azt mutatta, hogy EIF5A2 protein egy független előrejelzője szegény túlélési műtéten átesett betegek számára GC.

MTA1, mint egy jelölt metasztázis-asszociált gén, kimutatták, hogy játszani a kritikus szerepet gyomor rákos sejtek agresszivitását. [27] túltermelése MTA1 szignifikánsan összefügg a rossz prognózissal pN0 GC betegeknél. [30] A jelenlegi tanulmány kimutatta, hogy EIF5A2 kifejezés pozitív korrelációt mutatott a MTA1 kifejezés humán GC szövetekben. Immunhisztokémiai analízis kombinált in vitro vizsgálatok kimutatták, hogy a EIF5A2-MTA1-tengely fontos szerepet játszanak a gyomorrák agresszivitás.

Összefoglalva, az eredmények a jelenlegi tanulmány kimutatta, hogy a túlzott mértékű expressziója EIF5A2 szorosan kapcsolódik GC sejtburjánzást, migrációs és behatolás útján metasztázis-asszociált fehérjék MTA1. Ugyanakkor, EIF5A2 fontosak lehetnek EMT szabályozás GC. Túlexpressziója EIF5A2 lehet független tényezőnek előrejelzésében szegény túlélési és vonzó terápiás célpont GC, de további vizsgálatok szükségesek. Katalógusa

alátámasztó információk
S1 táblázat. Elemzés kapcsolatos tényező a teljes túlélés (OS). Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0119229.s001 katalógusa (DOC) hotelben S2 táblázat. Elemzés kapcsolatos tényező betegségmentes túlélés (DFS). Katalógusa doi: 10,1371 /journal.pone.0119229.s002 katalógusa (DOC) hotelben

Köszönetnyilvánítás katalógusa

A szerzők szeretnék megköszönni Mr De-Tian Wang asszony Yu-Feng Luo professzor Pei Gu azok műszaki támogat. katalógusa

• PLoS One: Hatása Intratumoralis expressziós szintet fluoropirimidint metabolizáló enzimek a kezelés kimenetelét adjuváns S-1 terápia gyomorrákban
• PLoS One: Az aberráns CCR4 Expression részt vesz a tumor invázióban nyirokcsomó-negatív humán gyomorkarcinóma