PLoS ONE: Overexpressie van eukaryote translatie initiatie Factor 5A2 (EIF5A2) correleert met de Cel Agressiviteit en slechte overleving in Gastric Cancer

Abstract

Eukaryotische translatie initiatie factor 5A2 (EIF5A2) speelt een belangrijke rol in de progressie van de tumor en de prognose evalueren. Er is echter weinig informatie beschikbaar is over de mogelijke rol bij maagkanker. Dit onderzoek was gericht op de functie van EIF5A2 bij tumorprogressie en de mogelijke mechanismen te onderzoeken. EIF5A2 expressie werd gemeten in menselijke maagkanker cellijnen, het onsterfelijk maagslijmvlies epitheliale cellijn (GES-1) en menselijke maagkanker weefsels en neergeslagen door RNA interferentie of gereguleerd door EIF5A2 plasmide transfectie. Celproliferatie, migratie en invasie werden beoordeeld In vitro
. De stroomafwaartse doelwitten van EIF5A2 werden onderzocht door western blotting. EIF5A2 en de mogelijke target-metastase-geassocieerd eiwit 1 (MTA1) expressie werden 160 paren van menselijke maagkanker en naburige niet-tumormonsters middels immunohistochemie (IHC) kleuring onderzocht, en de correlatie met klinische en pathologische kenmerken en overleving onderzocht. Knockdown van EIF5A2 golfreizen of MTA1
veroorzaakt een schijnbare onderdrukking van HGC27 celproliferatie, migratie en invasie. Na de knock-down van de EIF5A2
in HGC27 cellen, E-cadherine niveaus werden opgereguleerd en vimentine, cycline D1, cycline D3, C-MYC en MTA1 niveaus werden neerwaarts gereguleerd. Opregulatie van EIF5A2 in MKN45 cellen resulteerde in het omgekeerde. IHC resultaten toonden een positieve correlatie tussen EIF5A2 en MTA1 expressie in maagkanker ( P
< 0,001). Zowel EIF5A2 en MTA1 overexpressie werden gecorreleerd met pT stadium ( P
= 0.018 en P
= 0,042), pN stadium ( P
= 0,037 en P
= 0,020) en lymfovasculaire invasie ( P
= 0,016 en P
= 0,044). EIF5A2 of MTA1 overexpressie was significant geassocieerd met een slechte algemene overleving en ziektevrije overleving (All P Restaurant < 0,05). Multivariate analyses geïdentificeerd EIF5A2 als een onafhankelijke voorspeller voor zowel de totale overleving ( P
= 0,012) en ziektevrije overleving ( P
= 0,008) bij maagkanker patiënten. Onze bevindingen wijzen erop dat EIF5A2 opregulatie een belangrijke oncogene rol speelt bij maagkanker. EIF5A2 kan een nieuwe voorspeller van een slechte overleving vormen en een potentieel therapeutisch doel voor maagkanker

Citation:. Meng Q-B, Kang W-M, Yu J-C, Liu Y-Q, Ma Z-Q, Zhou L, et al. (2015) Overexpressie van eukaryote translatie initiatie Factor 5A2 (EIF5A2) correleert met de Cel Agressiviteit en slechte overleving bij maagkanker. PLoS ONE 10 (3): e0119229. doi: 10.1371 /journal.pone.0119229

Academic Editor: Jun Li, Sun Yat-sen University Medical School, CHINA

Ontvangen: 22 januari 2014; Aanvaard: 29 januari 2015; Gepubliceerd: 20 maart 2015

Copyright: © 2015 Meng et al. Dit is een open toegang Artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering: Dit werk werd ondersteund door subsidies van de Beijing Municipal Natural Science Foundation (No. 7.132.209), de provincie Hubei gezondheid en gezinsplanning wetenschappelijk onderzoeksproject (No. WJ2015MB137) en Major wetenschappelijke en technologische projecten in Beijing City (No. D141100000414004). De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Maagkanker (GC) is een zeer metastatische ziekte en één van de meest dodelijke van de gastrointestinale maligniteiten. [1] Ondanks de vooruitgang in chirurgische en cytotoxische therapieën voor GC, de huidige behandelingen voor patiënten met gevorderde GC zeer beperkt. [2, 3] van nieuwe therapeutische strategieën te ontwikkelen, is het essentieel om de moleculaire mechanismen die de invasieve en metastatische eigenschappen van GC cellen te bevorderen helderen.

Eukaryotische translatie initiatie factor 5A2 (EIF5A2) zich op humaan chromosoom 3q26.2, en is een lid van de EIF5A
genfamilie. [4] overexpressie van EIF5A2
mRNA in bepaalde menselijke kankercellen, in tegenstelling tot overexpressie beperkt tot menselijke testis en delen van de hersenen, suggereert EIF5A2
een potentieel oncogen. [4] Vorige studies gevonden dat EIF5A2 in vele menselijke kankers is overexpressie zoals pancreatisch ductaal adenocarcinoom, eierstokkanker, hepatocellulaire kanker, longkanker, colorectale kanker en melanomen , en is gecorreleerd met slechte overleving van kankerpatiënten en /of kankercel agressiviteit. [5-11] Recente studies hebben aangetoond dat EIF5A2 heeft carcinogeen vaardigheden door de activering van de EIF5A2-MTA1 /C-MYC as. [8] echter, weinig informatie beschikbaar is over EIF5A2 eiwit expressie, zijn prognostische betekenis en de potentiële oncogene rol in de menselijke GC.

Daarom hebben we eerst onderzocht de expressie van EIF5A2
in menselijke GC cellijnen en zijn potentiële rol celproliferatie, migratie en invasie. Vervolgens identificeerden we mogelijk stroomafwaarts doeleiwitten het effect van EIF5A2 uitputting of opregulatie van de cellulaire functies van GC cellen helderen. Tot slot, analyseerden we de correlatie van EIF5A2 en MTA1 expressie in menselijke GC en de relevantie ervan voor klinisch-pathologische factoren en overleving in GC patiënten.

Materialen en methoden

Ethics Verklaring

De studie werd goedgekeurd door de ethische commissie van PUMCH, de Chinese Academie van Medische Wetenschappen en Peking Union Medical College, Beijing, China, en schriftelijke toestemming werd verkregen van elke patiënt.

Patiënten en monsters

GC weefsel en de aangrenzende niet-tumorweefsel monsters geëvenaard werden verkregen van 160 opeenvolgende patiënten die een chirurgische resectie voor primair GC onderging in Peking Union Medical College Hospital (PUMCH) tussen januari 2002 en december 2006. Geen patiënten kregen neo-adjuvante chemotherapie of radiotherapie. De overleving gegevens werden verkregen op basis van zowel platen en telefonische follow-up van de patiënt. De mediane follow-up tijd was 53 maanden (range, 1-113 maanden). Nog twee paren GC verse weefsels en goedaardige maagslijmvlies weefsels werden verkregen van patiënten die chirurgische resectie ondergaan in 2014.
voor slecht gedifferentieerd adenocarcinoom van de maag PUMCH

gedefinieerd lymfovasculaire invasie als de aanwezigheid van tumorcelembolen binnen ruimten omgeven door een duidelijk gevisualiseerd endotheliale voering aan de periferie van tumorsecties. [12, 13] Patiënten werden opgevoerd volgens de 7e editie van de AJCC TNM classificatie voor carcinoom van de maag. [14] Lauren histotype bestond uit darm- en diffuse- gemengde categorieën. [15]

Cell cultuur

Vijf types van het humaan GC cellijnen werden verkregen uit de cel centrum van Shanghai Institutes voor Biologische Wetenschappen (AGS en MGC803, Shanghai, China) en de Cell Center van het Instituut van Basic Medische Wetenschappen (MKN45, SGC7901 en HGC27, Beijing, China). De vereeuwigd maagslijmvlies epitheliale cellijn GES-1 werd verkregen uit Beijing ComWin Biotech Co, Ltd (Beijing, China). Alle cellen werden gekweekt in RPMI 1640 medium aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS, Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) bij 37 ° C in een bevochtigde atmosfeer met 5% CO _{2. Cellen in logaritmische groeifase werden gebruikt voor verdere experimenten.}

Knockdown EIF5A2 of MTA1 door kleine interfererende RNA's (siRNA's)

Het siRNA specifiek tegen EIF5A2 en MTA1 [16] en hun niet-targeting control siRNA (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) werden chemisch gesynthetiseerd voor studie. De EIF5A2 siRNA sequenties waren als volgt:
: 5'-GGAUCUUAAACUGCCAGAATT-3 ', 5'UUCUGGCAGUUUAAGAUCCTT-3';: 5'-GGUUCACCUUGUUGGAAUUTT-3 ', 5'-AAUUCCAACAAGGUGAACCTT 3; en: 5'-GCUUCCAGCACUUACCCUATT-3 ', 5'-UAGGGUAAGUGCUGGAAGCTT-3; de niet-targeting control (NC1) siRNA: 5'-UUC UCC GAA CGU GUC ACG UTT-3 '; 5'-ACG CAC UGA GUU CGG AGA ATT-3 '). De MTA1 siRNA sequenties (Target 2 siRNA, T2-siRNA) waren: 5'-GCUGAGAGCAAGUUAAAGCdTdT-3 ', 5'-GCUUUAACUUGCUCUCAGCdTdT-3') en FAM gelabelde siRNA (AM4620) werd gebruikt als een niet-targeting control siRNA (NC2 ).

Vierentwintig uur na het uitplaten in platen met zes putjes werden GC-cellen getransfecteerd met 100 pmol siRNA-EIF5A2, MTA1-siRNA of controle siRNA gebruik van Lipofectamine 2000 transfectiereagens (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA ) volgens de instructies van de fabrikant. De cellen werden geoogst voor Western blotting op 48 uur na transfectie.

Plasmideconstructie en transiënte transfectie

EIF5A2 expressievector (pIRES2-EGFP-EIF5A2) gesynthetiseerd door Life Technologies. Cellen werden getransfecteerd met pIRES2-EGFP-EIF5A2 of controleplasmide gebruik van Lipofectamine 2000 (Life Technologies) volgens de instructies van de fabrikant.

Real-time kwantitatieve RT-PCR

Totaal RNA werd geïsoleerd met behulp van TRIzol Reagent (Life Technologies) volgens het protocol van de fabrikant. PCR werd uitgevoerd met de sequenties voor EIF5A2: voorwaarts: 5'- AACTGCCAGAAGGTGAACTAGG-3 '; reverse: 5'GTTTCCGTTTATTTGCAGGGT-3 'en de sequenties voor MTA1: forward: 5'-CCGGGCCTGCGAGAGCTGTTACAC-3'; reverse: 5'-CACGGCTTCCAGCGGCTTGCGTAC-3 '. PCR werd uitgevoerd met behulp UltraSYBR Mengsel (CWbio.Co.Ltd) volgens het protocol van de fabrikant. Reverse transcriptie werd uitgevoerd met behulp van een PrimeScript RT Master Mix kit (Takara Biotechnologie Co, Ltd, Dalian, China). De cDNA-producten werden onderworpen aan real-time PCR met gebruik van een SYBR Premix Ex Taq II kit (TAKARA Biotechnology Co. Ltd.). Real-time PCR werd uitgevoerd in een StepOnePlus Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) onder toepassing van het volgende programma: 95 ° C gedurende 10 minuten, gevolgd door 40 cycli van 95 ° C gedurende 15 seconden en 60 ° C gedurende 1 minuut. GAPDH
mRNA in elk monster werd gekwantificeerd als endogene controle.

Western blotting

De eiwitconcentratie werd gekwantificeerd onder toepassing van een BCA proteïne assay kit (Thermo Scientific Pierce). Natrium dodecylsulfaat polyacrylamide gelelektroforese (SDS-PAGE) werd gebruikt om cellysaten scheiden. Eiwitten werden overgebracht op PVDF membranen en geblokkeerd met Tris-gebufferde zoutoplossing en 0,1% Tween 20 (TBST) bevattende 5% runderserum albumine, en vervolgens geïncubeerd met de volgende primaire antilichamen bij 4 ° C geïncubeerd: konijn anti-EIF5A2 of -C- MYC (1: 1000; Epitomics, USA, CatalogȪ9-1 of 1472-1), konijn anti-MTA1, -E-cadherine of -vimentin (1: 1000, Cell Signaling, USA, Catalogȴ7, 3195 of 5741 ), of de muis anti-GAPDH (1: 1000, Santa Cruz, Catalog # sc-25778). De membranen werden drie keer gewassen met TBST en geïncubeerd met mierikswortelperoxidase (HRP) geconjugeerd anti-konijn of anti-muis secundaire antilichamen (1: 3000, Santa Cruz, USA, Catalogus # sc-2004 of sc-2005) gedurende 1 h op kamertemperatuur. De eiwitbanden werden zichtbaar gemaakt ECL detectie reagens (Pierce, USA). De relatieve eiwit expressie niveaus waren genormaliseerd op GAPDH.

Cell proliferatie assay

De proliferatie van HGC27 en MKN45 cellen werd onderzocht met behulp van een Cell Counting Kit-8 (CCK-8) (DOJINDO, Japan ) volgens de instructies van de fabrikant. Kort, 24 uur na transfectie met siRNA of plasmide werden de cellen geënt bij een dichtheid van 1 x 10 ^{4 cellen /well in 96-wells platen en gedurende 0, 24, 48 en 72 uur. Vervolgens, op verschillende tijdstippen, 10 uL CCK-8 werd aan elk putje toegevoegd en gedurende 2 uur. De absorptie werd afgelezen bij 450 nm op een plaat reader.}

Transwell assays

De trekkende en invasieve vermogen van GC cellen werd gedetecteerd met behulp van 24-well transwell celkweek kamers (8.0μm poriën, Costar , Cambridge, MA, USA) volgens de instructies van de fabrikant. Voor de invasie assay, het inzetstuk membranen werden vooraf bekleed met Matrigel (BD, San Diego, CA, USA). Voor de celmigratie assay, werd geen Matrigel gebruikt. Op 24 uur na transfectie werden de cellen geënt met een geschikte dichtheid (HGC27, 5 x 10 ^{5 /ml, MKN45, 1 x 10 7 /ml) in de bovenste kamer en gekweekt in OPTI-MEM (GIBCO, USA) zonder FBS gedurende nog eens 24 uur. Men liet de cellen te migreren naar het RPMI 1640 medium met 20% FBS in de onderste kamer. De niet-migrerende cellen op de bovenste membraanoppervlak verwijderd met een wattenstaafje en de migrerende cellen bevestigd aan het onderste membraanoppervlak werden gefixeerd met 4% paraformaldehyde en gekleurd met H &E. Het aantal binnengedrongen cellen werden geteld in vijf willekeurig gekozen velden onder een microscoop.}

immunohistochemie (IHC) kleuring en beoordeling

IHC-kleuring werd uitgevoerd op 5 urn dikke coupes van in paraffine ingebedde monsters. Monoklonale konijnen anti-humaan antilichaam EIF5A2 (Epitomics, USA, CatalogȪ9-1), konijn anti-humaan MTA1 antilichaam (Cell Signaling, USA, Catalogȴ7) en PV-6000 Polymer Detection System (ZSBG-BIO, China) waren gebruikt voor het kleuren volgens de instructies van de fabrikant. Kortom, slides met paraffine coupes werden van paraffine ontdaan en gerehydrateerd met xyleen met ethanol. Endogene peroxidase activiteit werd geblokkeerd met 3% waterstofperoxide gedurende 10 minuten. Voor antigen retrieval, glijbanen waren microgolven behandeld en gekookt in een 0,01 M citraatbuffer (pH 6,0) gedurende 10 min, en vervolgens geïncubeerd met 0,1% trypsine bij 37 ° C gedurende 5 minuten. De glasplaatjes werden geïncubeerd met monoklonale konijnen anti-humaan EIF5A2 of MTA1 antilichaam (1: 100 verdunning) gedurende 1,5 uur bij 37 ° C in een bevochtigde kamer. Als negatieve kleuring controle werd primair antilichaam vervangen door niet-specifieke konijn IgG. Twee onafhankelijke pathologen evalueerden de immunohistochemische kleuring van EIF5A2 en MTA1. Een semikwantitatieve scoremethode werd gebruikt met betrekking tot de eerdere studie. [7]

Statistische analyse

Alle analyses werden uitgevoerd met SPSS 12.0 software (Chicago, IL, USA). De McNemar test werd gebruikt voor vergelijking van EIF5A2 of MTA1 kleuring in menselijke GC en naburige niet-tumormonsters. De chi-kwadraat test werd gebruikt om de verschillen tussen categorische variabelen te vergelijken, terwijl de gepaarde, tweezijdige Student's t
-testen werden gebruikt om de verschillen tussen categorische variabelen te vergelijken. De correlatie tussen EIF5A2 en MTA1 werd geanalyseerd met behulp van de Spearman rank test. Voor univariate survival analyse werden survival curves geconstrueerd met behulp van de Kaplan-Meier-methode en vergeleken door de Log-rank test. Cox proportional hazards model met multivariate analyse werd gebruikt om de onafhankelijke prognostische factoren te onderzoeken. Alle P
waarden waren tweezijdig en P
waarden van < 0,05 werden beschouwd als statistisch significant. Alle experimenten werden uitgevoerd in ieder geval in de technische en biologische drievoud.

Resultaten

EIF5A2 Expressie in GC cellen en weefsels en validatie van de interventie

We onderzochten de expressie van EIF5A2 in GC vijf cellijnen en onsterfelijk maagslijmvlies epitheelcellijn GES-1 in vitro
zowel qRT-PCR (Fig. 1A) en Western blotting (Fig. 1B). EIF5A2 eiwit in humane weefsels GC hoger dan die van de gepaarde afstand niet-tumorweefsels (Fig. 1C). Vanwege de hoge endogene expressie van EIF5A2 en de relatief hoge transfectie-efficiëntie in HGC27, selecteerden we deze cellijn voor RNAi analyse en MKN45 geselecteerde cellen EIF5A2 opregulatie experimenten vanwege de relatief lage EIF5A2 expressie en hoge transfectie-efficiëntie.

De drie siRNA efficiënt kon EIF5A2 HGC27 expressie in cellen (Fig. 1D, E) te onderdrukken. We gebruikten siRNA
als EIF5A2-gerichte siRNA (T1-siRNA) in de volgende experimenten. EIF5A2 expressie was significant opgereguleerd door transiënte transfectie van plasmiden in EIF5A2 MKN45 cellen (fig. 1F, G). T2-siRNA niet efficiënt zou kunnen onderdrukken MTA1 expressie in HGC27 cellen (fig. 1 H, I).

EIF5A2 of MTA1 expressie niveaus invloed op de agressiviteit van GC cellen in vitro

Knockdown van EIF5A2 door T1 siRNA remde significant celproliferatie (Fig. 2A), migratie en invasie (fig. 2B) in HGC27 cellen vergeleken met die van de ouderlijke cellen. Opregulatie van EIF5A2 door EIF5A2 plasmide expressie bevorderde verhoogde proliferatie (figuur 2C.), Migratie en invasie (fig. 2D) van MKN45 cellen. Knockdown van MTA1 door T2-siRNA aanzienlijk remden celproliferatie (Fig. 2E), migratie en invasie (fig. 2F) in HGC27 cellen vergeleken met die van de ouderlijke cellen.

Mogelijke doelwitgenexpressie na EIF5A2 knockdown of overexpressie

Na knockdown van EIF5A2 in HGC27 cellen de niveaus van de epitheliale marker E-cadherine waren opgereguleerd, terwijl de niveaus van mesenchymale merker vimentine werden neerwaarts gereguleerd en begeleid door proliferatiegerelateerde proteïnen cycline D1 en cycline D3 en metastase geassocieerde C-MYC en MTA1 downregulatie (Fig. 3A). Daarentegen EIF5A2 na overexpressie in MKN45 cellen de expressie van E-cadherine neerwaarts gereguleerd, terwijl het niveau van vimentine werd opgereguleerd en vergezeld van cycline D1, cycline D3, C-MYC en MTA1 opregulatie (fig. 3B). Knock-down of overexpressie van EIF5A2 had geen significant effect op MMP9 meningsuiting in HGC27 en MKN45 cellen (Fig. 3A, B).

Vereniging van EIF5A2 en MTA1 expressie met clinicopathologische functies bij patiënten met GC

positieve signalen EIF5A2 werden hoofdzakelijk in het cytoplasma en de kern van tumorcellen, terwijl MTA1 signalen hoofdzakelijk gelokaliseerd in de kern van tumorcellen (Fig. 4). Definieerden we de immunokleuring waarden van 0-3 als normaal expressieniveau van EIF5A2 of MTA1, terwijl immunokleuring waarden van 4-12 werd gedefinieerd als overexpressie van EIF5A2 of MTA1. EIF5A2 overexpressie werd gevonden in 75 van de tumormonsters, tegen slechts zeven van 160 afgestemd naburige niet-tumor slijmvliezen ( P
< 0,001). Representatieve IHC kleuring van EIF5A2 in moderately- of slecht gedifferentieerd adenocarcinoom, verblijf invasie van tumorcellen en niet-tumorweefsel wordt getoond in Fig. 4A, B, C en D respectievelijk. Van de 160 onderzochte gevallen, 70 (43.75%) positief voor MTA1 waren, Statistische analyse van de expressie patronen bleek dat er een positieve correlatie tussen EIF5A2 en MTA1 expressie (r = 0.510, P Restaurant < 0,001) . De typische kleuring afbeeldingen voor overexpressie van EIF5A2 en MTA1 in adenocarcinoom worden getoond in Fig. 4E en 4F.

Zoals getoond in Tabel 1, zowel EIF5A2 en MTA1 overexpressie werden positief gecorreleerd met meer geavanceerde pT stadium ( P
= 0,018 en P
= 0,042) pN stadium ( P
= 0,037 en P
= 0,020) en positieve lymfovasculaire invasie ( P
= 0,016 en P
= 0,044), terwijl zij niet geassocieerd met andere klinische en pathologische kenmerken.

Verhoogde EIF5A2 of MTA1 expressie gecorreleerd met een slechtere overleving in GC patiënten

bij de laatste follow-up, was 75 van 160 patiënten overleden. Van deze 73 mensen overleden aan de tumor herhaling. De Kaplan-Meier-analyse toonde aan dat zowel de 5-jaars totale overleving (OS) en ziektevrije overleving (DFS) voor de EIF5A2 overexpressie groep waren korter dan die voor de normale EIF5A2 uitdrukking groep ( P
< 0.001 en P
= 0,001, afb. 4G, H). Consequent, patiënten met MTA1 overexpressie vertoonden een slechte prognose voor OS en DFS ( P Restaurant < 0,001 en P
= 0.001)

Variabelen met betekenis in univariate analyse door. de Kaplan-Meier methoden werden opgenomen in de multivariate Cox regressie analyses. Zoals aangegeven in tabel S1 en S2 Table, multivariate analyse geïdentificeerd die overexpressie van EIF5A2 was een onafhankelijke factor voor zowel OS (hazard ratio 1,831, 95% CI 1,135-2,857, P
= 0,012, S1 Table) en DFS (hazard ratio 1,880, 95% CI1.177 tot 3,002, P
= 0.008, S2 Table) van de patiënten die curatieve resectie voor GC. Echter, de overexpressie van MTA1 produceert onafhankelijke prognostische betekenis voor OS en DFS in de multivariate analyse.

Discussie

eukaryote initiatie factor 5A 2 (EIF5A2) is gelokaliseerd op een chromosomaal gebied vaak genoteerd voor chromosomale instabiliteit in GC en vele andere kankers, 3q. [17-20] EIF5A2, als één van de twee isovormen van EIF5A familie, wordt bevestigd als een oncogeen eiwit en kan een belangrijke biomarker voor de prognose en therapeutische doelwit zijn van vele soorten menselijke tumoren. [21] Hoewel een eerdere studie EIF5A2
genexpressie in primaire GC had onderzocht, de huidige studie geeft het eerste bewijs van de klinische betekenis van EIF5A2 expressie in menselijke GC en de mogelijke rol in de de regulatie van GC cel agressiviteit. [22]

We hebben eerst uitgevoerd EIF5A2 knock-down en overexpressie experimenten in vitro
. De resultaten toonden aan dat onderdrukking van EIF5A2 in HGC27 cellen leidde tot significante dalingen van celproliferatie, migratie en invasie, terwijl de opregulatie in MKN45 cellen resulteerde in het omgekeerde. Deze resultaten zijn consistent met eerdere bevindingen in andere tumoren. [8, 10, 23] We vonden ook dat MTA1 knockdown in HGC27 cellen remde significant celproliferatie, migratie en invasie. Maar het mechanisme waarmee EIF5A2 verbetert GC cel agressiviteit is nog onbekend.

Daarom voerden we verdere studies van de mogelijke doelwitten van EIF5A2 In vitro
. Onze resultaten toonden dat EIF5A2 positief gereguleerd cycline D1 en cycline D3, die belangrijke rollen proliferatie GC cel en celcyclus regulatie. [24, 25] Al deze resultaten ondersteunden de hypothese dat EIF5A2 bevordert GC celproliferatie via opregulatie van cycline D1 en cycline D3. Tegelijkertijd, eerdere studies is gebleken dat EIF5A2 bevordert invasie /metastase en epitheliale-mesenchymale transitie (EMT) door middel van het activeren MTA1 /C-MYC bij colorectale kanker. [8] MTA1 en C-MYC, en het EMT-programma, waren ook betrokken bij de regulatie van GC metastase. [26-28] We onderzochten daarom MTA1, C-MYC en twee-EMT geassocieerde markers, E-cadherine en vimentine. Onze studies hebben aangetoond dat EIF5A2 positief gereguleerd MTA1, C-MYC en vimentine en negatief gereguleerde E-cadherine. Al deze resultaten suggereren dat EIF5A2 cel migratie en invasie zou kunnen reguleren door regulering van MTA1, C-MYC en EMT In vitro
, maar verdere studies zijn nodig om de exacte mechanismen te onderzoeken.

De resultaten van de huidige studie toonde ook aan dat EIF5A2 eiwit was positief gecorreleerd met pT podium en pN podium. Soortgelijke resultaten werden ook waargenomen in humane eierstokkanker. [5] Deze resultaten suggereren dat EIF5A2 kan worden geassocieerd met tumorinvasie en metastase in lymfeklieren bepaalde typen menselijke kankers, waaronder GC. Interessanter is in de huidige studie, EIF5A2 overexpressie werd ook gevonden in een invasie van kankercellen (vaartuig invasie) en overexpressie van EIF5A2 eiwit in primaire GC weefsel gecorreleerd met de aanwezigheid van lymfovasculaire invasie. Overeenkomstig de resultaten uit eerdere studies van andere menselijke kwaadaardigheden waaronder epitheliale ovariumtumoren, blaascarcinoom, longkanker en darmkanker, overexpressie van EIF5A2 in de huidige studie was gecorreleerd met slechte overleving van patiënten met GC. [5, 8, 29] Bovendien multivariate analyse toonde dat EIF5A2 eiwit een onafhankelijke voorspeller van een slechte overleving in patiënten die chirurgie ondergaan voor GC.

MTA1, als kandidaat-metastase-geassocieerd gen is aangetoond dat de kritische rol spelen bij maagkanker cel agressiviteit. [27] Overexpressie van MTA1 is significant geassocieerd met een slechte prognose in pN0 GC patiënten. [30] De huidige studie toonde aan dat EIF5A2 expressie positief is gecorreleerd met MTA1 expressie in menselijke weefsels GC. Immunohistochemische analyse gecombineerd in vitro studies aangetoond dat de EIF5A2-MTA1-as een belangrijke rol bij maagkanker agressiviteit kunnen spelen.

Samenvattend, de resultaten van de huidige studie toonde aan dat de overexpressie van EIF5A2 nauw verwant aan GC celproliferatie, migratie en invasie via metastase-geassocieerde eiwitten MTA1. Tegelijkertijd kan EIF5A2 belang EMT verordening GC zijn. Overexpressie van EIF5A2 zou een onafhankelijke factor voorspellen slechte overleving en een aantrekkelijk therapeutisch doelwit voor GC, maar verdere studies nodig zijn.

Ondersteunende informatie
S1 Table. Analyse van de factoren die samenhangen met de totale overleving (OS)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0119229.s001
(DOC)
S2 Table. Analyse van de factoren die samenhangen met ziektevrije overleving (DFS)
doi:. 10.1371 /journal.pone.0119229.s002
(DOC)

Dankwoord

De auteurs willen graag aan de heer de-Tian Wang, mevrouw Yu-Feng Luo en Professor Pei Gu bedanken voor hun technische ondersteuning.

• PLoS ONE: Invloed van Intratumoral expressie van fluoropyrimidine-metaboliserende enzymen op de resultaten van de behandeling van Adjuvant S-1 therapie bij maagkanker
• PLoS ONE: Afwijkende CCR4 Expression is betrokken bij Tumor Invasie van lymfkliertest-Negative Human Gastric Cancer