De abstracte
Introductie
LDH-A, het enzym dat verantwoordelijk is voor het omzetten van pyruvaat in lactaat, is aangetoond up-gereguleerd in vele vormen van kanker en tot meer agressief gedrag geven door het reguleren van de proliferatie en anti-apoptose. Echter, zijn expressie in maagkanker (GC) niet grondig gekarakteriseerd. Het doel van deze studie was om de expressie en mogelijke gevolgen van LDH-A in GC verduidelijkt.
We onderzochten LDH-A expressie door immunohistochemie van GC tissue microarray (TMA) en met behulp Western blot op verse GC weefsels en cellijnen. Prognostische waarde en correlatie met andere clinicopathologic factoren werden geëvalueerd. We getransfecteerd siRNA in cellen tegen GC LDH-A. LDH-A werd geanalyseerd door Western blotting en real-time RT-PCR. celgroei in vitro en in vivo. Lactaat en ATP productie door cellen werden bepaald.
Er was significant hogere LDH-A expressie in carcinoma dan bij niet-neoplastische mucosa (NNM). Er was een positieve correlatie van LDH-A-expressie met de leeftijd, histologische type en Lymfeknoop metastasen. Overlevingsanalyse toonde aan dat hoge expressie van LDH-A in GC werd geassocieerd met lagere algehele overleving (OS). Wanneer gestratificeerd door Lauren rang en histologische indeling, verscheen betekenis diffuse type en ongedifferentieerde het type GC. In multivariate analyse, de LDH-A expressie in GC was een onafhankelijke prognostische risicofactor voor OS (hazard ratio = 1,829, 95% CI 1,375-2,433, P < 0,0001). Specifieke siRNA tegen LDH-A in GC cellijn groei vertraagde cel zowel in vitro als in muismodellen. LDH-A knock-down ook verminderd lactaat en ATP productie in GC cellen.
Onze studie gewezen op de oncogene rol van LDH-A in GC. LDH-A-expressie is een onafhankelijke prognostische risicofactor in GC patiënten en up-gereguleerde expressie van LDH-A zou voorspellend voor slechte resultaten in diffuse type en ongedifferentieerde het type GC zijn. Onze resultaten suggereerden dat LDH-A receptor een therapeutisch potentieel bij maagkanker kan zijn
Citation:. Zon X, Z zon, Zhu Z, Guan H, J Zhang, Zhang Y, et al. (2014) clinicopathologische Betekenis en prognostische waarde van lactaatdehydrogenase A Expression bij maagkankerpatiënten. PLoS ONE 9 (3): e91068. doi: 10.1371 /journal.pone.0091068
Editor: Anthony W.I. Lo, De Chinese Universiteit van Hong Kong, Hong Kong
Ontvangen: 12 augustus 2013; Aanvaard: 7 februari 2014; Gepubliceerd: 7 maart 2014
Copyright: © 2014 Zon et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd
Financiering:. Deze studie werd ondersteund door subsidies van de onderzoeksprojecten in de provincie Liaoning Science and Technology Department (nr 2007225017, No. 2009225011-2 en nr 2011415052) en de wetenschappelijke en technologische projecten in de stad Shenyang (nr F11-264-1-19). De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript
Competing belangen:.. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan
Introductie
de metabole eigenschappen van kankercellen significant verschillen van die van normale cellen, zoals kankercellen voorkeur glycolyse plaats van mitochondriale oxidatieve fosforylering, zelfs in aanwezigheid van zuurstof te gebruiken; Dit fenomeen staat bekend als de Warburgeffect [1], [2], [3]. De verrassend hoge mate van toegang tot glucose en lactaat productie in tumoren in de aanwezigheid van zuurstof geleid Warburg te speculeren dat afwijkende metabolisme de oorzaak van vele vormen van kanker [2] zijn. De voordelen van de metabolische omzetting oplevert voor kankercellen onduidelijk [4], [5]. Onlangs heeft de ontdekking van het verband tussen oncogenen en metabole processen heeft geleid tot een hernieuwde belangstelling voor het werk Warburgs. Er zijn steeds meer aanwijzingen dat de aanpassing van aërobe glycolyse door kankercellen verspreiding van kanker [5] zou kunnen vergemakkelijken. Metabolisme kanker is extensief onderzoek in de hoop van het ontdekken van nieuwe effectieve therapieën voor kanker.
LDH-A, is een essentieel enzym dat een belangrijke rol in de laatste stap van de Warburgeffect speelt door omzetting pyruvaat naar lactaat . In verschillende typen menselijke kankers, werd de expressie van LDH-A opgereguleerd [6], [7]. In oesofageale plaveiselcelcarcinoom, LDH-A werd up-gereguleerd in kankerweefsel en bevorderde de overleving van tumorcellen [8]. Daarnaast werd LDH-A gemeld aan de groei en migratie van gastrische kanker cellen [9] verbeteren. De expressie status en de functie van LDH-A bij maagkanker (GC) nog onopgehelderd.
In deze studie hebben we de expressie van LDH-A onderzocht in een groot cohort GC monsters en correleerden de expressie met klinische pathologische parameters en de totale overleving (OS). Onze resultaten tonen dat de expressie van LDH-A werd up-gereguleerd in de klinische maagkanker monsters en eiwitexpressie werd gecorreleerd aan de leeftijd en histologische classificatie. Bovendien vonden we dat hoge LDH-A expressie werd geassocieerd met een slechtere prognose bij patiënten GC. Bij elkaar genomen, onze studie bleek de oncogene functie van de LDH-A bij maagkanker en stelde LDH-A als een nieuwe potentiële prognostische factor en een potentieel therapeutisch doelwit.
Materialen en methoden
Patiënten
de huidige studie omvatte 264 patiënten met GC die curatieve operatie van januari 2006 tot mei 2007 op First Affiliated hospital van de China Medical University volgden. De groep bestond uit 194 mannen en 70 vrouwen met een gemiddelde leeftijd van 59 (bereik 29-81) jaar. Geen van de patiënten onderging chemotherapie of radiotherapie voor de operatie. Follow-up gegevens werden verzameld van alle patiënten.
ethische goedkeuring voor dit onderzoek werd verkregen uit de Research Ethics Committee van de China Medical University, China. Alle patiënten verstrekken van tumorweefsel en normale maag weefselmonsters tekende een toestemmingsformulier voor de chirurgische verwijdering van de maagcarcinoom mogelijk te maken voor dit onderzoek uit te voeren. Alle van de studie procedures dieren waren in overeenstemming met de National Institutes of Health Guide voor de Zorg en gebruik van proefdieren en werden uitgevoerd volgens de institutionele ethische richtlijnen. Deze proefdieren werden aangekocht van Shanghai Branch Center, Institute of Laboratory Animal Science, de Chinese Academie van Medische Wetenschappen (ook bekend als Shanghai CAS, certificaat nummer: SCXK [Hu] 2003-0003). Alle experimentele procedures werden uitgevoerd in overeenstemming met de institutionele richtlijnen voor de zorg en het gebruik van proefdieren, en protocollen werden goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite in China Medical University, Shenyang, China. Alle inspanningen werden gedaan om het lijden te minimaliseren.
All-patiënt afgeleid paraffine ingebedde Maagkanker monsters (n = 264) en hun geëvenaard NNM exemplaren (2 cm afstand van de carcinoom n = 209) werden uit chirurgische resectie verzameld en gearchiveerd onder protocollen door de Institutional review Boards van de First Affiliated Hospital China Medical University goedgekeurd. Verse maagcarcinoom en aangrenzende NNM werden verzameld en bevroren tot -80 ° C eiwitextractie door homogeniseren in RIPA lysisbuffer. De histologische diagnose en andere microscopische kenmerken werden bevestigd door pathologen en de TNM per maagcarcinoom werd beoordeeld volgens de Internationale Unie tegen Kanker (UICC) voor de omvang van de tumor verspreid. Histologische architectuur van maagcarcinoom werd uitgedrukt in de indeling Lauren en de World Health Organization (WHO) classificatie. Bovendien, grootte van de tumor, diepte van invasie, en lymfatische werden bepaald.
De menselijke maagkanker cellijnen MKN28 (goed gedifferentieerd), AGS, SGC-7901 (matig gedifferentieerd ), MGC803 (slecht gedifferentieerd) en de humane normale maag-cellijn GES-1 gekocht van de celbank van de Chinese Academy of Sciences. Vijf cellijnen werden in RPMI 1640 (Hyclone, Logan city, USA) aangevuld met 10% foetaal runderserum (FBS) gehouden. Alle cellijnen werden in een 5% CO 2 bevochtigde atmosfeer bij 37 ° C. Representatieve gebieden van vaste tumoren en aangrenzend NNM geïdentificeerd in HE-gekleurde coupes van de geselecteerde gevallen en een 1,5-mm-diameter weefselkern per geverblok werd uitgeponst en overgebracht in een ontvangerblok met maximaal 200 (10 x 20) kernen onder toepassing van een 1,5-mm punch instrument. Na opnieuw gesmolten, werden secties (4 urn dik) achtereenvolgens gesneden uit elk weefsel microarray blok, vlekken HE werd uitgevoerd op TMA ter bevestiging van de tumor en slijmvliezen weefsel. Immunohistochemische analyse werd uitgevoerd op secties TMA werd Snelkookpan gemedieerde antigeenterugtrekking uitgevoerd in citraatbuffer (pH 6,0) gedurende 10 min. Secties werden geïncubeerd met 1:300 verdunning van LDH-A (spier subeenheid) Rabbit monoklonaal antilichaam (Epitomics) overnacht bij 4 ° C en vervolgens geïncubeerd met geit anti-muis of anti-konijn Envision System Plus-HRP (Dako Cytomation) voor 30 min bij kamertemperatuur. Na drie keer spoelen in PBS gedurende 10 minuten elk, werden de coupes geïncubeerd met DAB gedurende 1 min, tegengekleurd met Mayer hematoxyline, gedehydrateerd, geklaard en gemonteerd. Weglating van het primaire antilichaam werd gebruikt als negatieve controle. Eiwitten concentraties van monsters geëxtraheerd uit weefsel monsters en cellijnen middels radio-immuniteitsaktiviteit precipitatie assay lysisbuffer werden bepaald met Bradford-reagens ( Sigma) volgens de instructies van de fabrikant. Gedenatureerde proteïne werd gescheiden op een natriumdodecylsulfaat (SDS) -polyacrylamide gel (10% acrylamide) en overgebracht naar polyvinylideenfluoride membranen (Millipore, Bedford, MA), die vervolgens in 5% vetvrije melk werd geblokkeerd in Tris-gebufferde zoutoplossing (pH 7,5). Voor immunoblotting werd het membraan overnacht geïncubeerd met LDH-A (spier subeenheid) Rabbit monoklonaal antilichaam (1:1500) (Epitomics) bij 4 ° C. Vervolgens werd gespoeld met TBST en geïncubeerd met secundaire antilichamen gedurende 15 minuten. Signalen werden gedetecteerd door versterkte chemiluminescentie (Pierce, Rockford, IL). De 264 patiënten die gastroctomy ondergingen werden onderworpen aan klinische observatie, met inbegrip van de borst /buik /bekken sluiten berekende tomografische (CT) beeldvorming, CEA niveau en bloedonderzoek 2 tot interval van 3 maanden en jaarlijks gastroscopie. Follow-up was in overeenstemming met (NCCN) Praktijk Richtlijnen National Comprehensive Cancer Network bij maagkanker. Overall survival (OS) percentage werd gedefinieerd als het interval van de eerste operatie gedood. De einddatum van de follow-up studie voor het uitvoeren van de analyse was 29 juni, was 2012. Evaluatie van immunohistochemische kleuring Immunoreactiviteit onafhankelijk beoordeeld door twee onderzoekers die werden verblind voor de patiënt uitkomst. De evaluatie is gebaseerd op de kleurintensiteit. Kleuring intensiteit LDH-A werd gescoord als 0 (negatief); 1 (zwak); 2 (matig); en 3 (sterk). De monsters werden verdeeld in twee groepen op basis van hun scores: 0 en 1 zijn lage expressie groep; 2 en 3 zijn hoge expressie groep. In geval van een discrepantie in het noteren, de glaasjes werden opnieuw onderzocht door zowel pathologen onder een microscoop. Op basis van de LDH -A sequentie, shRNA is gemaakt middels siRNA Target Finder (Ambion): de nucleotidesequentie van het ingebrachte ShLDH-A was 5'-ATCCAGTGGATATCTTGACCTACG TGGCT-3 '. De cellijn gegenereerd door het infecteren van cellen met scrambled plasmide werd gebruikt als controle. 10 ug shRNA en 25 gl Lipofectamine 2000 (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) werden samen met 1350 pi RPMI-1640 medium (zonder FBS) gemengd en vervolgens werd het mengsel getransfecteerd in MGC-803 maagkanker cellen. Het mengsel werd toegevoegd aan een 25-cm 2 kolf die eerder werd bedekt met een 1 x 10 6 MGC-803 maagkanker cellen. Het kweekmedium werd vervangen door volledig RPMI-1640 medium 6 uur na inoculatie en 28 uur na transfectie werden stabiele celklonen geselecteerd gedurende 2 weken met neomycine en geanalyseerd door immunoblotting. Totaal RNA werd geïsoleerd uit cellen met behulp van TRIzol reagens volgens de instructies van de fabrikant (Invitrogen) en 1 ug RNA werd direct verwerkt in cDNA met behulp van een reverse transcriptie kit (Promega, Madison, Wisconsin), volgens de instructies van de fabrikant. Amplificatiereacties werden uitgevoerd in een 20 ul-volume met 0,2 ui SYBR Green (Bio-Rad, Hercules, Californië). Deze reacties werden uitgevoerd in drievoud met behulp van een BioRad iCycler (Bio-Rad). B-actine werd gebruikt als een interne controle. De gebruikte primers waren als volgt: LDH-A, 5'-CTCCTGTGCAAAATGGCAAC-3 '(voorwaarts) en 5'-CCTAGAGCTCACTAGTCACAG-5' (omgekeerd); andβ-Actin, 5'-GATCATTGCTCCTCCTGAGC-3 '(voorwaarts) en 5'-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3' (omgekeerde). De specificiteit van real-time kwantitatieve PCR werd geverifieerd door smeltcurve analyse en agarosegelelektroforese. Voor celgroei analyse evenveel cellen werden gezaaid in 48 -goed platen. Het totale aantal cellen werd elke dag gemeten met de MTT-bepaling volgens het protocol van de fabrikant (Roche Applied Science). Voor kolonievorming analyse evenveel controlecellen en cellen silencing de expressie van LDH-A werden uitgezaaid in 60 mm kweekschaal in drievoud. De cellen werden gedurende 7 dagen werd celgroei gestopt na 7 dagen in kweek door het verwijderen van het medium en het toevoegen van 0,5% kristalviolet oplossing in 20% methanol. Na kleuren gedurende 5 minuten werden de gefixeerde cellen gewassen met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS), gefotografeerd, en opgelost met 1% SDS. Het aantal kolonies in elke groep werd geteld. Het MGC-803 GC cellen xenotransplantaten werden geproduceerd op 6-weken oude vrouwelijke athymische naakt muizen (Vital River Laboratories, Beijing, China) door injectie van 5 x 10 6 cellen in 0,2 ml PBS in de flank van elke muis (6 muizen /groep). Tumorvorming werd beoordeeld wekelijks. Het tumorvolume werd berekend volgens de formule:. V (mm 3) = a x b 2/2 (waarbij a de grootste oppervlakkige diameter en b de kleinste diameter oppervlakkige) lactaatbepaling concentratie en ATP productie Na 48 uur incubatie, lactaat en ATP-gehalte in het kweekmedium werden gemeten met commercieel verkrijgbare assay kits (verkregen van BioVision [Mountain View, California] en Roche Applied Science respectievelijk). De resultaten werden gecorrigeerd voor de finale celgetal nummer. Alle statistische analyses werden uitgevoerd met behulp van SPSS 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Overlevingscijfers werden bepaald met de Kaplan-Meier schatter, een gebeurtenis gedefinieerd als dood aan kanker gerelateerde oorzaken. De log-rank test werd gebruikt om de verschillen tussen de overleving curves te identificeren. In univariate analyse, tweezijdig χ 2 tests of tweezijdig t-toets werden gebruikt voor statistische vergelijkingen. En Cox's proportionele-hazard model werd gebruikt in univariate analyse en multivariate analyse, om belangrijke factoren gecorreleerd met prognose te identificeren. Voor alle analyses, alleen P-waarden. ≪ werden 0,05 significant geacht Resultaten LDH-A Expression in Human MaagKanker Tissue We gesorteerde gekleurde coupes van TMA's van GC en NNM weefsel kernen voor hun cytoplasma immunohistochemische kleuring intensiteit tegen LDH-A-eiwit. De leesbare monsters die 264 maagcarcinoom en 209 geëvenaard NNM. De typische diffuse cytoplasmatische kleuring van het eiwit kan worden gevonden in veel maagcarcinoom en normale gastrische weefsels, zoals weergegeven in figuur 1, kankerweefsel zich positief cytoplasmatische kleuring voor 201 gevallen (76,14%), terwijl bij 209 gevallen van NNM, 131 gevallen ( 62,68%) had LDH-A positieve expressie (Tabel 1). Om de expressie hoeveelheid LDH-A in GC monsters te onderzoeken, de expressie van LDH-A werd onderzocht door western blot analyse in zeven willekeurig geselecteerde tumoren en de gepaarde normale weefsels. Up-regulatie van LDH-A werd waargenomen in GC-monsters vergeleken met het andere normale weefsels (fig. 2a). Deze onderzoeken gaven aan dat LDH-A aanzienlijk opgereguleerd kankerachtige monsters werd vergeleken met naburige niet-kankerachtige weefsels (Tabel 1 p = 0,002). Western blotanalyse werd uitgevoerd in de maag cellijnen. De western blot toonde aan dat de expressie van het LDH-A was significant sterk in slecht gedifferentieerde MGC803 en matig gedifferentieerde AGS; zwak in matig gedifferentieerde SGC-7901 en goed gedifferentieerde MKN28; en afwezig is in humane normale maag-cellijn GES-1 (fig. 2 b). clinicopathologische Variabelen in 264 gevallen van maagcarcinoom Zoals samengevat in tabel 2, We vonden dat verhoogde expressie van LDH-A was significant geassocieerd met de leeftijd van de patiënten (p = 0,004) en histologische type (P = 0,02), lymfeklier (P = 0,043), maar niet bij mannen (p = 0,072), tumorgrootte (P = 0,086) , de diepte van de invasie (P = 0,328), lymfatische invasie (P = 0,738), Lauren waardering (P = 0,152) of TNM stadium (P = 0,417). Survival Analysis De 5 -jarig OS koers van de 264 patiënten met primaire maagkanker was 46% (122/264), met 142 sterfgevallen waargenomen tijdens de follow-up periode. De mediane duur van follow-up was 50 maanden (range, 9-78 maanden). Survival analyse door Kaplan-Meier survival curve en log-rank test toonde aan dat patiënten met een hoge expressie van LDH-A in tumorweefsel hadden een significant slechtere overleving dan patiënten met een tumor lage LDH-A expressie (P < 0,001; fig. 3) . Met de exploratie mogelijke relatie tussen de expressie van LDH-A en de prognose in verschillende GC, hebben we de overleving van patiënten in verschillende subgroepen: Bij statistische analyse werd uitgevoerd gestratificeerd Lauren rang en histologische classificatie verscheen betekenis diffuse Type GC en GC ongedifferentieerde soort (P < 0,001, respectievelijk), maar niet in de darm (P = 0,179) of gedifferentieerd (P = 0,104) degenen. Multivariate analyse werd uitgevoerd volgens het Cox proportional hazards model voor alle belangrijke variabelen in de univariate analyse. Tabel 3 toont de significantie: Gecorrigeerd voor andere covariaten, de resultaten van de multivariate analyse bleek dat LDH-A expressie (P < 0,001), lymfatische invasie (p = 0,046) en Lauren waardering (P = 0,001), TNM (P = 0,006), maar niet leeftijd (P = 0,053), tumorgrootte (P = 0,111), invasiediepte (P = 0,598), lymfeklier (P = 0,089), of weefseltype (P = 0,674) waren onafhankelijke prognostische risicofactoren voor OS (Tabel 3). Knockdown van LDH-A door siRNA vermindert de expressie van LDH-A in MGC-803 Volgens de western blot resultaten en real-time RT -PCR, de expressie van LDH-A daalde effectief de LDH-A-siRNA tot expressie MGC-803 cellen. Zoals getoond in figuur 4, expressie van LDH-A proteïne getest door Western blot was nauwelijks waarneembaar en het PKM2 mRNA werd verminderd met 74% in de LDH-A-siRNA tot expressie MGC-803 cellen. LDH-A expressie bleef onveranderd in beide GC cellijnen en cellijnen die een controle siRNA. Om de tumor te evalueren celgroei, gebruikten we MTT en kolonievorming assays. In de MTT assay silencing de expressie van LDH-A remde de proliferatie van MGC-803 cellen (Fig. 5a, b). De groei van MGC-803 cellen die LDH-A siRNA daalden met 64% na 168 uur incubatie in vergelijking met die van de controlecellen (P < 0,05). Consequent, zwijgen de uitdrukking van LDH-A verzwakt de verankering-onafhankelijke groei van MGC-803 cellen (Fig. 5c, d). LDH-A knockdown in deze cellen voorkomen kolonievorming, wat aangeeft dat verankering-afhankelijke groei werd hersteld. Deze resultaten verder stelde de oncogene rol van LDH-A in GC kanker. In deze studie hebben we de tumorigene capaciteit van LDH-A onderzocht in vivo. De tumorigeniciteit in vivo van MGC-803 cellen siLDH-A en controle cellen werd beoordeeld door sc injectie van cellen in athymische naakt muizen. Consistent met de in vitro studies, zwijgen de expressie van LDH-A dramatisch verzwakt de tumorigeniciteit van LDH-A cellen in tumorgrootte. Voor alle aangenomen xenotransplantaten, siLDH A-tumoren significant kleiner dan die van de controles (fig. 5e, f). Omdat LDH-A is het sleutelenzym voor het omzetten van pyruvaat tot lactaat, dient een aanpassing van de expressie ervan in GC cellen beïnvloeden lactaatproductie en energiemetabolisme. Om deze hypothese te testen, vergeleken we lactaat- en ATP productie tussen LDH-A siRNA knockdown cellen en controlecellen na 48 uur incubatie. Wanneer LDH-A door siRNA werd geklopt, het vermogen van de cel te produceren lactaat en ATP werd drastisch verlaagd met 61,5% en 63,3% na 48 uur (Fig. 6a, b). In de jaren 1920, Warburg eerst aangetoond dat kankercellen nemen hogere tarieven glucose dan normale cellen en de productie van energie bijna per aërobe glycolyse voor hun energiebehoefte aan milieu-eisen aan te passen, zoals intermitterende hypoxie [10], [11]. Echter, deze metabole verandering is niet alleen een aanpassing aan een hypoxische omgeving, maar is actief cellulaire strategie die een aanzienlijk voordeel verschaft voor proliferatie en maligniteit. Nu Vegran et al LDH-A, het enzym verantwoordelijk voor het omzetten van pyruvaat tot lactaat, speelt een belangrijke rol in het proces van glycolyse. Verschillende studies hebben gemeld dat de expressie van LDH-A kan worden veroorzaakt door een aantal oncogenen [15]. Deze rapporten ondersteunen het idee dat LDH-A inductie essentieel is voor de oncogene activiteit van deze oncogenen in kankercellen. De oncogene activiteit van LDH-A is beschreven in slokdarmcarcinoom, pancreaskanker en maagkanker cellen [ ,,,0],8], [9], [16]. Yongjie Zhang et al Samengevat ons onderzoek blijkt dat opgereguleerd expressie van LDH-A geeft maagkanker cellen met groeivoordelen. Tegelijkertijd onze studie suggereert LDH-A als potentieel therapeutisch doel.
Tissue Microarray (TMA) en immunohistochemie
Western blotanalyse
Follow-up na de operatie
Genereren van kleine interfererende (si) RNA Knockdown stabiele cellijnen
RNA-extractie en real-time kwantitatieve RT-PCR analyse
MTT en Kolonie Formatie Assay
tumorigeniciteit Assay
Statistische analyse
Expressie Analyse van LDH-A in maag cellijnen
Knockdown van LDH-A remde de groei van GC cellijnen MGC-803
Knockdown van LDHA remde de tumorigeniciteit in xenograft muismodellen
Knockdown van LDH-A door siRNA vermindert Lactate en ATP productie in humane cellijnen GC MGC- 803
Discussie
. [12] hebben gemeld dat lactaat direct het fenotype van endotheliale cellen kan moduleren, mogelijk maakt een belangrijk mechanisme waardoor tumoren controle over hun eigen bloedtoevoer via vasculaire morfogenese. Omdat reactieve zuurstofspecies (ROS) zijn natuurlijke bijproducten van mitochondriale ademhaling, is voorgesteld dat de omzetting van glucose naar lactaat kankercellen kan beschermen tegen oxidatieve stress [13]. Onlangs bevindingen suggereren dat herstel van normale oxidatieve fosforylering in kankercellen niet alleen celgroei en proliferatie te remmen, maar ook nadelig voor het metastatische vermogen van kwaadaardige cellen [14]. Daarom is het belangrijk constitutief opgereguleerd aerobe glycolyse is onlangs erkend in tumorprogressie, maar de moleculaire mechanismen die leiden tot dit fenotype en hun bijdragen aan kankerontwikkeling zijn niet goed begrepen.
. gemeld dat LDH-A verkleining worden de tumorigeniciteit van intestinale-type maagkanker (ITGC) cellen kunnen onderdrukken door het neerwaarts reguleren Oct4 [17]. En Zhiyu Wang et al
. gemeld dat LDH-A silencing onderdrukt borstkanker tumorigeniciteit tot inductie van oxidatieve stress gemedieerde mitochondriale apoptose pathway [18]. Hier onderzochten we met formaline gefixeerde, in paraffine ingebedde tumorweefsel van 264 patiënten voor de expressie van LDH-A en meldde de karakterisering van LDH-A expressie in menselijke GC, en legt het verband met klinisch-parameters en de prognose van patiënten. Ten eerste, bleek dat de expressie van LDH-A in GC monsters werd verhoogd ten opzichte van de afgedekte normale weefsels. Dit resultaat kan in overeenstemming met eerdere onderzoek dat in verschillende typen menselijke kankers, de expressie van LDH-A werd opgereguleerd [4], [5]. In tumorweefsel, onze studie toonde aan dat LDH-A expressie was sterk gecorreleerd met GC clinicopathologic kenmerken: leeftijd, lymfeklier uitzaaiingen en histologische classificatie. We stellen dat de opgereguleerd LDH-A expressie kan bijdragen tot proliferatie en ontwikkeling van GC. Ten tweede hebben we verder geanalyseerd de prognostische rol van LDH-A op de totale overleving van patiënten met GC. Kaplan-Meier-analyse toonde een significante relatie tussen LDH-A expressie en overleving van patiënten, en patiënten met sterkere LDH-A kleuring een lagere overlevingskans. Bij statistische analyse gelaagde werd uitgevoerd door Lauren rang en histologische indeling, verscheen betekenis diffuse soort GC en ongedifferentieerde het type GC, maar niet in de darmen of gedifferentieerde Ones. Specifieke siRNA tegen LDH-A werd uitgevoerd in MGC803 cellen en groeiachterstand cellen zowel in vitro als in muismodellen. LDH-A knockdown ook verminderd lactaat en ATP productie GC cellen. Daarom suggereren onze resultaten dat expressie van LDH-A is een onafhankelijk voorspeller van OS, en gaf aan dat LDH-A een oncogene rol bij tumorontwikkeling kunnen hebben, vooral in diffuse Type GC of ongedifferentieerde soort GC patiënten. Consistent met onze studie is gerapporteerd dat neerhalen de expressie van LDH-A in humane hepatocellulaire carcinoomcellen kan apoptose [8], en downregulatie van LDH-A induceren zou de productie van ROS en cytosolische Ca2 + -signalen, die de verminderde vergroten binnenste mitochondriale membraanpotentiaal en leidde tot de afgifte van cytochroom C in hepatocellular carcinoomcellen.
Eiwitboodschappers van het menselijk microbioom werpen licht op de menselijke gezondheid
Darmbacterieprofiel kan darmschade voorspellen na radiotherapie
De ziekte van Parkinson kan worden voorkomen door darmmicroben
Nieuwe interacties tussen gastheer en viraal microbioom tijdens COVID-19 kunnen de uitkomst bepalen
Menselijke coronavirussen hebben organische materialen nodig om efficiënt tussen oppervlakken te kunnen worden overgedragen
Gedetailleerde kaart van het microbioom van de menselijke tong
Biologische therapie kan het risico op ernstige COVID-19 verminderen
Een recent observationeel onderzoek door Spaanse onderzoekers, momenteel beschikbaar op de medRxiv* preprint-server, suggereert dat patiënten met immuungemedieerde ziekten die biologische therapie k
Nieuwe strategie kan de darm-hersencommunicatie versterken
Het communicatiesysteem tussen de darm en de hersenen staat bekend als de darm-hersen-as en is goed ingeburgerd. Nutsvoorzieningen, wetenschappers hebben een strategie ontwikkeld die het volume van de
Darmmicrobioom en IBD - het verband misschien in het dieet zegt studie
Een nieuwe studie heeft overtuigend bewijs aangetoond dat inflammatoire darmaandoeningen of IBD nauw verband houden met de microbiële omgeving in de darm, die kan worden veranderd met een voorgeschrev