PLOS ONE: Importância clínicas e Valor prognóstico de lactato desidrogenase A Expressão em câncer gástrico Patients

Abstract

Introdução

LDH-A, a enzima responsável pela transformação de piruvato em lactato, foi demonstrada ser regulado para cima em muitos tipos de câncer e de dar origem a um comportamento mais agressivo pela regulação da proliferação e anti-apoptose. No entanto, a sua expressão em cancro gástrico (GC) não foi completamente caracterizado. O objetivo deste estudo foi esclarecer a expressão eo potencial impacto da LDH-A no GC.

Métodos

Foram examinados LDH-A expressão por imuno-histoquímica em tissue microarray GC (TMA) e usando western blot em tecidos frescos GC e linhas celulares. Valor prognóstico e correlação com outros fatores clínico-patológicas foram avaliadas. Nós transfectadas siRNA em células GC contra LDH-A. LDH-A foi analisado por transferência de Western e em tempo real de RT-PCR. O crescimento celular foi avaliada in vitro e in vivo. foram determinados lactato e produção de ATP pelas células.

Resultados

Não foi significativamente maior LDH-A expressão no carcinoma do que em mucosa não-neoplásica (NNM). Houve uma correlação positiva de LDH-A expressão com a idade, tipo histológico e metástases nos linfonodos. A análise de sobrevivência demonstrado que a alta expressão de LDH-A no GC foi associado à sobrevida global inferior (OS). Quando estratificado por Lauren grau e classificação histológica, significado apareceu no tipo difuso e tipo indiferenciado GC. Na análise multivariada, a LDH-A expressão em GC foi um fator de risco prognóstico independente para OS (taxa de risco = 1,829, IC 95% 1,375-2,433, P < 0,0001). siRNA específica contra LDH-A no crescimento celular retardada linha celular GC tanto in vitro e em modelos de ratos. LDH-A knockdown também reduziu lactato e produção de ATP em células GC.

Conclusões

O nosso estudo indicou o papel oncogênico de LDH-A no GC. LDH-A expressão é um fator de risco independente de prognóstico em pacientes GC e up-regulada expressão de LDH-A podem ser preditivos de resultados pobres em tipo difuso e tipo indiferenciado GC. Nossos resultados sugerem que a LDH-A pode ser um potencial alvo terapêutico no cancro gástrico

Citation:. Sun X, Z Sun, Zhu Z, Guan H, Zhang J, Zhang Y, et al. (2014) Importância clínicas e Valor prognóstico de lactato desidrogenase A Expressão em pacientes com câncer gástrico. PLoS ONE 9 (3): e91068. doi: 10.1371 /journal.pone.0091068

editor: Anthony Federação das Índias Ocidentais Lo, da Universidade Chinesa de Hong Kong, Hong Kong

Recebido: 12 Agosto, 2013; Aceito: 07 de fevereiro de 2014; Publicação: 07 de março de 2014

Direitos de autor: © 2014 Sun et al. Este é um artigo de acesso aberto distribuído sob os termos da Licença Creative Commons Attribution, que permite uso irrestrito, distribuição e reprodução em qualquer meio, desde que o autor original ea fonte sejam creditados

Financiamento:. Este estudo foi suportado por concessões dos projectos de investigação na província de Liaoning Departamento de Ciência e Tecnologia (No. 2007225017, No. 2009225011-2 e No. 2011415052) e projetos de ciência e tecnologia em Shenyang City (No. F11-264-1-19). Os financiadores não tiveram nenhum papel no desenho do estudo, coleta de dados e análise, decisão de publicar ou preparação do manuscrito

CONFLITO DE INTERESSES:.. Os autores declararam que não existem interesses conflitantes

Introdução

as propriedades metabólicas de células cancerosas divergem significativamente das células normais, como células cancerosas utilizar preferencialmente a glicólise em vez de fosforilação oxidativa mitocondrial, mesmo na presença de oxigénio; este fenómeno é conhecido como o efeito Warburg [1], [2], [3]. O surpreendentemente elevada taxa de tomar-se glucose e produção de lactato em tumores, na presença de oxigénio conduzido Warburg a especular que o metabolismo aberrante poderia ser a causa de muitos cancros [2]. No entanto, a vantagem de a transformação metabólica confere às células cancerosas permanece incerto [4], [5]. Recentemente, a descoberta da relação existente entre os oncogenes e os processos metabólicos levou a um ressurgimento do interesse na obra de Warburg. Existe uma evidência crescente que indica que a adaptação da glicólise aeróbica por células cancerosas pode facilitar a proliferação do cancro [5]. metabolismo do cancro tem estado sob grande exploração na esperança de descobrir novos tratamentos eficazes para o cancro.

LDH-A, é um enzima crucial que desempenha um papel importante no passo final do efeito Warburg através da conversão de piruvato em lactato . Em vários tipos de cancros humanos, a expressão de LDH-A foi regulado para cima [6], [7]. No carcinoma epidermóide de esôfago, LDH-A foi regulada em tecidos de câncer e promoveu a sobrevivência das células tumorais [8]. Além disso, a LDH-A foi relatado para aumentar o crescimento e migração de células de cancro gástrico [9]. No entanto, o estado da expressão e da função de LDH-A em cancro gástrico (GC) ainda permanecem desconhecidos.

Neste estudo, foi examinada a expressão de LDH-A num grande grupo de amostras de GC e a sua correlação expressão com parâmetros patológicos clínicos e sobrevida global (OS). Os nossos resultados demonstram que a expressão de LDH-A foi regulado para cima nas amostras clínicas cancro gástrico, e a expressão da proteína foi correlacionada com a idade e classificação histológica. Além disso, verificou-se que a alta LDH-A expressão foi associada com pior prognóstico em pacientes GC. Tomados em conjunto, nosso estudo revelou a função oncogénica de LDH-A no câncer gástrico e sugeriu LDH-A como um novo fator prognóstico potencial e um potencial alvo terapêutico.

Materiais e Métodos

Os pacientes

o presente estudo incluiu 264 pacientes com GC que seguiram cirurgia curativa a partir de janeiro de 2006 a maio de 2007, o primeiro hospital afiliada da China Medical University. O grupo foi composto por 194 homens e 70 mulheres, com idade média de 59 (variação, 29-81) anos. Nenhum dos pacientes foi submetido à quimioterapia ou radioterapia antes da cirurgia. informações de acompanhamento foram coletados de todos os pacientes.

Ética Declaração

A aprovação ética para esta pesquisa foi obtido a partir Comitê de Ética em Pesquisa da China Medical University, China. Todos os pacientes que fornecem tecido do tumor, bem como amostras de tecido gástrico normais assinaram um termo de consentimento antes da remoção cirúrgica do carcinoma gástrico para permitir essa investigação a realizar. Todos os procedimentos do estudo animais estavam de acordo com o National Institutes of Health Guide para o Cuidado e Uso de Animais de Laboratório e foram realizados de acordo com as diretrizes éticas institucionais. Estes animais de laboratório foram adquiridos a partir de Xangai Branch Center, Instituto de Ciência Animal Laboratory, da Academia Chinesa de Ciências Médicas (também conhecido como Shanghai CAS, número de certificado: SCXK [Hu] 2003-0003). Todos os procedimentos experimentais foram realizados em conformidade com as diretrizes institucionais para o cuidado e uso de animais de laboratório, e os protocolos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Animal Care and Use na China Medical University, Shenyang, China. Todos os esforços foram feitos para minimizar o sofrimento.

Amostras de tecidos e Patologia

Todos os espécimes câncer gástrico parafina derivado do paciente incorporado (n = 264) e seus espécimes NNM pareados (2 cm de distância do carcinoma n = 209) foram coletadas de ressecção cirúrgica e arquivados sob protocolos aprovados pelos Institutional Review Boards do Hospital China Medical University Primeira filiados. carcinoma gástrico fresca e NNM adjacente foram recolhidas e congeladas em -80 ° C até à extracção da proteína por homogeneização em tampão de lise RIPA. O diagnóstico histológico e outras características microscópicas foram confirmados por patologistas eo estadiamento TNM para cada carcinoma gástrico foi avaliada de acordo com o sistema da União Internacional contra o Cancro le (UICC) para a extensão da disseminação do tumor. arquitetura histológica de carcinoma gástrico foi expressa na classificação de Lauren e a classificação da Organização Mundial da Saúde (OMS). Além disso, foram determinados o tamanho do tumor, profundidade de invasão e linfático.

linhas celulares e Cultura

As linhas celulares de cancro gástrico humano MKN28 (bem diferenciado), AGS, SGC-7901 (moderadamente diferenciado ), MGC803 (pouco diferenciado) e a linha celular gástrica humana normal GES-1 adquiridos a partir do banco de células da Academia chinesa de Ciências. Cinco linhas celulares foram mantidas em meio RPMI 1640 (Hyclone cidade, Logan, EUA) suplementado com 10% de soro fetal de bovino (FBS). Todas as linhas celulares foram em 5% de CO _{2 atmosfera humidificada a 37 ° C.}

tissue microarray (TMA) e imuno-histoquímica

foram identificadas áreas representativas de tumores sólidos e NNM adjacente nas secções dos casos selecionados coradas com HE e um núcleo de tecido de 1,5 mm de diâmetro por bloco doador foi perfurado e transferidos para um bloco receptor com um máximo de 200 (10 × 20) núcleos usando um instrumento de diâmetro perfurador de 1,5 mm. Depois de re-derretido, seções (4 mm de espessura) foram consecutivamente cortado de cada bloco de tissue microarray, coloração HE foi realizada em TMA para confirmação de tumor e tecido da mucosa. A análise imuno-histoquímica foi realizada em secções de TMA, recuperação de antigénio mediada panela de pressão foi realizada em tampão de citrato (pH 6,0) durante 10 min. As secções foram incubadas com 1:300 diluição de LDH-A (subunidade músculo) O anticorpo monoclonal de coelho (epitomics) durante a noite a 4 ° C, e, em seguida, incubadas com anticorpo de cabra anti-ratinho ou anti-coelho Envision Plus System-HRP (Dako Cytomation) para 30 min à temperatura ambiente. Após lavagem três vezes em PBS durante 10 minutos cada, as secções foram incubadas com DAB durante 1 min, contra-coradas com Hematoxilina de Mayer, desidratado, foi afastada e montado. A omissão do anticorpo primário foi usado como controlo negativo.

Análise Western Blot

Proteínas concentrações de amostras extraídas a partir de amostras de tecidos e linhas celulares utilizando precipitação com tampão de ensaio de lise radioimune foram determinadas utilizando o reagente de Bradford ( Sigma) de acordo com as instruções do fabricante. proteína desnaturada foi separada sobre uma sulfato de dodecilo de sódio (SDS) em gel de poliacrilamida (10% acrilamida) e transferidas para membranas de fluoreto de polivinilideno (Millipore, Bedford, MA), o qual foi, em seguida, bloqueadas em leite isento de gordura a 5% em solução salina tamponada com Tris (pH 7,5). Para imunotransferência, a membrana foi incubada durante a noite com LDH-A (subunidade muscular) Coelho Anticorpo Monoclonal (1:1500) (epitomics) a 4 ° C. Em seguida, foi lavado por TBST e incubaram-se com anticorpos secundários durante 15 minutos. Os sinais foram detectados por quimioluminescência aumentada (Pierce, Rockford, IL).

O acompanhamento após a cirurgia

Os 264 pacientes que se submeteram gastroctomy foram submetidos a fechar observação clínica, incluindo no peito /abdominal /pélvica tomográfica (CT) computado, o nível de CEA, e os testes de sangue em intervalos de 2 a 3 meses e uma gastroscopia anual. Follow-up estava de acordo com a National Comprehensive Cancer Network orientações (NCCN) Prática no câncer gástrico. taxa de sobrevivência global (OS) foi definido como o intervalo entre a cirurgia inicial de morte. A data final do estudo de acompanhamento para a realização da análise foi 29 de junho de 2012.

Avaliação da imuno-coloração

Imunoreatividade foi avaliada independentemente por dois pesquisadores que estavam cegos para o resultado do paciente. A avaliação baseou-se a intensidade da coloração. intensidade da coloração de LDH-A foi pontuada como 0 (negativo); 1 (fraca); 2 (moderada); e 3 (forte). Os espécimes foram divididos em dois grupos de acordo com suas pontuações: 0 e 1 são baixas grupo expressão; 2 e 3 são grupo de alto expressão. No caso de discrepância na pontuação, as lâminas foram reexaminados por ambos os patologistas sob um microscópio.

Geração de de pequena interferência (si) RNA Knockdown linhas celulares estáveis ​​

Com base na LDH -A sequência, shRNA foi concebido utilizando siRNA alvo localizador (Ambion): a sequência de nucleótidos do inserido ShLDH-a foi 5'-ATCCAGTGGATATCTTGACCTACG TGGCT-3 '. A linha celular gerada por células com o plasmídeo codificado infectar foi utilizada como um controlo. 10 ug de shRNA e 25 ul de Lipofectamina 2.000 (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, EUA) foram misturados com 1350 mL de meio RPMI-1640 (sem FBS), e, em seguida, a mistura foi transfectada para células MGC-803 de cancro gástrico. A mistura foi adicionada a uma ^{2 cm balão de 25 cultura que foi previamente revestida com uma × 10 6 MGC-803 células de cancro gástrico. O meio de cultura foi substituído com meio completo 6 h após a inoculação de RPMI-1640 e a 28 h após a transfecção, foram seleccionados os clones de células estáveis ​​durante 2 semanas com neomicina e analisados ​​por imunotransf erência.}

Extração de RNA e quantitativa em tempo real Análise de RT-PCR

o ARN total foi isolado a partir de células utilizando o reagente TRIzol de acordo com as instruções do fabricante (Invitrogen), e 1? g de ARN foi processado directamente em ADNc utilizando um kit de transcrição reversa (Promega, Madison, Wisconsin), de acordo com as instruções do fabricante. reacções de amplificação foram realizadas num volume de 20 ul com 0,2 ul de SYBR Green (Bio-Rad, Hercules, Califórnia). Estas reacções foram realizadas em triplicado utilizando um BioRad iCycler (Bio-Rad). p-actina foi utilizado como um controlo interno. Os iniciadores utilizados foram os seguintes: LDH-A, 5'-CTCCTGTGCAAAATGGCAAC-3 '(directo) e 5'-CCTAGAGCTCACTAGTCACAG-5' (inverso); andβ-actina, 5'- GATCATTGCTCCTCCTGAGC-3 '(directo) e 5'-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3' (inverso). A especificidade da PCR em tempo real quantitativo foi verificada por análise da curva de fusão e de electroforese em gel de agarose.

MTT e Ensaio de Formação de Colónias

Para a análise do crescimento celular, um número igual de células foram semeadas em placas de 48 placas -Bem. O número total de células foi medida todos os dias pelo ensaio MTT de acordo com o protocolo do fabricante (Roche Applied Science). Para a análise de formação de colónias, igual número de células de controlo e células de silenciar a expressão de LDH-A foram semeadas em placa de cultura de 60 mm de triplicado. As células foram cultivadas durante 7 dias, o crescimento celular foi parada após 7 dias em cultura por remoção do meio e adição de solução de violeta de cristal a 0,5% em metanol a 20%. Após a coloração durante 5 min, as células fixadas foram lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS), fotografada, e dissolveu-se com 1% de SDS. O número de colónias em cada grupo foi contado.

tumorigenicidade Ensaio

Os MGC-803 células de GC xenoenxertos foram produzidos em ratos atímicos fêmea de 6 semanas de idade (Vital River Laboratories, Pequim, China) por injecção de 5 × 10 ^{6 células em 0,2 ml de PBS no flanco de cada murganho (6 ratinhos /grupo). formação do tumor foi avaliado semanalmente. O volume do tumor foi calculado de acordo com a fórmula:. V (mm 3) = a x b 2/2 (em que a é o diâmetro superficial maior e b representa o diâmetro menor superficial)}

medição da concentração de lactato e produção do ATP

Após 48 horas de incubação, o lactato, e os níveis de ATP no meio de cultura foram medidos utilizando kits de ensaio disponíveis comercialmente (adquirido a partir de BioVision [mountain View, Califórnia], e Roche Applied Science , respectivamente). Os resultados foram corrigidos para o número final da contagem de células.

Análise Estatística

Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o SPSS 17.0 (SPSS Inc, Chicago, IL). taxas de sobrevida global foram determinadas usando o estimador de Kaplan-Meier, um evento que está sendo definida como morte por causas relacionadas ao câncer. O teste de log-rank foi utilizado para identificar diferenças entre as curvas de sobrevida. Na análise univariada, bicaudal χ ^{foram usados ​​2 testes ou bicaudal teste t para comparações estatísticas. E modelo de risco proporcional de Cox foi utilizado na análise univariada e multivariada, para identificar fatores significativos correlacionados com o prognóstico. Para todas as análises, apenas valores de P <. 0,05 foram considerados significativos}

Resultados

LDH-A Expressão em tecidos de câncer gástrico humano

Nós classificados secções coradas de TMAs de GC e núcleos de tecido NNM para a sua citoplasmática intensidade de coloração imuno-histoquímica contra a LDH-A proteína. As amostras incluíram 264 legíveis carcinoma gástrico e 209 NNM combinados. A coloração citoplasmática difusa típico da proteína pode ser encontrada em muitos carcinoma gástrico e tecidos gástricos normais, como mostrado na Figura 1, tecido de cancro apresentaram coloração citoplasmática positiva para 201 casos (76,14%), enquanto que entre os 209 casos de NNM, 131 casos ( 62,68%) tinha HDL-A expressão positiva (Tabela 1). Para investigar a expressão quantidade de LDH-A em amostras de GC, a expressão de LDH-A foi analisado por análise de Western blot em sete tumores seleccionados aleatoriamente e os tecidos normais emparelhadas. A regulação da LDH-A foi observada em amostras de GC em comparação com os tecidos normais, emparelhados (Fig. 2a). Estes estudos indicaram que a LDH-A foi significativamente sobre-regulada em amostras cancerosas em comparação com tecidos não cancerosos adjacentes (Tabela 1. p = 0,002).

Análise da expressão de LDH-A em linhas de células gástricas

análise de transferência de Western foi realizada em linhas celulares gástricas. O Western blot mostrou que a expressão da LDH-A foi significativamente forte em MGC803 pouco diferenciado e moderadamente diferenciado AGS; fraco em moderadamente diferenciado SGC-7901 e bem diferenciadas MKN28; e ausente em linha celular gástrica humana normal GES-1 (Fig. 2 b).

Variáveis ​​clínicopatológicos na 264 casos de carcinoma gástrico

Como resumido na Tabela 2, nós descobriram que a expressão de um aumento LDH-A foi significativamente associada com a idade dos pacientes (p = 0,004) e tipo histológico (p = 0,02), metástases em linfonodos (P = 0,043), mas não com o sexo (P = 0,072), o tamanho do tumor (P = 0,086) , profundidade de invasão (P = 0,328), invasão linfática (P = 0,738), grau Lauren (P = 0,152) ou estágio TNM (P = 0,417).

Análise de Sobrevivência

O 5 taxa oS year dos 264 pacientes com câncer gástrico primário foi de 46% (122/264), com 142 óbitos observados durante o período de acompanhamento. A duração média do acompanhamento foi de 50 meses (variação de 9-78 meses). A análise de sobrevida de Kaplan-Meier curva de sobrevivência e teste log-rank demonstrou que pacientes com alta expressão de LDH-A no tecido tumoral apresentaram uma sobrevida global significativamente pior do que pacientes com tumor de baixo LDH-A expressão (P < 0,001; Fig. 3) . Com o objetivo de explorar o potencial relação entre a expressão da LDH-A eo prognóstico em diferentes tipos de GC, foi avaliada a sobrevivência de pacientes em diferentes subgrupos: Quando a análise estatística foi realizada estratificada por Lauren grau e classificação histológica, significado apareceu em tipo difuso GC e GC tipo indiferenciado (P < 0,001, respectivamente), mas não em intestinal (P = 0,179) ou (P = 0,104) mais diferenciadas. A análise multivariada foi realizada utilizando o modelo de riscos proporcionais de Cox para todas as variáveis ​​significativas na análise univariada. A Tabela 3 mostra o significado: Ajustado para outras variáveis, os resultados da análise multivariada mostrou que LDH-A expressão (P < 0,001), invasão linfática (P = 0,046) e grau Lauren (P = 0,001), estadiamento TNM (P = 0,006), mas não a idade (P = 0,053), o tamanho do tumor (P = 0,111), profundidade da invasão (P = 0,598), metástases em linfonodos (P = 0,089), ou tipo histológico (P = 0,674), eram independentes de prognóstico fatores de risco para oS (Tabela 3).

Knockdown de LDH-a por siRNA Reduz a Expressão da LDH-a na MGC-803

de acordo com os resultados western blot e em tempo real RT -PCR, a expressão da LDH-a diminuição eficaz na LDH-a-siRNA expressando células MGC-803. Como mostrado na Figura 4, a expressão de LDH-A proteína ensaiadas por Western Blot era dificilmente detectáveis, e o nível de ARNm PKM2 foi reduzido em 74% na LDH-A-siRNA expressando células MGC-803. LDH-A expressão permaneceu inalterada em ambas as linhas celulares GC e as linhas de células que expressam um controle siRNA.

Knockdown de LDH-A inibiu o crescimento de GC celular Lines MGC-803

Para avaliar tumor o crescimento celular, utilizou-se ensaios de formação de MTT e colônia. No ensaio MTT, brometo de silenciar a expressão de LDH-A inibiu a proliferação de células MGC-803 (Fig. 5a, b). O crescimento de células MGC-803 que expressam ARNsi de LDH-A diminuição de 64%, após 168 horas de incubação, em comparação com aquele das células de controlo (p < 0,05). Consistentemente, silenciar a expressão de LDH-A atenuou o crescimento independente de ancoragem de células MGC-803 (Fig. 5C, D). -LDH de um knockdown nestas células impediram a formação de colónias, indicando que o crescimento dependente de ancoragem foi restaurado. Estes resultados sugerem ainda mais o papel oncogênico de LDH-A no câncer de GC.

Knockdown de LDHA inibiu a tumorigenicidade em xenoenxerto mouse Modelos

Neste estudo, nós examinamos a capacidade tumorigénica de LDH-A na Vivo. A tumorigenicidade in vivo de células MGC siLDH-A-803 e as células de controlo foi avaliada por injecção subcutânea de células em ratinhos pelados atímicos. Consistente com os estudos in vitro, silenciar a expressão de LDH-A atenuou dramaticamente a tumorigenicidade de células-A LDH no tamanho do tumor. Para todos os xenoenxertos de combinados, tumores siLDH-A foram significativamente menores do que os dos controlos (Fig. 5e, F).

knockdown de LDH-A por siARN Reduz Lactato e a produção de ATP em linhas celulares de GC humano MGC- 803

Como LDH-a é a enzima chave para a transformação de piruvato em lactato, alteração da sua expressão em células GC deve afectar a produção de lactato e o metabolismo energético. Para testar esta hipótese, foram comparados produção de lactato e ATP entre células knockdown LDH-A siRNA e células de controlo após uma incubação de 48 horas. Quando LDH-A foi derrubado por siRNA, a capacidade da célula para produzir lactato e ATP foi drasticamente diminuída por 61,5% e 63,3% às 48 horas, respectivamente (Fig. 6a, b).

Na década de 1920, Warburg demonstrou pela primeira vez que as células cancerosas assumir taxas mais elevadas de glicose que as células normais e produzir energia quase por glicólise aeróbica para a sua exigência de energia para se adaptar as restrições ambientais, tais como hipóxia intermitente [10], [11]. No entanto, esta alteração metabólica não é simplesmente uma adaptação a um ambiente hipóxico, mas é uma estratégia celular activo que confere uma vantagem significativa para proliferação e malignidade. Agora Vegran et al
. [12] relataram que o lactato é capaz de modular directamente o fenótipo de células endoteliais, potencialmente representando um importante mecanismo pelo qual os tumores controlar o seu próprio fornecimento de sangue através morfogénese vascular. Porque as espécies de oxigénio reactivas (ROS) são naturais subprodutos da respiração mitocondrial, tem sido proposto que a conversão de glicose em lactato poderiam proteger as células cancerosas do stress oxidativo [13]. Recentemente, os resultados sugerem que o restabelecimento da fosforilação oxidativa normais em células cancerosas podem não só inibem o crescimento celular e a proliferação mas também prejudicar a capacidade metastática de células malignas [14]. Por conseguinte, a importância da glicólise aeróbica constitutivamente-regulado tem sido recentemente reconhecido na progressão tumoral, mas os mecanismos moleculares que conduzem a este fenótipo e suas contribuições para o desenvolvimento do cancro não são bem compreendidos.

LDH-A, a enzima responsáveis ​​pela transformação de piruvato em lactato, desempenha um papel importante no processo de glicólise. Vários estudos têm relatado que a expressão de LDH-A pode ser induzida por um número de oncogenes [15]. Estes relatórios suportam a ideia de que a indução de LDH-A é crítico para a actividade oncogénica destes oncogenes em células cancerosas.

A actividade oncogénica da LDH-A tem sido relatada em carcinoma esofágico, o cancro do pâncreas e células de cancro gástrico [ ,,,0],8], [9], [16]. Yongjie Zhang et al
. relataram que LDH-A redução pode suprimir a tumorigenicidade de células do tipo intestinal, cancro gástrico (ITGC) por downregulating Oct4 [17]. E Zhiyu Wang et al
. informou que LDH-A silenciamento suprime tumorigenicidade cancro da mama através da indução do estresse oxidativo mediado apoptose via mitocondrial [18]. Aqui, nós examinamos, tecido de tumor embebido em parafina fixado em formalina a partir de 264 pacientes para a expressão de LDH-A e relataram a caracterização de LDH-A expressão do GC humano, e apresentar a sua correlação com os parâmetros clínico e prognóstico do paciente. Em primeiro lugar, verificou-se que a expressão de LDH-A foi elevada em amostras de GC em comparação com os tecidos normais correspondentes. Este resultado pode ser consistente com o estudo anterior que, em vários tipos de cancros humanos, a expressão de LDH-A foi regulado para cima [4], [5]. No tecido tumoral, o nosso estudo mostrou que a LDH-A expressão foi fortemente correlacionada com a GC clinicopatológico características: idade, metástases em linfonodos e classificação histológica. Assim, propõe-se que a sobre-regulada de LDH-A expressão pode contribuir para a proliferação e o desenvolvimento de GC. Em segundo lugar, analisamos ainda mais o papel prognóstico da LDH-A sobre a sobrevida global dos pacientes com GC. Kaplan-Meier análise mostrou uma associação significativa entre a LDH-A expressão e sobrevida global dos pacientes, e os pacientes com forte LDH-A coloração tinha uma taxa de sobrevivência inferior. Quando a análise estatística foi realizada estratificada por Lauren grau e classificação histológica, significado apareceu no tipo GC difusa e do tipo indiferenciado GC, mas não nos intestinais ou diferenciadas. siRNA específica contra LDH-A foi realizada em MGC803 células e crescimento celular retardada tanto in vitro e em modelos de ratos. -LDH de um knockdown também reduziu a produção de ATP e de lactato nas células de GC. Portanto, nossos resultados sugerem que a expressão de LDH-A foi um fator independente de prognóstico de OS, e indicou que LDH-A pode ter um papel oncogênico no desenvolvimento do tumor, especialmente no tipo GC difuso ou pacientes tipo GC indiferenciadas. Consistente com o nosso estudo, foi relatado que derrubar a expressão de LDH-A em células de carcinoma hepatocelular humano poderia induzir a apoptose [8], e regulação negativa de LDH-A pode aumentar a produção de ROS e da concentração de Ca2 + de sinalização, o que reduziu o interior potencial de membrana mitocondrial e levou à liberação de citocromo C em células de carcinoma hepatocelular.

em conjunto, nosso estudo indica que a expressão regulada para cima da LDH-a fornece células cancerosas gástricas com vantagens de crescimento. Ao mesmo tempo, o nosso estudo sugere LDH-A como um potencial alvo terapêutico.

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