Plos ONE: Clinicopathological Pomen in prognostičnih vrednost laktat-dehidrogenaze izraza želodčnega raka Patients

, encim, odgovoren za preoblikovanje piruvat v laktat, je bila dokazana

Povzetek

Uvod

LDH-A da je up-urejeno v mnogih vrstah raka in povzročajo več agresivnega vedenja, ki jih ureja orožja in anti-apoptozo. Vendar pa je njen izraz na raka želodca (GC), ni bila temeljito označen. Namen te raziskave je bil pojasniti izraz in možnega vpliva LDH-A v GC.

Metode
Proučili smo LDH-A izražanje imunohistokemijo na GC tkiv mikromrež (TMA) in z uporabo

Western blot na svežih GC tkiv in celičnih linij. Prognostično vrednost in povezovanje z drugimi clinicopathologic dejavniki so bili ocenjeni. Mi transfektiramo siRNA v GC celice proti LDH-A. LDH-A smo analizirali z Western blot in v realnem času RT-PCR. Rast celic so ovrednotili in vitro in in vivo. Laktat in proizvodnja ATP celice so bile določene.

Rezultati

Tam je bila bistveno višja LDH-A izraz v raka kot pri drugih ne-neoplastične sluznice (NNM). Tam je bila pozitivna korelacija LDH-A izražanja s starostjo, histološki tip in bezgavkah. Preživetje analiza je pokazala, da je bila visoka ekspresija LDH-A v GC povezano s spodnjim skupnega preživetja (OS). Ko je dodan še Lauren razredu in histološko klasifikaciji pomen pojavil v difuzni tip in nediferencirani tipa GC. V multivariatne analize, je LDH-A izraz v GC neodvisni napovedni dejavnik tveganja za OS (razmerje ogroženosti = 1,829; 95% interval zaupanja 1,375-2,433, P < 0,0001). Specifična siRNA proti LDH-A v GC celične linije rasti zaostal celic in vitro in v modelih miško. LDH-A rasklapanje zmanjša laktata in ATP v GC celicah.

Sklepi

Naša raziskava je pokazala, da onkogenega vlogo LDH-A v GC. LDH-A izraz je neodvisen napovedni dejavnik tveganja pri bolnikih GC in reguliran izraz LDH-A je lahko napovedujejo slabih rezultatov v difuznega tipa in nediferencirani tipa GC. Naši rezultati kažejo, da lahko LDH-A potencialna terapevtska tarča raka želodca

Navedba. Ned X, ned Z Zhu Z, Guan H, Zhang J Zhang Y, et al. (2014) Clinicopathological Pomen in prognostičnih vrednost laktat-dehidrogenaze izraza v želodčnih bolnikih z rakom. PLoS ONE 9 (3): e91068. doi: 10,1371 /journal.pone.0091068

Urednik: Anthony W.I. Lo, kitajski University of Hong Kong, Hong Kong

Prejeto: 12. avgust 2013; Sprejeto: 7. februar, 2014; Objavljeno: 7. marec 2014

Copyright: © 2014 Sun et al. To je odprtega dostopa članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Financiranje:. Ta študija je podprta s sredstvi iz raziskovalnih projektov v Liaoning Province znanost in tehnologijo Ministrstvo (No. 2007225017, št 2009225011-2 in št 2011415052) in projektov znanosti in tehnologije v Shenyang City (št F11-264-1-19). Med financerji imel nobene vloge pri oblikovanju študije, zbiranje in analizo podatkov, sklep, da se objavi, ali pripravi rokopisa

nasprotujočimi si interesi.. Avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

presnovne lastnosti rakavih celic bistveno razlikujejo od tistih iz normalnih celic, saj rakave celice, prednostno uporabiti glikolize namesto mitohondrijske oksidativne fosforilacije tudi v prisotnosti kisika; ta fenomen je znan kot učinek Warburg [1], [2] [3]. Presenetljivo visoka stopnja prevzemu glukoze in laktata proizvodnjo v tumorjih v prisotnosti kisika stekel Warburg da domnevajo, da bi bilo zmotno presnovo vzrok številnih raka [2]. Vendar pa je prednost metaboličnega preoblikovanja daje na rakave celice še vedno nejasen [4], [5]. Pred kratkim je odkritje povezave med onkogenov in presnovnih procesov privedla do preporod zanimanja za delo Warburg je. Vedno več je dokazov, ki kažejo, da bi lahko prilagajanje aerobne glikolize, ki ga rakave celice olajša širjenje raka [5]. Presnova Rak je bil v skladu z obsežno raziskovanje v upanju, odkrivanja novih učinkovitih terapij za raka.

LDH-A, je ključni encim, ki igra pomembno vlogo pri zadnjem koraku učinka Warburg s pretvorbo piruvata v laktat . V različnih vrstah človeških rakih, je izraz LDH-A navzgor regulirano [6] [7]. V požiralniku ploščatoceličnim karcinomom, LDH-A je bil up-urejena v tumorskih tkivih in spodbuja preživetje tumorskih celic [8]. Poleg tega je bil LDH-A poročali za povečanje rasti in migracije celic želodčnih rakavih [9]. Vendar je stanje izražanje in funkcija LDH-A v raka želodca (GC) še vedno neznano.

V tej študiji smo opisali izražanje LDH-A v veliki kohorti GC osebkov in korelaciji njenih izraz s kliničnimi patološkimi parametri in celokupno preživetje (OS). Naši rezultati kažejo, da je bil izraz LDH-A up-urejena v kliničnih želodčnih vzorcev raka, in izražanje proteina je bila povezana s starostjo, in histološko razvrstitvi. Poleg tega smo ugotovili, da je visoka LDH-A izražanja je bila povezana s slabšo prognozo pri bolnikih GC. Skupaj, je naša raziskava pokazala onkogenega funkcijo LDH-A raka želodca in predlagal, LDH-A kot novi potencialni prognostični dejavnik in potencialnega terapevtskega cilja.

Materiali in metode

Bolniki

To študijo je bilo vključenih 264 bolnikov z GC, ki sledijo kurativno operacijo od januarja 2006 do maja 2007, na prvi povezan bolnišnici China Medical University. Skupina je bila sestavljena iz 194 moških in 70 žensk s srednjo starostjo 59 (razpon, 29-81) let. Nihče od bolnikov je doživel kemoterapijo ali radioterapijo pred operacijo. Nadaljnje informacije so bile zbrane iz vse bolnike.

Etika Izjava

Etični odobritev za te raziskave so bili pridobljeni od Odbor za etiko raziskovalnega Kitajske Medical University, Kitajska. Vsi bolniki, ki zagotavljajo tumorsko tkivo kot tudi običajne vzorce želodčne tkiva podpisali obrazec o soglasju pred kirurško odstranitvijo karcinoma želodca, da se omogoči, da se te raziskave je treba izvesti. Vsi postopki študije na živalih so bili v skladu z National Institutes of Health Vodnik za nego in uporabo laboratorijskih živali, in so bile izvedene v skladu z institucionalno etične smernice. Te laboratorijske živali so bile kupljene od Shanghai Branch center, Inštitut za znanosti o laboratorijskih živalih, kitajske akademije medicinske vede (znan tudi kot Shanghai CAS, številka certifikata: SCXK [Hu] 2003-0003). Vsi eksperimentalni postopki so bili opravljeni v skladu s smernicami ustanove za nego in uporabo laboratorijskih živali, in protokoli je odobril Odbor za institucionalne živali Nega in uporabo na Kitajskem Medical University, Shenyang, Kitajska. Vsa so bila prizadevanja za zmanjšanje trpljenja.

tkiv Vzorci in Pathology

Vse bolnik izhaja parafin vgrajeni želodcu osebki raka (n = 264), in njihove ujema Strip osebki (2 cm stran od karcinoma n = 209) so bili zbrani iz kirurški odstranitvi in ​​arhivirajo v skladu s protokoli, ki jih institucionalne Pregled svetih Najprej povezano Hospital China Medical University odobril. Sveži želodca karcinom in sosednji NNM zberemo in zamrznemo pri -80 ° C, dokler ekstrakcijo proteinov s homogenizacijo v RIPA liznega pufra. Histološko diagnozo in druge mikroskopske značilnosti so potrdili patologi in TNM počivališče za vsako raka želodca, je bila ocenjena v skladu z Union International Contre le proti raku (UICC) sistema za obseg širjenja tumorja. Histološka arhitektura raka želodca je bila izražena v razvrstitvi Lauren in klasifikaciji Svetovne zdravstvene organizacije (WHO). Poleg tega smo določili velikost tumorja, globina invazije, in limfatičnega.

Mobilni Lines in kulture

želodčni rak humane celične linije MKN28 (dobro diferenciran), AGS, SGC-7901 (zmerno razlikuje ), MGC803 (slabo diferenciran) in človeško normalno želodca celične linije GES-1 kupili od banke celice kitajske akademije znanosti. Pet celične linije smo vzdrževali v RPMI 1640 (Hyclone, Logan mesta, ZDA), dopolnjenem z 10% fetalni goveji serum (FBS). Vse celične linije so bile v 5% CO _{2 navlaženi atmosferi pri 37 ° C.}

Tissue Mikromrežni (TMA) in Imunohistokemija

smo identificirali Reprezentativni področja solidnih tumorjev in sosednji Strip v HE-obarvane dele izbranih primerih in jedro tkivo 1,5-mm-premer na bloku darovalca je udaril ven in prenesli v bloku prejemnika z največ 200 (10 × 20) jeder z uporabo 1,5-mm premer punch instrumenta za. Po ponovno stopljeno-, so odseki (4 m-debele) zaporedoma izrezano iz vsakega tkiva mikromrež blok, HE obarvanje je bila izvedena na TMA za potrditev tumorja in sluznice tkiva. Imunohistokemični analizi je bila izvedena na TMA odsekih je tlačni kuhalnik posredovana pridobivanje antigena izvedemo v citratnem pufru (pH 6,0) 10 minut. Odseki inkubiramo z 1:300 redčenjem LDH-A (mišice podenote) Rabbit monoklonsko protitelo (epitomics) preko noči pri 4 ° C, in nato inkubirali s kozjim anti-miš ali anti-kunca Envision Sistem Plus-HRP (Dako Cytomation) za 30 min pri sobni temperaturi. Po izpiranju trikrat v PBS za vsakih 10 minut, so odseki inkubirali z DAB 1 minuto, jih nasprotno z Mayer hematoksilinom, dehidrirani, očistili in montiran. Opustitev primarno protitelo smo uporabili kot negativno kontrolo.

Western Blot Analiza

Proteine ​​smo določili koncentracije vzorcev ekstrahiranih iz tkivnih vzorcev in celičnih linijah s pomočjo radioimunskim padavin vsebnosti liznega pufra uporabo Bradford reagenta ( sigma) v skladu z navodili proizvajalca. Denaturirani protein smo ločili na natrijevega dodecilsulfata (SDS) -polyacrylamide gelu (10% akrilamida) in prenesemo na poliviniliden fluorid membrane (Millipore, Bedford, MA), ki je bila nato blokirali v 5% nemastnega mleka v Tris-pufrom (pH 7,5). Za imuno smo membrano inkubirali preko noči z LDH-A (mišica podenota) Rabbit monoklonsko protitelo (1:1500) (epitomics) pri 4 ° C. Nato se je splaknemo s TBST in inkubirali s sekundarnimi protitelesi za 15 minut. Signali so odkrile okrepljeno kemiluminescence (Pierce, Rockford, IL).

Spremljanje po operaciji

264 bolnikov, ki so šli skozi gastroctomy bili podvrženi zapreti klinično opazovanje, vključno prsih /trebušne /medenici izračunana tomografsko (CT) slikanje, raven CEA in testiranje krvi na 2 do 3 mesečnih intervalih in letno gastroskopija. Spremljanje je bil v soglasju s smernicami National Comprehensive Cancer omrežja (NCCN) Practice raka želodca. Celotna preživetje stopnja (OS) je definiran kot v razponu od začetne operacijo do smrti. Končni datum študije spremljanja za izvedbo analize se je 29. junij je bil 2012.

Vrednotenje Imunohistokemijsko

radioinkorporacijo neodvisno ocenjevati dveh raziskovalcev, ki so bili zaslepljeni, da izid bolnikov. Ocena je temeljila na intenziteto barvanja. Obarvanjem intenzivnost za LDH-A je dosegel kot 0 (negativno); 1 (slabo); 2 (zmerna); in 3 (močan). Osebki so bili razdeljeni v dve skupini glede na njihove rezultate: 0 in 1, so nizke izraz skupina; 2 in 3 sta visoka ekspresija skupina. V primeru neskladja v točkovanju diapozitive bili obe patologov ponovno pregledajo pod mikroskopom.

generacija mala moteče (si) RNA rasklapanje Stabilno Cell Lines

Na podlagi LDH -A sekvenca je shRNA namenjeni uporabi siRNA Target Finder (Ambion): nukleotidna sekvenca vstavljena ShLDH-A je 5'-ATCCAGTGGATATCTTGACCTACG TGGCT-3 '. Celična linija ustvari okužili celice umešana plazmida smo uporabili kot kontrolo. 10 mikrogramov shRNA in 25 ul Lipofectamine 2000 (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, ZDA) smo zmešali skupaj z 1350 ul RPMI-1640 medij (brez FBS) in nato zmes transfektirali v MGC-803 želodčnih rakavih celic. Zmes dodamo v 25-cm ^{2 kulture bučki, ki je bila predhodno prevlečeni z 1 x 10 6 MGC-803 želodčnih rakavih celic. Gojitveni medij je bila nadomeščena s popolno RPMI-1640 medij 6 h naslednjo inokulacijo in pri 28 ur po transfekciji smo izbrali stabilne klone celic 2 tednih neomicin in analizirali z imuno.}

RNK Pridobivanje in v realnem času Kvantitativni RT-PCR analizo

Celotno RNA smo izolirali iz celic, ki uporabljajo TRIzola reagenta v skladu z navodili proizvajalca (Invitrogen) in 1 ug RNA smo obdelali neposredno cDNA s pomočjo reverzne transkripcije kit (Promega, Madison, Wisconsin), v skladu z navodili proizvajalca. Amplification reakcije so bile izvedene v volumnu 20-ul z 0,2 ul iz SYBR Green (Bio-Rad, Hercules, Kalifornija). Te reakcije so bile izvedene v treh izvodih z uporabo BIORAD iCycler (Bio-Rad). beta-aktina je bila uporabljena kot notranje kontrole. Primerji, ki se uporabljajo, so bili naslednji: LDH-A, 5'-CTCCTGTGCAAAATGGCAAC-3 '(naprej) in 5'-CCTAGAGCTCACTAGTCACAG-5' (nazaj); andβ-Actin, 5'-GATCATTGCTCCTCCTGAGC-3 '(naprej) in 5'-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3' (nazaj). Specifičnost realnem času kvantitativne PCR je bila preverjena s topljenjem analizo krivulje in elektroforezo na agaroznem gelu.

MTT in Colony Formation Vsebnost

Za analizo rasti celic, enako število celic smo zasejali v 48 No plošče. Skupno število celic smo merili vsak dan MTT testom po protokolu proizvajalca (Roche Applied Science). Za analizo tvorbe kolonij, je bilo enako število kontrolnih celic in celic za dušenje zvoka izražanje LDH-A zasejali v 60 mm kulture jed v treh izvodih. Celice smo gojili 7 dni, je bila rast celic ustavila po 7 dneh v kulturi z odstranitvijo medija in dodatkom 0,5% Raztopina kristal vijoličnega v 20% metanola. Po obarvanjem 5 minut, so bile določene celice izperemo s fosfatnim pufrom (PBS), fotografirali in raztopili z 1% SDS. preštejemo število kolonij v vsaki skupini.

tumorogenosti Vsebnost

MGC-803 GC celic ksenotransplantati so bili proizvedeni na 6 tednov stare ženske gole miši (Vital River Laboratories, Peking, Kitajska) z vbrizganjem 5 x 10 ^{6 celic v 0,2 ml PBS v bok vsaki miši (6 miši /skupina). nastanek tumorja je bila ocenjena vsak teden. volumen tumorja je bila izračunana po formuli:. V (mm 3) = a × b 2/2 (kjer je največji površinski premer in b je najmanjša površno premer)}

merjenje laktata Koncentracija in ATP proizvodnje

Potem, ko so bili 48 ur inkubacije, laktat in na ravni ATP v medijih kulture merili z uporabo komercialno dostopnih testa s sklopi (kupljene od BioVision [Mountain View, California], in Roche Applied Science oz). Rezultati so bili popravljeni pri končnem številu število celic.

Statistična analiza

Vse statistične analize smo izvedli s pomočjo SPSS 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Splošne stopnje preživetja so bile določene z uporabo Kaplan-Meier cenilec, dogodek, ki je opredeljen kot smrt za povezane z rakom vzroka. Preskus log-rank je bila uporabljena za ugotavljanje razlike med krivuljami preživetja. V univariantne analizi dveh zimsko χ ^{2 testa ali dve zimske preizkus t so bili uporabljeni za statistične primerjave. In model proporcionalni nevarnosti Cox je bila uporabljena v univariantne analize in analize multivariatne, da prepoznajo pomembne dejavnike, ki se ujemajo s prognozo. Za vse analize, samo P vrednosti. ≪ bilo 0,05 štejejo za pomembne}

Rezultati

LDH-A Izražanje v Human želodca raka tkiva

ocenjena smo obarvajo dele za TMAs GC in tkiva jedra NNM za njihovo citoplazemske imunohistokemičnim intenzivnost obarvanja proti LDH-A beljakovin. Berljivo vzorci vključeni 264 želodca karcinom in 209 ujema Strip. Značilna difuzna citoplazemski obarvanje proteina najdemo v mnogih želodčnega raka in normalnih želodca tkivih, kot je prikazano na sliki 1, rak tkiva pokazala pozitiven citoplazemsko obarvanja v 201 primerih (76,14%), medtem ko je med 209 primerih NNM, 131 primerih ( 62,68%) je LDH-A pozitiven izraz (tabela 1). Da bi raziskali izraz količine LDH-A v vzorcih GC, je izraz LDH-A pregledal zahodni blot analizo v sedmih naključno izbranih tumorjev in seznanjenih normalnih tkivih. Regulacijo navzgor LDH-A opazili v vzorcih GC primerjavi s parnih normalnih tkivih (sl. 2a). Te študije so pokazali, da je bila LDH-A bistveno povečana pri rakavih osebkov v primerjavi s sosednjimi ne-rakavih tkiv (tabela 1 p = 0,002).

Izražanje Analiza LDH-A v želodcu celičnih linijah

Western blot analiza je bila izvedena v celičnih linijah želodca. Western Blot je pokazala, da je bil izraz LDH-A zelo močna v slabo diferencirano MGC803 in zmerno razlikuje AGS; šibka zmerno diferenciranega SGC-7901 in tudi različno MKN28; in ni v humani normalni želodca celične linije GES-1 (sl. 2 b).

Clinicopathological Razlike v 264 primerih želodca karcinom

Kot je povzeto v tabeli 2, Ugotovili smo, da povečano izražanje LDH-A je bila značilno povezana s starostjo bolnikov (P = 0,004) in histološki tip (P = 0,02), na bezgavkah metastaze (P = 0,043), vendar ne s spolom (P = 0,072), velikost tumorja (P = 0,086) , globina invazije (P = 0,328), limfna invazija (P = 0,738), Lauren razred (P = 0,152) ali stopnja TNM (P = 0,417).

Survival Analysis

5 -Leto stopnja OS od 264 bolnikov s primarnim rakom želodca je bila 46% (122/264), s 142 smrtnih primerov, zabeleženih v obdobju spremljanja. Mediano trajanje spremljanja je bilo 50 mesecev (razpon, 9-78 mesecev). Preživetje analiza s testom preživetje krivulje in log-ranga Kaplan-Meier je pokazala, da so imeli bolniki z visokim izražanja LDH-A v tumorskem tkivu precej slabše skupno preživetje kot pri bolnikih s tumorsko nizko LDH-A izražanja (P < 0,001;. Slika 3) . Z namenom raziskuje morebitno povezavo med izražanjem LDH-A in prognozo pri različnih vrstah GC, smo ocenili preživetje bolnikov v različne podskupine: Ko je bila statistična analiza opravljena stratificiran Lauren razredu in histološko klasifikaciji pomen pojavil v difuzna tip GC in nediferencirani tip GC (P < 0,001 oz), ne pa v črevesju (P = 0,179) ali diferenciranih (p = 0,104) narave. Multivariatna analiza je bila opravljena s pomočjo Cox sorazmernih tveganj model za vse pomembnih spremenljivk v univariantne analize. Tabela 3 prikazuje pomen: korigirano drugih spremenljivk, rezultati iz multivariatne analize so pokazale, da LDH-A izraz (P < 0,001), limfna invazija (P = 0,046) in Lauren razred (P = 0,001), TNM faza (P = 0,006), ne pa tudi starost (P = 0,053), velikost tumorja (P = 0,111), globina invazije (P = 0,598), bezgavko metastaze (p = 0,089), ali histološki tip (P = 0,674) so ​​neodvisni napovedni dejavniki tveganja za OS (tabela 3).

rasklapanje od LDH-A s siRNA Zmanjša Podajanje LDH-A v MGC-803

Glede na zahodni rezultatov blot in v realnem času RT -PCR, izraz LDH-A dejansko se je v LDH-A-siRNA izražanje MGC-803 celic. Kot je prikazano na sliki 4, je izraz LDH-proteina z western blot preizkušene komaj zaznavnega, raven PKM2 mRNA se je zmanjšala za 74% v LDH-A-siRNA izraža MGC-803 celice. LDH-A izraz ostal nespremenjen v obeh celičnih linijah GC in celičnih linij, ki izražajo nadzor siRNA.

rasklapanje od LDH-A inhibira rast GC celičnih linij MGC-803

Da bi ocenili, tumor rast celic, smo uporabili MTT in kolonijami formacijskih testov. V MTT testu utišanje izražanje LDH-A inhibira proliferacijo MGC-803 celicah (sl. 5a, b). Rast MGC-803 celic, ki izražajo LDH-A siRNA zmanjšala za 64% po 168 urah inkubacije v primerjavi s tisto kontrolnih celic (P < 0,05). Dosledno, utišanje izražanja LDH-A oslabila pritrdišča neodvisen rast MGC-803 celic (sl. 5c, d). je bila obnovljena LDH-A rasklapanje v teh celicah preprečiti nastajanje kolonij, kar kaže, da je rast sidrišča odvisna. Ti rezultati so pokazali, da onkogenega vlogo LDH-A pri raku GC.

rasklapanje od LDHA zaviral tumorjev pri modelih ksenotransplantskih Mouse

V tej študiji smo preučili tumorogeno zmogljivost LDH-A in vivo. Tumorogenosti vivo celic siLDH-A MGC-803 in kontrolnih celic smo ocenili s sc injekcijo celic gole miši. V skladu s študijami in vitro, za dušenje zvoka izražanje LDH-A močno oslabila tumorogenosti celic LDH-A v velikosti tumorja. Za vse ujema presadkov so tumorji siLDH-A bistveno manjši od tistih kontrol (sl. 5e, f).

rasklapanje od LDH-A s siRNA Zmanjšuje laktat in ATP Proizvodnja v Human GC celičnih linijah MGC- 803

Ker LDH-A je ključni encim za preoblikovanje piruvat v laktat, bi sprememba svojem izrazu v GC celicah vpliva laktata proizvodnjo in presnovo energije. Da bi to hipotezo preverili, smo primerjali laktata in ATP med LDH-A siRNA rasklapanje celic in kontrolnih celic po 48-urni inkubaciji. Ko je LDH-A podrli z siRNA, sposobnost celic za proizvodnjo laktat in ATP smo 48 ur, v tem zaporedju (sl. 6a, b).

Diskusija

V letih 1920, Warburg najprej dokazal, da rakave celice prevzamejo višje cene glukoze kot normalne celice in proizvodnjo energije skoraj aerobna glikoliza za svoje energijske porabe prilagoditi okoljske omejitve, kot so prekinitvami hipoksije [10], [11]. Vendar pa je ta presnovna sprememba ni zgolj prilagoditev na hipoksično okolje, ampak je aktiven celični strategija, ki daje veliko prednost za širjenje in maligne bolezni. Zdaj Vegran et al
. [12] so poročali, da lahko laktata neposredno modulira fenotip endotelnih celic, kar lahko predstavlja pomemben mehanizem, s katerim tumorji nadzirati svojo oskrbo s krvjo preko žilnega morfogenezo. Saj so reaktivne kisikove spojine (ROS) naravni stranski produkti mitohondrijske dihanja, je bilo predlagano, da bi pretvorba glukoze laktata zaščitijo rakave celice pred oksidativnim stresom [13]. V zadnjem času, ugotovitve kažejo, da ponovna normalno oksidativno fosforilacijo v rakavih celicah, lahko ne le zavira rast celic in razmnoževanje, ampak tudi škoduje metastatskega sposobnost malignih celic [14]. Zato je pomembno konstitutivno up-reguliranega aerobne glikolize pred kratkim priznana v napredovanja tumorja, vendar molekularnih mehanizmov, ki vodijo do tega fenotipa in njihov prispevek k razvoju raka niso dobro razumeli.

LDH-A, encim odgovoren za preoblikovanje piruvat v laktat, igra pomembno vlogo v procesu glikolize. Več raziskave so poročali, da bi se izraz LDH-A inducirane s številnimi onkogenov [15]. Ta poročila podpira zamisel, da je LDH-A indukcija ključnega pomena za onkogenih dejavnosti teh onkogeni v rakavih celicah.

onkogeni aktivnost LDH-A, so poročali v požiralniku raka, raka trebušne slinavke in želodca rakave celice [ ,,,0],8], [9], [16]. Yongjie Zhang et al
. poročali, da lahko-A LDH zmanjšanje zatreti tumorogenosti za črevesne tipa celic raka želodca (ITGC), ki jih downregulating Oct4 [17]. In Zhiyu Wang et al
. poročali, da LDH-A utišanje zavira raka dojk tumorjev z indukcijo oksidativni stres posredovanega mitohondrijske poti, v apoptozo [18]. Tukaj smo pregledali, formalinom določen,-parafin vgrajeni tumorsko tkivo od 264 bolnikov za izražanje LDH-A in poročali opredelitev LDH-A izražanja v človeškem GC, in predstavi svojo povezavo z clinicopathological parametri in prognozo bolnikov. Prvič, smo ugotovili, da je izraz LDH-A povišano vzorcih GC primerjavi z izravnanih normalnih tkivih. Ta rezultat se lahko v skladu s prejšnjim študije, ki v različnih vrstah človeških rakih, je izraz LDH-A navzgor regulirano [4], [5]. V tumorskem tkivu, naša študija je pokazala, da je bila LDH-A izraz močno povezana z GC clinicopathologic značilnosti: starost, bezgavkah metastaze in histološko razvrstitvi. Zato smo predlagali, da se lahko reguliran LDH-A izraz prispevajo k širjenju in razvoju GK. Drugič, smo dodatno analizirali napovedni vlogo LDH-A na splošno preživetje bolnikov z GC. Kaplan-Meier analiza je pokazala pomembno povezavo med LDH-A izražanja in celokupnega preživetja bolnikov in bolnikov z močnejšim LDH-A barvanjem imeli nižjo stopnjo preživetja. Ko je bila statistična analiza opravljena slojevit Lauren razredu in histološko klasifikaciji pomen pojavil v difuzni tip GC in nediferencirani tipa GC, vendar ne v črevesni ali različne narave. Specifična siRNA proti LDH-A je bila izvedena v MGC803 celic in rasti zaostal celic in vitro in v modelih miško. LDH-A rasklapanje zmanjša laktata in ATP v GC celicah. Torej, naši rezultati kažejo, da je bil izraz LDH-A pripravi neodvisno napovedni dejavnik OS, in navaja, da bi morali LDH-A je onkogenega vlogo pri razvoju tumorjev, še posebej v difuzni tip PK ali bolnikih nediferenciranih tipa GC. V skladu z našo raziskavo, je bilo poročali, da podreti izražanje LDH-A v človeških hepatocelularnim karcinomom celic lahko povzroči apoptozo [8], in downregulation za LDH-A lahko poveča proizvodnjo ROS in citosolnega Ca2 + signalizacijo, ki se je zmanjšal notranji mitohondrijski membranski potencial in je privedla do sproščanja citokroma C v hepatoceličnih celic karcinoma.

Če povzamemo, je naša raziskava kaže, da se regulirano izraz LDH-A določa, želodčne rakavih celic s prednostmi rasti. Hkrati je naša raziskava kaže LDH-A kot potencialnega terapevtskega cilja.

• Plos ONE: Povečana MicroRNA-630 Expression želodčnega raka je povezana s splošno slabo preživetje
• Plos ONE: Vpliv Individualna in Neighborhood socialno-ekonomskim položajem na želodca raka preživetje