Ploche ONE: klinicko Význam a prognostický význam laktátdehydrogenázy výrazu v žalúdočnej pacientov s rakovinou

Abstract

Úvod

LDH-A, enzým zodpovedný za premenu pyruvátu na laktát, bolo preukázané, že je up-regulovaná v mnohých typov rakoviny, a viesť k oveľa agresívnejší správanie tým, že reguluje proliferáciu a anti-apoptózu. Avšak, jeho expresie v karcinómu žalúdka (GC), nie je ešte dôkladne opísané. Účelom tejto štúdie bolo objasniť expresiu a potenciálny dopad LDH-A v GC.

Metódy

Skúmali sme LDH-A výraz imunohistochemicky na GC mikroskopické sústavy tkanív (TMA) a za použitia Western blotting na čerstvé GC tkanív a bunkových línií. Prognostický význam a korelácia s ďalšími patologickým faktory boli vyhodnotené. prenesené sme siRNA do GC buniek proti LDH-A. LDH-A bola analyzovaná metódou Western blot a real-time RT-PCR. Rast buniek bol hodnotený in vitro a in vivo. Laktátu a produkcie ATP bunkami boli stanovené.

Výsledky

Tam bol výrazne vyšší LDH-A expresie v karcinómu ako u nenádorových sliznice (IPA). Tam bol pozitívna korelácia LDH-A prejavu s vekom, histologický typ a lymfatických uzlín. Prežitie analýza ukázala, že vysoká expresia LDH-A GC bola spojená s nižšie celkové prežívanie (OS). Pri rozdelenia podľa triedy a Lauren histologické klasifikácie, význam objavil v difúznym typu a nediferencovaného typu GC. V mnohorozmerné analýze LDH-A výraz v GC bol nezávislý prognostický rizikovým faktorom pre OS (pomer rizika = 1,829, 95% CI 1,375 - 2,433, P < 0,0001). Špecifická siRNA proti LDH-A v GC bunkové línie retardovaný rast buniek in vitro a v modeloch myšiach. LDH-A porazený tiež znížila laktátu a ATP výroby v GC buniek.

Závery

Naša štúdia ukázala, onkogénne rolu LDH-A v GC. LDH-A výraz je nezávislý prognostický rizikovým faktorom u pacientov s GC a up-regulovaná expresia LDH-A môže byť prediktívne zlými výsledkami v difúznym typu a nediferencovaného typu GC. Naše výsledky naznačujú, že LDH-A môže byť potenciálnym terapeutickým cieľom v karcinómu žalúdka

Citácia :. Sun X, Z Sun, Zhu Z, Guan H, Zhang J., Zhang Y, et al. (2014) klinicko Význam a prognostický význam laktátdehydrogenázy výrazu v žalúdočných pacientov s rakovinou. PLoS ONE 9 (3): e91068. doi: 10,1371 /journal.pone.0091068

Editor: Anthony W.I. Lo, čínsky University of Hong Kong, Hong Kong

prijatá: 12.08.2013; Prijaté: 7.2.2014; Uverejnené: 07.03.2014

Copyright: © 2014 Sun et al. Toto je článok o otvorený prístup distribuovaný pod podmienkami Creative Commons Attribution licencie, ktorá umožňuje neobmedzené použitie, distribúciu a reprodukciu v nejakom médiu, za predpokladu, že pôvodný autor a zdroj sú pripísané

Financovanie :. Táto štúdia bol podporený dotácií z výskumných projektov v provincii Liao-ning Oddelenie vedy a technológie (No. 2007225017, č 2009225011-2 a č 2011415052) a vedecko-technických projektov v Šen-City (č F11-264-1-19). Platcovia mal žiadnu úlohu v dizajne štúdie, zber a analýzu dát, rozhodnutie publikovať, alebo prípravu rukopisu

Konkurenčné záujmy: .. Autori vyhlásili, že žiadne konkurenčné záujmy neexistujú

Úvod

metabolické vlastnosti nádorových buniek, zásadným spôsobom líšia od tých normálnych buniek, ako rakovinové bunky prednostne využívajú glykolýzu miesto mitochondriálnej oxidatívny fosforylácie, aj v prítomnosti kyslíka; Tento jav je známy ako účinok Warburg [1], [2], [3]. Prekvapivo vysoká rýchlosť nástupu do glukózy a laktátu v nádoroch v prítomnosti kyslíka viedlo Warburg špekulovať, že aberantne metabolizmu by mohol byť príčinou mnohých rakovín [2]. Avšak výhoda metabolickej premeny prepožičiava nádorových buniek zostáva nejasná [4], [5]. V poslednej dobe sa objav spojenie medzi onkogénov a metabolických procesov viedlo k oživeniu záujmu o Warburgova prácu. Existuje stále viac dôkazov naznačuje, že adaptácia aeróbne glykolýzy rakovinovými bunkami by mohla uľahčiť šírenie rakoviny [5]. metabolizmus rakovina je pod rozsiahleho prieskumu v nádeji, že objavovanie nových účinných liečby rakoviny.

LDH-A, je veľmi dôležité enzým, ktorý hrá dôležitú úlohu v konečnom stupni účinku Warburg prevedením pyruvátu na laktát , V rôznych typoch ľudských nádorov, bola up-regulovaná expresia LDH-A [6], [7]. V pažeráka spinocelulárny karcinóm, LDH-A bola up-regulovaná v nádorových tkanivách a podporoval prežitie nádorových buniek [8]. Navyše, LDH-A bolo hlásené zvýšiť rast a migráciu buniek karcinómu žalúdka [9]. Avšak, stav expresie a funkcie LDH-A u karcinómu žalúdka (GC), stále zostávajú neznáme.

V tejto štúdii sme skúmali expresiu LDH-A z veľkej skupiny GC vzoriek a koreláciu jeho výraz s klinickými patologickými parametrami a celkové prežívanie (OS). Naše výsledky ukazujú, že expresia LDH-A bola up-regulovaná v klinických vzorkách s karcinómom žalúdka, a expresie proteínu bola v korelácii s vekom a histologické klasifikácie. Okrem toho sme zistili, že vysoko LDH-A expresie bola spojená s horšou prognózou u pacientov s GC. Celkovo vzaté, naša štúdia ukázala, že onkogénne funkciu LDH-A u rakoviny žalúdka a navrhol LDH-A ako nový potenciálny prognostický faktor a potenciálny terapeutický cieľ.

materiáloch a metódach

Pacienti

Táto štúdia zahŕňala 264 pacientov s GC, ktorí nasledovali kuratívne chirurgický zákrok od januára 2006 do mája 2007 pri rokovaní prvého pridružená nemocnice Čínskej lekárskej univerzity. Skupina bola zložená zo 194 mužov a 70 žien s priemerným vekom 59 (v rozmedzí 29-81) rokov. Žiadny z pacientov podstúpilo chemoterapiu alebo rádioterapiu pred operáciou. Nadväzujúce informácie boli zhromaždené zo všetkých pacientov.

Ethics Prehlásenie

Etické schválenie pre tento výskum bol získaný z etickou komisiou Výskumného Číny Medical University v Číne. Všetci pacienti poskytujúce nádorového tkaniva rovnako ako normálne vzorky žalúdočné tkaniva podpísal formulár súhlasu pred chirurgickým odstránením karcinómu žalúdka, aby bolo možné tento výskum majú byť vykonané. Všetky študijných postupov na zvieratách boli v súlade s National Institutes of Health Guide pre starostlivosť a používanie laboratórnych zvierat a boli vykonané v súlade s inštitucionálnymi etickými smernicami. Tieto laboratórne zvieratá bola zakúpená od Shanghai Branch Center, Institute of Animal Science Laboratory, čínskej akadémie lekárskych vied (tiež známy ako Šanghaj CAS, číslo certifikátu: SCXK [HU] 2003-0003). Všetky experimentálne postupy boli vykonávané v súlade s inštitucionálnymi pokynmi pre starostlivosť a využitie laboratórnych zvierat, a protokoly boli schválené používanie a ošetrovanie výboru Institutional Animal v Číne lekárskej univerzity, Shenyang, Čína. Bolo vynaložené úsilie, aby sa minimalizovalo utrpenie.

Tkanivové vzorky a patológie

Všetky vzorky rakovinou žalúdka pacienta odvodené od parafínu vloženej (n = 264) a ich spárované vzorky NNM (2 cm od karcinómu n = 209) boli odobraté z chirurgickej resekcii a archivované na základe protokolov schválených Institutional Review prvky prvej pridružené nemocnice Čínskej lekárskej univerzity. Čerstvé karcinóm žalúdka a priľahlý NNM boli odobraté a zmrazené v -80 ° C až do extrakcie proteínov homogenizáciou v RIPA pufri pre lýzu. Histologický diagnóza a ďalšie mikroskopické vlastnosti boli potvrdené patológov a TNM predstavovať pre každého žalúdočného karcinómu bola hodnotená podľa Union International Contre le Cancer (UICC) systému pre rozsah šírenia tumoru. Histologické architektúra karcinómu žalúdka bol vyjadrený v Lauren klasifikácie a klasifikácie Svetovej zdravotníckej organizácie (WHO). Okrem toho, veľkosť nádoru, hĺbku invázie a lymfatického boli stanovené.

bunkových línií a kultúra

Ľudské rakovina žalúdka bunkové línie MKN28 (dobre diferencovaný), AGS, SGC-7901 (stredne diferencovaný ), MGC803 (zle diferencované) a normálny ľudský žalúdočné bunkové línie GES-1 zakúpené od bunkovej banky čínskej akadémie vied. Päť bunkové línie boli udržiavané v RPMI 1640 (Hyclone centrá, Logan, USA), doplnenom 10% fetálneho hovädzieho séra (FBS). Všetky bunkové línie boli v atmosfére 5% CO _{2 zvlhčenej atmosfére pri teplote 37 ° C.}

mikroskopické sústavy tkanív (TMA) a imunohistochémia

Reprezentatívny oblasti solídnych nádorov a priľahlé IPA boli identifikované v HE-postriekané časti vybraných prípadov a 1,5 mm priemerom tkanivo žila na darcovskej blok bol prerazený a prenesie sa do bloku príjemcu s maximálnym počtom 200 (10 x 20) jadier pomocou 1,5 mm priemer dierovanie inštrumentu. Po re-roztavenie, sekcia (4 um hrubé) sa postupne znížiť z každého bloku mikroskopické sústavy tkanív, HE farbenie bolo vykonané na TMA pre potvrdenie nádoru a sliznice tkaniva. Imunohistochemické analýza bola vykonaná na TMA sekcií, Tlakový hrniec sprostredkovaná získanie antigénu bola vykonaná v citrátovom pufri (pH 6,0) počas 10 minút. Rezy boli inkubované s 1: 300 riedením LDH-A (svalová podjednotka) králičie monoklonálna protilátka (epitomics) cez noc pri 4 ° C, a potom inkubované s kozie anti-myšou alebo anti-králičie Envision System Plus-HRP (Dako Cytomation) pre 30 min pri izbovej teplote. Po opláchnutí trikrát v PBS po dobu 10 minút každý, boli rezy inkubované s DAB po dobu 1 min, kontrastne Mayerovým hematoxylínom, dehydratáciu, zrušené a montáž. Vynechanie primárnej protilátky bola použitá ako negatívna kontrola.

Analýza Western Blot

Proteíny koncentrácie vzoriek získaných z tkanivových vzoriek a bunkových línií za použitia radioimmune zrážanie test lyzačného pufra boli stanovené za použitia Bradford činidla ( Sigma) podľa pokynov výrobcu. Denaturovaný proteín sa oddelí na dodecylsulfát sodný (SDS) -polyacrylamide gélu (10% akrylamidu) a prenesené na PVDF membrány (Millipore, Bedford, MA), ktorý bol potom blokované v 5% mliekom bez tuku v Tris-pufrovanom fyziologickom roztoku (pH 7,5). Pre-chémiou, bola membrána inkubovaná cez noc s LDH-A (sval podjednotka) králičie monoklonálne protilátky (1: 1500) (epitomics) pri 4 ° C. Potom sa prepláchne pomocou TBST a inkubujú sa s sekundárnej protilátky po dobu 15 minút. Signály boli detekované zvýšenej chemiluminiscencie (Pierce, Rockford, IL).

Ďalšie kroky po operácii

264 pacientov, ktorí podstúpili gastroctomy boli podrobené starostlivé klinické pozorovanie, vrátane hrudníka /brucha /panvovej počítačová tomografia (CT) imaging, hladina CEA, a testovanie krvi na 2 až 3 mesačných intervaloch a ročné gastroskopia. Follow-up bol v súlade s National Cancer Comprehensive Network (NCCN) najlepších postupoch v rakoviny žalúdka. Celkového prežívania (OS) rýchlosť bola definovaná ako interval od počiatočnej operácie na smrť. Koncový dátum follow-up štúdie pre vykonávanie analýzy bola 29. júna 2012.

Vyhodnotenie Imunohistochemické farbenie

Imunoreaktivita bola hodnotená nezávisle na sebe dva výskumníkmi, ktorí boli oslepení na výsledku pacienta. Hodnotenie je založené na intenzite farbenie. Farbenie intenzita LDH-A bola hodnotená ako 0 (negatívne); 1 (slabý); 2 (stredná); a 3 (silný). Vzorky boli rozdelené do dvoch skupín podľa ich skóre: 0 a 1 sú nízka expresia skupina; 2 a 3 sú vysoká expresie skupinu. V prípade rozporu vo vyhodnocovaní boli doštičky znova vyšetria obidve patológov pod mikroskopom.

Generácia malé interferujúce (SI) RNA Knockdown Stabilné bunkové línie

Na základe LDH -A sekvencie, zhrnie boli navrhnuté s použitím siRNA cieľ Finder (Ambion): nukleotidovej sekvencie vloženého ShLDH-A bol 5'-ATCCAGTGGATATCTTGACCTACG TGGCT-3 '. Bunková línia generované infekcií buniek s miešanými plazmid bol použitý ako kontrola. 10 ug zhrnie a 25 ul Lipofectamine 2000 (Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, CA, USA) sa zmieša s 1350 ul RPMI-1640 (bez FBS), a táto zmes bola potom transfekována do MGC-803 buniek karcinómu žalúdka. Zmes bola pridaná do 25-cm ^{2 kultivačné banky, ktorá bola vopred potiahnutá 1 x 10 6 MGC-803 buniek karcinómu žalúdka. Kultivačné médium sa nahradí kompletným RPMI-1640 6 hodín po naočkovaní a pri teplote 28 hodín po transfekciu, stabilné bunkové klony sa selektovali po dobu 2 týždňov s neomycín a analyzované imunoblotováním.}

RNA extrakcia a v reálnom čase Kvantitatívne RT-PCR analýza

Celková RNA bola izolovaná z buniek za použitia TRIzolu činidla podľa inštrukcií výrobcu (Invitrogen), a 1 ug RNA bola spracovaná priamo na cDNA s použitím súpravy reverznej transkripcii (Promega, Madison, Wisconsin), v súlade s pokynmi výrobcu. Amplifikačnej reakcie boli vykonávané v objeme 20 ul s 0,2 ul SYBR Green (Bio-Rad, Hercules, Kalifornia). Tieto reakcie sa vykonávali trojmo za použitia zariadenia BIORADE iCycler (Bio-Rad). beta-aktínu bol použitý ako vnútorná kontrola. Použité primery boli nasledujúce: LDH-A, 5'-CTCCTGTGCAAAATGGCAAC-3 '(kódujúce) a 5'-CCTAGAGCTCACTAGTCACAG-5' (reverzný); andβ-aktínu, 5'-GATCATTGCTCCTCCTGAGC-3 '(kódujúce) a 5'-ACTCCTGCTTGCTGATCCAC-3' (reverzný). Špecifickosť real-time kvantitatívnej PCR bola overená tavením analýzy krivky a elektroforézou na agarosovém gélu.

MTT a Colony Formation Test

Pre analýzu rastu buniek, rovnaký počet buniek boli nasadené na 48 no dosky. Celkový počet buniek bol meraný každý deň testu MTT podľa protokolu výrobcu (Roche Applied Science). Pre analýzu tvorby kolónií, rovnaký počet kontrolných buniek a buniek umlčanie expresiu LDH-A boli vrúbľovať do 60 mm kultivačné misky v trojitom prevedení. Bunky boli kultivované počas 7 dní, rast buniek bola zastavená po 7 dňoch v kultúre odstránením média a pridaním 0,5% fialového roztoku kryštálov v 20% metanolu. Po zafarbení po dobu 5 minút, fixované bunky boli premyté fosfátom pufrovaným fyziologickým roztokom (PBS), fotografoval, a rozpustí s 1% SDS. bol počítaný počet kolónií v každej skupine.

tumorigeničnosti Test

MGC-803 GC buniek xenoimplantáty boli vyrobené na šesť týždňov starých samíc athymických nahých myší (Vital River Laboratories, Peking, Čína) injekciou 5 x 10 ^{6 buniek v 0,2 ml PBS do boku každej myši (6 myší /skupina). Tvorba nádoru bola hodnotená každý týždeň. Objem nádoru bol vypočítaný podľa nasledujúceho vzorca: v. (Mm 3) = a x Bo 2/2 (kde je najväčší priemer povrchné a b je najmenší priemer povrchné)}

meranie koncentrácie laktátu a produkcie ATP

Po 48 hodinách inkubácie, laktátu a hladiny ATP v médiu boli merané pomocou komerčne dostupných testovacích súprav (zakúpený od Biovision [Mountain View, Kalifornia], a Roche Applied Science , v uvedenom poradí). Výsledky boli korigované na konečnom počte krviniek.

Štatistická analýza

Všetky štatistické analýzy boli vykonané pomocou SPSS 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL). Celková miera prežitia bola stanovená použitím Kaplan-Meierov odhad, udalosť je definovaná ako úmrtie na príčiny súvisiace s rakovinou. Log-rank test bol použitý na identifikáciu rozdielov medzi krivkou prežívanie. V jednorozmerné analýze dvojchvostý χ ^{2 testy alebo dvojstranný t testu boli použité pre štatistické porovnanie. A model proporcionálny nebezpečenstvo Cox bol použitý v jednorozmerné analýze a analýze viacrozmerné, identifikovať významné faktory korelované s prognózou. Pri všetkých analýz, iba P hodnoty. ≪ 0,05 boli považované za významné}

Výsledky

LDH-A v bunkách ľudského karcinómu žalúdka Tissue

triedi sme zafarbené úseky z TMA GC a NNM tkaniva jadra pre ich cytoplazmatickej imunohistochemické intenzity farbenia proti LDH-proteín. Čitateľné vzorky zahrnuté 264 karcinóm žalúdka a 209 uzavreté NNM. Typický difúzna cytoplazmatická farbenie proteínu možno nájsť v mnohých karcinómu žalúdka a normálne žalúdočné tkaniva, ako je znázornené na obrázku 1, rakovinu tkanivo, vykazujú pozitívny cytoplazmatickej farbenie na 201 prípadov (76,14%), zatiaľ čo u 209 prípadov IPA, 131 prípadov ( 62,68%) malo LDH-A pozitívna expresia (tabuľka 1). Vyšetrovať výraz množstvo LDH-A vo vzorkách GC, expresie LDH-A bola skúmaná analýzou Western blot za sedem náhodne vybraných nádorov a spárovaných normálnych tkanivách. Up-regulácia LDH-A sa pozorovala vo vzorkách GC v porovnaní s spárovaných normálnych tkanivách (obr. 2a). Tieto štúdie ukázali, že LDH-A bola významne up-regulovaná v nádorových vzoriek v porovnaní so susednými nerakovinových tkanív (Tabuľka 1: p = 0,002).

Expression Analysis of LDH-A v žalúdočnej bunkových líniách

Western blot analýza bola vykonaná v bunkových líniách žalúdku. Western blot ukázala, že expresia LDH-A bola výrazne silný v zle diferencované MGC803 a mierne diferencovanej AGS; slabé stredne diferencovaného SGC-7901 a dobre diferencovaný MKN28; a chýba v ľudskej normálnej žalúdočnej bunkové línie GES-1 (viď obr. 2 b).

klinicko Premenné v 264 prípady karcinómu žalúdka

Ako je zhrnuté v tabuľke 2, Zistili sme, že zvýšená expresia LDH-a bola významne spojené s vekom pacientov (p = 0,004) a histologických typov (P = 0,02), lymfatických uzlín (p = 0,043), ale nie s pohlavia (p = 0,072), veľkosť nádoru (p = 0,086) , hĺbka invázie (P = 0,328), lymfatická invázie (P = 0,738), Lauren stupeň (P = 0,152), alebo TNM stupeň (P = 0,417).

Analýza prežitie

5 -rok miera OS zo 264 pacientov s primárnou rakoviny žalúdka u 46% (122/264), s 142 úmrtí bolo zaznamenaných v priebehu sledovaného obdobia. Medián trvania sledovania bola 50 mesiacov (rozmedzie 9-78 mesiacov). Analýza prežitie podľa Kaplan-Meierove krivky prežitia a log-rank testu preukázali, že pacienti s vysokou expresiou LDH-A v nádorovom tkanive, významne horšie celkové prežívanie ako pacienti s nádorom nízkou LDH-A výrazu (p 0,001, obr. 3) , Za účelom skúmania potenciálny vzťah medzi expresiou LDH-A a prognózou u rôznych typov GC sme hodnotili prežitie pacientov v rôznych podskupín: Keď bola štatistická analýza vykonaná stratifikovaní Lauren platovej triedy a histologické klasifikácie, sa objavil význam v difúzny typ GC a nediferencovaný typ GC (P 0,001, v tomto poradí), ale nie v črevnej (p = 0,179) alebo diferencovaných (p = 0,104), ty. Multivariačný analýza bola vykonaná s použitím Coxovho modelu proporcionálneho rizika pre všetky významné premenné v jednorozmerné analýze. Tabuľka 3 ukazuje význam: nastavený pre iné premenných, výsledky z viacnásobnej analýzy ukázali, že LDH-A výraz (P 0,001), lymfatické invázie (P = 0,046) a Lauren stupeň (P = 0,001), TNM fáza (P = 0,006), ale nie vek (P = 0,053), veľkosť nádoru (p = 0,111), hĺbka invázie (P = 0,598), lymfatických uzlín (P = 0,089), alebo histologický typ (P = 0,674), boli nezávislé prognostický rizikové faktory pre OS (tabuľka 3).

Vyradenie LDH-a podľa siRNA Znižuje Vyjadrenie LDH-a v MGC-803

podľa západných výsledkov blot a real-time RT -PCR expresie LDH-A účinne znížila v LDH-A-siRNA exprimujúce MGC-803 buniek. Ako je znázornené na obrázku 4, expresie LDH-A proteín bol testovaný western blot bol ťažko zistiteľný a úroveň PKM2 mRNA bola znížená o 74% v LDH-A-siRNA exprimujúcich MGC-803 buniek. LDH-A výraz zostal nezmenený v obidvoch bunkových líniách GC a bunkových línií vyjadrujúcich kontrolu siRNA.

Vyradenie LDH-A inhibuje rast GC bunkových línií MGC-803

Aby bolo možné posúdiť nádor rast buniek, sme použili MTT testami tvorby kolónií a. V teste MTT, umlčanie expresie LDH-A inhibuje proliferáciu MGC-803 buniek (obr. 5a, b). Rast MGC-803 buniek, ktoré exprimujú LDH-A siRNA sa znížila o 64%, po 168 hodinách inkubácie v porovnaní s kontrolnými bunkami (p 0,05). Dôsledne, umlčanie expresie LDH-A tlmí ukotvenie nezávislý rast MGC-803 buniek (obr. 5c, d). LDH-A porazený v týchto bunkách zabrániť tvoreniu kolónií označujúci, že rast závislých na ukotvenie bola obnovená. Tieto výsledky ďalej vyplýva, onkogénne rolu LDH-A pri liečbe rakoviny GC.

Vyradenie LDHA inhibuje tumorigenicity u modelov xenoimplantátu myš

V tejto štúdii sme skúmali tumorigénny kapacitu LDH-A in vivo. Vyvolanie nádorového bujnenia, in vivo MGC-803 buniek siLDH-A a kontrolných buniek bola hodnotená pri subkutánnej injekcii buniek v athymických nahých myší. V súlade s štúdií in vitro, umlčanie expresie LDH-A výrazne tlmí tumorigeničnosti buniek LDH-A vo veľkosti nádoru. Pri všetkých zladených xenoimplantátov, nádory siLDH-A boli výrazne menšie ako u kontroly (obr. 5e, f).

Vyradenie LDH-A podľa siRNA Znižuje laktátu a produkcie ATP v bunkách ľudského GC bunkových líniách MGC- 803

Vzhľadom k tomu, LD-a je kľúčový enzým pre premenu pyruvátu na laktát, zmena jeho expresie v GC buniek by mal mať vplyv produkcie laktátu a energetický metabolizmus. Pre testovanie tejto hypotézy sme porovnávali laktátu a produkcie ATP medzi LDH-A siRNA porazený bunky a kontrolné bunky po 48-hodinovej inkubácii. Keď bol LDH-A zráža siRNA, schopnosť bunky k produkcii laktátu a ATP sa dramaticky znížila o 61,5% a 63,3%, v 48 hodinách, v danom poradí (obr. 6a, b).

v roku 1920, Warburg prvý preukázal, že rakovinové bunky zaberajú vyšších rýchlostiach glukózy ako normálne bunky a produkujú energiu takmer aeróbne glykolýzy pre ich spotreba energie prispôsobiť obmedzenia v oblasti životného prostredia, ako sú prerušované hypoxia [10], [11]. Avšak, tento metabolický zmena nie je len adaptácie na hypoxické prostredie, ale je aktívna mobilné stratégie, ktorá predstavuje významnú výhodu pre proliferáciu a malignít. Teraz Vegran et al
. [12] uvádzajú, že laktát môže priamo modulovať fenotyp endotelových buniek, čo predstavuje potenciálne dôležitý mechanizmus, ktorým tumory kontrolovať vlastný prívod krvi cez cievne morfogeneze. Vzhľadom k tomu, reaktívne formy kyslíka (ROS) sú prirodzené vedľajšie produkty mitochondriálnej respirácie, bolo navrhnuté, že premena glukózy na laktát mohla chrániť rakovinové bunky pred oxidačným stresom [13]. V poslednej dobe, zistenia naznačujú, že opätovné zavedenie normálne oxidatívny fosforylácie v rakovinových bunkách môže nielen inhibuje bunkový rast a proliferáciu, ale aj zhoršiť metastatického schopnosť nádorových buniek [14]. Z tohto dôvodu je dôležité konštitutívne up-regulované aeróbne glykolýzy nedávno bol uznaný v progresii nádoru, ale molekulárne mechanizmy vedúce k tomuto fenotypu a ich prínos k rozvoju rakoviny nie sú dobre pochopené.

LDH-A, enzým zodpovedný za premenu pyruvátu na laktát, hrá dôležitú úlohu v procese glykolýzy. Niektoré výskumy uvádzajú, že expresia LDH-A by mohla byť vyvolaná radom onkogénov [15]. Tieto správy podporujú myšlienku, že LDH-A indukčná je rozhodujúce pre onkogénne aktivity týchto onkogénov v nádorových bunkách.

onkogénne aktivita LDH-A bola popísaná v pažeráku karcinómu, rakoviny pankreasu a buniek karcinómu žalúdka [ ,,,0],8], [9], [16]. Yongjia Zhang et al
. hlásil, že LDH-A redukcia môže potlačiť tumorigeničnosti črevných typu buniek, rakovina žalúdka (ITGC) o downregulating Oct4 [17]. A Zhiyi Wang et al
. uvádzajú, že LDH-A tlmenie hluku potláča rakovinu prsníka tumorigeničnosti indukciou oxidačného stresu sprostredkované mitochondriálnej dráhy apoptózy [18]. Tu sme sa zaoberali formalínom fixované, parafínových nádorové tkanivá od 264 pacientov pre expresiu LDH-A a označená charakterizáciu LDH-A v bunkách ľudského GC, a predloží svoj vzťah s klinicko-parametrami a prognózu pacientov. Po prvé, sme zistili, že expresia LDH-A bola zvýšená vo vzorkách GC v porovnaní s krytej normálnych tkanivách. Tento výsledok môže byť v súlade s predchádzajúce štúdie, že v rôznych typov ľudskej rakoviny, expresie LDH-A bola up-regulovaná [4], [5]. V nádorovom tkanive, naše štúdie ukázali, že LDH-A expresie bola silne korelované s GC patologickým charakteristikami: veku, lymfatických uzlín a histologické klasifikácie. Tak navrhujeme, aby up-regulované LDH-A expresie môže prispievať k proliferácii a vývoj GC. Po druhé, sme ďalej analyzovali prognostickú úlohu LDH-A na celkové prežívanie pacientov s GC. Kaplan-Meierova analýza preukázala významný vzťah medzi LDH-A prejavu a celkovým prežitím pacientov a pacientov s silnejšie LDH-A farbenie mali nižšiu mieru prežitia. Keď bola štatistická analýza vykonaná rozvrstvené Lauren platovej triedy a histologické klasifikácie, význam objavil v difúznym typu GC a nediferencované typu GC, ale nie tie črevné alebo diferencovaných. Špecifická siRNA proti LDH-A sa vykonáva v MGC803 bunkách a oneskoreného rastu buniek in vitro a v modeloch myšiach. LDH-A porazený tiež znížila laktátu a ATP výroby v GC buniek. Preto sú naše výsledky naznačujú, že expresia LDH-A bol nezávisle prognostický faktor OS, a naznačila, že LDH-A môže mať onkogénne úlohu vo vývoji nádoru, a to najmä v difúznym typu GC alebo u pacientov nediferencovanej typu GC. V súlade s našou štúdiu, bolo popísané, že zrážanie expresiu LDH-A v ľudských hepatocelulárneho karcinómu buniek by mohlo vyvolať apoptózu [8], a znižujúce množstvo LDH-A by mohlo zvýšiť produkciu ROS a cytozolové Ca2 + signalizácia, čím sa znižuje vnútorné mitochondriálnej membránový potenciál a viedla k uvoľňovaniu cytochrómu C v bunkách s hepatocelulárnym karcinómom.

vzaté, naša štúdia ukazuje, že up-regulované expresie LDH-a poskytuje buniek karcinómu žalúdka s výhodami rastu. V rovnakej dobe, naša štúdia naznačuje, LDH-A ako potenciálny terapeutický cieľ.

• Ploche ONE: Zvýšená microRNA-630 expresie v karcinómu žalúdka je spojená s celkovo neuspokojivé Survival
• Ploche ONE: Vplyv individuálne a susedstve sociálno-ekonomický status u karcinómu žalúdka Survival