PLoS ONE: Een Polymorfisme (rs2295080) in mTOR Promoter Gewest en de associatie met maagkanker in een Chinees Population

De abstracte

Achtergrond

Als een dwingend onderdeel van PI3K /Akt /mTOR-route , zoogdieren doelwit van rapamycine (mTOR) is aangetoond toenemen bij maagkanker cellen en tumoren. Ons onderzoek onderzocht de relatie tussen single nucleotide polymorfismen (SNP) rs2295080 in mTOR
promotor gebied en het risico op maagkanker (GC).

Methods

Zeven honderd en vijftig -drie (753) maagdarmkanker patiënten en 854 geëvenaard gezonde proefpersonen werden geworven in de kanker associatie studie en 60 weefsels werden gebruikt om de expressie van de mTOR Electronics Test. Onvoorwaardelijke logistische regressie werd geselecteerd om de associatie tussen de rs2295080 T >evalueren; G polymorfisme en GC risico. Vervolgens onderzochten we de functionaliteit van deze promotor genetische variant door luciferasetest en EMSA.

Resultaten

Personen met G-allel had een 23% verminderd risico op GC, te vergelijken met degenen die T-allel (gecorrigeerde OR = 0,77, 95% CI = 0,65-0,92). Dit beschermende effect van G-allel stond beter in de mannelijke groep. Ondertussen GC patiënten dragen TG /GG genotype verschijnt ook een verminderde mRNA niveau van mTOR
( P
= 0,004). In luciferase assay, T-allel de neiging om de transcriptie activiteit van mTOR
verbeteren met een geschatte 0,5-vouw over G-allel. Bovendien EMSA testen legde uit dat verschillende allelen van rs2295080 getoond verschillende affiniteiten enkele transcriptie factor.

Conclusie

De mTOR
promoter polymorfisme rs2295080 was significant geassocieerd met GC risico. Deze SNP, die de expressie effectief beïnvloed mTOR
kan een nieuwe biomarker vroege diagnose van maagkanker en een geschikte indicator van het gebruik mTOR remmer voor de behandeling van GC zijn

Citation:. Xu M, G Tao, Kang M, Gao J, Zhu H, Gong w, et al. (2013) A Polymorfisme (rs2295080) in de mTOR
Promotor Gewest en de associatie met maagkanker in een Chinese bevolking. PLoS ONE 8 (3): e60080. doi: 10.1371 /journal.pone.0060080

Editor: Paolo Peterlongo, IFOM, Fondazione Istituto di FIRC Oncologia Molecolare, Italië

Ontvangen: 26 november 2012; Aanvaard: 21 februari 2013; Gepubliceerd: 29 maart 2013

Copyright: © 2013 Xu et al. Dit is een open-access artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Financiering:. Deze studie werd mede gesteund door de National Natural Science Foundation of China (81230068, 30972444, 81001274 en 81102089), de Key Program van Natural Science Foundation van de provincie Jiangsu (BK2010080), Natural Science Foundation van de provincie Jiangsu (BK2011773 en BK2012842), de Key Program voor fundamenteel onderzoek van Jiangsu Provinciale Departement van Onderwijs (11KJB330002 en 12KJA330002), de Qing-Lan Project van Jiangsu Provinciale Departement van Onderwijs, en de Priority Academische Programma Ontwikkeling van Jiangsu instellingen voor hoger onderwijs (volksgezondheid en Preventieve Geneeskunde). We willen ook graag Luo Y (Nanjing Rode Kruis Blood Center) bedanken voor haar hulp bij het functionele experimenten. De financiers hadden geen rol in de studie design, het verzamelen van gegevens en analyse, besluit te publiceren, of de voorbereiding van het manuscript

Competing belangen. De auteurs hebben geen belangenconflicten verklaard

Introductie <. br>

Maagkanker (GC) is de meest voorkomende kanker wereldwijd onder mannen met 640.556 en vrouwen met 349.042 nieuwe gevallen en 738.069 sterfgevallen in 2008 [1]. Gezien de therapeutische efficiëntie kan chirurgische resectie primaire curatieve behandeling vroeger GC patiënten [2] zijn. Helaas zijn de meeste patiënten met maagkanker ontdekt in gevorderd stadium, gedurende welke periode de tumor irresectabel meer. Bovendien terugval na de operatie is een andere vreselijke gebeurtenis voor een slechte 5-jaarsoverleving. Gezien de patiënten met gevorderde of recidiverende maagkanker, is het geen twijfel dat de ontdekking van biomarkers en hun toepassing gepaard met traditionele diagnose een waardevolle indicatie en een uitgebreide hulp voor de preventie en behandeling strategie te formuleren zou kunnen zijn.

Mammalian doel van rapamycine (mTOR) bestaat uit 2549 aminozuren die in zeer geconserveerd domein [3]. Structureel mTOR bevat een rapamycine-bindend domein in het middengedeelte en een kinase domein in het C-uiteinde [4]. Als een essentieel onderdeel van PI3K /Akt /mTOR route, mTOR nauw relevant kapitaal cellulaire processen zoals celgroei, proliferatie, metabolisme, migratie, angiogenese en apoptose [5] - [7]. Tot nu toe, mTOR
producten betreft als twee verschillende complexen (dat wil zeggen, mTORC1 en mTORC2) met verschillende gevoeligheid [8], [9]. mTORC1 een rapamycine-gevoelige mTOR complex plus FK506 bindend eiwit 12 kDa (FKBP12), zoogdierlijke LST8 (mLST8) en de geassocieerde regulerende eiwit mTOR (roofvogel) omvat. In tegenstelling mTORC2 bestaat met sin1, mLST8 en rapamycine-ongevoelige metgezel van mTOR (rictor) [10] - [12]. Ontregeling van mTOR
verschijnt vaak in verschillende soorten kanker tijdens de carcinogenese en achteruitgang. Echter, zijn de redenen voor deze afwijkende fenomeen nog steeds overvoerd met debatten.

Een aantal studies hebben de rol van single nucleotide polymorfismen (SNP's) van de onderzochte mTOR
gen in het ontstaan ​​van kanker in verschillende organen, waaronder slokdarmkanker [13], longkanker [14], blaaskanker [15], darmkanker, rectale kanker [16] en acute lymfoblastische leukemie [17]. De meeste van deze SNPs vinden in exons of introns met onbekende functionele effecten. Onlangs heeft een toenemend aantal onderzoeken gericht op de SNPs zitplaatsen in genpromoter, die bleek te beïnvloeden bindingsvermogen enkele transcriptiefactoren (TF) en beïnvloeden de volgende gentranscriptie. In deze studie hebben we de hypothese dat mTOR
rs2295080 T > G polymorfisme in de promotorregio zou de gevoeligheid beïnvloeden GC. Om deze hypothese te testen, genotype we de frequentie van mTOR
rs2295080 het belang ervan op GC risico's te testen in onze voortdurende, ziekenhuis-based, case-control studie in een Chinese bevolking. Bijgevolg gedetecteerd we de mTOR
mRNA levels met verschillende genotypen in weefsels van maagkanker patiënten. Verder hebben we verder gekenmerkt de functionaliteit van deze genetische variant op de mTOR
promoter transcriptie van luciferase-test en EMSA.

Materialen en methoden

proefpersonen

Deze studie omvatte 753 patiënten met histologisch bevestigd adenocarcinoom van de maag en 854 vrij van kanker controles. Alle patiënten werden gerekruteerd uit de Cancer Clinical Research Base of Nanjing Medical University tussen maart 2006 en januari 2010. En al demografische en klinische gegevens, zoals leeftijd, geslacht, tumorgrootte, tumor, histologische types, diepte van invasie, lymfekliermetastasen, metastasen op afstand, en TNM stadium, werden verkregen met behulp van een korte vragenlijst en klinisch medische dossiers.

de frequentie-gematchte controles om deze zaken op leeftijd (± 5 jaar) en geslacht werden verzameld bij de zelfde periode en regio's van ongerelateerde genetische verwantschap met maag-en vaatziekten en de spijsvertering tumoren. Elke deelnemer ondertekende een schriftelijke informed consent en schonk 5 ml veneuze bloed voor genomische DNA-extractie. Het onderzoeksprotocol werd goedgekeurd door de institutionele review board van Nanjing Medical University.

DNA-extractie en SNP genotypering

Genoom DNA werd geëxtraheerd uit bloedmonsters zoals eerder beschreven [18]. Genotypering werd voltooid door TaqMan SNP genotypering Assay gebruik ABI 7900HT real-time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA) en Sequence Detection System versie 2.4 (SDS 2,4). De sequenties van de primers en sondes waren beschikbaar op aanvraag, en controles werden opgenomen voor elke plaat om de juistheid van genotypering te waarborgen. De genotypering test werd uitgevoerd door twee personen onafhankelijk van elkaar in een blinde manier. Meer dan 10% van de monsters werden willekeurig geselecteerd voor de bevestiging en de resultaten waren 100% concordant. Primers en probes werden opgenomen in Tabel S1.

Celkweek en constructie van plasmiden Promotor Reporter

Een normale maagslijmvlies epitheliale cellijn (GES-1) en drie verschillende maagkanker cellijnen (BGC -823, MGC-803, en SGC-7901) werden in dit onderzoek vastgesteld. Alle cellen werden gekweekt in Dulbecco's Gemodificeerd Egale medium /hoge glucose kweekmedium met 10% FBS, 10 mM HEPES, 2 mM L-glutamine, 1 mM pyruvaat natrium, 100 U /ml penicilline en 100 ug /ml streptomycine bij 37 ° C in een bevochtigde atmosfeer die 95% lucht en 5% CO _{2. De meeste reagentia werden verkregen van GIBCO (Burlington, Ontario, Canada)}

In luciferase reporter plasmiden, de menselijke mTOR
promotersequenties verschillende allelen rs2295080 T >. G polymorfisme werden gesynthetiseerd en geconstrueerd in pGL3-basic vector (Promega, Madison, WI, USA) door Generay Company (Shanghai, China). Alle plasmiden werden bevestigd door DNA sequentiebepaling. Primers die bij de proef waren opgenomen in tabel S2.

Transiënte Transfectie en Luciferase Assay

GES-1, BGC-823, MGC-803 en SGC-7901-cellen werden getransfecteerd door Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) met 0,8 ug van elk geconstrueerde vector, hetzij met T allel of G allel. Tegelijkertijd werd 10 ng pRL-SV40 per putje getransfecteerd ook als een interne controle voor transfectie-efficiëntie corrigeren. Voordat het werden cellen gezaaid op 24-putjes platen overnacht bij 90% -95% confluentie garanderen op het moment van transfectie. Vierentwintig uur na transfectie werd luciferaseactiviteit gemeten met de Dual-Luciferase Reporter Assay System (Promega, Madison, WI, USA) en uitgedrukt als de verhouding van vuurvlieg luciferase activiteiten Renilla. Alle cellen werden in triplo uitgevoerd met dezelfde voorwaarden

elektroforetische mobiliteit Shift Assay (EMSA)

De sense probe sequenties waren als volgt: rs2295080 T probe, 5'- AGGGTTCCCATCCCTGAGGAC-3 ';. rs2295080 G probe, 5'- AGGGTTCCCAGCCCTGAGGAC-3 '. Nucleaire eiwitten werden geëxtraheerd met NE-PERTM nucleaire en cytoplasmatische Extraction reagentia (Pierce, Rock-ford, IL, USA). DNA-probes werden bereid met biotine 3'-einde DNA Labeling Kit (Pierce, Rock-ford, IL, USA). Elektroforetische mobiliteit shift assay (EMSA) werd uitgevoerd met een LightShift Chemiluminiscentie EMSA Kit (Pierce, Rock-ford, IL, USA). Bindende reacties werden als volgt uitgevoerd: nucleaire extracten (8 ug eiwit) en 1 x bindingsbuffer met 2,5% glycerol, 5 mM MgCl _{2, 50 ng /pl poly (dI-dC), 0,05% NP-40, en 20 fmol met biotine gemerkt rs2295080 T /G rs2295080 probes werden geïncubeerd op ijs gedurende 30 minuten in een volume van 20 pl. Voor competitie studies werden nucleaire extracten geïncubeerd met ongelabeld oligonucleotide gedurende 30 minuten vóór de toevoeging van gemerkte oligonucleotide.}

expressieniveaus van mTOR
mRNA.

Totaal RNA uit 60 maag kanker weefsels in 753 gevallen, met verschillende genotypen werden geëxtraheerd met behulp van Trizol reagens (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Het mRNA werd gemeten met behulp van kwantitatieve real-time PCR (ABI 7300) na reverse transcriptie. GAPDH werd gebruikt als een interne kwantitatieve controle voor elk monster. De primers die voor amplificatie werden mTOR F: 5'- TTGCTTGAGGTGCTACTG-3 'en R: 5'- CTGACTTGACTTGGATTCTG-3'; de primers voor GAPDH waren F: 5'- AAGGTGAAGGTCGGAGTCAAC-3 'en R: 5'- GGGGTCATTGATGGCAACAATA-3'. Relatieve kwantificatie van mTOR
mRNA werd berekend met behulp van de 2-ΔΔCt methode. Veelvoudveranderingen werden genormaliseerd ten opzichte van GAPDH, en elke test werd in drievoud uitgevoerd.

Statistische analyse.

Hardy-Weinberg-evenwicht (HWE) werd geëvalueerd door de chi-kwadraat-test goedheid van fit de waargenomen genotype frequenties te vergelijken met de verwachte bij de controles. Associaties tussen genotypes en het risico van maagkanker werden geschat door het berekenen van odds ratio's (OR's) en 95% betrouwbaarheidsintervallen (CI's) van logistische regressie-analyse met correctie voor leeftijd en geslacht. Twee-zijdige χ ^{2 tests van de statistische significantie werd uitgevoerd met behulp van SAS-software (versie 9.1.3; SAS Institute, Inc., Cary, NC, USA) en P Restaurant < 0,05 werd beschouwd als statistisch betekenis.}

Resultaten

kenmerken van de proefpersonen

de geselecteerde kenmerken van deze gevallen en controles zijn samengevat in tabel 1. de cases en controles bleek adequaat worden gematched op leeftijd ( P
= 0,424) en geslacht ( P
= 0,406). Van de 753 gevallen tumorplaatsen inbegrepen 295 cardia kanker (39,2%) en 458 niet-cardia kanker (60,8%). Patiënten met type diffuse (437, 58,0%) werd een iets hogere verhouding dan intestinale type (316, 42,0%). Op basis van de TNM classificatie van het Gemengd Comité Amerikaanse on Cancer (AJCC kanker enscenering handleiding, 6 ^{e editie) [19], 17,3%, 17,3%, 50,6% en 14,8% van de patiënten had T1, T2, T3, en T4 respectievelijk. Ondertussen, 60,6% van de patiënten gepresenteerd positieve lymfeklier metastase en 13,0% bestond verre metastase. Volgens deze klinische kenmerken werden alle patiënten uiteindelijk geïdentificeerd fase I, II, III en IV met 26,8%, 21,9%, 35,3% en 16,0%, respectievelijk.}

De algemene effecten van rs2295080 polymorfisme op het risico van GC

het genotype uitkeringen en allel frequenties van rs2295080 zijn weergegeven in tabel 2. de genotype frequenties in de controles waren in overeenstemming met de HWE model ( P
= 0,569). Zoals getoond in Tabel 2, de genotype frequenties van rs2295080 waren 64,0%, 32,7% en 3,3% voor de TT, TG en GG genotypen tussen de gevallen en 58,2%, 35,7% en 6,1% bij de controle, respectievelijk. Het verschil tussen de patiënten en controles was statistisch significant ( P =
0,008). Ook de G-allel frequentie was significant lager bij gevallen dan controles (19,7% versus 23,9%, P
= 0,003). Bovendien, de gecombineerde TG /GG genotype frequentie was lager bij gevallen dan controles (36,0% versus 41,8%, P
= 0,016). Bij het nemen TT genotype als referentie, vonden we dat de variant genotypen (TG en O) geassocieerd met een verminderd risico van GC op een dosis-respons wijze vergeleken met de TT genotype (gecorrigeerde OR = 0,83, 95% CI = 0,67-1,02 voor TG, en 0,49, 0,30-0,80 voor GG; P
_{trend = 0,003). Op dezelfde wij waargenomen dat de gecombineerde TG /GG genotypes geassocieerd met een statistisch significant lagere gevoeligheid voor Gc vergeleken met TT genotype (0,78, 0,64-0,96). Tezamen bieden deze gegevens gesuggereerd dat de mTOR
rs2295080 G-allel kan een vermeende beschermende allel zijn.}

De mannetjes zijn meer vatbaar voor maagkanker met rs2295080 polymorfisme

Omdat het gevestigde, leeftijd en geslacht zijn belangrijke factoren in de tumor carcinogenese inclusief maagkanker. Volgens de stratificatie analyse met leeftijd en geslacht factoren, vonden we dat significant verband werd waargenomen bij mannelijke groep dan bij vrouwelijke groep (Tabel 3). Bij mannen, de uitvoering rs2295080 G-allel was een significant verminderd risico factor (OR = 0,72, 95% CI = 0,56-0,93 voor TG /GG versus TT), te vergelijken met het dragen van T-allel. Er was echter geen statistisch verschil tussen jong en oud onderwerpen.

De Gestratificeerde analyse van de associaties tussen rs2295080 polymorfisme en klinische variabelen van maagkanker

We voerde de stratificatie analyse van rs2295080 polymorfisme in alle onderwerpen door klinische kenmerken van GC. Van alle onafhankelijke variabelen, werden de beschermende effecten voornamelijk waargenomen bij subgroepen van patiënten met cardia maagkanker (OR = 0,68, 95% CI = 0,52-0,91), intestinale type (0,73, 0,56-0,96), T3 diepte invasie (0,78, 0,60 -1,00), positieve lymfklier metastase (0,79, 0,62-1,00), negatief metastasen op afstand (0,76, 0,62-0,94), en gelokaliseerde stadium (0,76, 0,59-0,98) (tabel 4).

Effect van rs2295080 polymorfisme op transcriptie-activiteit

Om een ​​inzicht te krijgen in de biologische functionele effect van rs2295080 polymorfisme op mTOR
transcriptie, GES-1, BGC823, MGC803 en SGC-7901-cellen werden met verschillende luciferase rapport plasmiden, met inbegrip van wild type (T-allel) en muteren type (G-allel). Zoals getoond in Fig. 1A, vonden we dat de transcriptie activiteit van T allel hoger dan G allel met een ongeveer 1,5-voudig hierboven vier cellijnen, wat suggereert dat rs2295080 G allel werkte als verdediging voor maagkanker doordat de transcriptie van mTOR
.

Nuclear Protein-bindende activiteit van varianten in rs2295080

Vervolgens voerden we een EMSA experiment om de biologische gevolgen van rs2295050 polymorfisme analyseren SGC-7901-cellen. Een sterke band (eiwitcomplex) werd omgekeerd wanneer de nucleaire extracten geïncubeerd met biotine gemerkte probe T rs2295080, terwijl de zwakkere band werd waargenomen wanneer het nucleaire extracten geïncubeerd met biotine-gelabeld met rs2295080 G probe. De verschoven banden werden significant geremd door een molaire overmaat van een ongemerkt rs2295080 T of G rs2295080 concurrent op een dosis-afhankelijk wijze (fig. 1B). Deze resultaten gaven aan dat rs2295080 G-allel het nucleaire eiwit binding activiteit tot op zekere hoogte kunnen afnemen.

Associatieovereenkomst tussen mTOR
rs2295080 polymorfisme en de expressie van mTOR
mRNA

Sixty-drie maagkanker weefsels met verschillende genotypen van mTOR
rs2295080 waren beschikbaar in onze huidige studie. Vanwege de lage frequentie van GG genotype voegden we het in de monsters met TG genotype voor analyse. Zoals getoond in Fig. 2, de expressieniveaus van mTOR
mRNA dramatisch hoger bij personen met TT genotype dan in die met TG of GG genotype (gemiddelde ± SEM van TT versus TG /GG: 12,35 ± 1,51 versus 6,17 ± 1,32, P
= 0,004).

Discussie

In de huidige studie hebben we aangetoond dat de G-allel van de mTOR
promoter polymorfisme rs2295080 werd geassocieerd met een significant verminderd risico van GC. We vonden dat de T naar G verandering rs2295080 aanzienlijk gewijzigde transcriptionele activiteit van mTOR
gen via het beïnvloeden van de binding van bepaalde transcriptiefactor. We hebben ook geconstateerd dat mTOR
rs2295080 T-allel werd geassocieerd met een hogere mTOR
mRNA expressie In vivo
.

zoogdieren doelwit van rapamycin (mTOR) , ook bekend als FRAP1, is een noodzakelijk lid van PI3K /Akt /mTOR route en centrale metabole signalering [20], [21]. Het kan worden geactiveerd door insuline, insuline-achtige groeifactoren en andere groeifactoren, en niet tijdens cellulaire honger. mTOR bestaan ​​twee verschillende soorten complex genaamd mTORC1 en mTORC2 respectievelijk [22]. De mTORC1 complex fosforyleert haar downstream-effector p70S6k, die de afbraak van insuline-receptor substraat kon veroorzaken en verdere versterking van de insuline gedreven Akt activiteit. De mTORC2 complex fosforyleert de C-terminus van Akt op Ser473, die kunnen leiden tot de gehele activering van Akt [9]. Als een therapeutisch doelwit andere kankers [4], [8], [23] - [27], mTOR kan ook naar voren gekomen als een potentieel doelwit voor de behandeling van maagkanker, spontaan. Sirolimus [28] en everolimus [29], de mTOR remmers werden geïdentificeerd leiden tot G1 celcyclus en remde de proliferatie van maag cellijnen. Onlangs is een nieuwe potentiële mTOR
promoter polymorfisme rs2295080 is beschreven in verscheidene studies [30] - [32]. Werden echter onvoldoende functionele studies uitgevoerd om de rol van deze genetische variant reguleren van de mTOR
uitdrukking uit. In GC, onze bevindingen op voorwaarde dat het bewijs dat de T-allel rs2295080 kon de transcriptie activiteit van mTOR
tot op zekere hoogte in GES-1-cellijn na getransfecteerd verbeteren In vitro
. En verder luciferase assay drie maagkanker cellijnen (d.w.z. BGC-823, MGC-803, en SGC-7901) verder het effect van rs2295080 polymorfisme bevestigd. Deze resultaten in onze huidige onderzoek zijn overeenkomstig de resultaten bij nierkanker cellijn en cervixkanker cellijn [32]. In EMSA assay, werd rs2295080 voorspeld op de mogelijke bindingsplaats, waarvan de polymorfe varianten zouden de werven van transcriptiefactoren (met behulp van de p-MATCH programma, dat gebruik maakt van bindingsplaatsen in TRANSFAC®; www.gene-regulation.com) invloed te lokaliseren. Genomen deze resultaten samen, is het aannemelijk dat mTOR
rs2295080 polymorfisme zou de expressie van mTOR Kopen en individuele gevoeligheid voor verschillende soorten kanker te beïnvloeden.

De SNP rs2295080, alsook als een ander intron SNP rs11121704, werd voor het eerst gemeld door Hildebrandt et al.
in lokaliseren mTOR
potentiële promoter regio [13]. Zoals beschreven in slokdarmkanker, rs2295080 leek geen associatie of functie met overleving na chemoradiotherapie en chirurgie. Maar tot nu toe zijn verschillende studies het effect van dit polymorfisme geïdentificeerd mTOR
voor kankerrisico [30] - [32], die alle geacht rs2295080 T allel als een risicofactor. In de huidige studie, het verband tussen T allel rs2295080 en GC risico was consistent met de resultaten van eerdere studies drie [30] - [32]. Bovendien, onze resultaten suggereerden ook dat dit polymorfisme een biologische kern in de ontwikkeling van GC kan zijn. Vanwege de verschillende populaties en de verschillende mechanismen onder optreden, ontwikkeling en overleving, we speculeerden de etnische verschillen en mechanistische onderscheidingen kunnen deze discordanties verklaren.

Een ander nieuw resultaat komt voort uit de associatie tussen de geslachten en mTOR
rs2295080 polymorfisme in gelaagde analyse. Dit rs2295080 polymorfisme bleek meer sterke betekenis bij mannen dan bij vrouwen. Daarnaast Hartgrink et al
. (2009) heeft gemeld de verhouding tussen mannen en vrouwen die besmet zijn door maagkanker is ongeveer 2:01 per jaar [33]. Nadere toelichting voor aansluitingen van deze resultaten moet worden gezocht, en verschillende soorten hormonen expressie bij mannen en vrouwen uitgegroeid tot de beste overweging, rationeel. In een onderzoek van borstkanker, Galoian et al.
Heeft de gegevens die prolinerich polypeptide-1 oefent antiproliferatieve effect via remmende mTOR kinase-activiteit in ER-negatieve MDA-231 gegeven, maar geen remmend effect bestaat in luminale T47 -D cel die presteert als een ER-positieve cellijn [34]. Voor studies van androgeen, werd aangenomen dat androgene mTOR activiteit kunnen stimuleren PTEN-deficiënte prostaatkankercellen. Een recente studie over androgeenreceptor verbeterde de rol van androgeen in opreguleren mTORC2 activiteit [35]. Het is waarschijnlijk dat androgeen in plaats van oestrogeen kan de mTOR
expressie te verhogen; androgeen kan leiden tot de hoge incidentie van maagkanker bij mannen en de sterke betekenis van mTOR
rs2295080 in mannelijke groep in onze studie.

Een aantal beperkingen van onze huidige studie moet worden opgemerkt als volgt . Ten eerste, rs2295080 was niet de enige polymorfisme significant bestaan ​​op mTOR
, en het belang van het combineren van SNPs werd verwaarloosd in onze studie. Ten tweede, als cruciale factoren in de maag carcinogenese, de mist van de Helicobacter pylori
informatie, het roken van informatie, en het drinken van informatie waren ook onvoldoende in onze studie, is het ongewenst voor ons voor nader onderzoek naar de effecten van deze polymorfisme. Bovendien, vanwege de relatief kleine steekproef in ons onderzoek geen significante resultaten leken in het bijzonder lagen (leeftijdsubgroepen vrouwelijke subgroep, en andere klinische en pathologische subgroepen) van gestratificeerde analyses (tabel S3 en S4). Verdere grotere studie met meer informatie werd verwacht dat onze bevindingen te controleren.

Tot slot, onze studie van de mTOR
rs2295080 vestigen in de promotorregio van verlichte mTOR
gen was significant geassocieerd met het risico van maagkanker in een Chinese bevolking.

Ondersteunende informatie
Tabel S1.
primers en probes gebruikt voor genotypering
doi:. 10.1371 /journal.pone.0060080.s001
(DOC)
tabel S2.
Primers voor de constructie van plasmiden
doi:. 10.1371 /journal.pone.0060080.s002
(DOC)
tabel S3.
Interactie analyses van mTOR
rs2295080 polymorfisme en leeftijd of geslacht status case-control studie
doi:. 10.1371 /journal.pone.0060080.s003
(DOC)
Table S4.
Interactie analyses van mTOR
rs2295080 polymorfisme en leeftijd /geslacht of klinische tekens in case-studie alleen
doi:. 10.1371 /journal.pone.0060080.s004
(DOC)

Dankwoord

Wij willen Luo Y (Nanjing Rode Kruis Blood Center) bedanken voor haar hulp bij het functionele experimenten.

• PLoS ONE: associatie tussen Glutathion S-transferase T1 Null Genotype en Gastric Cancer Risk: een meta-analyse van 48 Studies
• PLoS ONE: Vereniging onder Polymorfismen in EGFR Gene Exon, Lifestyle en risico van maagkanker met genderverschillen in de Chinese Han Onderwerpen