PLoS ONE:. Протеомика-Based идентификации и анализа белков, ассоциированных с Helicobacter Pylori в желудочном Cancer

Абстрактный

хеликобактерной
( H
пилори
) представляет собой спиралевидную грамотрицательная бактерия, которая вызывает наиболее распространенной хронической инфекции в желудке человека. Приблизительно 1% -3% инфицированных развивается рак желудка. Однако механизмы, с помощью которых H
. пилори
вызывает рак желудка не полностью поняты. Имеющиеся данные указывают на сильную связь между фактором вирулентности H
. пилори
, цитотоксин-ассоциированный ген А (CagA) и рак желудка. Для дальнейшей характеристики H
. пилори
вирулентность, мы установили три клеточные линии путем инфицирования желудочные линий раковых клеток SGC-7901 и AGS с CaGa
^{+
H <бр>. пилори
и трансфекцию SGC-7901 с вектором, несущим полную длину ген CagA
. Мы обнаружили, 135 по-разному выраженные белки из трех клеточных линий с использованием технологии протеома и 10 дифференциальные белки, общие для трех клеточных линий были выбраны и идентифицированных с помощью ЖХ-МС /МС, а также подтверждали Вестерн-блоттинга: бета-актина, L-лактат (ЛДГ), dihydrolipoamide дегидрогеназы (DLD), пре-мРНК обработки фактор 19 гомолога (PRPF19), АТФ-синтазы, кальмодулин (САМ), P64 CLCP, Ран-специфический ГТФ-активирующий белок (RanGAP), P43 и калретикулин. Обнаружение экспрессии этих белков и генов, кодирующих эти белки, в человеческих тканях желудка рака путем ПЦР в реальном времени (RT-КПЦР) и вестерн-блоттинга показал, что выражение <ЕМ> β-актина
, ЛДГ
, DLD
, PRPF19
и гены CaM
были повышающей регуляции и RanGAP
подавлялась в желудочном раковых тканей и /или метастатическим лимфатических узлов по сравнению с пери-раковой ткани. Высокая экспрессия гена наблюдалась для H
. пилори
инфекции в желудочном раковых тканей. Кроме того, ЛДГ
, DLD
и Кэм
гены деметилируется на промотор -2325, -1885 и -276 сайты, соответственно, и RanGAP
ген был высоко метилируется на промотор -570 и -170 сайтов в H
. пилори
-infected и CaGa
-overexpressing клетки. Эти результаты дают новое понимание молекулярных мишеней патогенеза и лечения рака желудка с H
. пилори
инфекция
<р> Образец цитирования:. Чжоу J, Ван W, Y Се, Чжао Y, X Чэнь, Сюй W и др. (2016 г.) Протеомика-Based идентификации и анализа белков, ассоциированных с хеликобактерной
в рака желудка. PLoS ONE 11 (1): e0146521. DOI: 10.1371 /journal.pone.0146521
<р> Редактор: Хирому Suzuki, Саппоро медицинский университет, JAPAN
<р> Поступило: 15 сентября 2015 года; Принято: 19 декабря 2015 года; Опубликовано: 8 января 2016
<р> Copyright: © 2016 Чжоу и др. Это статья открытого доступа распространяется в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution, которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе, при условии, что оригинальный автор и источник приписывают наличие
<р> Data:. Все соответствующие данные находятся в работе
<р> Финансирование:. работа выполнена при финансовой поддержке Национального фонда естественных наук Китая (81260303, 31560326), Гуйчжоу основания провинции (QianJiaoHe [2014] 06) и проект Ключевые науки и техники провинции Гуйчжоу Область (QianKeHe SY [2011] 3067, QianKeHe J [2012] 2039). В оригинальной версии, работа была выполнена при поддержке Национального фонда естественных наук Китая (81260303, 31560326) и ключевой проект науки и техники провинции Гуйчжоу (QianKeHe SY (2011) 3067)}

Конкурирующие интересы:. авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов.

Введение

хеликобактерной
( H
. пилори
) вызывает наиболее распространенной хронической инфекции желудка у людей во всем мире. Примерно половина населения земного шара инфицирована H
. пилори
, и большинство колонизировали индивидуумов развивается бессимптомное гастрит. Среди ВИЧ-инфицированных лиц, примерно 10% -20% людей развиваются язвенной болезни желудка и 1% -3% развивается рак желудка [1,2]. В 1994 году H
. пилори
была классифицирована как тип I канцерогеном для рака желудка Международным агентством Всемирной организации здравоохранения по изучению рака.
<Р> Рак желудка является одним из наиболее распространенных видов рака, и более 70% новых случаев заболевания и смерти происходят в развивающихся странах [3]. Хотя глобальный уровень заболеваемости снижается в течение нескольких десятилетий, рак желудка остается распространенным в большинстве развивающихся стран, в том числе Японии, Кореи и Китая [4-6]. В 2012 году годовой отчет Китайский регистр раковых заболеваний желудка показал, что заболеваемость и смертность от рака занимают второе место и третье место среди всех злокачественных опухолей, соответственно.
<Р> Большинство H
. штаммы пилори
нести CAG
острова патогенности ( CAG
PAI), который содержит от 27 до 31 генов, которые кодируют бактериальный тип 4 системы секреции (T4SS) [7] , Цитотоксин-ассоциированный ген Ген ( CaGa
), который находится в конце 3 ' CAG
PAI, кодирует только известные бактериальные онкобелок, CagA, который перемещается в клетки-хозяева путем T4SS после бактериального прикрепления к животу. После того, как внутри клеток-хозяев, CagA является тирозин фосфорилируется членами киназ семейств Abl и Src и взаимодействует с многочисленными внутриклеточными эффекторами, что приводит к активации нижестоящих сигнальных молекул [8]. В клинических исследованиях, CaGa
-положительные штаммы были последовательно связаны с более тяжелым воспалением желудка и кишечника, а также небольшая часть особей развивается рак желудка [9]. Однако механизмы, лежащие в основе ассоциации CagA с раком не были выяснены.
<Р> Протеомика стала перспективной технологической платформы для рациональной идентификации биомаркеров и новых терапевтических мишеней для заболеваний и определения основных механизмов канцерогенеза [10]. Тем не менее, большинство важных белков, обнаруженных протеомики в пробирке не были подтверждены в естественных условиях в клинических образцах.
<Р> метилирование ДНК и деметилирования играет важную роль в развитии и прогрессировании рака путем блокирования связывания факторов транскрипции ДНК и происходит почти исключительно в промотор гена CpG островков [11-13]. Среди органов, желудок проявляет самую высокую частоту ненормального метилирования CpG острова, возможно, Н
. пилори
-опосредованного [14-16]. Хотя исследования метилирования ДНК увеличиваются, ген метилирования состояния, индуцированное H
. пилори
пока не ясны.
<Р> В этой работе мы стремились выявить специфические белки, связанные с H
. пилори
инфекции с использованием сравнительных протеомики и характеризуют экспрессию генов и CpG острова метилирование этих белков в желудочных раковых тканей и клеток.

Материалы и методы

тканей человека
<р> Человеческие ткани были получены из образцов хирургии из 30 больных раком желудка и соответствием прилегающих тканей рака и метастатических лимфатических узлов в Гуйян медицинской больницы Гуйян Китай, в период с января 2009 г. по июнь 2010 г. диагнозы были подтверждены двумя патологоанатомов. Среди пациентов, 23 были мужского пола, и 7 были женщины. Пациенты были в возрасте от 38 до 77 лет. Двадцать два пациента имели кишечное типа аденокарциномы, и 8 имели диффузного типа аденокарциномы. Протокол исследования был одобрен Комитетом по этике Гуйян медицинской больницы путем, и все субъекты дали письменное информированное согласие.

Культура клеток
<р> желудка человека клеточная линия карциномы AGS (АТСС CRL-1739TM) и SGC-7901 клетки были приобретены непосредственно из американской коллекции типовых культур (АТСС) и клетки Банка коллекции типовых культур китайской академии наук (Шанхай, Китай), соответственно, и пассировать на срок менее 3 месяцев в нашей лаборатории после получения. Клетки культивировали в Институте Roswell Park Memorial (RPMI) 1640, дополненной 10% инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки, 100 ед /мл пенициллина и 100 мкг /мл стрептомицина (Gibco, Гранд-Айленд, Нью-Йорк, США) при 37 ° C в увлажненном инкубаторе с 5% CO <подразделам> 2.

H
. пилори
культура

H
. пилори
штамма NCTC11637 (ATCC 43504, подарок от китайского центра хеликобактерной
Управление деформации и сохранение, Пекин, Китай), который <ет> CaGa
положительный, был выращивают в селективной среде, на агаровой пластинке Columbia, содержащей 10% фетальной телячьей сыворотки и H
. пилори
Selective Supplement (Oxoid Ltd, Англия) при 37 ° С в условиях микроаэробных.

Cell инфекции H
. пилори

<р> AGS и SGC-7901-клетки (5 × 10 5) были высеяны в 6-луночные планшеты в течение 24 ч и инфицировали H
. пилори
в течение 6 ч и 12 ч при кратности инфекции (MÕIS) 1: 100, 1: 500 и 1: 1000, соответственно. Клетки были инфицированы в течение 12 ч при MOI 1: 1000 с H
. пилори
кипятили в течение 15 мин в качестве контроля.

Построение вектора экспрессии пкДНК3.1 / CaGa

<р> ДНК экстрагировали из H
. пилори
, а полнометражный последовательность CaGa
синтезировали с помощью ПЦР и клонировали в pMD18-T плазмид построить pMD18-T / CaGa
. CaGa
ген был идентифицирован с помощью секвенирования (GQ161098). pMD18-T / CaGa
переваривают с ферментами рестрикции Pst
I и Bam HI
и CaGa
сшили в пкДНК3.1 /Zeo (-) (Invitrogen, США), чтобы построить эукариотической экспрессии вектор пкДНК3.1 / CaGa
. Последовательности праймеров представлены в таблице 1.

трансфекции клеток с пкДНК3.1 / CaGa

<р> SGC-7901 клетки инкубировали в течение 12 ч в 6-хорошо пластины, чтобы получить 80% сплошности клеток. Затем клетки трансфицировали в соответствии с инструкциями изготовителя. Через 48 ч клетки были разделены в соотношении 1:10 в новые 6-луночные планшеты и инкубировали в течение еще 24 ч, а затем поддерживали в селективной зеоцином содержащих (250 мкг /мл) стандартной среды в течение 2-х недель до образования клона. Клетки, трансфицированные пустым вектором пкДНК3.1 /Zeo (-) использовали в качестве контролей

экстрагирования белка и вестерн-блот

белковые экстракты готовили путем ресуспендирования клеток гранул в RIPA буфере или гомогенизацией 200. мг ткани в буфере RIPA. В общей сложности 30-50 мкг белкового экстракта подвергали электрофорезу в ДСН-ПААГ геле, переносили на поливинилидендифторидную (PVDF) мембрану (Millipore, Billerica, MA, USA) и промокали на ночь с мышиными моноклональными анти-CagA антител (1: 800, SC-28368), мышиные моноклональные антитела против фосфотирозина (PY99, 1: 300, SC-7020), кроличьи поликлональные анти-бета-актин антител (1: 500, ab189073), кроличьи поликлональные анти-ЛДГ антител (1: 350 , ab125683), мышиные моноклональные анти-DLD (1: 800, SC-376890), кроличьи поликлональные анти-PRPF19 (1: 400, ab27692), мышиные моноклональные анти-АТФ-синтазы антител (1: 300, ab54880), кроличьи поликлональные анти -calmodulin anbody (1: 250, ab208911), кроличье поликлональное антитело против RanGAP антитела (1: 200, ab92360), кроличье поликлональное антитело против p64CLCP антитела (1: 300, ab28722), кроличьего поликлонального анти-калретикулин антителом (1: 350, AB4) и мышиных моноклональных анти-глицеральдегид-3-фосфат -dehydrogenase антитело (GAPDH, 1: 8000) из Санта-Круз (Калифорния, США), Abcam (Кембридж, Великобритания) и CangChen (Шанхай, Китай), соответственно, в 5% БСА в Трис-солевом буфере и 0,01% твин-20. Конъюгированные с пероксидазой вторичных антител (1: 5000, SC-2371, Santa Cruz, CA, США) использовали и разработанные с ЭХЛ хемилюминесценции реагента Плюс с использованием Hyperfilm (Amersham Biosciences, Бакингемшир, Великобритания). Количественное западных помарки проводили с использованием программного обеспечения Количество От One. Каждый эксперимент проводили 3 раза, и репрезентативный результат показан.

экстрагирования белка и двухмерного электрофореза гель
<р> Клеточные осадки растворяли в буфере для лизиса клеток в течение ночи при 4 ° С, и белок осаждаетс трем объемами охлажденного льдом ацетона путем инкубирования при 4 ° с в течение 2 ч. Затем образцы центрифугировали при 20000 оборотах в минуту в течение 30 мин, и осадок ресуспендировали в буфере для лизиса клеток и хранили при 4 ° С в течение ночи.
<р> В общей сложности 800 мкг белка доводили до объема 250 мкл с регидратационной раствором и изоэлектрофокусировки (IEF) проводили с использованием фокусирующей системы Ettan IPGphor II изоэлектрической (Amersham Biosciences) в соответствии с инструкциями изготовителя. Протокол ИЭФ 300 V for1 ч, 500 В в течение 2,5 ч, 1000 В в течение 2 ч; 8000 В в течение 8 ч, 60 KVH (всего).
<Р> После завершения IEF полоски IPG (Amersham Biosciences) уравновешивали в равновесном буфере в течение 15 мин и помещают на 12% геле SDS-PAGE для двух- мерный электрофорез при 30 мА /гель. Полученный гель SDS-PAGE фиксировали в 20% ТСА в течение 30 мин, а затем окрашивают коллоидным Кумасси G-250 [5].
<Р> Белковые пятна на геле были отсканированы и проанализированы автоматически. Дифференциально выраженные белковые пятна были подтверждены с изображениями Master 2D 5.0 ​​аналитического программного обеспечения (Amersham Biosciences). T-тест Стьюдента проводили для количественного анализа 2D-гелей. Дифференциальный экспрессии специфического белка определяли как ≥2-кратное изменение точечной оптической плотности между двумя наборами подобранных в дубликатах. Дифференциальный пятна затем вырезали из SDS-PAGE, гелей для дальнейшей идентификации с помощью LC-MS /MS.

Выделение РНК и количественный RT-PCR
<р> Суммарную РНК экстрагировали из 50 мг ткани и обрабатывали ДНКазой I (РНКазы). Гены амплифицировали с SYBR Green (Applied Biosystems, Австралия). Гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансфераза ( HPRT
) использовали в качестве контроля нормализации, а также относительные уровни мРНК были вычислены с помощью сравнительного C <суб> T Метод с использованием Step-одного программного обеспечения (Applied Biosystems, Австралия) [8]. Каждый образец анализировали в трех экземплярах, и результаты выражали в виде среднего значения ± SD. Праймеры, используемые перечислены в Таблице 1.

Выделение ДНК и анализ метилирования CpG островков
<р> ДНК выделяли из клеток и модифицированный бисульфит натрия используя EZ метилирование ДНК-Gold Kit ^{™ (Zymo Research, CA, USA) в соответствии с инструкциями изготовителя. Promoter CpG островки были предсказаны с помощью программного обеспечения Метиловый Праймер Экспресс и амплифицировали из бисульфита-модифицированной ДНК с помощью ПЦР с использованием следующих процедур: денатурации при 96 ° С в течение 10 мин, затем 40 циклов денатурации при 94 ° С в течение 40 с, отжиг при 60 ° с в течение 40 сек и удлинение при 72 ° с в течение 40 сек, с конечным удлинением при 72 ° с в течение 10 мин. Амплифицированный продукт ПЦР клонировали в pMD19-Т векторов и секвенировали. Кроме того, ДНК, выделенной из опухолевой ткани использовали для обнаружения H
. пилори
16S рРНК
гена и CagA ген
. Последовательности праймеров приведены в таблице 2.}

Статистический анализ

Результаты выражены как среднее значение ± SD. Статистический анализ проводился с использованием SPSS 15,0 программного обеспечения. Односторонний дисперсионный анализ (ANOVA) и Т-критерия Стьюдента были использованы для анализа данных. P
&л;. 0,05 (двусторонний) считается значительным

Результаты

Введение в CagA клеток рака желудка
<р> Поскольку CagA из H
. пилори
является критическим фактором вирулентности в развитии и прогрессии рака желудка, CagA был обнаружен в желудочном линиях раковых клеток с помощью ОТ-ПЦР и вестерн-блоттинга после заражения SGC-7901 и клетки AGS с H
. пилори
и трансфекция SGC-7901 клеток с CaGa
-вектором. Белок CagA стали появляться в соотношении клеток к бактериям 1: 500 в культивируемых клетках через 6 ч, а содержание было самым высоким в соотношении 1: 1000 в 6 ч (рис 1А и 1В). Тем не менее, фосфорилируется CagA наблюдалась в клетках при соотношении 1: 500, после культивирования в течение 12 ч, а наибольшее содержание наблюдалось в клетках, в соотношении 1: 1000, через 6 ч культуры. CagA мРНК и белка также наблюдали в стабильно CaGa
-overexpressing SGC-7901-клетки (рис 1C и 1D). Эти данные свидетельствуют о том, что CagA был успешно введен в трех клеточных линий и фосфорилируется.

Идентификация дифференциальных белков в клетках рака желудка
<р> После того, как клетки были инфицированы Н
. пилори
в течение 6 ч при MOI 1: 1000 или трансфицируют CaGa
-векторных, протеомный техника была использована для создания шести двухмерного электрофореза (2-DE) карты из трех были обнаружены клеточные линии и их соответствующие средства управления (рис 2) и 135 дифференциальных пятен, из которых 73 были повышающей регуляции и 62 были понижающей регуляции. Десять дифференциал видит, общие для всех трех клеточных линий были идентифицированы с помощью LC-MS /MS и подтверждали Вестерн-блоттинга, в том числе 6 до регулируемых белков: бета-актина, ЛДГ, DLD, PRPF19, АТФ-синтазы и кальмодулин (САМ), и 4 вниз регулируемые белки, такие как RanGAP, P64, P43 CLCP и калретикулин (Таблица 3 и рис. 3А)

H
. пилори
инфекция способствует экспрессии белков в дифференциальных желудочных раковых тканей
<р>, потому что H
. пилори
избирательно колонизируют человеческий желудок, чтобы активировать набор патологических процессов, экспрессия гена из 10 дифференциальных белков в 30 образцах рака желудка человека оценивали с помощью количественной ОТ-ПЦР. Из 10 генов, экспрессия β-актина
, ЛДГ
, DLD
, PRP19
и CaM
в рака желудка и /или метастатических лимфатических узлов были повышающей регуляции по сравнению с пери раковой ткани, в то время как выражение RanGAP
подавлялась. , Подобным образом, эти 6 белки также были аномально выражены в одних и тех же тканях (рис 3В и 3С). Не было обнаружено существенных различий в экспрессии других генов.

H
. пилори
колонизация в раковых тканях желудка измеряли путем выявления 16S рРНК
гена и CaGa
ген H
. пилори
с помощью ПЦР. H
. пилори
присутствовал в 20 из 30 образцов (положительная норма 67%), и все H
. пилори
штаммы CaGa
положительный. Уровни мРНК бета-актина
, ЛДГ
, DLD
, PRP19 и Кэм
были выше в H
. пилори
-положительные ткани, чем в отрицательных образцах (рис 3D).

H
. пилори
индуцирует аберрантных метилирования ДНК в клетки рака желудка
<р> В течение трех клеточных линий, ПЦР-продукты островов CpG вышеуказанных генов были успешно приобретены следующие бисульфита лечения и секвенировали. В этих генах, ЛДГ
, DLD
и Кэм
гены деметилируется на промотор -2325, -1885 и -276 сайты, соответственно, и RanGAP
ген был высоко метилируется на промотор -570 и -170 сайты (рис 4).

Обсуждение
<р> Накопительный данные свидетельствуют о том, что H
. пилори
инфекция является важным фактором для H
. пилори
-associated заболеваний желудка и что CagA является поощрение фактором развития рака желудка [17,18]. Мы построили три экспериментальные клеточные линии, в том числе двух желудочных линий раковых клеток, инфицированных H
. пилори
( CaGa
<sup>+) и клетку рака желудка линии гиперэкспрессией CaGa
, и определил, что CagA стали появляться в клетках 6 ч после заражения и до 12 ч. Впоследствии фосфорилируется CagA стали появляться, в соответствии с введением и последующим фосфорилированием CagA в эпителиальных клеток желудка по T4SS из H
. пилори
после инфекции слизистой оболочки желудка человека. Фосфорилированные CagA активирует сигнальные пути вниз по течению и играет патологическую роль. Мы также наблюдали CagA в клетках, стабильно трансфицированных CaGa
-вектором. Эти данные подтверждают успешное строительство трех экспериментальных клеточных линий.
<Р> Протеомика был использован для изучения взаимосвязи между H
. пилори
инфекции и желудочные заболевания, и многие по-разному выраженные белки были идентифицированы [19-22]. Тем не менее, связь этих белков с CagA и их экспрессии в тканях желудка рака человека остаются неясными. Мы получили в общей сложности 135 дифференциальных пятен от трех клеточных линий, из которых 73 были на регулируемых и 62 были вниз регулируется. Десять дифференциальных пятен являются общими для всех трех клеточных линий, в том числе 6 до регулируемых белков (бета-актина, ЛДГ, DLD, PRP19, АТФ-синтазы, и Кэм) и 4 вниз регулируемые белки (p64 CLCP, RanGAP, P43 и калретикулин) , выражение и 10 белков 'были проверены с помощью вестерн-блоттинга в этих клеточных линиях. Эти белки участвуют в энергетическом обмене, скелетной перегруппировке, обработки пре-мРНК, сигнальной трансдукции, а также другие белки, тесно связаны с развитием и прогрессированием многих раковых заболеваний человека [23,24]. Мы количественно обнаружили экспрессию генов, кодирующих эти 10 белков в тканях желудка рака человека, который показал, что β-актина
, ЛДГ
, DLD
, PRP19
и CaM
последовательно высоко выражены и RanGAP
был слабо выражен в обоих раковых тканях и /или метастатических лимфатических узлов по сравнению с пери-раковой ткани. Аберрантная экспрессия этих белков была также подтверждена с помощью Вестерн-блоттинга при раке желудка и метастатических лимфатических узлов. Далее, мы обнаружили, что CaGa
+ H
. пилори
колонизировали в 20 из 30 раковых тканей желудка и способствует или ингибирует экспрессию этих генов в естественных условиях.
<Р> ЛДГ и DLD тесно связаны с энергетическим метаболизмом. Нарушение энергетического обмена считается важным фактором для развития и прогрессирования рака. В отличие от нормальных клеток, раковые клетки обладают повышенной зависимость от гликолиза с достаточным количеством кислорода, называемый аэробный гликолиз. Большое количество пировиноградной кислоты, конечный продукт пути, превращается в молочную кислоту ЛДГ, способствуя гликолиза и энергетического метаболизма дисбаланс [25]. Молочная кислота может также уменьшить рН клеточного микроокружения, тем самым увеличивая неоваскулярной реакцию на действие факторов ангиогенеза для продвижения метастазов опухолевых клеток [26,27]. В соответствии с нашими результатами, ЛДГ
высоко экспрессируются в тканях рака в 61,8% пациентов с раком желудка; у пациентов с избыточной экспрессии LDH имели меньшую выживаемость по сравнению с пациентами с низким уровнем экспрессии [28]. Ким <ЕМ> и др
. [29] заметил, что DLD
выражение возрастает с опухолевой прогрессии, обеспечивая тем самым больше энергии для роста опухолевых клеток. Таким образом, высокая экспрессия СДГ и DLD является решающим фактором для развития и прогрессирования рака желудка, и H
. пилори
инфекция способствует экспрессии этих двух генов в раковых тканях желудка.
<Р> Бета-актин, ключевым компонентом цитоскелета, сохраняет структуру, движение и деление клеток в нормальных условиях. β-актина
ненормально экспрессируется во многих заболеваний [30]. Белок PRPF19, как полагают, функционировать в предварительно сплайсинга мРНК. Убиквитинирование PRPF19 может привести к повреждению ДНК, и ненормальное восстановление ДНК является важной причиной онкогенеза [31]. Кальмодулин является кальций-связывающий белок, который регулирует многие сигнальные пути, и, таким образом, участвует в клеточной пролиферации, митоза и транскрипции генов. Кальмодулин способствует пролиферации клеток в карцином печени в сочетании с PI3K и переход от G1 к фазе S в сочетании с циклин Е [32]. Ингибитор кальмодулин арестах клеток в G1 фазе, чтобы ингибировать деление клеток [33]. В соответствии с этими результатами, мы определили, что H
. пилори
может участвовать в развитии рака желудка тканей за счет индукции высокий уровень экспрессии этих трех белков.
<Р> Кроме того, мы наблюдали вниз регулирование RanGAP
гена раковые ткани с H
. пилори
инфекции. RanGAP является ГТФ-активирующий белок. После гидролиза GTP к ВВП с помощью GTPase, активный RanGTP становится неактивным RanGDP, что приводит к блокаде клеток сигнализации для ингибирования прогрессии рака [34]. Аналогичным образом, снижение активности RanGAP, индуцированный убихитинизация способствует развитию рака [35].
<Р> метилирования ДНК может вызывать аномальную экспрессию генов. H
. пилори
инфекция увеличивает уровни метилирования некоторых генов и приводит к канцерогенеза слизистой оболочки желудка [36,37]. Метилирование ДНК обычно появляется на островах ЦГ промоторов генов. Мы обнаружили, статус метилирования CpG островов этих генов в клеточных линиях, построенных и определил, что ЛДГ
, DLD
и Кэм
гены деметилируется на промотор -2325, -1885 и -276 сайты, соответственно, и RanGAP
ген был высоко метилируется на промотор -570 и -170 сайтов, в соответствии с высоким выражением ЛДГ
, DLD
и CaM
генов и низкое выражение RanGAP
гена в раковых тканях желудка с CaGa
+ H
. пилори
инфекция.
<Р> В заключение, эти результаты свидетельствуют о том, что H
. пилори
инфекции, через CagA транслокации, может вызвать аберрантную метилирование этих генов приводят к дисфункциональной экспрессии генов в раковых тканях желудка и клеток. Наши результаты обеспечивают новое понимание молекулярного патогенеза рака желудка с H
. пилори
инфекции. Дальнейшие исследования будут исследовать влияние этих измененных моделей метилирования о патогенезе рака желудка в клинических образцах.</sup>

Выражение признательности
<р> Мы благодарим китайский центр хеликобактерной
Управление штаммом и сохранение для обеспечения H
. пилори
NCTC11637 и д-р Ян Wenxiu и Ву Jiahong для оказания технической помощи.

• PLoS ONE: Ассоциация между потерей зубов и рака желудка: Мета-анализ обсервационных исследований
• PLoS ONE: Массивная эндоскопической скрининг для рака пищевода и рака желудка в высокой зоне риска Китая