PLoS One: Proteomika-alapú azonosítása és elemzése kapcsolódó fehérjéket Helicobacter pylori a gyomor Cancer

absztrakt katalógusa

Helicobacter pylori katalógusa ( H katalógusa. pylori
) egy spirál alakú, Gram-negatív baktérium okozza a leggyakoribb krónikus fertőzés az emberi gyomorban. Körülbelül 1% -3% a fertőzött egyének fejlesztése gyomorrák. Azonban azok a mechanizmusok, amelyek H katalógusa. pylori katalógusa indukál gyomorrák még nem teljesen tisztázott. A rendelkezésre álló bizonyítékok szerint szoros kapcsolat áll fenn a virulencia faktora H katalógusa. pylori katalógusa, cytotoxin-asszociált gén A (CagA), és a gyomorrák. További jellemzése H katalógusa. pylori katalógusa virulencia hoztuk létre három sejtvonal által megfertőzni a gyomor rákos sejtvonalak SGC-7901 és AGS a cagA katalógusa ^{+ katalógusa H
. pylori katalógusa és transzfektálása SGC-7901 hordozó vektor a teljes hosszúságú cagA katalógusa gént. Azt észleltük, 135 eltérően expresszált fehérjéknek a három sejtvonal felhasználásával proteom technológia, és a 10 differenciál fehérjék közösek a három sejtvonalat választottunk ki és azonosítottak LC-MS /MS, valamint ellenőrizni Western blot: p-aktin, L-laktát dehidrogenáz (LDH), dihidrolipoamid-dehidrogenáz (DLD), pre-mRNS-feldolgozás faktor 19 homológját (PRPF19), az ATP-szintáz, kalmodulin (CAM), P64 CLCP, Ran-specifikus GTPáz aktiváló fehérje (RanGAP), P43 és calreticulin. Kimutatása a kifejezés ezen fehérjék és ezeket kódoló gének fehérjéket a humán gyomorrák szövetekben valós idejű PCR (RT-qPCR) és Western-blot során kiderült, hogy a kifejezés a β-aktin katalógusa, LDH
, DLD katalógusa, PRPF19 katalógusa és CaM katalógusa géneket up-szabályozott és RanGAP katalógusa volt lefelé szabályozni a gyomorrák szövetek és /vagy áttétes nyirokcsomók képest peri-rákos szövetekben. Nagy génexpresszió volt megfigyelhető H katalógusa. pylori fertőzés katalógusa gyomorrákban szövetekben. Továbbá, a LDH katalógusa, DLD katalógusa és CaM katalógusa géneket demetilezzük a promoter -2325, -1885 és -276 oldalakat, illetve és a RanGAP
gén erősen metilezett a promoter -570 és -170 helyek H katalógusa. pylori katalógusa-fertőzött és cagA katalógusa -overexpressing sejteket. Ezek az eredmények új betekintést a molekuláris patogenezise és kezelése célokat gyomorrák H katalógusa. pylori
fertőzés.}

bevezető hivatkozás: Zhou J, Wang W, Xie Y, Zhao Y, Chen X, Xu W, et al. (2016) Proteomika-alapú azonosítása és elemzése kapcsolódó fehérjéket Helicobacter pylori katalógusa gyomorrákban. PLoS ONE 11 (1): e0146521. doi: 10,1371 /journal.pone.0146521 katalógusa

Szerkesztő: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japán katalógusa

Beérkezett: szeptember 15, 2015; Elfogadva: december 19, 2015; Megjelent: január 8, 2016 katalógusa

Copyright: © 2016 Zhou et al. Ez egy nyílt hozzáférésű cikk feltételei szerint terjeszthető a Creative Commons Nevezd meg! Licenc, amely engedélyezi a korlátlan használatát, a forgalmazás és a reprodukció bármilyen adathordozón, feltéve, hogy az eredeti szerző és a forrás jóváírásra. Katalógusa

Az adatok elérhetősége: minden releváns adatokat a papírra. katalógusa

Forrás: a munkát támogatta Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (81260303, 31560326), Guizhou tartomány alapja (QianJiaoHe [2014] 06) és a Key Project of Science and Technology Guizhou tartomány (QianKeHe SY [2011] 3067, QianKeHe J [2012] 2039). Az eredeti változat, a munka által támogatott Nemzeti Természettudományi Alapítvány Kína (81260303, 31560326) és a Key Project of Science and Technology Guizhou tartomány (QianKeHe SY (2011) 3067). Katalógusa

Érdekütközés: szerzők kijelentették, hogy nem ellentétes érdekek léteznek. katalógusa

Bevezető katalógusa

Helicobacter pylori katalógusa ( H katalógusa. pylori katalógusa) okozza a legtöbb közös krónikus gyomor- fertőzés emberben világszerte. Mintegy fele a világ népességének fertőzött H katalógusa. pylori katalógusa, és a legtöbb gyarmatosított egyének fejlesztése tünetmentes gyomorhurut. Közül a fertőzött egyének, körülbelül 10% -20% -a egyének fejlesztése gyomorfekély betegségek és 1% -3% fejleszteni gyomorrák [1,2]. 1994-ben a H katalógusa. pylori katalógusa minősítették I. típusú rákkeltő gyomorrák az Egészségügyi Világszervezet Nemzetközi Ügynökség Rákkutató. Katalógusa

A gyomorrák egyik leggyakoribb ráktípusok, és több mint 70% -a új megbetegedések és halálesetek fejlődő országokban következik be [3]. Habár a globális előfordulási arány már csökken több évtizede, gyomorrák is túlnyomórészt a legtöbb fejlődő országban, többek között Japánban, Koreában és Kínában [4-6]. 2012-ben a kínai Rákregiszter Éves jelentés rámutatott, hogy a gyomorrák morbiditás és mortalitás második és a harmadik között rosszindulatú daganatok, ill. Katalógusa

A legtöbb H katalógusa. pylori katalógusa törzsek hordozzák a CAG katalógusa patogenitási sziget ( CAG katalógusa PAI), amely 27-31 kódoló gének bakteriális 4. típusú szekréciós rendszer (T4SS) [7] . A citotoxin-asszociált gén egy olyan gént ( cagA
) található, amely a 3 'végén CAG
PAI, kódolja az egyetlen ismert bakteriális onkoprotein, CagA, amely transzlokálódik gazdasejtekbe által T4SS után bakteriális kötődés a gyomorban. Miután bekerült a gazda-sejtek, CagA tirozin foszforilált tagjai által Abl és Src kináz családok és kölcsönhatásba lép számos intracelluláris effektor, ami az aktiválás jelátviteli molekulák [8]. A klinikai vizsgálatokban, cagA
-pozitív törzseket következetesen kapcsolódik a súlyosabb gyomor gyulladás és fekély, és egy kis töredéke egyének fejlesztése gyomorrák [9]. Azonban azok a mechanizmusok hátterében a szövetség CagA daganatos nem tisztázott. Katalógusa

proteomikai vált, mint egy ígéretes technológiai platform a racionális azonosítása biomarkerek és új terápiás célpontokat betegségek meghatározására a háttere karcinogenezissel [10]. Azonban a legtöbb fontos fehérjék által észlelt proteomika in vitro nem erősítették in vivo klinikai mintákban.

DNS metiláció és demetilezési fontos szerepet játszik a fejlesztés és progressziójában rákok, gátolja a kötődése transzkripciós faktorok DNS és előfordul szinte kizárólag gén promoter CpG-szigetek [11-13]. Között szervek, a gyomor mutat a legmagasabb frekvencia a kóros CpG sziget metiláció, esetleg H katalógusa. pylori katalógusa közvetített [14-16]. Bár a vizsgálatok DNS metiláció növekszik, a gén metilációs államok által kiváltott H katalógusa. pylori katalógusa még nem világosak. Katalógusa

Ebben a munkában arra törekedtünk, hogy a specifikus fehérjék meghatározására vonatkozó H katalógusa. pylori fertőzés katalógusa, összehasonlító proteomikai és jellemezze a génexpresszió és CpG-sziget metilációs ezeknek a fehérjéknek a gyomorrák szövetek és sejtek. Katalógusa

Anyagok és módszerek katalógusa

Az emberi szövetek katalógusa

Az emberi szöveteket szereztünk műtét példányok 30 gyomorrákos betegek és kiegyenlített szomszédos rákos szövetek és áttétes nyirokcsomók Guiyang Medical Kórház Guiyang Kína között 2009. január és 2010. június A diagnózis megerősítette két patológusok. A betegek között 23 férfi volt, és 7 nő volt. A betegek életkora 38-77 év. Huszonkét beteg bél típusú adenocarcinoma, és 8 volt diffúz típusú adenocarcinoma. A vizsgálati protokollt jóváhagyta az etikai bizottság Guiyang Medical Kórház, és minden alanyok írásos beleegyezését adta. Katalógusa

Sejtkultúra katalógusa

Az emberi gyomor karcinóma sejtvonal AGS (ATCC CRL-1739TM) és SGC-7901 sejteket közvetlenül vásárolt American Type Culture Collection (ATCC) és Cell Bank Type Culture Collection a kínai Tudományos Akadémia (Sanghaj, Kína), illetve és passzálják kevesebb, mint 3 hónap laboratóriumunkban kézhezvétele után. A sejteket Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 tápközegben, amelyet 10% hővel inaktivált magzati borjúszérummal, 100 U /ml penicillinnel és 100 ng /ml sztreptomicinnel (Gibco, Grand Island, NY, USA) 37 ° C-on nedvesített inkubátorban, 5% CO _{2. katalógusa}

H katalógusa. pylori katalógusa kultúra katalógusa

H katalógusa. pylori katalógusa törzs NCTC11637 (ATCC 43504, ajándék a kínai központ Helicobacter pylori katalógusa törzs Management és megőrzése, Peking, Kína), amely cagA katalógusa pozitív volt, növesztjük szelektív tápközegben a Columbia agar lemezre, amely 10% magzati borjúszérumot és H
. pylori katalógusa szelektív kiegészítő (Oxoid Ltd., Anglia), 37 ° C-on mikroaerob körülmények között. Katalógusa

Cell fertőzés H katalógusa. pylori Matton

AGS, SGC-7901 sejteket (5 x 10 ^{5) oltottunk 6 mérőhelyes lemezeken 24 órán és fertőzött H
. pylori
6 órán és 12 órán át egy multiplicitásokkal fertőzés (Mois) 1: 100, 1: 500 és 1: 1000, ill. Sejtet fertőzünk 12 órán át egy MOI 1: 1000 H
. pylori katalógusa forraljuk 15 percig kontrollként. Katalógusa}

Az expressziós vektor pcDNA3.1 / cagA Matton

A DNS-t kivonjuk H katalógusa. pylori katalógusa, és a teljes hosszúságú cagA katalógusa szekvenciát szintetizált PCR és klónozva pMD18-T plazmidok építésére pMD18-T / cagA katalógusa. A cagA katalógusa gént azonosítottunk szekvenálás (GQ161098). pMD18-T / cagA
-gyel emésztettük, a restrikciós enzimekkel Pst
I és Bam
HI, és a cagA
ligáltuk pcDNA3.1 /Zeo (-) (Invitrogen, USA) megépítésére eukarióta expressziós vektor pcDNA3.1 / cagA katalógusa. A szekvenciákat a primerek az 1. táblázat tartalmazza

Cell transzfekciót pcDNA3.1 / cagA Matton

SGC-7901 sejteket inkubáltunk 12 órán keresztül, 6 mérőhelyes lemezek beszerzése 80% konfluens sejteket. A sejteket azután transzfektáltuk a gyártó utasításai szerint. 48 óra elteltével a sejteket osztva 01:10 új 6-lyukú lemezekre és inkubáljuk további 24 órán át, majd tartjuk szelektív zeocintartalmú (250 ug /ml) standard tápközeg 2 hétig, amíg klón képződést. A sejteket transzfektáltuk üres vektorral pcDNA3.1 /Zeo (-) alkalmaztunk kontrollként.

Fehérjeextrakció és Western-blot-

protein extraktumokat készítettünk által újraszuszpendáljuk sejt pelletet egy RIPA pufferben vagy homogenizáló 200 mg szövetek egy RIPA pufferben. Összesen 30-50 ug fehérje extraktumot SDS-PAGE gélelektroforézissel, áttöltöttük egy polivinilidén-difluorid (PVDF) membránra (Millipore, Billerica, MA, USA), és blottoltuk éjszakán át egér monoklonális anti-CagA antitesttel (1: 800, SC-28368), egér monoklonális anti-foszfotirozin antitestet (PY99, 1: 300, az SC-7020), nyúl poliklonális anti-béta aktin antitest (1: 500, ab189073), nyúl poliklonális anti-LDH antitesttel (1: 350 , ab125683), egér monoklonális anti-DLD (1: 800, az SC-376890), nyúl poliklonális anti-PRPF19 (1: 400, ab27692), egér monoklonális anti-ATP szintáz antitesttel (1: 300, ab54880), nyúl poliklonális anti -kalmodulin anbody (1: 250, ab208911), nyúl poliklonális anti-RanGAP antitesttel (1: 200, ab92360), nyúl poliklonális anti-p64CLCP antitesttel (1: 300, ab28722), nyúl poliklonális anti-kalretikulin antitesttel (1: 350, AB4) és egér monoklonális anti-gliceraldehid-3-foszfát--dehydrogenase antitesttel (GAPDH, 1: 8000) a Santa Cruz (CA, USA), ABCAM (Cambridge, Egyesült Királyság) és CangChen (Shanghai, Kína), illetve 5% BSA Tris-pufferolt sóoldat, és 0,01% Tween-20. Peroxidáz-konjugált másodlagos antitestekkel (1: 5000, SC-2371, Santa Cruz, CA, USA) alkalmaztunk, és kifejleszteni a kemilumineszcenciás reagens ECL Plus használatával Hyperfilmmel (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, Egyesült Királyság). Számszerűsítve a Western-blot segítségével végeztük Mennyiség One szoftvert. Mindegyik kísérletet végeztünk 3-szor, és a reprezentatív eredmény látható.

Fehérje extrakció és kétdimenziós gélelektroforézissel

sejtüledékeket feloldunk sejt lízis pufferrel egy éjszakán át 4 ° C-on, és a fehérje kicsapjuk három térfogat jéghideg aceton inkubálva 4 ° C-on 2 órán át. A mintákat ezután centrifugáltuk 20.000 rpm-en 30 percig, és az üledéket újra szuszpendáljuk sejt lízis pufferben tárolunk 4 ° C-on egy éjszakán át.

Összesen 800 ug protein-ját egy 250 ul térfogatában az a rehidratáló oldat, és izoelektromos fókuszálás (IEF) lépésben egy Ettan IPGphor II izoelektromos fókuszálás rendszer (Amersham Biosciences) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. A protokoll IEF 300 V for1 H, 500 V-on 2,5 órán, 1000 V, 2 H; 8000 V-on 8 órán át, 60 KVH (összesen).

befejezése után IEF, az IPG csíkok (Amersham Biosciences) ekvilibráltuk egyensúlyi pufferben 15 percig, és felvisszük egy 12% -os SDS-PAGE gélen két- dimenziós elektroforézis 30 mA /gél. A kapott SDS-PAGE gélt rögzítettük 20% -os TCA-val 30 percig, majd megfestettük kolloidális Coomassie G-250 [5].

A fehérje foltok a gélen beolvasott és elemeztük automatikusan. Differenciáltan expresszálódó fehérje foltokat megerősítették képalkotó Mester 2D 5.0 ​​analitikai szoftver (Amersham Biosciences). Student-féle t-tesztet végeztünk a mennyiségi elemzést a 2D géleken. Differenciális expressziója egy specifikus protein definiáltuk, mint egy ≥2-szoros változást spot optikai sűrűség a két párosított beállta ismétlődések. A differenciál foltok ezután kivágtuk a SDS-PAGE-gélek, további azonosítás LC-MS /MS.

RNS extrakció és kvantitatív RT-PCR

Teljes RNS-t extraháltunk 50 mg szövetet és hozzáadunk DNáz I (RNáz-mentes). A géneket amplifikáltuk SYBR Green (Applied Biosystems, Ausztrália). Hipoxantin-guanin-foszforibozil-( HPRT
) alkalmaztunk a normalizálási kontroll, és a relatív mRNS-szinteket számítottuk ki az összehasonlító C _{T módszerrel Step-egy szoftver (Applied Biosystems, Ausztrália) [8]. Minden mintát három párhuzamosban vizsgáltuk, és az eredményeket mint az átlag ± SD. Az alkalmazott primerek az 1. táblázatban felsorolt ​​}

DNS-extrahálás és metilációs elemzésére CpG-szigetek

DNS-t izoláltunk a sejtekből és a módosított nátrium-hidrogén-szulfit segítségével EZ a DNS-metilációs-Gold Kit ^{™ (Zymo Research, CA, USA) alkalmazásával a gyártó utasításai szerint. Promoter CpG-szigetek arra megjósolt módon metil Primer Express szoftver és ampiifikáit biszulfit-módosított DNS-t PCR-rel az alábbi eljárások alkalmazásával: denaturálás 96 ° C-on 10 percen keresztül, majd 40 ciklus denaturáló 94 ° C-on 40 másodperc, illesztés 60 ° C-on 40 másodperc, majd lánchosszabbítás 72 ° C-on 40 másodperc, a végső extenzió 72 ° C-on 10 percig. Az amplifikált PCR-termékeket klónoztuk pMD19-T vektorokba és szekvenáltuk. Ezen túlmenően, izolált DNS tumor szövetek kimutatására használt H
. pylori katalógusa 16S rRNS gén katalógusa és cagA katalógusa gént. A primer szekvenciák felsorolása a 2. táblázatban}

Statisztikai analízis

Az eredményeket, mint az átlag ± SD. Statisztikai elemzéseket végeztünk SPSS 15.0 szoftver segítségével. Egytényezős varianciaanalízissel (ANOVA) és Student-féle t-tesztet alkalmaztunk az adatok elemzésére. P katalógusa < 0,05 (kétoldalas) tekintettük szignifikánsnak. Katalógusa

Eredmények katalógusa

Bemutatjuk CagA a gyomorrák sejtek katalógusa

Mivel CagA a H katalógusa. pylori
kritikus virulencia tényező a fejlesztés és progressziójában gyomorrák, CagA detektáltunk gyomorrák sejtvonalakon RT-PCR és Western blot fertőzés után SGC-7901 és AGS sejtek H katalógusa. pylori katalógusa és transzfekciója SGC-7901 sejtek cagA katalógusa vektor. A CagA fehérje kezdtek megjelenni arányban sejtek baktériumok 1: 500 tenyésztett sejtekben 6 H, és a tartalom volt a legnagyobb arányban 1: 1000, 6 H (ábra az 1A és 1B). Azonban foszforilezett CagA volt megfigyelhető sejtek aránya 1: 500 tenyésztés után 12 órán, és a legmagasabb tartalom volt megfigyelhető sejtek aránya 1: 1000 6 óra eltelte után a kultúra. CagA mRNS és fehérje is megfigyelhetők voltak a stabilan cagA
-overexpressing SGC-7901 sejtek (ábra 1c és 1d). Ezek az adatok azt sugallják, hogy CagA sikeresen be a három sejtvonal és foszforilált.

azonosítása eltérés fehérjék gyomor rákos sejtekben

Miután sejteket megfertőztük H
. pylori
6 órán át egy MOI 1: 1000 vagy transzfektált cagA
vektor, egy proteomikus technikát létrehozásához használt hat kétdimenziós elektroforézis (2-DE) térképek a három sejtvonalak és azok kontrollok (2. ábra), és a 135 differenciális foltok detektáltunk, amelyek közül 73 volt akár szabályozott és 62-le-szabályozott. Tíz eltérés foltok közös mindhárom sejtvonal azonosítottuk LC /MS és ellenőrzött Western-blot, beleértve a 6 felülszabályozott fehérjék: p-aktin, LDH, DLD, PRPF19, ATP szintáz és kalmodulin (CaM) és 4 leszabályozott fehérjék, mint például RanGAP, p64 CLCP, P43 és calreticulin (3. táblázat és 3A ábra). katalógusa

H katalógusa. pylori fertőzés katalógusa elősegíti a kifejezés eltérés fehérjék gyomorrák szövetek katalógusa

Mivel H katalógusa. pylori
szelektíven colonizes az emberi gyomorban, hogy aktiválja egy sor kóros folyamatok, a gén expresszióját 10 eltérés fehérjék 30 humán gyomorrák mintákat értékeltük kvantitatív RT-PCR-rel. A 10 gén, a kifejezés β-aktin katalógusa, LDH katalógusa, DLD katalógusa, PRP19 katalógusa és CaM
gyomor- rákok és /vagy metasztatikus nyirokcsomók nem voltak felülszabályozott képest peri-rákos szövetekben, míg a kifejezés a RanGAP
volt alulszabályozott. Hasonlóképpen, a 6-fehérjéket is abnormálisan expresszált ugyanabban a szövetekben (ábra 3B és 3C). Nem volt szignifikáns különbség a kifejezés a többi gén észleltek. Katalógusa

H katalógusa. pylori katalógusa kolonizáció gyomorrák szövetekben mérjük, hogy kimutatjuk a 16S rRNS gén katalógusa és cagA katalógusa génje H katalógusa. pylori katalógusa PCR. H katalógusa. pylori katalógusa jelen volt 20, a 30 minta (pozitív arány 67%), és az összes H katalógusa. pylori katalógusa törzsek cagA katalógusa pozitív. Az mRNS szintje β-aktin katalógusa, LDH katalógusa, DLD katalógusa, PRP19 és Cam katalógusa magasabb volt H katalógusa. pylori-pozitív katalógusa szövetekben, mint a negatív minta (ábra 3D). Katalógusa

H katalógusa. pylori katalógusa indukál rendellenes DNS metiláció gyomorrák sejtek katalógusa

A három sejtvonal, a PCR-termékek a CpG szigetek a fenti gének sikeresen megszerezte következő biszulfit kezelés és szekvenálása. Ezekben a gének, LDH katalógusa, DLD katalógusa és CaM katalógusa géneket demetilezzük a promoter -2325, -1885 és -276 oldalakat, illetve és a RanGAP katalógusa gén erősen metilezett a promoter -570 és -170 oldalak (lásd 4. ábra). katalógusa

Vita katalógusa

felhalmozódó bizonyítékok azt mutatják, hogy a H katalógusa. pylori fertőzés katalógusa fontos tényezője H katalógusa. pylori katalógusa -asszociált gyomorbetegségek és CagA egy faktort gyomorrák [17,18]. Mi épített három kísérleti sejtvonalak, beleértve a két gyomor rákos sejtvonalak fertőzött H
. pylori katalógusa ( cagA katalógusa ^{+) és a gyomorrák sejtvonal túltermelõ cagA katalógusa, és megállapítottuk, hogy CagA kezdtek megjelenni a sejteket 6 órával a fertőzés után, és legfeljebb 12 óra hosszat. Ezt követően a foszforilált CagA kezdtek megjelenni, összhangban az injekciót, és az azt követő foszforilációja CagA gyomorban hámsejtek által T4SS a H katalógusa. pylori katalógusa fertőzés után az emberi gyomor nyálkahártyáját. Foszforilált CagA aktiválja a jelátviteli utak és játszik patológiás szerepet. Azt is megfigyelték, CagA sejtekben stabilan transzfektált a cagA
vektor. Ezek az adatok megerősítik a sikeres építése a három kísérleti sejtvonalat. Katalógusa}

proteomikai arra használták, hogy tanulmányozzák a kapcsolatát H katalógusa. pylori
fertőzés és a gyomor betegségek, valamint számos differenciálisán expresszált fehérjét azonosítottak [19-22]. Azonban a szövetség ezen fehérjék CagA és expresszió humán gyomorrák szövetek továbbra sem tisztázott. Megszereztük összesen 135 eltérés foltok a három sejtvonal, amelyből 73 volt akár szabályozott, és 62-le szabályozni. Tíz eltérés foltok közös volt mind a három sejtvonal, beleértve a 6 felülszabályozott fehérjék (β-aktin, LDH, DLD, PRP19, ATP szintáz, és a CAM) és 4 lefelé szabályozott fehérjék (P64 CLCP, RanGAP, P43 és calreticulin) , és a 10 fehérjék "kifejezés ellenőrizték Western blot ezekben a sejtvonalakban. Ezek a proteinek részt vesznek energia metabolizmus, csontváz átrendeződés, a pre-mRNS-feldolgozás, szignál transzdukció, és más fehérjék szorosan összefügg a fejlődés és a progresszió számos emberi rákos megbetegedések [23,24]. Mi mennyiségileg kimutathatók a kifejezés az ezeket kódoló gének 10 fehérjék az emberi gyomor rákos szövet, amely feltárta, hogy β-aktin katalógusa, LDH katalógusa, DLD katalógusa, PRP19 katalógusa és CaM katalógusa következetesen nagyon kifejezett és RanGAP katalógusa rosszul egyaránt kifejezett rákos szövetek és /vagy áttétes nyirokcsomók képest peri-rákos szövet. A kóros expressziója e fehérjék is igazolta western blot gyomorrákban és áttétes nyirokcsomók. Továbbá azt találtuk, hogy cagA katalógusa ^{+ H katalógusa. pylori
kolonizált 20 30 gyomorrák szövetek és támogatott vagy gátolta az expresszióját ezek a gének in vivo.}

LDH és DLD szorosan korrelál a energia-metabolizmus. Disorder energia anyagcsere tartják fontos tényező a fejlődés és progresszió a rák. Ezzel szemben a normális sejtek, rákos sejtek mutatnak fokozott függését a glikolízis elegendő oxigénnel, nevezzük aerob glikolízis. A nagy mennyiségű piroszőlősav, a végső termék az útvonal, alakítjuk tejsav által LDH, elősegítve a glikolízis és az energia metabolizmus kiegyensúlyozatlanság [25]. A tejsav is csökkentheti a pH a sejt mikrokörnyezet, így növelve a neovaszkuláris válasz angiogenezisfaktorokra elősegítése tumorsejt-metasztázis [26,27]. Összhangban az eredmények, LDH katalógusa nagyra kifejezve rákos szövetekben 61,8% -ánál a gyomorrák; betegeknél LDH overexpressziója rövidebb volt a túlélési betegekhez képest alacsony expressziós [28]. Kim és munkatársai katalógusa. [29] megfigyelték, hogy DLD katalógusa kifejezés növeli a tumor progresszióját, ezáltal több energiát a tumorsejtek növekedését. Ezért nagy kifejezése LDH és DLD döntő tényező a kialakulásában és progressziójában gyomorrák, és H katalógusa. pylori fertőzés katalógusa elősegíti a kifejezés a két génnek a gyomorrák szövetekben. Katalógusa

A béta-aktin, kulcsfontosságú eleme a citoszkeleton, fenntartja a szerkezet, a mozgás és a sejtosztódást normális körülmények között. β-aktin katalógusa kórosan kifejezve számos betegség [30]. A PRPF19 fehérje úgy működik, a pre-mRNS splicing. Ubiquitinezését PRPF19 vezethet DNS-károsodás és a kóros DNS-javítás egyik fontos oka tumorigenezis [31]. Calmodulin egy kalcium-kötő fehérje, amely szabályozza számos jelátviteli utak, és ezáltal részt vesz a sejtproliferációban, a mitózist és a gén transzkripciót. Calmodulin elősegíti a sejtek burjánzását májkarcinomák kombinálva PI3K és az átmenetet a G1-S fázis kombinációban ciklin E [32]. Egy inhibitor kalmodulin letartóztatások sejtek G1 fázisban, hogy gátolják a sejtosztódást [33]. Ezekkel az eredményekkel egybevág megállapítottuk, hogy H katalógusa. pylori
részt vehetnek a rák fejlődésének gyomor indukálnak a szövetekben a magas expresszióját ezek három fehérje.

Ezen túlmenően megfigyeltük, down-regulációja a RanGAP
gén rák szövetek H katalógusa. pylori fertőzés katalógusa. RanGAP egy áz aktiváló protein. A hidrolízis után a GTP GDP egy GTPáz, aktív RanGTP inaktívvá válik RanGDP, ami a blokád a sejt jelátviteli gátolni a rák progressziójának [34]. Hasonlóképpen csökkent RanGAP tevékenység által kiváltott ubikvitináció elősegíti a rák kialakulásához [35]. Katalógusa

DNS metiláció indukálhat abnormális génexpresszió. H katalógusa. pylori
fertőzés növeli a metilációs szintek néhány gént és eredmények karcinogenezis a gyomornyálkahártya [36,37]. DNS metiláció rendszerint megjelenik a CpG szigetek génpromotereket. Azt észleltük, a metilációs állapotát CpG szigetek ezeknek a géneknek a képzett sejtvonalak és megállapította, hogy a LDH katalógusa, DLD katalógusa és CaM katalógusa géneket demetilezzük a promoter -2325, -1885 és -276 oldalakat, illetve és a RanGAP katalógusa gén erősen metilezett a promoter -570 és -170 oldalakat, összhangban a magas kifejezés a LDH katalógusa, DLD katalógusa és CaM katalógusa gének és az alacsony kifejeződése RanGAP katalógusa gén gyomorrák szövetekben cagA katalógusa ^{+ H katalógusa. pylori fertőzés katalógusa.}

Összefoglalva, ezek az eredmények arra utalnak, hogy H katalógusa. pylori fertőzés katalógusa keresztül CagA transzlokáció okozhatnak, a rendellenes metilációs ezen gének vezet diszfunkcionális génexpresszió gyomorrák szövetek és sejtek. Eredményeink új megértése a molekuláris patogenezisének gyomorrák H katalógusa. pylori fertőzés katalógusa. További vizsgálatokra lesz felfedezni a hatása ezeknek a megváltozott metilációs mintázat a patogenezisében gyomorrák klinikai mintákban. Katalógusa

Köszönetnyilvánítás katalógusa

Köszönjük a kínai központ Helicobacter pylori katalógusa törzs Management és megőrzése biztosításának H katalógusa. pylori katalógusa NCTC11637 és Dr. Yang Wenxiu és Wu Jiahong a technikai segítségnyújtás. Katalógusa

• PLoS One: egyrészről fogvesztés és a gyomorrák: meta-analízise megfigyeléses vizsgálatok
• PLoS One: Massive endoszkópos szűrés, nyelőcső és a gyomor daganatok egy magas kockázatú terület Kína