PLoS ONE. Proteomika-Based Identifikacija i analiza proteine ​​povezane s Helicobacter pylori u želučanom Cancer

Sažetak pregled

Helicobacter pylori pregled ( H pregled pylori
) je spiralnim gram-negativna bakterija koja uzrokuje najčešće kronične infekcije u ljudskom želucu. Oko 1% -3% zaraženih osoba razvije rak želuca. Međutim, mehanizmi kojima H
. pylori pregled izaziva rak želuca nisu u potpunosti razumio. Dostupni dokazi ukazuju na jaku vezu između faktora virulencije u H Netlogu. pylori pregled, citotoksin povezana gen A (CAGA), te rak želuca. Za daljnju karakterizaciju H
. pylori pregled virulencije, ustanovili smo tri stanične linije infekcijom želučanog raka stanične linije SGC-7901 i AGS s CagA pregled ^{+ pregled, H
. pylori pregled te transfekcijom SGC-7901 sa vektorom koji nosi pune duljine CagA pregled gena. Otkrili smo 135 različito izražene proteina iz tri stanične linije koriste složenu tehnologiju, te 10 diferencijalne proteine ​​zajedničke tri stanične linije su odabrane i prepoznati po LC-MS /MS, kao i verificirana Western blot: P-aktin, L-laktat dehidrogenaze (LDH), dihydrolipoamide dehidrogenaze (DLD), pre-mRNA za obradu faktor 19 homologa (PRPF19), ATP, kalmodulin (CAM), p64 CLCP, trčao specifične GTPaza aktivirajući protein (RanGAP), P43 i kalretikulin. Detekcija ekspresije tih proteina i geni koji kodiraju ove proteine ​​u ljudskim tkivima, u realnom vremenu PCR (RT-qPCR) i western blot rak želuca otkrila da je ekspresija β-aktin pregled, LDH
, DLD pregled, PRPF19 pregled i CaM
geni su up-regulirana i RanGAP pregled je dolje regulirana u želučanom tkivu raka i /ili metastatski limfni čvorovi u odnosu na peri-kancerogen tkiva. Visoke ekspresije gena opažena je za H Netlogu. pylori pregled infekcije želuca tkiva raka. Nadalje, LDH pregled, DLD pregled i CAM pregled, geni su memetilirani na promotora -2325, -1885 i -276 mjesta, odnosno, i RanGAP pregled gena je vrlo metilirani na promotora -570 i -170 mjesta u H Netlogu. pylori pregled -infected i CagA pregled -overexpressing stanice. Ovi rezultati pružaju novi uvid u molekularne patogenezi i liječenju ciljeva za rak želuca s H Netlogu. pylori infekcija pregled pregled}

Izvor. Zhou J, Wang W, Y Xie, Zhao Y, Chen X, Xu W, et al. (2016) Proteomika-Based Identifikacija i analiza proteine ​​povezane s Helicobacter pylori pregled u rak želuca. PLoS ONE 11 (1): e0146521. doi: 10,1371 /journal.pone.0146521 pregled

Urednik: Hiromu Suzuki, Sapporo Medicinski fakultet, JAPAN pregled

Primljeno: 15. rujna 2015. godine; Prihvaćeno: 19. prosinca 2015. godine; Objavljeno: 8 siječanj 2016 pregled

Copyright: © 2016 Zhou i sur. Ovo je otvoreno pristupa članak distribuirati pod uvjetima Creative Commons Imenovanje License, koja omogućuje neograničeno korištenje, distribuciju i reprodukciju u bilo kojem mediju, pod uvjetom da je izvorni autor i izvor su zaslužan pregled

dostupnost podataka. Sve relevantne podaci u radu pregled

Financiranje:. rad je podržan od strane Nacionalne zaklade prirodoslovni Kine (81260303, 31560326), pokrajini Guizhou temelja (QianJiaoHe [2014] 06) i Projekt ključ znanosti i tehnologije Guizhou Provincija (QianKeHe SY [2011] 3067, QianKeHe J [2012] 2039). U izvornoj verziji, rad je podržan od strane Nacionalne zaklade prirodoslovni Kine (81260303, 31560326) i ključni projekt znanosti i tehnologije provinciji Guizhou (QianKeHe SY (2011) 3067)

suprotstavljenih interesa. autori su izjavili da ne postoje suprotstavljeni interesi. pregled

Uvod pregled

Helicobacter pylori pregled ( H pregled. pylori pregled) uzrokuje najviše učestala kronična infekcija želuca kod ljudi širom svijeta. Otprilike polovica svjetske populacije zaraženo H Netlogu. pylori pregled, a većina koloniziranih osoba razvije asimptomatska gastritis. Među zaraženih osoba, oko 10% -20% osoba razvije peptički bolesti čirom i 1% -3% razvije rak želuca [1,2]. Godine 1994. H pregled. pylori pregled je klasificiran kao tip I kancerogen za rak želuca od strane Svjetske zdravstvene organizacije Međunarodne agencije za istraživanje raka. Pregled

Rak želuca je jedna od najčešćih vrsta raka, a više od 70% novih slučajeva i smrtnih slučajeva javlja se u zemljama u razvoju. [3] Iako je globalna stopa incidencije je u padu već nekoliko desetljeća, raka želuca i dalje prevladava u većini zemalja u razvoju, uključujući Japan, Koreja i Kina [4-6]. U 2012. godini, kineski registar za rak, Godišnje izvješće pokazuje da rak želuca morbiditet i mortalitet su drugo i treće mjesto među svim zloćudnim tumorima, respektivno. Pregled

Većina H Netlogu. pylori pregled sojevi nose CAG
patogenosti otok ( CAG pregled PAI), koji sadrži 27 do 31 gena koji kodiraju sustav bakterija tipa 4 izlučivanjem (T4SS) [7] , Gen citotiksin povezane Gen ( CagA pregled), koji se nalazi na 3 'kraju CAG
PAI, kodira samo poznate bakterijske onkoprotcin, CagA, koja je premještena u stanice domaćina by T4SS nakon bakterijske vezanosti za želudac. Jednom unutar stanice domaćina, CagA je tirozin fosforiliran članovi obitelji kinaza Abl i Src i komunicira s brojnim intracelularne efektora, što dovodi do aktivacije nizvodne signalne molekule [8]. U kliničkim studijama, CagA pregled pozitivnih sojeva su dosljedno povezana s težom želučane upale i čireva, te mali dio ljudi oboljeti od raka želuca [9]. Međutim, mehanizmi kojima se temelji društvo CagA s rakom nisu razjašnjeni. Pregled

Proteomika je nastao kao obećavajući tehnološke platforme za racionalno utvrđivanje biomarkera i novih terapijskih ciljeva za bolesti i određivanje temeljnih mehanizama karcinogeneze [10]. Međutim, većina od važnih proteina otkrivenih proteomike in vitro nisu potvrditi in vivo u kliničkim uzorcima. Pregled

DNA metiliranje i demetilacija igra važnu ulogu u razvoju i napredovanju raka blokiranjem vezanja transkripcijskih faktora DNA i javlja se skoro isključivo u promoter gen CpG otocima [11-13]. Među organe, želudac pokazuje najveću učestalost abnormalnog otoku CpG metilacije, možda i H
. pylori pregled posredovanih [14-16]. Iako su studije metilacije DNA u porastu, gen metilacije stanja izazvana H Netlogu. pylori pregled još nisu jasne. Pregled

U ovom radu željeli smo utvrditi određene proteine ​​koji se odnose na H Netlogu. pylori pregled infekcije koristeći komparativne proteomika i karakterizirati ekspresiju gena i CpG otok metilacije tih proteina u želučanog tkiva raka i stanica. Pregled

Materijali i metode

ljudskim tkivima pregled

ljudska tkiva dobiveni su iz kirurgije uzoraka iz 30 pacijenata s rakom želuca i uskladiti susjedna tkiva raka i metastatskih limfnih čvorova na Medicinskom bolnici Guiyang, Guiyang Kini, u razdoblju od siječnja 2009. do lipnja 2010. dijagnoze su potvrđene od strane dva patologa. Među pacijentima, 23 su bili muškarci, a sedam su žene. Pacijenti su u dobi od 38 do 77 godina. Dvadeset i dva bolesnika imalo intestinalni tipa adenokarcinom i 8 imale difuzno tipa adenokarcinom. Protokol istraživanja je odobren od strane Etičkog povjerenstva o Guiyang Medicinskog bolnice, te su svi sudionici pod uvjetom pismeni informirani pristanak. Pregled

Kultura stanica pregled

stanične linije ljudskog karcinoma želuca AGS (ATCC CRL-1739TM) i SGC-7901 stanice su kupljeni izravno od American Type Culture Collection (ATCC) i stanične banke Type Culture Collection kineske akademije znanosti (Shanghai, Kina), odnosno, i pasaža manje od 3 mjeseca u našem laboratoriju nakon primitka. Stanice su kultivirane u Roswell Memorial Institute Park (RPMI) 1640 mediju uz 10% fetalnog goveđeg seruma inaktiviranog toplinom, 100 U /ml penicilina i 100 ug /ml streptomicina (Gibco, Grand Island, NY, USA) na 37 ° C u vlažnom inkubatoru s 5% CO _{2. pregled}

H pregled. pylori pregled kultura pregled

H pregled. pylori pregled soj NCTC11637 (ATCC 43504, dar iz kineskog Centra za Helicobacter pylori pregled soj upravljanje i čuvanje, Peking, Kina), što je CagA pregled pozitivna, je uzgojene u selektivnom mediju na Columbia agar ploče koje sadrže 10% fetalnog telećeg seruma i H
. pylori pregled Selektivno Doplata (oksoid doo, Engleska) na 37 ° C u uvjetima microaerobic. Pregled

Cell infekcija s H Netlogu. pylori

AGS i SGC-7901 stanice (5 × 10 ^{5) nasađene u 6 jažica 24 sata, a zaraženi H Netlogu. pylori pregled 6 sati i 12 sati na jedan mnogostrukosti infekcije (mjeseci) od 1: 100, 1: 500 i 1: 1000, respektivno. Stanice su zaražene 12 sati na moi od 1: 1000 s H Netlogu. pylori pregled kuha se 15 minuta kao kontrole. Pregled}

Izgradnja vektor ekspresije pcDNA3.1 / CagA

DNK izolirana je iz H pregled. pylori pregled, a full-length CagA pregled slijed sintetizira pomoću PCR i klonira u pMD18-T plazmida za izgradnju pMD18-T / CagA
. CagA pregled gen je identificiran od strane sekvenciranje (GQ161098). pMD18-T / CAGA pregled je razgrađen s restrikcijskim enzimima Pst I i pregled Bam HI pregled i CAGA pregled je ligiran u pcDNA3.1 /Zeo (-) (Invitrogen, USA) za konstrukciju ekspresijskog vektora pcDNA3.1 eukariotski / CAGA
. Sekvence prajmera su u Tablici 1. pregled

stanica s pcDNA3.1 / CAGA

SGC-7901 stanice su inkubirane 12 h u 6 jažica ploče se dobije 80% konfluentne stanice. Stanice su zatim transficirane u skladu s uputama proizvođača. Nakon 48 sati, stanice su podijeljeni u omjeru 1:10 u nove 6-jažične ploče i inkubirano je još 24 sata, zatim održava u selektivnom sadržavao zeocin (250 ug /ml), standardnom mediju za 2 tjedna do formiranja klona. Stanice transfektirane s praznim vektorom pCDNA3.1 /Zeo - Kao kontrole korišteni su pregled

ekstrakciju proteina i western blot pregled

Proteinski ekstrakt se dobije suspendiranjem staničnih peleta u RIPA puferom i homogeniziranje 200 (). mg tkiva u RIPA puferom. Ukupno 30-50 ug proteinskog ekstrakta je podvrgnut SDS-PAGE gel elektroforeze, prenese u polivinilidenfluorid (PVDF) membranu (Millipore, Billerica, MA, USA) i mrlja preko noći s mišjim monoklonskim anti-CagA antitijelo (1: 800, sC-28.368), mišje monoklonsko anti-fosfotirozin protutijela (PY99, 1: 300, sC-7020), zečje poliklonalno anti-beta aktin antitijelo (1: 500, ab189073) zečjeg poliklonskog anti-LDH antitijela (1: 350 , ab125683) mišjeg monoklonskog anti-DLD (1: 800, sC-376,89 tisuće) zečjeg poliklonskog anti-PRPF19 (1: 400, ab27692) mišjeg monoklonskog anti-ATP antitijela (1: 300, ab54880) zečjeg poliklonskog anti -calmodulin anbody (1: 250, ab208911) zečjeg poliklonalnog anti-RanGAP protutijelom (1: 200, ab92360) zečjeg poliklonalnog anti-p64CLCP protutijelom (1: 300, ab28722) zečjim poliklonskim anti-kalretikulin protutijelom (1: 350, AB4) i mišje monoklonsko anti-gliceraldehid-3-fosfat -dehydrogenase antitijela (GAPDH, 1: 8000) iz Santa Cruz (CA, USA), Abcam (Cambridge, UK) i CangChen (Shanghai, Kina), odnosno, u 5% BSA u Tris-pufer u fiziološkoj otopini i 0,01% Tween-20. Peroksidaze-konjugiranih sekundarnih antitijela (1: 5000, SC-2371, Santa Cruz, CA, USA) su korišteni i razvijene s ECL Plus reagensa kemiluminiscencija koristeći Hyperfilm (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK). Kvantifikacija Western blot analize provedena je pomoću Količina jednom softvera. Svaki eksperiment izveden 3 puta, a prikazan je reprezentativni rezultati. Pregled

ekstrakcije proteina i dvodimenzionalni gel elektroforeza pregled

Stanična zrnca su otopljena u puferu za lizu stanica preko noći na 4 ° C, a protein se istaloži s tri volumena ledenog acetona inkubacijom na 4 ° C tijekom 2 sata. Uzorci su zatim centrifugirani na 20,000 rpm kroz 30 minuta, a talog se resuspendira u puferu za lizu stanica i pohranjeni na 4 ° C preko noći. Pregled

ukupno 800 ug proteina je podešena na volumen od 250 uL s rehidracije otopine, izoelektrično fokusiranje (IEF) se izvodi pomoću sustava fokusiranje Ettan IPGphor II izoelektričnim (Amersham Biosciences) u skladu s uputama proizvođača. Protokol za IEF bila 300 V for1 h, 500 V tijekom 2,5 h, 1.000 V tijekom 2 sata; 8.000 V 8 h, 60 KVH (ukupni), pregled

Nakon završetka IEF, na IPG trake (Amersham Biosciences) se uravnoteži u puferu za ujednačavanje 15 minuta i stavi se na 12% SDS-PAGE gelu za dvostrukom dimenzionalni elektroforeza na 30 mA /gela. Dobiveni SDS-PAGE gel je fiksiran u 20% TCA tokom 30 minuta i zatim oboje s Coomassie koloidni G-250 [5]. Pregled

Proteinske mjesta na gelu su skenirani i analizirani automatski. Različito izražena proteinske mrlje su potvrđeni s Imaging Master 2D 5.0 ​​analitičkog softvera (Amersham Biosciences). Studentov t-test je proveden za kvantitativnu analizu 2D gelova. Diferencijalne ekspresije određenog proteina definiran kao ≥2 puta promjene licu optičke gustoće između dvije jednake postavlja u duplikatima. Diferencijalne Mrlje su potom izrezani iz SDS-PAGE gelovima za daljnje identifikacije LC-MS /MS. Pregled

ekstrakcija RNA i kvantitativna RT-PCR pregled

Ukupna RNA ekstrahirana je iz 50 mg tkiva i pomiješa s DNase i (posudu bez RNaze). Geni su amplificirani kod SYBR Green (Applied Biosystems, Australija). Hipoksantin-gvanin fosforibosiltransferaza ( HPRT pregled) je korišten kao kontrola normalizacije i relativne razine mRNA su izračunate komparativnom C _{T metoda pomoću korak-jedan softver (Applied Biosystems, Australija) [8]. Svaki uzorak je analiziran u triplikatu, a rezultati su izraženi kao srednja vrijednost ± SD. Primeri korišteni su prikazani u Tablici 1. pregled}

ekstrakcija DNA i analiza metiliranje CpG otoka

DNA je izolirana iz stanica i promjene s natrijevim bisulfitom korištenjem EZ metilacije DNA-zlato Kit ^{™ (Zymo Research, CA, USA) prema uputama proizvođača. Promotorski CpG otoci se predvidjeti pomoću metil Primer Express softvera i pojačan od bisulfita modificirani DNA pomoću PCR korištenjem sljedeće postupke: denaturiranje na 96 ° C tijekom 10 minuta, nakon čega slijedi 40 ciklusa denaturacije na 94 ° C tijekom 40 sekundi, sljepljivanje pri 60 ° C ° C tijekom 40 sekundi, i istezanja pri 72 ° C tijekom 40 sekundi, uz konačno proširenje pri 72 ° C tijekom 10 minuta. Amplificirani PCR produkti su klonirani u pMD19-T vektora i sekvencionirani. Osim toga, DNA je izolirana iz tumorskog tkiva se koriste za otkrivanje H
. pylori pregled 16S rRNA pregled gena i CagA pregled gena. Sekvencijama navedeni su u tablici 2. pregled}

Statistička analiza pregled

Rezultati su izraženi kao prosjek ± SD. Statističke analize su provedene korištenjem SPSS 15,0 softvera. Jednosmjerna analiza varijance (ANOVA) i t-test se koristi za analizu podataka. P pregled. ≪ 0,05 (dvostrani) smatra se značajnim pregled

Rezultati

Uvođenje CagA u želučanih stanica raka pregled

Zbog CagA H pregled. pylori pregled je kritični čimbenik virulencije u razvoju i progresiji karcinoma želuca, CagA je otkriven u želučanim staničnim linijama karcinoma pomoću RT-PCR i Western blot nakon infekcije SGC-7901 i AGS stanica s H pregled. pylori pregled i transfekcija SGC-7901 stanica s CagA
-vector. CagA protein počeli pojavljivati ​​u omjeru stanica bakterija od 1: 500 u kulturi stanica u 6 sati, a sadržaj je bio najveći u omjeru 1: 1000 u 6 sati (Slika 1A i 1B). Međutim, fosforilirani CagA opažena u stanicama u omjeru 1: 500 nakon uzgoja 12 h, a najveći sadržaj opažena u stanicama u omjeru 1: 1000 nakon 6 h kulture. CagA mRNA i proteina također su zabilježene u stabilno CagA pregled -overexpressing SGC-7901 stanica (Slika 1c i 1d). Ovi podaci ukazuju na to da CagA uspješno je uvedena u tri stanične linije i fosforiliran. Pregled

Identifikacija diferencijalnih proteina u želučanih stanica raka pregled

Nakon što su stanice inficirane s H pregled. pylori pregled 6h na moi od 1: 1000 ili transfecirane CagA pregled -vector, proteomic tehnika je korištena za stvaranje šest dvodimenzionalne elektroforeze (2-DE) karata od tri otkrivene su stanične linije i njihove kontrole (Slika 2), te 135 diferencijalne mjesta, od kojih su 73 bili regulira prema gore i 62 dolje su regulirana. vidio zajedničko Deset diferencijal za sva tri stanične linije su identificirane prema LC-MS /MS i ovjeren od strane western blot, uključujući i 6 up-regulirana proteina: P-aktin, LDH, DLD, PRPF19, ATP i kalmodulin (CAM), i 4 dolje regulirane proteine ​​kao što su RanGAP, p64 CLCP, P43 i kalretikulin (tablica 3 i 3A). pregled

H pregled. pylori pregled infekcija potiče ekspresiju diferencijalnih proteina u želučanog tkiva raka pregled

Budući da H
. pylori pregled selektivno kolonizira ljudski želudac za aktiviranje niza patoloških procesa, gen ekspresija 10 diferencijalnih proteina u 30 uzorka ljudskog raka želuca procijenjena kvantitativnom RT-PCR. Od 10 gena, ekspresija β-aktin pregled, LDH pregled, DLD pregled, PRP19 pregled i CaM pregled u karcinome želuca i /ili metastaze bile doregulirani u usporedbi s peri-kancerozni tkivima, dok je ekspresija RanGAP pregled je podregulirao. Slično tome, u 6 proteini su abnormalno izraženi u istim tkivima (Slika 3B i 3C). Nisu primijećene značajne razlike u ekspresiji drugih gena. pregled

H pregled. pylori pregled kolonizacija u želučanim tkiva raka mjerena je otkrivanje 16S rRNA pregled gena i CagA pregled gen H Netlogu. pylori pregled pomoću PCR. H pregled. pylori pregled je bio prisutan u 20 od 30 uzoraka (pozitivna stopa 67%), a sve u H Netlogu. pylori
sojevi su CagA pregled pozitivan. Razine mRNA p-aktin Netlogu, LDH pregled, DLD pregled, PRP19 i Cam pregled bila je viša u H Netlogu. pylori pregled pozitivnih tkiva nego u negativnim uzorcima (slika 3D). Pregled

H pregled. pylori pregled uzrokuje neprirodni DNA metilacije na želučane stanice raka

U tri stanične linije, PCR produkti CpG otoka navedenih gena uspješno su stekli slijedeće bisulfita liječenje i sekvencirani. U tim genima, LDH pregled, DLD pregled i CAM pregled, geni su memetilirani na promotora -2325, -1885 i -276 mjesta, odnosno, i RanGAP pregled gena je vrlo metilirani na promotora -570 i -170 stranice (Slika 4). pregled

Rasprava pregled

kumulativnih dokaza ukazuje na to da H
. pylori pregled infekcija je važan faktor za H Netlogu. pylori pregled -associated želučanih bolesti, te da CagA je promicanje faktor za rakom želuca [17,18]. izgrađena smo tri eksperimentalne stanične linije, uključujući i dva želuca staničnim linijama karcinoma zaraženih H Netlogu. pylori pregled ( CagA pregled ^{+) i rak želuca stanične linije ekspresijom CagA pregled i utvrdio da CagA počeo da se pojave u stanicama 6 sati nakon infekcije, a za do 12 sati. Nakon toga, fosforilirani CagA počeo da se pojave, u skladu s ubrizgavanjem i slijedi fosforilacija CagA u želučanog epitela uz T4SS od H Netlogu. pylori pregled nakon infekcije ljudske želučane sluznice. Fosforilirani CagA aktivira nizvodne signalne putove i igra patološku ulogu. Također smo uočili CagA u stanicama stabilno transficiranim s CagA
-vector. Ovi podaci potvrđuju uspješnu izgradnju triju eksperimentalnih staničnim linijama. Pregled}

Proteomika se koristi za proučavanje odnosa između H Netlogu. pylori pregled infekcija i želučanih bolesti, a mnogi različito izražena proteini su identificirani [19-22]. Međutim, povezanost tih proteina s CagA i njihove ekspresije u ljudskim tkivima s rakom želuca ostaju nejasni. Dobili smo ukupno 135 diferencijalnih mrlje od tri stanične linije, od kojih su 73 bili regulira prema gore i 62 su dolje propisanih. Deset diferencijalnih mrlje su zajednički za sve tri stanične linije, uključujući i 6 up-regulirana proteina (P-aktin, LDH, DLD, PRP19, ATP sintaze i CAM) i 4 dolje regulirane proteini (p64 CLCP, RanGAP, P43 i kalretikulin) , izražavanja i 10 proteini "potvrđene su western blot u tim staničnim linijama. Ovi proteini su uključeni u metabolizam energije, kostur pregrađivanjem, obradu pre-mRNA, provođenju signala, te drugi proteini blisko povezana s razvojem i napredovanjem mnogih humanih karcinoma [23,24]. Mi kvantitativno otkriti ekspresiju gena koji kodiraju ove 10 proteina u ljudskim tkivima raka želuca, koji je otkrio da β-aktin pregled, LDH pregled, DLD pregled, PRP19 pregled i CaM pregled dosljedno su vrlo izražen i RanGAP pregled slabo je izražen u oba tkiva karcinoma i /ili metastatskih limfnih čvorova u odnosu na peri-kancerogen tkiva. Aberantnoj ekspresija tih proteina također je potvrđena pomoću Western Blot da rak želuca, te metastaze. Dalje, otkrili smo da CagA pregled ^{+ H pregled. pylori pregled kolonizirani u 20 od 30 želučanog tkiva raka i promovira ili inhibira ekspresiju tih gena in vivo. Pregled}

LDH i DLD usko povezana s energetskom metabolizmu. Poremećaj energetskog metabolizma smatra važan faktor za razvoj i progresiju raka. Za razliku od normalnih stanica, stanice karcinoma pokazuju povećanu ovisnost o glikolitičke puta s dovoljno kisika, nazvan aerobni glikolizu. Velika količina piruvatne kiseline, konačni produkt puta, se prevodi u mliječnu kiselinu LDH, promicanjem glikolize puta i energetski metabolizam neravnotežu [25]. Mliječna kiselina može smanjiti pH stanica mikrookoliša, čime se povećava odgovor na neovaskularne angiogeneze faktora za promociju tumorskih stanica metastaziranje [26,27]. U skladu s našim rezultatima, LDH pregled vrlo je izražen u tkivu raka u 61,8% bolesnika s rakom želuca; bolesnici s LDH prekomjernom ekspresijom imali kraće preživljenje u odnosu na pacijente s niskim izraza [28]. Kim i sur pregled. [29] opaženo da DLD pregled izraz povećava s napredovanja tumora, čime više energije za rast tumorskih stanica. Dakle, visoka ekspresija LDH i DLD je ključni faktor za razvoj i progresiju raka želuca i H Netlogu. pylori pregled infekcija potiče ekspresiju tih dvaju gena u želučanog tkiva raka. Pregled

Beta-aktin, ključna komponenta citoskeleta, održava strukturu, gibanje i podjelu stanica pod normalnim uvjetima. β-aktin pregled nenormalno se izražava u mnogim bolestima [30]. PRPF19 protein se vjeruje da funkcioniraju na pre-mRNA. Ubikvintinacija od PRPF19 može dovesti do oštećenja DNA, a nenormalno popravak DNA je važan uzrok nastanku tumora [31]. Kalmodulina je protein koji veže kalcij, koji regulira mnoge signalne putove i tako sudjeluje u staničnoj proliferaciji, mitozu i transkripcije gena. Kalmodulinu potiče proliferaciju stanica u jetri karcinoma u kombinaciji s PI3K i prijelaz iz G1 u S fazu u kombinaciji s ciklina E [32]. Inhibitor kalmodulina uhićenjima stanica u G1 fazi da inhibiraju staničnu diobu [33]. U skladu s tim rezultatima, ustanovili smo da je H
. pylori pregled mogu sudjelovati u razvoju raka želuca tkiva zbog izazivanja visoku ekspresiju tih triju proteina. Pregled

Osim toga, primijetili smo dolje regulaciju RanGAP
gena u tkiva raka s H Netlogu. pylori pregled infekcija. RanGAP je GTPaza aktivirajući protein. Nakon hidrolize GTP na BDP strane GTPaza, aktivni RanGTP postane neaktivan RanGDP, što dovodi do blokade staničnu signalizaciju za inhibiciju progresije raka [34]. Slično tome, smanjena aktivnost RanGAP izazvana ubiquitination potiče razvoj raka [35]. Pregled

metilacije DNA može izazvati abnormalnu ekspresiju gena. H pregled. pylori pregled infekcija povećava razinu metilacije nekih gena i rezultata u procesu karcinogeneze od želučane sluznice [36,37]. DNA metilacije obično se javlja u CpG otocima gena promotora. Otkrili smo status metilacije CpG otoka tih gena u izgrađenim staničnim linijama i utvrdio da je LDH pregled, DLD pregled i CAM pregled, geni su memetilirani na promotora -2325, -1885 i -276 mjesta, odnosno, i RanGAP pregled gena je vrlo metilirani na promotora -570 i -170 mjestima, u skladu s visokom ekspresijom LDH pregled, DLD pregled i CaM pregled gena i niska ekspresija RanGAP
gena u želučanim tkiva raka s CagA
^{+ H pregled. pylori pregled infekcija. Pregled}

Na kraju, ovi rezultati ukazuju na to da H
. pylori pregled infekcija, putem CagA izgon, mogu izazvati neprirodni metilacije ovih gena dovode do disfunkcionalnih gena u želučanim tkiva raka i stanica. Naši rezultati pružaju novi uvid u molekularne patogeneze raka želuca s H Netlogu. pylori pregled infekcija. Buduće studije će istražiti učinke tih izmijenjenih metilacije uzorke u patogenezi karcinoma želuca u kliničkim uzorcima. Pregled

Priznanja

Zahvaljujemo kineski Centar za Helicobacter pylori pregled, soja upravljanje a Očuvanje za pružanje H pregled. pylori pregled NCTC11637 i dr Yang Wenxiu i Wu Jiahong za tehničku pomoć. Pregled