PLoS ONE: Proteomics-Based Identifikation og analyse af proteiner associeret med Helicobacter pylori i Gastric Cancer

Abstrakt

Helicobacter pylori
( H
. pylori
) er en spiralformet Gram-negativ bakterie, der forårsager den mest almindelige kroniske infektion i den menneskelige mave. Ca. 1% -3% af inficerede individer udvikler mavekræft. Men de mekanismer, hvormed H
. pylori
inducerer mavekræft er ikke helt forstået. De foreliggende data viser en stærk forbindelse mellem virulens faktor H
. pylori
, cytotoksin-associeret gen A (CagA), og gastrisk cancer. For yderligere at karakterisere H
. pylori
virulens, etablerede vi tre cellelinier ved at inficere de gastriske kræftceller SGC-7901 og AGS med CagA
^{+
H
. pylori
og transfektion af SGC-7901 med en vektor, der bærer den fulde længde CagA
gen. Vi har registreret 135 forskelligt udtrykte proteiner fra de tre cellelinjer under anvendelse proteom teknologi, og 10 differentielle proteiner er fælles for de tre cellelinier blev udvalgt og identificeret ved LC-MS /MS samt verificeret ved Western blot: p-actin, L-lactat (LDH), dihydrolipoamide dehydrogenase (DLD), præ-mRNA-behandling faktor 19 homolog (PRPF19), ATP syntase, calmodulin (CAM), P64 CLCP, Ran-specifikke GTPase-aktiverende protein (RanGAP), P43 og calreticulin. Påvisning af ekspressionen af ​​disse proteiner og gener, der koder disse proteiner i humane gastriske cancer væv ved realtids-PCR (RT-qPCR) og western blot afslørede, at ekspressionen af ​​ β-actin-
, LDH
, DLD
, PRPF19
og CAM-gener blev opreguleret og RanGAP
blev nedreguleret i mavekræft væv og /eller metastatisk lymfeknuder i forhold til peri-kræft væv. Høj genekspression blev observeret for H
. pylori
infektion i mavekræft væv. Desuden LDH
, DLD
og CAM-gener blev demethyleret ved promotoren -2325, -1885 og -276 lokaliteter, henholdsvis og RanGAP
genet blev meget methyleret ved promotor -570 og -170 steder i H
. pylori
inficerede og CagA
-overexpressing celler. Disse resultater giver ny indsigt i de molekylære patogenese og behandling mål for mavekræft med H
. pylori
infektion}

Henvisning:. Zhou J, Wang W, Xie Y, Zhao Y, Chen X, Xu W, et al. (2016) Proteomics-Based Identifikation og analyse af proteiner associeret med Helicobacter pylori
i Gastric Cancer. PLoS ONE 11 (1): e0146521. doi: 10,1371 /journal.pone.0146521

Redaktør: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, JAPAN

Modtaget: September 15, 2015; Accepteret: December 19, 2015; Udgivet: 8. januar 2016

Copyright: © 2016 Zhou et al. Dette er en åben adgang artiklen distribueres under betingelserne i Creative Commons Attribution License, som tillader ubegrænset brug, distribution og reproduktion i ethvert medie, forudsat den oprindelige forfatter og kilde krediteres

Data Tilgængelighed:. Alle relevante data er inden papiret

Finansiering:. arbejdet blev støttet af National Natural Science Foundation of China (81260303, 31560326), Guizhou provinsen fundament (QianJiaoHe [2014] 06) og Key Projekt for Videnskab og Teknologi i Guizhou provinsen (QianKeHe SY [2011] 3067, QianKeHe J [2012] 2039). I den oprindelige version blev arbejdet støttet af National Natural Science Foundation of China (81260303, 31560326) og Key Projekt for Videnskab og Teknologi i Guizhou-provinsen (QianKeHe SY (2011) 3067)

Konkurrerende interesser:. Det forfattere har erklæret, at der ikke findes konkurrerende interesser.

Introduktion

Helicobacter pylori
( H
. pylori
) får mest almindelige kroniske mave infektion hos mennesker over hele verden. Omkring halvdelen af ​​verdens befolkning er inficeret med H
. pylori
, og størstedelen af ​​koloniserede individer udvikler asymptomatisk gastritis. Blandt inficerede individer, ca. 10% -20% af individer udvikler peptiske mavesår og 1% -3% udvikler mavekræft [1,2]. I 1994 H
. pylori
blev klassificeret som en type I kræftfremkaldende stof for mavekræft af Verdenssundhedsorganisationens Internationale agentur for kræftforskning.

mavekræft er en af ​​de mest almindelige typer af kræft, og mere end 70% af nye tilfælde og dødsfald sker i udviklingslande [3]. Selv om den globale forekomst har været faldende i flere årtier, mavekræft forbliver udbredt i de fleste udviklingslande, herunder Japan, Korea og Kina [4-6]. I 2012 den kinesiske Cancerregisteret årsberetning anførte, at mavekræft sygelighed og dødelighed er anden og tredje blandt alle maligne tumorer, hhv.

De fleste af H
. pylori
stammer bærer KAG
patogenicitet ø ( KAG
PAI), som indeholder 27 til 31 gener, der koder en bakteriel type 4 sekretion systemet (T4SS) [7] . Cytotoksinet-associeret gen Et gen ( CagA
), som er placeret i 3'-enden af ​​ CAG
PAI, koder den eneste kendte bakterielle onkoprotein, CagA, som translokeres i værtsceller ved T4SS efter bakteriel fastgørelse til maven. Når inde værten celler, CagA er tyrosin phosphoryleres med medlemmer af Abl og Src kinase familier og interagerer med mange intracellulære effektorer, der fører til aktivering af downstream signalmolekyler [8]. I kliniske undersøgelser, CagA
-positive stammer er blevet konsekvent forbundet med mere alvorlige gastrisk betændelse og sår, og en lille brøkdel af individer udvikler mavekræft [9]. Imidlertid har de mekanismer, der ligger til grund for sammenslutningen af ​​CagA med kræft ikke blevet belyst.

Proteomics er dukket op som en lovende teknologisk platform for rationel identifikation af biomarkører og nye terapeutiske mål for sygdomme og bestemmelse af de underliggende mekanismer for carcinogenese [10]. Men de fleste af de vigtige proteiner påvises ved proteomics in vitro er ikke blevet bekræftet in vivo i kliniske prøver.

DNA-methylering og demethylering spiller en vigtig rolle i udviklingen og progressionen af ​​cancere ved at blokere bindingen af ​​transkriptionsfaktorer til DNA og er forekommer næsten udelukkende i genpromotor CpG-øer [11-13]. Blandt organer, maven udviser den højeste frekvens af unormal CpG ø methylering, muligvis H
. pylori
medieret [14-16]. Selvom undersøgelser af DNA methylering er stigende, de gen methylering induceret af H
. pylori
er endnu ikke klart.

I dette arbejde, vi havde til formål at identificere specifikke proteiner relateret til H
. pylori
infektion ved hjælp af sammenlignende proteomics og karakterisere genekspression og CpG ø methylering af disse proteiner i mavekræft væv og celler.

Materialer og metoder

humane væv

Humane væv blev opnået fra kirurgi prøver fra 30 mavecancerpatienter og matches tilstødende kræft væv og metastatiske lymfeknuder på Guiyang Medical Hospital, Guiyang Kina, mellem januar 2009 og juni 2010. De diagnoser blev bekræftet af to patologer. Blandt patienterne, var 23 mænd, og 7 var kvinder. Patienterne var i alderen fra 38 til 77 år. Tyve-to patienter havde tarm-typen adenocarcinom, og 8 havde diffus-typen adenocarcinom. Undersøgelsen protokol Den blev godkendt af den etiske komité i Guiyang Medical Hospital, og alle emner, der er fastsat skriftligt informeret samtykke.

Cell kultur

Den menneskelige gastrisk karcinom cellelinje AGS (ATCC CRL-1739TM) og SGC-7901 celler blev købt direkte fra American Type Culture Collection (ATCC) og Cell Bank of Type Culture Collection of Chinese Academy of Sciences (Shanghai, Kina), henholdsvis og passeret i mindre end 3 måneder i vores laboratorium efter modtagelsen. Celler blev dyrket i Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 medium suppleret med 10% varmeinaktiveret føtalt bovint serum, 100 U /ml penicillin og 100 ug /ml streptomycin (Gibco, Grand Island, NY, USA) ved 37 ° C i en fugtig inkubator med 5% CO _2.

H
. pylori
kultur

H
. pylori
stammen NCTC11637 (ATCC 43504, en gave fra den kinesiske center for Helicobacter pylori
stammen Ledelse og Preservation, Beijing, Kina), som er CagA
positiv, blev dyrket i selektivt medium på en Columbia-agarplade indeholdende 10% føtalt kalveserum og H
. pylori
Selective Supplement (Oxoid Ltd., England) ved 37 ° C under mikroaerobe betingelser.

Cell infektion med H
. pylori

AGS og SGC-7901 celler (5 x 10 ^{5) blev udsået i 6-brønds plader i 24 timer og inficeret med H
. pylori
i 6 timer og 12 timer ved en infektionsmultipliciteter (MOI) på 1: 100, 1: 500 og 1: 1000, hhv. Celler blev inficeret i 12 timer ved en MOI på 1: 1000 med H
. pylori
kogt i 15 min som kontroller.}

Konstruktion af ekspressionsvektoren pcDNA3.1 / CagA

DNA blev ekstraheret fra H
. pylori
, og fuldlængde CagA
sekvens blev syntetiseret ved PCR og klonet i pMD18-T-plasmider til konstruktion pMD18-T / CagA
. CagA
genet blev identificeret ved sekventering (GQ161098). pMD18-T / CagA
blev fordøjet med restriktionsenzymer Pst
I og Bam
HI, og CagA
blev ligeret i pcDNA3.1 /Zeo (-) (Invitrogen, USA) til at konstruere den eukaryote ekspressionsvektor pcDNA3.1 / CagA
. Sekvenserne af primerne er vist i tabel 1.

Cell transfektion med pcDNA3.1 / CagA

SGC-7901-celler blev inkuberet i 12 timer i 6-brønds plader til opnåelse 80% konfluerende celler. Cellerne blev derefter transficeret i overensstemmelse med producentens anvisninger. Efter 48 timer blev cellerne opdelt 1:10 til nye plader med 6 brønde og inkuberet i yderligere 24 timer, og derefter holdes i selektiv zeocin-indeholdende (250 ug /ml) standard medium i 2 uger indtil klon formation. Celler transficeret med tom vektor pcDNA3.1 /Zeo (-) blev anvendt som kontroller

proteinekstraktion og western blot

Proteinekstrakter blev fremstillet ved resuspendering cellepellets i en RIPA buffer eller homogenisering 200. mg væv i en RIPA-buffer. I alt 30-50 ug protein ekstrakt blev underkastet SDS-PAGE-gelelektroforese, overført til en polyvinylidendifluorid (PVDF) -membran (Millipore, Billerica, MA, USA) og blottet natten over med monoklonalt muse-anti-CagA-antistof (1: 800, sc-28368), monoklonalt muse-anti-phosphotyrosin-antistof (PY99, 1: 300, sc-7020), kanin-polyklonalt anti-beta actin antistof (1: 500, ab189073), kanin polyklonalt anti-LDH-antistof (1: 350 , ab125683), monoklonalt muse-anti-DLD (1: 800, sc-376.890), kanin polyklonalt anti-PRPF19 (1: 400, ab27692), monoklonalt muse-anti-ATP syntase antistof (1: 300, ab54880), kanin polyklonalt anti -calmodulin anbody (1: 250, ab208911), kanin polyklonalt anti-RanGAP antistof (1: 200, ab92360), kanin polyklonalt anti-p64CLCP antistof (1: 300, ab28722), kanin polyklonalt anti-calreticulin antistof (1: 350, AB4) og muse monoklonale anti-glyceraldehyd-3-phosphat -dehydrogenase antistof (GAPDH, 1: 8000) fra Santa Cruz (CA, USA), Abcam (Cambridge, UK) og CangChen (Shanghai, Kina) i henholdsvis 5% BSA i Tris-bufret saltvand og 0,01% Tween-20. Peroxidasekonjugerede sekundære antistoffer (1: 5000, SC-2371, Santa Cruz, Californien, USA) blev anvendt og udviklet med kemoluminescens reagens ECL Plus hjælp Hyperfilm (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK). Kvantificering af western blots blev udført ved hjælp Mængde One-software. Hvert eksperiment blev udført 3 gange, og et repræsentativt resultat er vist.

Protein ekstraktion og todimensional gelelektroforese

Cellepellets blev opløst i cellelyse-buffer natten over ved 4 ° C, og protein blev udfældet med tre volumener iskold acetone ved inkubering ved 4 ° C i 2 timer. Prøverne blev derefter centrifugeret ved 20.000 rpm i 30 min, og pelletene blev resuspenderet i cellelyse-buffer og opbevaret ved 4 ° C natten over.

I alt 800 ug protein blev justeret til et volumen på 250 pi med rehydrering opløsning og isoelektrisk fokusering (IEF) blev udført under anvendelse af en Ettan IPGphor II isoelektrisk fokusering (Amersham Biosciences) ifølge producentens instruktioner. Protokollen for IEF var 300 V for1 h, 500 V i 2,5 timer, 1000 V i 2 timer; 8.000 V i 8 timer, 60 Kvh (i alt).

Efter at have afsluttet IEF blev IPG-strimler (Amersham Biosciences) ækvilibreret i ækvilibreringsbuffer i 15 minutter og anbringes på en 12% SDS-PAGE-gel for to- dimensionel elektroforese ved 30 mA /gel. Den resulterende SDS-PAGE-gel blev fikseret i 20% TCA i 30 minutter og derefter farvet med kolloidt Coomassie G-250 [5].

protein pletter på gelen blev scannet og analyseret automatisk. Differentielt udtrykte protein pletter blev bekræftet med Imaging Master 2D 5,0 analytisk software (Amersham Biosciences). T-test blev udført for kvantitativ analyse af 2D-geler. Differentiel ekspression af et specifikt protein blev defineret som en ≥2-gange ændring i plet optisk tæthed mellem de to matchede sæt i dubletter. De differentielle pletter blev derpå udskåret fra SDS-PAGE-geler til yderligere identifikation ved LC-MS /MS.

RNA-ekstraktion og kvantitativ RT-PCR

Totalt RNA blev ekstraheret fra 50 mg væv og behandlet med DNase I (RNase-frit). Generne blev amplificeret med SYBR Green (Applied Biosystems, Australien). Hypoxanthin-guanin phosphoribosyltransferase ( HPRT
) blev anvendt som en normalisering kontrol, og relative mRNA-niveauer blev beregnet ved en sammenlignende C _{t metode under anvendelse af trin-on software (Applied Biosystems, Australien) [8]. Hver prøve blev analyseret tredobbelt, og resultaterne er udtrykt som middelværdi ± SD. De anvendte primere er anført i tabel 1.}

DNA ekstraktion og metyleringsanalyse af CpG-øer

DNA blev isoleret fra celler og modificeret med natriumbisulfit ved anvendelse af en EZ DNA-methylering-Gold Kit ^{™ (Zymo Research, CA, USA) ifølge producentens anvisninger. Promotorsekvenser CpG-øer blev forudsagt under anvendelse af Methyl Primer Express software og amplificeret fra bisulfit modificerede DNA ved PCR under anvendelse af følgende procedurer: denaturering ved 96 ° C i 10 minutter, efterfulgt af 40 cykler af denaturering ved 94 ° C i 40 sek, annealing ved 60 ° C i 40 sek, og forlængelse ved 72 ° C i 40 sek, med en endelig forlængelse ved 72 ° C i 10 min. De amplificerede PCR-produkter blev klonet ind pMD19-T vektorer og sekventeret. Desuden DNA isoleret fra tumorvæv anvendtes til påvisning H
. pylori
16S rRNA
gen og CagA
gen. Primersekvenserne er anført i tabel 2.}

Statistisk analyse

Resultater udtrykkes som middelværdi ± SD. Statistiske analyser blev udført under anvendelse af SPSS 15.0 software. Envejs variansanalyse (ANOVA) og t-test blev anvendt til analyse af dataene. P
. ≪ 0,05 (tosidet) blev betragtet som signifikant

Resultater

Indførelse af CagA i gastriske kræftceller

Da CagA af H
. pylori
er en kritisk virulens faktor i udviklingen og progressionen af ​​mavekræft, blev CagA påvist i gastrisk cancer cellelinier ved RT-PCR og western blot efter infektion af SGC-7901 og AGS celler med H
. pylori
transfektion af SGC-7901 celler med CagA
-vector. Den CagA-proteinet begyndte at dukke i et forhold på celler for bakterier fra 1: 500 i dyrkede celler ved 6 timer, og indholdet var højest i et forhold på 1: 1000 ved 6 timer (fig 1A og 1B). Imidlertid blev phosphoryleret CagA observeret i celler i et forhold på 1: 500 efter dyrkning i 12 timer, og det højeste indhold blev observeret i celler i et forhold på 1: 1000 efter 6 timer af kultur. CagA mRNA og protein blev også observeret i stabilt CagA
-overexpressing SGC-7901-celler (Fig 1C og 1D). Disse data tyder på, at CagA succes blev indført i de tre cellelinier og phosphoryleret.

Identifikation af differentierede proteiner i gastrisk kræftceller

Efter celler blev inficeret med H
. pylori
i 6 timer ved en MOI på 1: 1000 eller transficeret med CagA
-vector, en proteomisk teknik blev brugt til at skabe seks todimensional elektroforese (2-dE) kortlægger fra tre blev påvist cellelinier og deres respektive kontroller (fig 2), 135 differentielle pletter, hvoraf 73 blev opreguleret og 62 blev nedreguleret. Ti forskellen blev fælles for alle tre cellelinier blev identificeret ved LC MS /MS og verificeret af western blot, herunder 6 opreguleret proteiner: p-actin, LDH, DLD, PRPF19 ATP syntase og calmodulin (CAM), og 4 nedreguleret proteiner såsom RanGAP, P64 CLCP, P43 og calreticulin (tabel 3 og figur 3A).

H
. pylori
infektion fremmer ekspressionen af ​​differentierede proteiner i mavekræft væv

fordi H
. pylori
selektivt koloniserer den humane mave at aktivere et sæt af patologiske processer, blev genekspressionen af ​​10 differential proteiner i 30 humane gastriske cancer prøver bedømt ved kvantitativ RT-PCR. Af de 10 gener, udtryk for β-actin
, LDH
, DLD
, PRP19
og CAM-i gastrisk kræft og /eller metastatisk lymfeknuder var opreguleret i forhold til peri-ondartede væv, mens ekspressionen af ​​ RanGAP
blev nedreguleret. Similarily blev de 6-proteiner også unormalt udtrykt i de samme væv (Fig 3B og 3C). Ingen signifikante forskelle i angivelsen af ​​de andre gener blev observeret.

H
. pylori
kolonisering i mavekræft væv blev målt ved at registrere 16S rRNA
gen og CagA
gen af ​​ H
. pylori
ved PCR. H
. pylori
var til stede i 20 af de 30 prøver (positive sats 67%), og alle H
. pylori
stammer er CagA
positiv. De mRNA niveauer af β-actin
, LDH
, DLD
, PRP19 og CAM-var højere i H
. pylori
-positive væv end i de negative prøver (figur 3D).

H
. pylori
inducerer afvigende DNA methylering i gastriske kræftceller

I tre cellelinjer, PCR-produkter af CpG øer af ovennævnte gener lykkedes erhvervet efter bisulfitbehandling og sekventeret. I disse gener, LDH
, DLD
og CAM-gener blev demethyleret ved promotoren -2325, -1885 og -276 lokaliteter, henholdsvis og RanGAP
genet blev meget methyleret ved promotor -570 og -170 sites (Fig 4).

diskussion

Akkumulerende evidens for, at H
. pylori
infektion er en vigtig faktor for H
. pylori
associeret gastrisk sygdomme, og at CagA er en fremmende faktor for mavekræft [17,18]. Vi bygget tre eksperimentelle cellelinier, herunder to mavekræft cellelinjer inficeret med H
. pylori
( CagA
^{+) og en gastrisk cancer cellelinje overekspression CagA
, og fastslået, at CagA begyndte at dukke op i cellerne 6 timer efter infektion og for op til 12 timer. Efterfølgende phosphoryleret CagA begyndte at dukke, i overensstemmelse med injektion og efterfølgende phosphorylering af CagA i gastriske epitelceller ved T4SS af H
. pylori
efter infektion af den humane gastriske mucosa. Phosphoryleret CagA aktiverer nedstrøms signalveje og spiller en patologisk rolle. Vi har også observeret CagA i celler stabilt transficeret med CagA
-vector. Disse data bekræfter vellykket opførelse af de tre eksperimentelle cellelinier.}

Proteomics er blevet anvendt til at undersøge forholdet mellem H
. pylori
infektion og gastriske sygdomme, og mange differentielt udtrykte proteiner er blevet identificeret [19-22]. Men foreningen af ​​disse proteiner med CagA og deres udtryk i humane mavekræft væv fortsat uklare. Vi opnåede i alt 135 differentierede pletter fra de tre cellelinjer, hvoraf 73 blev opreguleret og 62 blev nedreguleret. Ti differentielle pletter var fælles for alle tre cellelinier, herunder 6 opreguleret proteiner (β-actin, LDH, DLD, PRP19, ATP syntase, og CAM) og 4 nedreguleres proteiner (P64 CLCP, RanGAP, P43 og calreticulin) , og de 10 proteiner 'udtryk blev verificeret ved western blot i disse cellelinjer. Disse proteiner er involveret i energistofskiftet, skelet omlejring, præ-mRNA-processering, signaltransduktion, og andre proteiner tæt forbundet med udviklingen og progressionen af ​​mange humane cancere [23,24]. Vi kvantitativt opdaget udtryk for de gener, der koder disse 10 proteiner i humane mavekræft væv, som afslørede, at β-actin
, LDH
, DLD
, PRP19
og CAM-blev konsekvent højt udtrykt og RanGAP
var dårligt udtrykt i både kræft væv og /eller metastatisk lymfeknuder i forhold til peri-kræft væv. Den afvigende ekspression af disse proteiner blev også bekræftet ved Western blot i gastrisk cancer og metastatiske lymfeknuder. Dernæst fandt vi, at CagA
^{+ H
. pylori
koloniseret i 20 af 30 mavekræft væv og fremmet eller hæmmet ekspression af disse gener in vivo.}

LDH og DLD er tæt korreleret med energistofskiftet. Disorder af energistofskiftet betragtes som en vigtig faktor for udvikling og progression af cancer. I modsætning til normale celler, cancerceller udviser forøget afhængighed af glycolytiske vej med tilstrækkelig ilt, betegnet aerobe glycolyse. En stor mængde af pyrodruesyre, et slutprodukt af vejen, omdannes til mælkesyre ved LDH, fremme glycolytiske vej og energimetabolisme ubalance [25]. Mælkesyre kan også sænke pH af cellen mikromiljø, hvilket således forøger neovaskulær respons på angiogenesefaktorer at fremme tumorcellemetastase [26,27]. I overensstemmelse med vores resultater, LDH
blev stærkt udtrykt i cancer væv i 61,8% af patienter med mavekræft; patienter med LDH overekspression havde kortere overlevelse sammenlignet med patienter med lavt udtryk [28]. Kim et al
. [29] bemærkede, at DLD
udtryk stiger med tumor progression, hvilket giver mere energi til tumorcellevækst. Derfor høj ekspression af LDH og DLD er en afgørende faktor for udviklingen og progressionen af ​​mavekræft, og H
. pylori
infektion fremmer ekspressionen af ​​disse to gener i mavekræft væv.

Beta-actin, en nøglekomponent i cytoskelettet, fastholder strukturen, bevægelse og deling af celler under normale forhold. β-actin
er unormalt udtryk i mange sygdomme [30]. Den PRPF19 protein menes at fungere i præ-mRNA splejsning. Ubiquitinering af PRPF19 kunne føre til DNA-ødelæggelse, og unormal DNA-reparation er en vigtig årsag til tumorigenese [31]. Calmodulin er et calcium-bindende protein, der regulerer mange signalveje og dermed deltager i celleproliferation, mitose og gentranskription. Calmodulin fremmer celleproliferation i leverkarcinomer i kombination med PI3K og overgangen fra G1 til S-fasen i kombination med cyclin E [32]. En inhibitor af calmodulin anholdelser celler i G1-fasen for at inhibere celledeling [33]. I overensstemmelse med disse resultater, vi bestemt, at H
. pylori
kan deltage i kræft udvikling af gastrisk væv ved at inducere høj ekspression af disse tre proteiner.

Desuden observerede vi nedregulering af RanGAP
gen i kræft væv med H
. pylori
infektion. RanGAP er et GTPase-aktiverende protein. Efter hydrolyse af GTP til BNP med en GTPase, aktiv RanGTP bliver inaktiv RanGDP, hvilket fører til blokaden af ​​celle signalering at hæmme kræft progression [34]. Ligeledes faldt RanGAP aktivitet induceret af ubiquitinering fremmer cancerudvikling [35].

DNA-methylering kan inducere unormal genekspression. H
. pylori
infektion øger methylering niveauer af visse gener og resulterer i carcinogenese af maveslimhinden [36,37]. DNA methylering normalt vises i CpG øer genpromotorer. Vi har detekteret status methylering af CpG øer af disse gener i de konstruerede cellelinier og bestemt, at LDH
, DLD
og CAM-gener blev demethyleret ved promotor -2325, -1885 og -276 lokaliteter, henholdsvis og RanGAP
gen var stærkt methyleret ved promotor -570 og -170 lokaliteter, i overensstemmelse med den høje udtryk for LDH
, DLD
og CAM-gener og den lave udtryk for RanGAP
gen i gastrisk kræft væv med CagA
^{+ H
. pylori
infektion.}

Som konklusion disse resultater tyder på, at H
. pylori
infektion via CagA translokation, kan inducere afvigende methylering af disse gener føre til dysfunktionel genekspression i gastrisk cancer væv og celler. Vores resultater giver en ny forståelse af den molekylære patogenese mavekræft med H
. pylori
infektion. Fremtidige undersøgelser vil undersøge virkningerne af disse ændrede methylering mønstre på patogenesen af ​​mavekræft i kliniske prøver.

Tak

Vi takker den kinesiske center for Helicobacter pylori
stammen Management og Preservation for at give H
. pylori
NCTC11637 og Dr. Yang Wenxiu og Wu Jiahong til teknisk bistand.

• PLoS ONE: associering mellem tandtab og Gastric Cancer: En meta-analyse af Observational Studies
• PLoS ONE: Massive Endoskopisk Screening for Esophageal og Gastric Kræft i et højrisikoområde af China