Plos ONE. Proteomika-Based Identifikacija in analiza beljakovin, povezanih s Helicobacter pylori v želodcu Cancer

Povzetek

Helicobacter pylori
( H
pylori
) je spiralno oblikovan Gram-negativna bakterija, ki povzroča najpogostejšo kronično okužbo v človeškem želodcu. Približno 1% -3% okuženih posameznikov razvoj raka na želodcu. Vendar pa so mehanizmi, s katerimi H
. pylori
povzroča raka na želodcu niso povsem razume. Razpoložljivi dokazi kažejo močno povezavo med virulence faktor H
. pylori
,-citotoksin povezan gen A (CagA) in rak želodca. Za nadaljnjo opredelitev H
. pylori
virulence, smo ugotovili tri celične linije, ki jih okuži želodčni rak celičnih linij SGC-7901 in AGS s cagA
^{+
H
. pylori
in transfektiranje SGC-7901 z vektorjem, ki nosi polno dolžino cagA
genov. Zaznali smo 135 različno izražene beljakovine iz treh celičnih linij z uporabo Proteome tehnologijo in 10 diferencialne beljakovine so skupne tri celičnih linij so bili izbrani in ki jih je ugotovila LC-MS /MS kot tudi preverja zahodni blot: beta-aktin, L-laktat dehidrogenaze (LDH), dihydrolipoamide dehidrogenaza (DLD), pre-mRNA obdelava faktor 19 homolog (PRPF19), ATP sintaze, kalmodulin (CAM), p64 CLCP, Ran specifičnim GTPase aktivira protein (RanGAP), P43 kalretikulina. Odkrivanje izražanja teh proteinov in genov, ki kodirajo te proteine ​​v človeške želodčne tkiva raka s PCR v realnem času (RT-qPCR) in Western Blot je pokazala, da je izraz β-aktina
, LDH
, DLD
, PRPF19
in CaM
geni so up-urejena in RanGAP
je navzdol urejeno v želodčnih tkivih raka in /ali metastatskega bezgavke v primerjavi s primestnih rakave tkiva. Visoka izražanje genov opazili za H
. pylori
okužba želodca tkivih raka. Poleg tega LDH
, DLD
in kamera
geni so demetilirani na promotor -2325, -1885 in -276 strani, v tem zaporedju, in RanGAP
je gen zelo metiliramo na promotor -570 in -170 strani v H
. pylori
okuženimi in cagA
-overexpressing celice. Ti rezultati zagotoviti nove vpogled v cilje molekularne patogeneze in zdravljenja raka želodca s H
. pylori
okužba}

Navedba. Zhou J, Wang W, Xie Y, Zhao Y, Chen X, Xu W, et al. (2016) Proteomika-Based Identifikacija in analiza proteinov povezan z Helicobacter pylori
in želodca raku. PLoS ONE 11 (1): e0146521. doi: 10,1371 /journal.pone.0146521

Urednik: Hiromu Suzuki, Sapporo Medical University, Japonska

Prejeto: 15. septembra 2015; Sprejeto: 19. december 2015; Objavljeno: 8. januar 2016

Copyright: © 2016 Zhou et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

razpoložljivost podatkov. Vse ustrezne podatki so v dokumentu

Financiranje:. delo je podprl National Natural Science Foundation Kitajske (81260303, 31560326), Guizhou province temelj ([2014] QianJiaoHe 06) in glavni projekt za znanost in tehnologijo Guizhou Province (QianKeHe SY [2011] 3067, QianKeHe J [2012] 2039). V prvotni različici, je bilo delo podpira National Natural Science Foundation Kitajske (81260303, 31560326) in Key projekta za znanost in tehnologijo v provinci Guizhou (QianKeHe SY (2011) 3067)

nasprotujočimi si interesi:. V avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčni interesi.

Uvod

Helicobacter pylori
( H
. pylori
) povzroča največ pogosta kronična okužba želodca pri ljudeh po vsem svetu. Približno polovica svetovnega prebivalstva je okužena z H
. pylori
, in večina koloniziranih posameznikov razvoj asimptomatsko gastritis. Med okuženih posameznikov, približno 10% -20% posameznikov razvoj peptične razjede bolezni in 1% -3% za rakom želodca [1,2]. Leta 1994, H
. pylori
je bil razvrščen kot tipa I rakotvorne snovi za raka želodca, ki ga Mednarodna agencija Svetovne zdravstvene organizacije za raziskave raka.

Rak želodca je ena izmed najbolj pogostih vrst raka, in več kot 70% novih primerov in smrti zgodi v državah v razvoju [3]. Čeprav je globalna stopnja pojavnosti upada že več desetletij, želodčni rak še vedno prevladuje v večini držav v razvoju, vključno z Japonsko, Korejo in Kitajsko [4-6]. V letu 2012, kitajski Register raka Letno poročilo je pokazala, da so želodca obolevnosti in umrljivosti za rakom, drugi in tretji med vsemi malignimi tumorji, oz.

Večina H
. pylori
sevi nosijo OAS
patogenosti otok ( OAS
PAI), ki vsebuje 27 do 31 genov, ki kodirajo bakterijske vrste 4 sistem izločanja (T4SS) [7] . The-citotoksin povezan gen gen ( cagA
), ki se nahaja na koncu 3 ' CAG
PAI, kodira edini znani bakterijsko onkoproteina, CagA, ki je prenesen v gostiteljske celice z T4SS po bakterijski pritrditev na želodcu. Ko znotraj celic gostitelja, CagA je tirozin fosforilirajo člani kinaze družin Abl in SRC in komunicira s številnimi znotrajceličnih efektorjev, ki vodi do aktivacije zaključnih signalnimi molekulami [8]. V kliničnih študijah, cagA
-positive sevi so bili vedno povezani s hujšo želodčno vnetje in razjede, in majhen delež posameznikov razvoj raka želodca [9]. Vendar pa še niso pojasnjeni mehanizmi, na katerih temelji združenje CagA z rakom.

je Proteomika pojavila kot obetaven tehnološki platformi za racionalno identifikacije biomarkerjev in novih terapevtskih ciljev za bolezni in določitev osnovnih mehanizmov nastanek raka [10]. Vendar je večina pomembnih beljakovin, ki jih proteomike in vitro odkrite niso bile potrjene vivo v kliničnih vzorcih.

DNA metilacija in demetilacija igra pomembno vlogo pri razvoju in napredovanje raka z blokado vezave transkripcijskih faktorjev na DNK in se pojavlja skoraj izključno v promotor gena CpG otokov [11-13]. Med organov, želodec kaže najvišjo frekvenco nenormalno otoku CpG metilacije, morda H
. pylori
pogojenega [14-16]. Čeprav so študije metilacije DNA povečuje, se je gen metilacije države, ki jih povzroča H
. pylori
še ni jasno.

V tem delu smo želeli opredeliti posebne beljakovine, povezane z H
. pylori
okužba s pomočjo primerjalne proteinomiko in značilna za izražanje genov in CpG otok metilacije teh proteinov v želodcu tkivih rakom in celic.

Materiali in metode

človeških tkiv

Človeška tkiva so bili pridobljeni iz vzorcev kirurgije od 30 bolnikov z rakom želodca in se ujema sosednje rakavih tkiv in metastaznih bezgavke na Medicinski bolnišnici Guiyang, Guiyang Kitajska, med januarjem 2009 in junijem 2010 so se diagnoza potrjena z dvema patologi. Med bolniki, 23 je bilo moških in 7 žensk. Bolniki so bili stari od 38 do 77 let. Dvaindvajset bolniki so imeli črevesnega tipa adenokarcinom in 8 je bilo razpršeno tipa adenokarcinom. Protokol študije je odobril Odbor za etiko Guiyang Medical Hospital, in vsi predmeti iz premije obveščenega soglasja.

celične kulture

karcinom človeška vrsta želodca AGS (ATCC CRL-1739TM) in SGC-7901 celice so bile kupljene neposredno od American Type Culture Collection (ATCC) in mobilni banke Type Culture Collection kitajske akademije znanosti (Shanghai, Kitajska), v tem zaporedju, in pasaže za manj kot 3 mesece v našem laboratoriju po prejemu. Celice smo kultivirali v Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 mediju dopolnjenem z 10% toplotno inaktiviramo fetalnega govejega seruma, 100 E /ml penicilina in 100 ug /ml streptomicina (Gibco, Grand Island, NY, ZDA) pri 37 ° C vlažnem inkubatorju s 5% CO _2.

H
. pylori
kultura

H
. pylori
sev NCTC11637 (ATCC 43504, darilo iz kitajskega centra Helicobacter pylori
sev upravljanje in ohranjanje, Peking, Kitajska), ki je cagA
pozitiven, je gojili v selektivnem mediju na Columbia gojišča, ki vsebuje 10% fetalnega telečjega seruma in H
. pylori
selektivni Dopolnilu (Oxoid Ltd, Anglija) pri 37 ° C pod pogoji microaerobic.

okužba celica z H
. pylori

AGS in SGC-7901 celice (5 × 10 ^{5) smo posejali v 6 vdolbinami za 24 ur in okužene s H
. pylori
6 h in 12 h pri multiplicitete infekcije (Mois), 1: 100, 1: 500 in 1: 1000, oz. Celice smo okužili 12 h pri MOI 1: 1000 z H
. pylori
kuhamo 15 minut, kot kontrole.}

Gradnja izražanje vektorja pcDNA3.1 v / cagA

DNA je bila vzeta iz H
. pylori
in celovečerni cagA
zaporedje sintetiziramo s PCR in klonirali v pMD18-T plazmidov za gradnjo pMD18-T / cagA
. cagA
gen smo identificirali sekvenciranje (GQ161098). pMD18-T / cagA
smo razgradili z omejitvami encimi Pst
I in Bam
HI in cagA
je bil vezan v pcDNA3.1 /Zeo (-) (Invitrogen, ZDA) za izgradnjo evkariontskih vektor za izražanje pcDNA3.1 / cagA
. Sekvence primerji so navedeni v tabeli 1.

Cell transfekciji z pcDNA3.1 / cagA

SGC-7901 celice smo inkubirali 12 ur v 6-dobro plošče, da dobimo 80% konfluentne celice. Celice smo nato transfektiramo v skladu z navodili proizvajalca. Po 48 urah smo celice razdeljeni v razmerju 1:10 v nove 6 vdolbinami in inkubirali dodatnih 24 h in potem vzdržuje pri selektivnem vsebuje zeocin (250 mg /ml) standarda medij za 2 tedna, dokler postavitev klon. Celice transficirane s praznim vektorja pcDNA3.1 /Zeo (-) smo uporabili kot kontrole

Odvajanje beljakovine in western blot

Beljakovinski ekstrakte pripravimo z resuspendiranje celic pelet na RIPA pufra ali homogeniziranje 200. mg tkiva v RIPA pufra. Skupno 30-50 ug ekstrakta proteina podvržemo SDS-PAGE gelno elektroforezo, prenesemo v poliviniliden difluorid (PVDF) membrano (Millipore, Billerica, MA, ZDA) in osušili preko noči z miško monoklonsko anti-CagA protitelesa (1: 800, sc-28.368), miška monoklonsko antifosfotirozinskih protiteles (PY99, 1: 300, sc-7020), zajec poliklonski anti-beta-aktina protitelesa (1: 500, ab189073), zajec poliklonski anti-LDH protitelo (1: 350 , ab125683), miška monoklonsko anti-DLD (1: 800, sc-376890), zajec poliklonska anti-PRPF19 (1: 400, ab27692), miška monoklonsko anti-ATP sintaza protitelesa (1: 300, ab54880), zajec poliklonska anti -calmodulin anbody (1: 250, ab208911), kunčje poliklonalno anti-RanGAP protitelesa (1: 200, ab92360), kunčje poliklonalno anti-p64CLCP protitelesa (1: 300, ab28722), kunčje poliklonalno anti-kalretikulina protitelesa (1: 350, ab4) in miško monoklonsko anti-gliceraldehid-3-fosfat -dehydrogenase protitelesa (GAPDH, 1: 8000) iz Santa Cruz (CA, ZDA), Abcam (Cambridge, UK) in CangChen (Shanghai, Kitajska), v tem zaporedju, pri 5% BSA v Tris-pufer in 0,01% Tween-20. Peroksidazo konjugiranih sekundarna protitelesa (1: 5000, SC-2371, Santa Cruz, CA, ZDA), ki se uporabljajo in razvijajo z kemiluminescenca reagenta ECL v Plus uporabo hyperfilm (Amersham Biosciences, Buckinghamshire, UK). Količinska opredelitev Western-blot analiz smo izvedli s pomočjo količina ena programske opreme. Vsak poskus smo izvedli 3-krat, in predstavnik Rezultat je prikazan.

ekstrakcija beljakovine in dvodimenzionalna gelska elektroforeza

Celične pelete smo raztopili v celico liznega pufra preko noči pri 4 ° C, in beljakovin oborimo s tremi volumni ledeno mrzlo acetona inkubacijo pri 4 ° C 2 h. Vzorce smo nato centrifugirali pri 20.000 obratih na minuto za 30 minut in pelete smo ponovno suspendirali v celico liznega pufra in shranili pri 4 ° C preko noči.

skupno 800 ig proteina prilagojena volumna 250 p.L z rehidracije rešitev, in izoelektričnim fokusiranjem (IEF) je bila izvedena s pomočjo sistema Osredotočanje Ettan IPGphor II izoelektrično (Amersham Biosciences) v skladu z navodili proizvajalca. Protokol za IEF 300 V for1 h, 500 V 2,5 h, 1.000 V, 2 h; 8000 V. 8 h, 60 KVH (skupno).

Po končanem IEF, IPG trakov (Amersham Biosciences) smo uravnotežili v uravnoteževalnem pufru za 15 min in damo na 12% SDS-PAGE gelu za dvo- dimenzionalni elektroforeza na 30 mA /gel. Nastalo SDS-PAGE gel je bil določen pri 20% TCA v 30 min in nato obarvali s Coomassie koloidnega G-250 [5].

proteinske lise na gelu bili skenirani in avtomatsko analizirajo. Različno izražene beljakovine, lise so bile potrjene z Imaging Master 2D 5,0 analitično programsko opremo (Amersham Biosciences). T-test smo izvedli za kvantitativno analizo 2D gelov. Diferencialna ekspresija posebnega proteina je bil definiran kot ≥ 2-krat spremembo promptno optične gostote med obema izravnanih nizov v dvojnikov. Različni lise so nato izrezali iz SDS-PAGE gelov za nadaljnjo identifikacijo, ki jih LC-MS /MS.

ekstrakcijo RNA in kvantitativno RT-PCR

Total RNA je bila vzeta iz 50 mg tkiva in obdelamo z DNazo (RNaze prosto). Geni so pomnožili z SYBR Green (Applied Biosystems, Avstralija). Hipoksantin-gvanin fosforiboziltransferaze ( HPRT
) smo uporabili kot kontrolo normalizacije in relativne ravni mRNA smo izračunali s primerjalno C _{metodi t uporabo Step-One (Applied Biosystems, Avstralija) [8]. Vsak vzorec smo testirali v trojniku in rezultati so izraženi kot povprečje ± SD. Primerji, so navedeni v tabeli 1.}

ekstrakcijo DNK in analiza metilacija CpG otokov

DNA smo izolirali iz celic in spremenjen z natrijevim bisulfitom z nizom EZ DNA metilacije-Gold Kit ^{™ (Zymo Research, CA, ZDA) po navodilih proizvajalca. Promotor CpG otoki so napovedali uporabo programske opreme metil Primer Express in dopolnjena od-bisulfita spremenjene DNA s PCR na naslednji način: denaturacija pri 96 ° C za 10 minut, čemur sledi 40 ciklov denaturacija pri 94 ° C za 40 sekund, za popuščanje pri 60 ° C za 40 sekund, in raztezek pri 72 ° C za 40 sekund, s končnim podaljšanje pri 72 ° C za 10 minut. Pomnoženih produktov PCR smo klonirali v vektorjih pMD19-T in sekvenciramo. Poleg tega DNA, izolirano iz tumorskih tkiv uporabimo, da detektiramo H
. pylori
16S rRNA
gene in cagA
gen. Temeljni premaz sekvence so navedene v tabeli 2.}

Statistična analiza

Rezultati so izraženi kot sredstvo ± SD. Statistične analize so bile izvedene s pomočjo SPSS 15.0 programske opreme. Enosmerne analize variance (ANOVA) in t-test smo uporabili za analizo podatkov. P
. ≪ 0,05 (obojestransko) je zdelo pomembno

Rezultati

Uvajanje CagA v želodčnih rakavih celic

Zaradi CagA za H
. pylori
je kritičen virulence dejavnik pri razvoju in napredovanju raka želodca, je CagA odkrita v želodčnih linij rakavih celic z RT-PCR in Western Blot po okužbi SGC-7901 in AGS celic s H
. pylori
in transfekcija SGC-7901 celic z cagA
-vector. The CagA protein začeli pojavljati pri razmerju celic bakterij od 1: 500 v kultiviranih celicah v 6 urah, in vsebina je bila najvišja v razmerju 1: 1000 v 6 urah (slika 1A in 1B). Vendar je fosforiliran CagA opazili v celicah v razmerju 1: 500 po kultiviranju 12 ur, in najvišjo vsebnost opazili v celicah v razmerju 1: 1000 po 6 h kulturi. CagA mRNA in beljakovin so opazili tudi v stalni cagA
-overexpressing SGC-7901 celic (slika 1C in 1D). Ti podatki kažejo, da je bila CagA uspešno uvedene v treh celičnih linij in fosforilirata.

Identifikacija diferencialnih beljakovin v želodcu rakavih celic

Potem, ko so celice okužene z H
. pylori
6 ur na MOI 1: 1000 ali transfekciji s cagA
-vector a proteomskimi tehnika je bila uporabljena za ustvarjanje šest dvodimenzionalna elektroforeza (2-DE) karte iz treh so odkrili celične linije in njihove kontrole (slika 2) in 135 diferencialne pike, od katerih je bilo 73 do regulirane in 62 so navzdol reguliran. Deset razlika je dobro videl kako skupna vsem trem celičnih linij, ki so bile ugotovljene s LC- MS /MS in potrdi Western Blot, vključno s 6 do reguliranih proteinov: beta-aktin, LDH, DLD, PRPF19, ATP sintaze in kalmodulin (CAM) in 4 down-regulirane proteini kot RanGAP, p64 CLCP, P43 kalretikulina (tabeli 3 in slika 3A).

H
. pylori
okužba spodbuja izražanje diferencialnih beljakovin v želodcu tkivih raka

Ker H
. pylori
selektivno colonizes človeški želodec za aktiviranje niz bolezenskih procesov, je izražanje genov 10 diferencialnih proteinov v 30 človeških želodca vzorcih raka oceniti kvantitativno RT-PCR. Od 10 genov, izražanje β-aktina
, LDH
, DLD
, PRP19
in CaM
in želodca raka in /ali metastatskega bezgavke so up-urejena v primerjavi s primestnih rakastih tkiv, medtem ko je izraz RanGAP
je navzdol urejeno. Podobno so 6 proteine ​​smo tudi nenormalno izražene v istih tkivih (slika 3B in 3C). niso opazili pomembnih razlik v izražanju drugih genov.

H
. pylori
kolonizacija v želodčnih tkivih raka je bila merjena z detekcijo 16S rRNA
gene in cagA
gen H
. pylori
s PCR. H
. pylori
je bil prisoten v 20 od 30 vzorcev (pozitivno mero 67%), in vse H
. pylori
sevi so cagA
pozitiven. Ravni mRNA v P-aktina
, LDH
, DLD
, PRP19 in CaM
so bile višje v H
. pylori
-positive tkiva, kot v negativnih vzorcev (slika 3D).

H
. pylori
povzroči zmotne DNA metilacije v želodčnih rakave celice

V treh celičnih linijah, PCR produkti otokov CpG zgoraj omenjenih genov so uspešno pridobili po bisulfita zdravljenje in zaporedje. V teh genov, LDH
, DLD
in kamera
geni so demetilirani na promotor -2325, -1885 in -276 strani, v tem zaporedju, in RanGAP
gen je bila najmočneje metiliramo na promotor -570 in -170 strani (Slika 4).

Pogovor

Zbirno dokazi kažejo, da je H
. pylori
okužba je pomemben dejavnik za H
. pylori
-associated želodčnih bolezni in da CagA je spodbujanje faktor za raka želodca [17,18]. Zgradili smo tri eksperimentalne celične linije, vključno z dvema želodca celičnih linijah raka, okuženih z H
. pylori
( cagA
^{+) in rak celično linijo v želodcu čezmerno izraženim cagA
, in ugotovila, da CagA začeli pojavljati v celicah 6 ur po okužbi in do 12 ur. Kasneje, fosforilirata CagA začeli pojavljati, v skladu z injekcijo in kasnejše fosforilacije CagA v epitelijskih celic želodca s strani T4SS za H
. pylori
po okužbo želodčne sluznice ljudi. Fosforilirata CagA aktivira nadaljnjim signalne poti in igra patološko vlogo. Opazili smo tudi CagA v celicah stabilno transfekciji s cagA
-vector. Ti podatki potrjujejo uspešno gradnjo treh eksperimentalnih celičnih linijah.}

Proteomika je bil uporabljen za preučevanje odnosa med H
. pylori
okužba in želodca bolezni, in mnogi različno izražene beljakovine so bile ugotovljene [19-22]. Vendar pa je združenje teh proteinov z CagA in njihovo izražanje v človeških želodčnega tkiva raka, še vedno nejasna. Dobili smo skupno 135 diferencialnih vložki iz treh celičnih linij, od katerih je bilo 73 do reguliranih in 62 so navzdol regulirane. Deset diferencialne vložki so skupne vsem trem celične linije, vključno s 6 do reguliranih proteinov (P-aktina, LDH, DLD, PRP19, ATP sintaze in CAM) in 4 navzdol regulirane proteini (p64 CLCP, RanGAP, P43 in kalretikulina) so izraz in 10 beljakovine "preveril Western blot v teh celičnih linijah. Te beljakovine so vključeni v energetsko presnovo, okostja preureditev, predelavo pre-mRNA, signalov in drugih proteinov, tesno povezana z razvojem in napredovanje številnih človeških raka [23,24]. Smo kvantitativno ugotavlja izražanje genov, ki kodirajo teh 10 beljakovine v človeškem želodcu tkivih z rakom, ki je razkrila, da je β-aktina
, LDH
, DLD
, PRP19
in CaM
bile dosledno močno izražen in RanGAP
je slabo izražena v obeh rakavih tkiv in /ali metastatskih bezgavk v primerjavi s peri-rakasto tkivo. The abnormalnih teh proteinov je bila preverjena tudi zahodni blot raka želodca in metastatskih bezgavk. Dalje, smo ugotovili, da je cagA
^{+ H
. pylori
kolonizirali v 20 od 30 želodčnega tkiva raka in spodbuja ali inhibira izražanje teh genov in vivo.}

LDH in DLD so tesno povezana s presnovo energije. Motnja presnove energetske velja pomemben dejavnik za razvoj in napredovanje raka. V nasprotju z običajnimi celice, rakave celice kažejo povečano odvisnost glikolitski poti z zadostnim kisikom, imenovano aerobne glikolize. Velika količina piruvične kisline, končnega produkta poti, se pretvori v mlečno kislino z LDH, spodbujanjem glikolitski pot in energetsko presnovo neravnovesje [25]. Mlečna kislina lahko zmanjša pH celične mikrookolja, s čimer se poveča neovaskularna odziv na angiogenezo dejavnikov za spodbujanje tumorske celice metastaz [26,27]. Skladne z našimi rezultati, LDH
je zelo izražena v tumorskih tkivih pri 61,8% bolnikov z rakom želodca; bolniki z LDH prekomerno imela krajše preživetje v primerjavi z bolniki z nizkim izražanja [28]. Kim et al
. [29] ugotovila, da DLD
izraz povečuje z napredovanja tumorja, kar zagotavlja več energije za rast tumorskih celic. Zato so visoko izraz LDH in DLD je ključni dejavnik za razvoj in napredovanje raka želodca, in H
. pylori
okužba spodbuja izražanje teh dveh genov v želodcu tkivih raka.

Beta-aktin, ki je ključna sestavina skeleta, ohranja strukturo, gibanje in delitev celic pod normalno stanje. β-aktina
je nenormalno izražena v številnih bolezni [30]. PRPF19 protein je verjel, da deluje v pre-mRNA spajanje. Ubikvitinacije od PRPF19 lahko privede do poškodb DNK, in nenormalno popravilo DNA je pomemben vzrok tumorigeneze [31]. Kalmodulin je kalcij veže protein, ki regulira mnoge signalizacijske poti in tako sodeluje v celično proliferacijo, mitoze in genskega prepisovanja. Kalmodulin spodbuja proliferacijo celic v jetrnih karcinomov v kombinaciji z PI3K in prehod iz G1 v S fazo v kombinaciji z ciklin E [32]. Zaviralec kalmodulin aretacije celic G1 fazi, da inhibira celično delitev [33]. V skladu s temi rezultati, smo ugotovili, da je H
. pylori
lahko sodelujejo pri razvoju raka na želodcu tkiv s spodbujanjem visoko ekspresijo teh treh proteinov.

Poleg tega smo opazili navzdol ureditev RanGAP
gena v rak tkiva s H
. pylori
okužbe. RanGAP je, GTPase aktivirajočega proteina. Po hidrolizi GTP BDP s strani GTPase, aktivno RanGTP postane neaktivna RanGDP, ki vodi do blokade celice signalizacijo, da zavira napredovanje raka [34]. Podobno se je zmanjšala RanGAP dejavnost, ki jo ubikvitinacije povzroča spodbuja razvoj raka [35].

DNA metilacija lahko povzroči nenormalno izražanje genov. H
. pylori
okužba zviša raven metilacije nekaterih genov in rezultatov v karcinogenosti želodčne sluznice [36,37]. DNA metilacija se običajno pojavi na otokih CpG od promotorjev genov. Zaznali smo metilacijskega statusa otokov CpG teh genov v konstruiranih celičnih linij in ugotovili, da je LDH
, DLD
in kamera
geni so demetilirani na promotor -2325, -1885 in -276 strani, v tem zaporedju, in RanGAP
gen je bila najmočneje metiliramo na promotor -570 in -170 mestih, v skladu z visoko izražanje LDH
, DLD
in CaM
genov in nizko izraz RanGAP
gena v želodčnih rakavih tkivih s cagA
^{+ H
. pylori
okužbe.}

Skratka, ti rezultati kažejo, da je H
. pylori
okužba prek CagA prenos, lahko povzroči, da zmotne metilacije teh genov privede do disfunkcionalne izražanje genov v želodčnih tkiva in celice raka. Naši rezultati so novo razumevanje molekularne patogenezi raka želodca s H
. pylori
okužbe. Nadaljnje študije bo raziskala učinke teh spremenjenih vzorcev metilacijskih o patogenezi raka želodca v kliničnih vzorcih.

Priznanja

Zahvaljujemo se kitajski center za Helicobacter pylori
seva upravljanje in ohranjanje za zagotavljanje H
. pylori
NCTC11637 in dr Yang Wenxiu in Wu Jiahong za tehnično pomoč.

• Plos ONE: Zveza med Tooth Izguba in želodca raku: Meta-analiza opazovalne študije
• Plos ONE: Massive Endoskopska Pregled za požiralnika in želodca rakov v območju z visokim tveganjem Kitajske