Абстрактный
Фон и цели
<р> Для идентификации и проверки N-гликанов биомаркеры при раке желудка (GC ) и выяснить лежащие в их основе молекулярного механизма действия.
Методы
<р> в общей сложности 347 лиц, в том числе больных с GC (рак желудка) или атрофический гастрит и здоровой контрольной группы, были случайным образом разделены в учебной группы (п = 287) и ретроспективное группа проверки (п = 60). Сыворотка N-гликанов профилирование была достигнута с ДНК секвенсор-помощь /флуорофором помощь углеводный электрофорез (АДС-слойного). Две диагностические модели были построены на основе N-гликанов профилей с использованием логистической регрессии ступенчатое. Диагностическая эффективность каждой модели была оценена в ретроспективной, перспективной (п = 60), и наблюдения (п = 40) когорты. Лектин-блоттинг проводили для определения общего ядра-фукозилирование, и экспрессия генов, вовлеченных в ядро-фукозилирования в ГХ анализировали с помощью обратной транскриптазы-полимеразной цепной реакции.
Финансирование:. Эта работа Работа выполнена при поддержке Национального фонда естественных наук Китая (гранты 81102693 и 81102565). Доноры не играет никакой роли в дизайн исследования, сбора и анализа данных, решение о публикации или подготовки рукописи
<р> Конкурирующие интересы:.. Авторы заявили, что не существует никаких конкурирующих интересов
Введение
<р> рак желудка (GC) является четвертым наиболее распространенным раком и третьей ведущей причиной рака, связанных смерти, с частотой приблизительно 930000; ежегодно, он несет ответственность за более чем 700 000 случаев смерти во всем мире, а уровень пятилетняя выживаемость составляет 20-30% [1]. Для пациентов с GC, выживание диктуется патологической стадии заболевания на момент постановки диагноза. К сожалению, общие симптомы GC не являются специфическими для этого заболевания, и на ранней стадии ГХ не может вызвать заметных симптомов. Несмотря на повышение уровня знаний о молекулярных механизмах, которые регулируют злокачественную трансформацию и метастазирование, общая выживаемость больных с ГК существенно не улучшилось. Несколько молекул было рекомендовано в качестве GC биомаркеров, включая карциноэмбриональному антиген (CEA) для послеоперационного наблюдения, углеводного антигена 19-9 (CA19-9), углеводный антиген 125 (CA125) и углеводного антигена 72-4 (CA72-4) [2- 6]. Тем не менее, ни один из этих маркеров опухоли не продемонстрировал достаточной чувствительности или специфичности диагностики GC на ранней стадии. В качестве альтернативы, гастроскопия увеличивает скорость окончательных диагнозов, но диагностическое значение гастроскопии ограничивается затратами, рисками и неудобствами. Таким образом, существует настоятельная необходимость в разработке неинвазивных биомаркеров, которые позволяют раннее обнаружение GC.
<Р> все больше доказательств указывает на изменение N-связанных гликана можно было бы рассматривать как потенциальных биомаркеров для диагностики рака. Предыдущие исследования наблюдались значительные изменения N-связанных гликана в различных раковых заболеваний и раковых клеточных линиях, которая включает в себя рак поджелудочной железы, рак молочной железы, рак простаты, рак яичников и рак печени [7-11]. Дополнительный анализ в GC также обнаружили, что свободный комплекс типа N-гликаны накапливается в MKN7 и MKN45 клеточных линий [12]. Тем не менее, колебания и изменения N-связанных гликана у пациентов GC по-прежнему в значительной степени неизвестны.
<Р> В наших предыдущих исследованиях с использованием секвенатора ДНК-помощь /флуорофором помощь капиллярного электрофореза (АДС-слойного), мы показали, что ветвление альфа-1,3-фукозилированные triantennary гликан и через biantennary гликан были весьма специфичным и чувствительным кандидатов HCC биомаркеры [13]. В текущем исследовании, мы использовали DSA-FACE ретроспективно профиль сыворотки N-гликаны в образцах от больных с ГХ или атрофический гастрит и от здоровых людей. Мы охарактеризовали идентифицированных GC N-гликанов маркеры с приемником, работающим характерные кривые (ROC) и проверены маркеры в перспективных и последующих когорт. Нашей целью было определить перспективную биомаркеров для прогнозирования и обнаружения GC с улучшенной специфичности и чувствительности
Материалы и методы
1.1:. Ретроспективная когорта
<р> Протокол исследования был одобрен Комитет по этике Китая людских ресурсов на втором военном медицинском университете. Письменное информированное согласие было получено от больных и здоровых людей.
<Р> В общей сложности 247 пациентов с GC (n = 138) или атрофический гастрит (п = 109) были приняты на работу в период между 2010 и 2012 годами диагнозов для всех включенных в исследование пациентов были гистологически подтверждены 2 патологоанатомами в Changhai больнице, Второй военный медицинский университет (Шанхай, Китай). В контрольной группе, 128 по возрасту и полу здоровых добровольцев сопоставимого (без заболевания) за тот же период времени были зачислены. Средний возраст и распределение по полу были согласованы в 3-х группах. Резюме данных пациента приведены в таблице 1. Пациенты, которые получили GC предоперационной лучевой терапии, химиотерапии, или химиолучевое были исключены из исследования.
Среднее ± SD или № (%)
Характеристика <бр> Контроль (n = 128)
атрофический гастрит (п = 109)
GC (п = 138)
Возраст, y50.10 ± 5.9552.11 ± 6.2951.01 ± 6.01Men75 (58.59) 60 ( 55,05) 70 (50,72) CEA-положительных 5 (3,91) 23 (21,10) 62 (44,93) CA19-9-положительных 11 (8.59) 20 (18,35) 53 (38,41) CA125-положительных 7 (5,47) 10 (9,17) 28 (20.29) CA72-4-положительным 8 (6,25) 12 (11,01) 22 (15,94) TNM stageI22 (15,94) II28 (20,29) III63 (45,65) IV25 (18,12) Таблица 1. Характеристика учебной группы.
Сокращения : GC, карциномы желудка; SD, стандартное отклонение. CSV Загрузить CSV
В общей сложности 60 пациентов (20 в каждой группе) были выбраны случайным образом из 3-х групп, описанных выше ретроспективной проверке; у остальных пациентов (n = 315) были включены в обучающей выборки для построения диагностической модели. В течение 2-х лет исследования, 40 из 138 пациентов с GC в учебной группе наблюдали до и после радикальной операции, в зависимости от наличия. Обучение группа включала 118 пациентов с GC, 89 пациентов с атрофическим гастритом и 108 здоровых лиц.
<Р> Лабораторные и клинические данные для всех участников были получены из клинических медицинских записей, отчетов патологии, а личные интервью. Собранные данные включали пол, возраст, и желудка особенности рака (например, расположение опухоли, гистологической степени, глубина вторжения и метастаза узла лимфы). Образцы сыворотки были получены перед хирургическим резекций; Эти образцы были собраны из цельной крови с использованием стандартного протокола, центрифугировали при 10000 в течение 20 минут и хранили при -80 ° С. Прогрессирование заболевания у пациентов GC была классифицирована в соответствии с седьмым изданием американского Объединенного комитета [14]: 20 пациентов (16,95%) имели стадия заболевания I, 25 (21,17%) была стадия II заболевания, 54 (45,76%) имели стадию болезнь III, и 19 (16,10%) была стадия заболевания IV
1.2:. проспективной когорте
<р> Для того, чтобы оценить прогностическую ценность моделей, созданных в ретроспективном исследовании, описанном выше, мы перспективно расследовавший дополнительный когорты (п = 60) больных с GC (п = 20) или атрофический гастрит (п = 20) и у здоровых лиц (п = 20), с мая 2012 по ноябрь 2012 года в той же больнице. Процедуры и стратегии были такими же, как те, что описаны выше
1.3:. Образцы тканей 1.4. Регулярное обнаружение опухолевых маркеров 1.5:. Сыворотка протеин N-Glycan профилирование 1.7:. Общее извлечение РНК из ткани и количественной ПЦР в реальном времени 1.8:. Статистический анализ Все количественные переменные были выражены как среднее ± стандартное отклонение, если не указано иное. Количественные переменные сравнивались с помощью т-теста Стьюдента, дисперсионный анализ, или непараметрических критериев. коэффициенты корреляции Пирсона и соответствующие вероятности (P) были использованы для оценки корреляции между параметрами; коэффициенты корреляции Спирмена были вычислены для порядковых категориальные переменные. Новые гликановые биомаркеры были идентифицированы и охарактеризованы на основе прямого пошагового логистического регрессионного анализа. Диагностическая эффективность отдельных биомаркеров и диагностических моделей оценивали с помощью анализа кривых ROC. Чувствительность, специфичность, прогностическая ценность положительного результата (PPV), отрицательное прогностическое значение (NPV), и точность были рассчитаны с использованием оптимальных значений среза, выбранных из кривых ROC. Все приведенные значения Р являются 2-белохвост, и значения Р &л; 0,05 считались статистически значимыми. Статистический анализ проводили с использованием программы SPSS 18.0 для Windows (SPSS Inc.) Результаты 2.1. Различные N-Glycan профили у больных с ГХ или атрофический гастрит и у здоровых людей с помощью технологии DSA-слойного, мы рассмотрели N-гликанов профилей у больных с ГК (п = 118) или атрофический гастрит (п = 89) и у здоровых лиц (n = 108). Мы количественно и статистически сравнивались пиков в 3 группах. По крайней мере, 9 N-гликанов структуры (пики) были выявлены во всех образцах (рис 1). 2.2: построение и оценка диагностической модели на основе N-Glycan маркеров, чтобы дифференцировать больных раком желудка от здоровых 2.3: построение и оценка диагностической модели дифференцировать рак желудка от атрофический гастрит 2.4: Снижение уровня общего объема основных белков-фукозилированные в желудочном 2.5:. Изменения N-Glycan маркеров до и после того, как хирургическое лечение 2.6: Корреляция между диагностических моделей и клинических параметров
<р> Образцы ткани были получены от 20 из 138 пациентов GC; 2 ломтика, опухоль и образец смежной ткани, были взяты. Образцы ткани (приблизительно 1 см 3) сразу же замораживали при -80 ° С и подвергают обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ-ПЦР) и лектин-блоттинга. Все ткани были использованы в соответствии с Положением Institutional Review Board Второй Военно-медицинского университета
<р> Рутинные анализы опухолевых маркеров были выполнены с использованием стандартных способов и реагентов , Уровни CEA и CA19-9 определялись на Abbott I2000, а также уровни CA72-4 и CA125 измеряли с помощью Roche Cobas E601. Уровни отрезные, рекомендованные производителем для CEA, CA19-9, CA125 и CA72-4 составляли 5,0 мкг /л, 39 Ед /л, 40 ед /мл и 9,8 Ед /мл соответственно. Анализы проводились в отделении лабораторной медицины, Changhai больницы Второй военный медицинский университет, Шанхай
<р> были выполнены в сыворотке крови белка N-гликанов анализы как описано ранее [13]. Вкратце, N-гликаны в 2 мкл сыворотки были освобождены из белков с пептидом-N-гликозидазы F (F) PNG-азой (New England Biolabs, Boston, MA), помеченный 8-aminonaphtalene-1,3,6-трисульфоновую кислоты (Invitrogen, Carlsbad, CA). Сиаловой кислоты удаляли с помощью Arthrobacter ureafaciens
сиалидаза (Roche Bioscience, Palo Alto, CA), и обработанные образцы были проанализированы с использованием технологий ДСА-слойного на капиллярный электрофорез на основе ABI3130 Genetic Analyzer (Applied Biosystems, Foster City , Калифорния). 9 самых высоких пиков, которые были обнаружены во всех образцах (с учетом > 90% от общего количества сыворотки N-гликанов) были проанализированы с использованием GeneMapper (Applied Biosystems). Каждый N-гликанов структура была описана численно нормализуя его высоту на сумму высот всех пиков, и мы проанализировали эти данные с помощью программы SPSS 18.0 статистического программного обеспечения (SPSS Inc., Chicago, IL).
1.6 экстракция белка в ткани и лектин-блоттинга
<р> ткани гомогенизировали с помощью ступки и пестика и ресуспендировали в буфере для лизиса, содержащем коктейль ингибиторов протеаз (Roche Diagnostics, MEYLAN, Франция). Unlysed фракцию удаляли центрифугированием (дважды при 12000xg в течение 10 минут при 4 ° С). Концентрацию растворимого белка определяли с использованием BioRad анализа (BioRad, Марн-ла-Кокетт, Франция), и образцы хранили при -80 ° С.
<Р> В общей сложности 25 мкг белка в сыворотке или 50 мкг белка, экстрагированного из замороженной ткани разделяли с помощью 10% электрофореза в геле полиакриламид-сульфатного додецилсульфата натрия. Гели окрашивали СВВ G250, или белки в геле переносили на нитроцеллюлозную мембрану (Ватман /Schleicher &Amp; Schuell, Версаль, Франция), чтобы обнаружить ядро-фукозилированные белки. Эти мембраны блокировали в течение ночи при 4 ° С с 5% бычьего сывороточного альбумина в Трис-буферном солевом растворе (TBS: 140 мМ NaCl, и 10 мМ Трис-HCl), а затем инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре в присутствии 5 мкг /мл биотинилированного линзы culinaris агглютининов А (LCA) (Vector Laboratories, Burlingame, CA), в TBS, содержащим 0,05% Tween-20 (TBST). После 4 промывок по 10 минут с помощью TBST, мембраны инкубировали с IRDye 800CW стрептавидином (1: 10000; LI-COR Biosciences, Линкольн, Небраска) в течение 1 часа при комнатной температуре, промывают 4 раза TBST, и разработано с использованием Odyssey Инфракрасная Imaging System (LI-COR Biosciences). Очищенная альбумин (Sigma, St. Louis, МО) использовали в качестве отрицательного контроля для лектин-блоттинга
<р> РНК экстрагировали из замороженных тканей с использованием набора Qiagen RNeasy мини в соответствии с инструкцией изготовителя (Qiagen GmbH, Hilden, Germany). Чистоту и концентрацию РНК определяли с помощью спектрофотометра (Эппендорф, Hamburg, Germany). кДНК синтезировали из 2 мкг тотальной РНК с использованием обратной транскрипции реагента (Toyobo, Osaka, Japan). Праймеры были сконструированы с использованием праймера Express (Applied Biosystems), и последовательности, представлены в таблице 2.
Gene
Прямой праймер (5'-3 ')
обратного праймера (5'-3')
Fut85'CCTGGCGTTGGATTATGCTCA 3'5'CCCTGATCAATAGGGCCTTCT 3'GDP-Tr5'CTGCCTCAAGTACGTCGGTG 3'5'CCGATGATGATACCGCAGGTG 3'GAPDH5'ATGGGGAAGGTGAAGGTCG 3'5'GGGGTCATTGATGGCAACAATA 3'Table 2. полимеразная цепная реакция пары праймеров последовательностей
Сокращения:. аденозин; C, цитидин; G, гуанозин; T, тимидина; FUT8, фукозилтрансферазной; ВВП-Tr, гуанозиндифосфат-транспортер фукозы CSV Загрузить CSV <р> кДНК амплифицировали в Applied Biosystems 7300 ПЦР в реальном времени машины в общем объеме реакционной смеси 20 мкл, который содержал 10 мкл 2X Fast SYBR Green Master Mix (Applied биосистем, включает в себя Fast-Start Taq ДНК-полимеразную реакцию буфера), то дезоксинуклеотидтрифосфатов смесь (в том числе дезоксиуридина трифосфата, SYBR Green I краситель и MgCl2) и 2 мкл праймеров для каждого гена (в конечной концентрации от 0,5 μΜ каждого) , Каждую реакцию проводили в трех повторностях. Условия велосипедных ПЦР были следующими: денатурация при 95 ° С в течение 5 минут, а затем 40 циклов при 95 ° С в течение 15 секунд, 59 ° C или 55 ° C в течение 15 секунд и при 72 ° С в течение 45 секунд
. <р> относительное выражение a-1,6-фукозилтрансферазы (FUT8) и гуанозиндифосфат (ВВП) -fucose транспортер (ВВП-Fuc-Тг) в каждом образце нормированы на экспрессию гена GAPDH домашнего хозяйства путем вычитания порогового значения значение цикла (Ct) из GAPDH от такового FUT8 или GDP-Tr (Δ CТ). Складка разница была рассчитывается путем вычитания Δ CТ испытуемого образца от контрольного образца для получения ΔΔCt и впоследствии 2 ^ -ΔΔCt. значения цикла порогу, за 40 циклов были рассмотрены ниже определяемого уровня. Растопите кривые были получены для каждой реакцией, чтобы гарантировать, что один продукт был усилен
<р> Callewaert и др Лю и др ранее опубликовал структурный анализ этих N-гликанов [15,16]. Среднее относительное обилие этих N-гликанов структур представлена в таблице 3. обилие структур в пиков 1, 2, 3, 5, 6, 7, и 9 значительно отличалась в GC, атрофический гастрит, и контрольная группа здоровых людей группы, указывая, что различные N-гликанов структуры существовали в различных патофизиологических условиях. По сравнению с контрольной группы здоровых, пики 1, 2, 5 и 9 были увеличены (P ≪ 0,05) и пики 3, 6, и 7 были уменьшены в GC группы (Р &ЛТ; 0,001). Обилие структур в пиках 3, 5, 6, 7, 9 и существенно отличалась в группе GC по сравнению с атрофический гастрит группы (рисунок 2).
Средства ± SD
управляющей переменной
(п = 128)
атрофический гастрит (п = 108)
GC (п = 138)
F
P <бр>
Age, у a50.10 ± 5.9552.11 ± 6.2951.01 ± 6.010.270.766Peak 1 a6.96 ± 1.677.64 ± 2.028.20 ± 2.7510.09 &л; 0.001Peak 2 a1.09 ± 0.341.20 ± 0.381.31 ± 0.493.120.045Peak 3 a6.28 ± 1.636.47 ± 1.385.76 ± 1.2810.48 &л; 0.001Peak 4 a5.76 ± 0.935.61 ± 0.815.75 ± 0.821.120.327Peak 5 a40.02 ± 3.7539.60 ± 3.7642.16 ± 4.3314.94 &л; 0.001Peak 6 a21.40 ± 2.6120.51 ± 2.8516.99 ± 2.9888.36 &л; 0.001Peak 7 a5.87 ± 1.416.02 ± 1.715.21 ± 1.2111.15 &л; 0.001Peak 8 a7.94 ± 1.587.59 ± 2.247.46 ± 1.822.240.108Peak 9a2.33±0.922.59±1.554.00±1.7748.12<0.001sumfucab47.37±4.4047.47±5.3043.21±5.9427.01<0.001Table 3. N-Glycan профилирование с помощью секвенатора ДНК-помощь /флуорофором помощь капиллярного электрофореза
Сокращения:. GC, рак желудка; SD, стандартное отклонение. а дисперсионными анализами B Sumfuc представляет общее обилие α-1,6-фукозилированные структур (сумма пиков 1, 2, 3, 4, 6, и 7). CSV Загрузить CSV
<р> Мы оценили GC, связанные с N-гликанов изменений на основе логистической регрессии анализ. Коэффициенты логистическую регрессию были использованы для оценки отношения шансов для каждой из независимых переменных. Математическая формула GCglycoA была построена, чтобы дифференцировать пациентов GC от здоровых (GCglycoA = -1,072 + 0,957 * peak4-0.331 * peak6 + 0,646 * peak9). Для того, чтобы оценить способность GCglycoA, CEA, CA19-9, CA125 и CA72-4 дискриминировать пациентов GC, мы охарактеризовали площадь под кривыми ROC (AUC). По сравнению с СЕА (AUC = 0,74), CA19-9 (AUC = 0,76), CA125 (AUC = 0,72) и CA72-4 (AUC = 0,67), GCglycoA более эффективно отличается от пациентов GC нормальной контрольной (AUC = 0,88) в учебной группы (рис 3А). В таблице 4 перечислены чувствительность, специфичность, PPV, NPV, и точность для прогнозирования Генеральном CEA, CA19-9, CA125, CA72-4 и GCglycoA. CEA при рекомендованном значении 5,0 нг /мл имел чувствительность 45,76%, 37 Ед /мл CA19-9 имел чувствительность 38,14%, 40 Ед /мл CA125 имел чувствительность 18,64%, и 9,8 Ед /мл CA72- 4 имели чувствительность 13,56%. Оптимальное значение среза -0.772 была выбрана для GCglycoA, основанный на анализе кривой ROC. При этом значении шага отсечки, GCglycoA имел чувствительность 75.42%, что увеличение чувствительности 29,66%, 37,28%, 56,78% и 61,86% по сравнению с СЕА, CA19-9, CA125 и CA72-4, соответственно. Диагностическая точность GCglycoA в дифференциации больных GC от здоровых увеличилась на 10,62%, 16,82%, 25,67% и 28,76% по сравнению с СЕА, CA19-9, CA125 и CA72-4 соответственно. Когда модель была применена к ретроспективным группе проверки, чувствительность увеличилась 45,00%, 45,00%, 55,00% и 55,00%, а точность увеличилась 15,00%, 17,50%, 20,00% и 20,00% по сравнению с СЕА, CA19-9, CA125 и CA72-4, соответственно (таблица 5).
значение Отсечка
фактический статус, Количество предметов:
Test
GC + <бр> GC-
Чувствительность,%
Специфичность,%
PPV,%
NPV,%
Точность,%
СЕА (5 нг /мл) GC + 54545.7695.3791.5361.6869.47 GC-64103CA19-9 (37 ед /мл) GC + 451038.1490.7481.8257.3163.27GC-7398CA125 (40 ед /мл) GC + 22718.6493.5275.8651.2754.42GC-96101CA72-4 (9,8 Ед /мл) GC + 16813.5692.5966.6749 .5151.33GC-102100GCglycoA (-0,77) GC + 891675.4285.1984.7676.0380.09GC-2992Table 4. Диагностическое питания для Дифференцируя карцинома из Желудочный элементов управления в группе Обучение
Сокращения: + положительная;. - Отрицательная; GC, рак желудка; GCglycoA, N-гликанов маркер на основе диагностики рака желудка модель A; NPV, отрицательная прогностическая ценность; PPV, прогностическая ценность положительного результата. CSV Загрузить значение CSV Среза
фактический статус, Количество предметов:
Test
GC +
GC-
Чувствительность,%
Специфичность,%
PPV,%
NPV,%
Точность,%
СЕА (5 нг /мл) GC + 8040.00100.00100.0062.5070.00GC-1220CA19-9 (37 Ед /мл ) GC + 8140.0095.0088.8961.2967.50GC-1219CA125 (40 ед /мл) GC + 6030.00100.00100.0058.8265.00GC-1420CA72-4 (9,8 Ед /мл) GC + 6030.00100.00100.0058.8265.00GC-1420GCglycoA (-0,77) GC + 17385.0085.0085.0085.0085.00GC-317Table 5. Диагностическое питания для Дифференцируя карцинома из Желудочный элементов управления в группе ретроспективной проверке
Сокращения:. + положительная; - Отрицательная; GC, рак желудка; GCglycoA, N-гликанов маркер на основе диагностики рака желудка модель A; NPV, отрицательная прогностическая ценность; PPV, прогностическая ценность положительного результата. CSV Загрузить CSV <р> Предполагаемая оценка показала, что чувствительность улучшается 65.00%, 65.00%, 85.00% и 80.00%, а точность улучшилась 30.00%, 27.50%, 37,50% и 37,50% по сравнению с СЕА, CA19-9, CA125 и CA72-4, соответственно (таблица 6). Значение
Граничная
фактический статус, Количество предметов:
Test
GC +
GC-
Чувствительность,%
Специфичность,%
PPV,%
NPV,%
Точность,%
СЕА (5 нг /мл) GC + 6130.0095.0085.7157.5862.50GC-1419CA19-9 (37 Ед /мл ) GC + 6030.00100.00100.0058.8265.00GC-1420CA125 (40 ед /мл) GC + 2010.00100.00100.0052.6355.00GC-1820CA72-4 (9,8 Ед /мл) GC + 3115.0095.0075.0052.7855.00GC-1719GCglycoA -0.77GC + 19295,0090 .0090.4894.7492.50GC-118Table 6. Диагностическое питания для Дифференцируя карцинома из Желудочный элементов управления в перспективной группой по проверке
Сокращения:. + положительная; - Отрицательная; GC, рак желудка; GCglycoA, N-гликанов маркер на основе диагностики рака желудка модель A; NPV, отрицательная прогностическая ценность; PPV, прогностическая ценность положительного результата. CSV Загрузить CSV
<р> С помощью модели логистической регрессии, была создана другая диагностическая модель (GCglycoB) провести различие между GC и атрофический гастрит: GCglycoB = 5.273-1.371 * peak2 + 0,781 * peak4-0.453 * peak6 + 0,221 * peak9. Пороговое значение для GCglycoB (0,594) был выбран на основании анализа кривой СОХ. В учебной группе, АУК для GCglycoB был 0,82, в то время как ППК для CEA, CA19-9, CA125 и CA72-4 были 0,65, 0,63, 0,69 и 0,64 соответственно (рис 3B). Диагностическая точность GCglycoB в дифференциации GC от атрофический гастрит увеличилась 21,26%, 24,64%, 31,40% и 34.30%, а чувствительность увеличилась 27.97%, 35.59%, 55,09% и 60,17% по сравнению с СЕА, CA19-9, CA125 и CA72- 4, соответственно (таблица 7). В группе проверки, точность GCglycoB 85,00% представляет собой увеличение на 40,00%, 45,00%, 65,00% и 55,00%, а чувствительность 85,00% указали увеличение на 22.50%, 22.50%, 30,00% и 30,00% по сравнению с СЕА, CA19-9, CA125 и CA72-4, соответственно (таблица 8).
значение Отсечка
фактический статус, Количество предметов:
Test
GC +
GC-
Чувствительность,%
Специфичность,%
PPV,%
NPV,%
Точность,%
СЕА (5 нг /мл) GC + 541945.7678.6573.9752.2459.90GC-6470CA19-9 (37 ед /мл) GC + 451738.1480.9072.5849.6656.52GC-7372CA125 (40 ед /мл) GC + 22818.6491.0173.3345.7649.76GC-9681CA72-4 (9,8 Ед /мл ) GC + 16813.5691.0166.6744.2646.86GC-10281GCglycoB (0,594) GC + 88873.7391.0191.5872.3281.16GC-3081Table 7. Диагностическая питания для Дифференцируя карцинома из желудка атрофический гастрит в группе Обучение
Сокращения:. + положительная; - Отрицательная; GC, рак желудка; GCglycoB, N-гликанов маркер на основе рака желудка диагностическая модель B; NPV, отрицательная прогностическая ценность; PPV, прогностическая ценность положительного результата. CSV Загрузить значение CSV Среза
фактический статус, Количество предметов:
Test
GC +
GC-
Чувствительность,%
Специфичность,%
PPV,%
NPV,%
Точность,%
СЕА (5 нг /мл) GC + 9445.0080.0069.2359.2662.50GC-1116CA19-9 (37 Ед /мл ) GC + 8340.0085.0072.7358.6262.50GC-1217CA125 (40 ед /мл) GC + 4220.0090.0066.6752.9455.00GC-1618CA72-4 (9,8 Ед /мл) GC + 6430.0080.0060.0053.3355.00GC-1416GCglycoB (0,594) GC + 17385.0085.0085.0085.0085.00GC-317Table 8. Диагностическая питания для Дифференцируя карцинома из желудка атрофический гастрит в группе ретроспективной проверке
Сокращения:. + положительная; - Отрицательная; GC, рак желудка; GCglycoB, N-гликанов маркер на основе рака желудка диагностическая модель B; NPV, отрицательная прогностическая ценность; PPV, прогностическая ценность положительного результата. CSV Загрузить CSV <р> В перспективной группе, GCglycoB был более точным (85,00% против 30,00%, 30,00%, 10,00% и 15,00%) и высокая чувствительность (90,00% против 62,50%, 62,50%, 55,00% и 55,00% ), чем CEA, CA19-9, CA125 и CA72-4, соответственно (таблица 9). Значение
Граничная
фактический статус, Количество предметов:
Test
GC +
GC-
Чувствительность,%
Специфичность,%
PPV,%
NPV,%
Точность,%
СЕА (5 нг /мл) GC + 6130.0095.0085.7157.5862.5GC-1419CA19-9 (37 Ед /мл ) GC + 6130.0095.0085.7157.5862.5GC-1419CA125 (40 ед /мл) GC + 2010.00100.00100.0052.6355.00GC-1820CA72-4 (9,8 Ед /мл) GC + 3115.0095.0075.0052.7855.00GC-1719GCglycoB (0,594) GC + 17185.0095.0094.4486.3690.00GC-319Table 9. Диагностическое питания для Дифференцируя карцинома из желудка атрофический гастрит в перспективному группы по проверке
Сокращения:. + положительная; - Отрицательная; GC, рак желудка; GCglycoB, N-гликанов маркер на основе рака желудка диагностическая модель B; NPV, отрицательная прогностическая ценность; PPV, прогностическая ценность положительного результата. CSV Загрузить CSV
рака <р> Общий уровень основных альфа-1,6-фукозы остатков (сумма пиков 1, 2, 3, 4 , 6, и 7) был значительно ниже (р &л; 0,001; Таблица 2) у больных ГЦ, чем у больных атрофическим гастритом и нормальной контрольной группы. Для подтверждения этого факта, мы оценивали концентрацию основных фукозилированные белков в сыворотке и ткани пациентов с использованием GC LCA, потому что она специфически распознает гликопротеины с альфа-1,6-фукозилированные-N-ацетил-D-глюкозамина-аспарагина (GlcNAc- Asp) в ядре trimannosyl. В сыворотке крови было меньше LCA-связывающих основные остатки фукозы в группе GC, чем в атрофический гастрит и нормальных групп (рис 4а). Общая численность ядра фукозы был в GC опухолей ниже, чем в парном смежной ткани (рис 4В). Для того, чтобы определить, является ли изменение общего ядра фукозилирования в GC опухолей связана с нарушением биосинтеза гликозилирования, анализировали обилие млекопитающих альфа-1,6-фукозилтрансферазы (FUT8) и гуанозиндифосфат Транспортер (ВВП-Tr) в GC опухолей и прилегающих тканей с помощью RT-PCR. Результаты показали, что экспрессия FUT8 мРНК в опухолях ниже, чем в соседних тканей (фиг.4С). Тем не менее, не было никаких существенных различий в гуанозиндифосфат (ВВП) -fucose Транспортер (ВВП-Fuc-Tr) экспрессии генов между опухолями и смежной ткани (рис 4D)
<р> обилие структур в пиков 1, 4, 9 и значительно отличалось после операции по сравнению с до операции (таблица 10). Результаты показали, что увеличение основного фукозилированные пика (пик 3), а также общего объема основных фукозилированные N-гликанов (sumfuc) были отменены после операции. Через десять недель после операции, значение GCglycoA стал отрицательным в 11 из 40 пациентов с GC, как и значение GCglycoB в 22 из 40 пациентов с GC.
Среднее ± SD или медиана (диапазон межквартильного) <бр> T
-Тест
Переменная
Перед хирургическим вмешательством
После операции а
T или Z
P
Пик 1 b8.92 ± 3.748.49 ± 3.342.0380.048Peak 2 b1.24 ± 0.591.52 ± 1.74-1.0510.300Peak 3 b5.96 ± 1.526.14 ± 1.33-0.6310.531Peak 4 b5.73 ± 0.695.21 ± 1.012.6020.013Peak 5 b40.81 ± 4.8742.27 ± 5.27-1.5130.138Peak 6 b16.74 ± 2.9817.30 ± 2.61-0.8090.423Peak 7 b5.28 ± 1.505.50 ± 1.14-0.7160.478Peak 8 b7.60 ± 2.077.82 ± 1.85-0.5860.562Peak 9b4.11±1.853.29±1.692.0470.047sumfucc43.88±7.7744.16±6.10-0.2170.830GCglycoAd1.07 (0.49, 3.12) 0,28 (-0,90, 1,14) -2.7820.005GCglycoB d1.31 (0,56, 2,41) 0,41 (-0,54, 1,19) -2.3790.017Table 10. N-Glycan Профилирование у пациентов с Рак желудка до и после радикальной операции
Сокращения:. GCglycoA и GCglycoB, N-гликанов маркер на основе рак желудка диагностические модели а и В, соответственно; SD, стандартное отклонение. через десять недель после операции. б парного образца T
тест с Sumfuc указывает общее обилие ofα-1,6-фукозилированные структур. d Критерий Уилкоксона. CSV Загрузить CSV
<р> В настоящее время опухолевые биомаркеры CEA, CA19-9, CA125 и CA72-4 широко используются для скрининга и мониторинга GC. Таким образом, мы определили корреляции между отдельными N-гликанов маркеров (в том числе диагностических моделей), опухоль биомаркеров и стадию TNM.
<Р> Результаты показали, что только стадия TNM был положительно связан с GCglycoA (г = 0,355, Р &л; 0,001) и GCglycoB (г = 0,345, Р &л; 0,001) (таблица 11). Обилие структур пиков 6 и 9 существенно отличалась между стадиями TNM (таблица 12).
Корреляция
CEA
CA19-9
CA125
CA72-4
TNM Этап
GCglycoA
GCglycoB
Пик 1r
0.210a0.127a0.006a-0.023a0.088a0.250b0.055bP
0.0160.1480.9440.7930.3160.0040.532Peak 2r
0.009a0.038a0.011a-0.067a0.010a0.224b-0.099bP
0.9170.6670.9040.4450.9060.0100.258Peak 3r
0.083a0.094a0.066a0.039a-0.115a-0.216b-0.346bP
0.3480.2860.4550.6540.1930.013<0.001Peak 4r
-0.045a0.160a0.047a-0.006a-0.091a0.122b0.074bP
0.6130.0680.5940.9430.3010.1670.403Peak 5r
-0.029a-0.156a-0.020a0.097a0.108a0.299b0.478bP
0.7430.0760.8160.2700.2180.001<0.001Peak 6r
0.009a0.020a0.044a-0.114a-0.348a-0.757b-0.787bP
0.9210.8170.6180.197<0.001<0.001<0.001Peak 7r
-0.039a0.089a-0.075a-0.161a-0.245a-0.368b-0.517bP
0.6580.3110.3940.0660.005<0.001<0.001Peak 8r
-0.135a-0.058a0.002a-0.087a-0.035a-0.215b0.011bP
0.1240.5130.9840.3210.6920.0140.897Peak 9r
0.028a-0.072a-0.034a0.095a0.315a0.794b0.591bP
0.7510.4130.7030.280<0.001<0.001<0.001GCglycoAr
-0.033b-0.042b-0.012b0.046b0.355b10.869bP
0.7100.6370.8960.605<0.001<0.001GCglycoBr
-0.052b-0.045b0.027b0.105b0.345b0.869b1P
0.5580.6110.7600.232<0.001<0.001Sumfuccr
0.061a0.151a0.040a-0.108a-0.170