Plos ONE: Čezmerno in Biološka funkcija ubikvitin-Specific proteaz 42 želodčnega raka

Povzetek

ubikvitina specifične proteaze 42 (USP42) je član deubiquitinating encimov (presname). So spremembe v Dubs so vpleteni v patogenezo različnih tumorjev. Vendar pa obstaja nekaj študij o izražanja in biološke funkcije USP42 raka želodca (GC). Tu so bile ravni izraz za USP42 v GC tkivih bistveno višja kot pri ne-tumorskih tkivih. USP42 izraz je pomembno povezana z velikostjo tumorja, stopnjo TNM, bezgavkah metastaze in celotnem preživetju bolnikov z GC. Poleg tega, USP42 utišanje v dveh celičnih linijah GC, AGS in podjetja MKN-45, orožja predvsem zaviral celic, vendar spodbudila G1 fazo aretacijo. Proteini, ki spodbujajo napredovanje celičnega ciklusa (ciklin D1, ciklin E1 in PCNA) so navzdol ureja-USP42 zatreti celic. Poleg tega zaviranje USP42 v GC celicah oslabljeno celično invazijo preko vplivajo na ekspresijo matriksnih metaloproteinaz (MMP) in prehodnih (EMT) regulatorji epitelijskih-mezenhimskih. Na koncu bi USP42 čezmernim potencialni prognostični marker za GC, urediti preživetje in invazivne lastnosti GC, in lahko predstavlja novo terapevtsko molekulsko tarčo za to tumor

Navedba. Hou K, Zhu Z, Wang Y, Zhang C Yu S Zhu Q, et al. (2016) Čezmerno in Biološka funkcija ubikvitin-posebnega proteaz 42 želodčnega raka. PLoS ONE 11 (3): e0152997. doi: 10,1371 /journal.pone.0152997

Urednik: Jung Weon Lee, Seoul National University, Republika Koreja

Prejeto: 29. december 2015; Sprejeto: 22. marec 2016; Objavljeno: 31. marec 2016

Copyright: © 2016 Hou et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

razpoložljivost podatkov. Vse ustrezne podatki so v dokumentu

Financiranje:. Ta študija je bila podprta z Znanstveno raziskovalni projekt Shanghai občinske komisije za zdravje in načrtovanje družine (20124321)

nasprotujočimi si interesi. avtorji so izjavili, da ne obstajajo konkurenčne interese.

Uvod

rak želodca (GC) je peti najpogostejši rak [1], in tretji najpogostejši vzrok smrti zaradi raka [2]. Trenutno je znano, glavni dejavniki tveganja za GC vključujejo okužbo s Helicobacter pylori (H. pylori), bivalno okolje, prehrana, genetske in imunski dejavniki, in kronične bolezni želodca [3]. Prognoza pri bolnikih z GC je na splošno slaba, saj je tumor pogosto metastaziral in pri večini bolnikov so starejši (povprečna starost je 70 let), v času, ko je diagnosticirana. Stopnja preživetja 5 let za GC je poročalo, da je manj kot 25% [4]. Zelo klinično pomembno določiti občutljivih diagnostičnih in prognostičnih označevalcev GC, raziskati molekularne mehanizme razvoja GC, in raziskati nove cilje zdravljenje te bolezni.

ubikvitina specifične proteaze 42 (USP42) je deubiquitinating encim (DUB), ki je pogosto izražena v različnih človeških tkiv [5]. Ubikvitinacije, reverzibilno posttranslacijsko modifikacijo, ki je vključen v več celične procese, kot so celični ciklus, popravila DNA in apoptozo [6, 7]. Vedno več dokazov je pokazala, da je spremenjena funkcija DUB vpleten v patogenezo različnih tumorjev [8]. Čezmerno USP9X, USP9Y, USP10 in USP25 je pokazalo pri raku dojke, ki dvodimenzionalno poliakrilamidni gel elektroforeze in proteomika analizo [9]. Nekaj ​​študije so pokazale, da USP22 prekomerno spodbuja napredovanje raka in slabo prognozo glioma, raka trebušne slinavke, raka materničnega vratu in raka pljuč [10-13]. USP42 je bilo predhodno ugotovljeno, je treba preurediti v akutne mieloične levkemije [14]. Kljub temu, da nam je znano, nobena preiskava je bila izvedena na izraz vzorec in bioloških funkcij v USP42 v PK.

V tej študiji je bilo ugotovljeno, da so precej višje na ravni, v okviru nadzora ravni USP42 mRNA GC tkivih . Nadaljnje klinične značilnosti analiza je pokazala, da je stopnja izražanja USP42 povezana s celokupno preživetje bolnikov GC. Nato smo uporabili RNA interferenca (RNAi) tehnologijo podreti izražanje USP42 v dveh GC celičnih linijah (AGS in MKN-45 celice) in raziskovali proliferacijo, celično cikel in invazivne zmogljivosti v obeh celičnih linijah. Naši podatki kažejo, da je USP42 močan onkogena v GC, ki nam daje prihodnji cilj za terapijo GC.

Materiali in metode

tkivnega vzorca

Skupno 90 GC bolnikih po operaciji na Oddelku za splošne kirurgije, Ljudska bolnišnica, Pudong New District (Shanghai, Kitajska) od februarja 2007 do junija 2009, so bili vključeni v to študijo. Srednja starost bolnikov je bila 56 let (razpon: 34-68 let). Vsi bolniki so imeli soglasje pisno obveščeno. Študija je odobril neodvisni etični odbor Shanghai Pudong District Ljudska bolnišnica (Shanghai, Kitajska). Vzorce tumor tkiva so bili pridobljeni iz vseh bolnikov GC. Medtem, 42 ujema brez tumorske vzorcev, ki se nahajajo > proč od tumorja 3 cm zberemo. Vse kirurške Vzorce smo zamrznili v tekočem dušiku takoj po kirurški odstranitvi in ​​shranili pri -80 ° C, dokler ekstrakcijo RNA.

Celične linije

celične linije dobljeni iz človeškega raka želodca, vključno AGS, SGC-7901, BGC-823, MKN-28 in MKN-45 so bili pridobljeni z inštituta za biokemijo in biologijo celice, kitajske akademije znanosti (Shanghai, Kitajska). Vse celične linije so bile v RPMI vzdržuje 1640 mediju (Gibco, Grand Island, NY, ZDA), dopolnjenem z 10% fetalnega govejega seruma (FBS) in antibiotikov pri 37 ° C v navlaženi atmosferi s 5% CO ₂

so bili izbrani utišanje USP42 jih male interferenčne RNA (siRNA)

siRNA specifično za prehrano USP42 (5'-AUGGCCUCUGGUAUCAAAU-3 '). Ne-specifični pehanje siRNA sekvenca (Sinc) smo uporabili kot negativno kontrolo. V siRNAs so začasno transfektirali v AGS ali MKN-45 celic z uporabo lipofactamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, ZDA) v skladu z navodilom proizvajalca. Poskuse smo opravili 48 ur po transfekciji.

Real-time PCR

Total RNA je bila vzeta s pomočjo TRIzola Reagent (Invitrogen), v skladu z navodili proizvajalca. Reverzno transkripcijo reakcijo smo izvedli z naključnimi heksamerni primerji in transkriptaze kompletu z eksponentom Povratne (Invitrogen). Nastalo cDNA smo uporabili kot predlogo za PCR v realnem času izvedli s standardno SYBR Green PCR kit (Fisher Scientific, Rockford, IL, ZDA) na ABI7300 (uporabno biosistemske, Foster City, CA, ZDA) toplotno ciklerja. GAPDH smo uporabili kot kontrolo ravni vhodnega RNA. so bili izvedeni vsi reakcije z naslednjimi kolesarske parametre, 95 ° C za 10 minut, nato pa 40 ciklov 95 ° C 15 sekund, pri 60 ° C za 45 sekund. Da se preveri specifično ojačanje izdelka, so bili izdelki nato podvržemo analizo disociacija krivulje. Izraz gen je bila izračunana po metodi Δ CT. Vsi podatki predstavljajo povprečje treh ponovitev. Sekvence specifičnih primerjev so bili naslednji: USP42 mRNA naprej, 5'ATGGAAAGCAGGGATGAC-3 ', in USP42 mRNA-reverse, 5'ACGCAGATTGGAACAGAG-3'; GAPDH mRNA naprej, 5'CACCCACTCCTCCACCTTTG-3 ", in GAPDH mRNA nazaj, 5'CCACCACCCTGTTGCTGTAG-3".

Protitelesa in Western blot

protitelesa proti CyclinD1, E-kadherina, β -catenin, Snail1 in GAPDH so bili kupljeni od signalizacijo med celicami tehnologijo (Danvers, MA, ZDA). Protitelesa proti USP42, CyclinE1, PCNA in MMP-9 je bilo iz Abcam (Cambridge, MA, ZDA). Anti-MMP-2 je bil od Epitomics (Burlingame, CA, ZDA). S hrenovo peroksidazo konjugiranih sekundarna protitelesa so bila od Beyotime biotehnologijo (Šanghaj, Kitajska).

Celice smo sprali trikrat s PBS in nato lizirali v predhodno ohlajeno radioimunološki (RIPA) testnem pufru na ledu 10 minut. Po odstranitvi ostankov celic s centrifugiranjem (12,000g, 10 min), se je koncentracija proteinov v supernatantih merjeno z BCA protein analiznega kompleta (Thermo Fisher Scientific). Po vre 5 minut v vzorčnem pufru, so bile enake količine proteinov različnih skupin ločen s SDS-PAGE, in prenese na na nitrocelulozno membrano (Millipore, Bredford, ZDA). Po blokiranjem s 5% posnetega mleka, smo membrane inkubirali s primarnimi protitelesi pri 4 ° C preko noči pri stresanju, čemur sledi inkubacija z ustrezno sekundarnih protiteles 1 h pri sobni temperaturi ob mešanju. Reaktivni protein je bil nato ugotavljamo z ECL kemiluminescenco sistema (Bio-Rad, Richmond, CA, ZDA).

test proliferacije celic, ki jih CCK-8

CCK-8 test je bil izveden s standardnimi metodami v 96-jedi. Na kratko, 3 x 10 ^{3 celice zasejemo na dobro. Na navedenem časovni točki smo raztopino CCK-8 (10 ul v 100 nI RPMI-1640 medij) dodamo v vsako vdolbino in inkubiramo 1 uro. Absorbanco pri 450 nm je bila odkrita s čitalnikom mikroploščnega.}

In vivo tumor ob nude modela miši
bili odobreni

​​Živalski eksperimenti in izvedena v skladu s smernicami za varstvo živali in uporabe odbora Shanghai Pudong District Ljudska Bolnišnica (Shanghai, Kitajska). Dvanajst BALB /c golih miši, starih od 4-5 tednov (SLAC živali, Šanghaj, Kitajska), so se ohranili pod posebnimi pogoji, brez patogenov z uporabo stojalo za laminarni zračni tok in so imeli stalno prost dostop do sterilizirano hrano in avtoklaviranega vodo. Poskusi so se začeli po 1 tednu aklimatizacije. AGS celice (2 x 10 ^{6) smo podkožno injicirali v desni bok golih miših vzpostaviti ksenograftov tumorja ležaja modela. Deset dni po subkutani injekciji, smo miši naključno razdelili v dve skupini (n = 6 /skupina) in IV vbrizgali USP42 siRNA ali Sinc vsebujejo formulacije dvakrat na teden. Najkrajši in najdaljši premer tumorja smo izmerili s kljunastim merilom na 4-dnevnih intervalih in volumen tumorja (mm 3) smo izračunali po naslednji standardni formuli: (najkrajša premer) 2 × (najdaljši premer ) × 0,5. 36 dni po namestitvi tumorjev, smo miši žrtvovali s cervikalno dislokacijo in bili ponovno tumorji. so bile pregledane mokre teže vsakega tumorja. Med poskusnim postopkom, so bile vse miši vsak dan spremljati. No miši umrla pred eksperimentalno koncu.}

Cell ciklusu

Celice tripsiniziramo, sprali dvakrat v PBS in pritrjena preko noči pri 4 ° C v ledeno mrzlo 70% etanola. Celice smo nato dvakrat sprali v PBS in inkubiramo v propidijevim jodidom (PI) barvanjem blažilnik (5 ug /ml PI in 0,25 mg /ml RNaze, Sigma, St. Louis, MO, ZDA) pri sobni temperaturi 30 minut. Celice smo nato analizirali z uporabo z uporabo FACSCAN citometrijo pretoka (BD bioznanosti, San Jose, CA, ZDA). Odstotki celic v G0 /G1, S in G2 /M fazi smo določili z PI barvanjem.

Cell invasion testi

Za merjenje celic invazivni potencial celic, Transwell Teste smo opravili s pomočjo Boyden komora-Študiie obložene (BD Biosciences). Celice smo serum siromašen noči, pridelane in ponovno suspendirali v mediju brez seruma. Celice (1 x 10 ^{5) nato dodamo k zgornji komori. Medij, ki vsebuje 10% FBS, smo dodali k spodnji komori. Po celice inkubiramo pri 37 ° C 24 ur, so bile celice na zgornji površini membrane popolnoma odstranimo z uporabo nasvetov bombaža. Celice migrantski pritrjeni na spodnjo površino bile določene v 4% paraformaldehida in obarvamo z 0,5% kristal vijolično. Število preseljenih celic na spodnji površini membrane smo prešteli pod mikroskopom v petih poljih na 100 ×.}

Bioinformatika analiza

želodcu nabori podatkov raka so prenesli iz NCBI Gene Expression Omnibus baze podatkov (Dostop ID: GSE26253) in The Cancer Genome Atlas (TCGA). Po nadaljnji preiskavi bioloških poti, ki sodelujejo pri želodčnem patogenezi raka skozi USP42 poti, Gene nastavite obogatitev analiza (GSEA) je bila izvedena z javno dostopno programsko opremo iz širših inštitutu MIT (http://www.broad.mit.edu/gsea/~~HEAD=pobj na programska oprema /software_index.html), kot je prej opisano [15]. Za vsak genom, GSEA opredeljuje oceno za bogatenje (-i), ki odraža korelacijo med genom in vzorca.

Statistična analiza

Kaplan-Meier analizo preživetja je bila narejena z Medcalc ( Mariakerke, Belgija). Statistični Paket za družbene vede (SPSS) verzija 17.0 (SPSS Inc., Chicago, IL), je bila uporabljena za druge statistične analize. Rezultati eksperimentov so izraženi kot povprečje ± SD. Studentov t test smo uporabili za primerjavo vrednosti testnih in kontrolnih vzorcev. Hi-kvadrat test je bil uporabljen za ugotavljanje razlik med kategorične spremenljivke. Statistično pomembne razlike v določeni P
. ≪ 0,05

Rezultati

Izražanje USP42 želodčnega raka

Za raziskovanje izražanje USP42 v GC smo izvedli v realnem času analize PCR na GC (n = 90) in vzorci noncancerous tkiva (n = 42). Relativna izraz USP42 mRNA v primerjavi z GAPDH smo izračunali s pomočjo △ Ct metodo. Jasno je, da je bil USP42 mRNA izraz v GC tkivih višja kot v noncancerous tkiva (slika 1A). Za nadaljnje preverjanje te ugotovitve, smo ponovno analizirali podatke mikromrež iz TCGA neodvisna GC CCD. Slika 1B je pokazala očitno čezmerno USP42 človeških GC tkiva v primerjavi z običajnimi tkiva.

S srednjo vrednost 2 ^{-ΔCt (0,550) kot cut-off med nizko raven in na visoki ravni USP42 mRNA izraz, je bilo 90 bolnikov, razvrščeni v nizkih (< 0,550) in visokih USP42 izražanja podskupin (≥0.550). Kot je razvidno iz tabele 1, je USP42 značilno povezana z velikostjo tumorja ( P
= 0.0328), stadij TNM ( P
= 0,0059) in na bezgavkah metastaze ( P
= 0,0184). Vendar pa ni bilo bistvene povezave med UP42 izražanja in druge značilnosti bolnikov, tudi spol in starost bolnikov ob diagnozi in lokacije tumorja. Kaplan-Meier analiza preživetja je pokazala, da je bil skupni čas preživetja bistveno krajši pri bolnikih z višjo USP42 izražanja, kot je pri bolnikih z nižjo USP42 izražanja (slika 1C, P < 0,05), kar je še dodatno potrjena z analizo preživetja na ArrayExpress CCD (Dostop id : GSE26253, slika 1D)}

USP42 siRNA zatreti USP42 se izraz

Primerjava različnih želodca raka celičnih linij je pokazala, da je raven izraz USP42 beljakovin v AGS in podjetja MKN 45 celic večja od tega. za SGC-7901, BGC-823 in MKN-28 celice (slika 2A). Zato so AGS in MKN-45 celice izbrana za nadaljnje poskuse. Če želite raziskati funkcije USP42 na GC, smo potem uničenih USP42 izraz v vrsticah GC celic s siRNA transfekciji. Kot je prikazano na sliki 2B, siRNA specifično za USP42 izrazito zatreti USP42 ekspresijo v AGS in MKN-45 celic z razmerjem dušenja 60,4% in 74,4% oz. Nato smo analizirali, ali bi odprava USP42 izražanja spremeni stopnjo rasti GC celic. Kot je prikazano na sliki 2C, je bilo znatno zmanjšanje stopnje rasti, USP42 zatreti celic v primerjavi z sinc-transfekciji celic.

USP42 siRNA zatreti rast tumorjev na golih miših

Za določitev učinek USP42 siRNA na tumorjev in vivo, je enako število AGS celic subkutano injicirali v golih miših in USP42-siRNA je bil IV vbrizga po nastanka tumorja. Stopnja rasti tumorja pri miših vbrizgali USP42-siRNA je bila bistveno počasneje kot pri miših vbrizgali kontrolno siRNA (slika 3A). Volumen in teža USP42-siRNA tumorjev je manj kot 25%, ki kontrolnih tumorjev (slika 3B). Nadalje, v primerjavi s kontrolnimi tumorji, USP42 in PCNA so bistveno zmanjšala v tumorjih z USP42-siRNA injekcijo (slika 3C).

Umetna G0 /G1 faza aretacija v USP42-potlačenih rakavih celic

Na izvedeti, kako višjo USP42 izraz prizadeti proliferacijo GC celic, smo izvedli Gene Set Enrichment Analysis (GSEA) na TCGA CCD z analizo odnosa USP42 izražanja in genov v Kjotskem enciklopedije genov in genomov (kegg) poti, celičnega cikla. Zanimivo je, da smo ugotovili, da je večja USP42 ekspresijo v pozitivni korelaciji s potjo celičnega cikla kegg pri bolnikih GC osnovi TCGA CCD (slika 4A). Nato smo analizirali distribucijo celičnega ciklusa od GC celic s USP42 rasklapanje. Zatiranja USP42 izraz zmanjšati populacijo celic S fazo in je privedla do G1 priporu v letnem pregledu rasti in MKN-45 celice (slika 4b). Za nadaljnje raziskovanje celični mehanizem, ki je podlaga USP42 inducira proliferacijo celic smo ocenili vsebnosti beljakovin iz proteinov celičnega ciklusa. USP42 rasklapanje bistveno zmanjšala izražanje ciklin D1, ciklin E1 in PCNA (slika 4C). Tako ti rezultati so pokazali, da zmanjšanje ravni USP42 izražanja inhibira ciklin D1, ciklin E1 in PCNA ekspresijo v GC celic, kar lahko povzroči G0 /G1 fazo aretacijo, bistveno zmanjša število S faze celic in zavira proliferacijo celic.

Nizka invazivni potencial USP42-zatreti rakave celice

GSEA je tudi navedla, da je bila USP42 izraz pozitivni korelaciji z metastaz (slika 5A). Če želite preveriti te ugotovitve v in vitro testu smo opisali invazivni potencial-USP42 zatreti celic z uporabo in vitro poskus vdora v Matrigel (slika 5B). Celice-USP42 zatreti razstavljene bistveno manj invazivni potencial kot Sinc-transfekciji celic ( P
< 0,01)., Kar pomeni, da je visoka izraz USP42 okrepljeno tumorsko invazivnost

Razgradnja zunajceličnega matriksa preko matriksnih metaloproteinaz (MMP), je kritičen proces med celične invazije [16]. Kot je prikazano na sliki 5C, utišanje USP42 navzdol reguliranih ekspresije MMP-2 in MMP-9.

Poleg tega se količina beljakovin iz epitelijskih-mezenhimskih prehod (EMT) procesi regulatorji, ki so tesno povezane z metastazami tumorske celice so analizirali z Western blot (Slika 5D). Transfekcija USP42 siRNA bistveno zmanjša raven izražanja beta catenin, Twist in Snail1, hkrati pa povečuje E-kadherina.

Pogovor

Več članov družine DUB je znano, da prispevajo k rakotvornosti vključno USP1 [17], USP2 [18], USP7 [19, 20] in USP22 [10-12, 21], medtem ko so drugi presname navzdol urejeno v človeških, vključno z rakom USP10 [22] in BAP1 [23]. Vendar pa je malo znanega o izrazom vzorec in bioloških funkcij USP42, ki DUB za p53 [24] in histon skupinoCbH2b [25], v človeških rakavih obolenj. V naši raziskavi smo pokazali, prvič, da GC tkiva izražajo visoke nivoje USP42 mRNA v primerjavi z ustreznim ne-tumorske tkiva. Poleg tega je bil USP42 izraz povezana z velikostjo tumorja, stopnjo TNM, bezgavkah metastaze in celotnem preživetju bolnikov GC (slika 1). Naše ugotovitve če dragocene informacije za napovedovanje kliničnega izida bolnikov z GC.

Predpostavljali smo, da lahko USP42 med razvojem GC deluje kot onkogenih dejavnik. Nato smo uporabili RNAi tehnologije, ki se pogosto uporablja za raziskave raka in zdravljenja raka, da podreti USP42 izraz v dveh GC celičnih linij (slika 2b). Spuščanje USP42 izraz učinkovito zmanjšal proliferacijo rakavih celic in vitro (slika 2C) in vivo
(slika 3). Podatki GSEA pokazala združenje poti celičnega cikla s USP42 izražanja (slika 4A). Nato smo uporabili analizo celičnega cikla, ki ga FACS (slika 4B) in analizo ekspresije ciklin D1, ciklin E in PCNA ga Western Blot (slika 4C). Naši podatki so pokazali, da je imel USP42 siRNA zavira rast GC celic z indukcijo G0 /G1 aretacijo.

GC je ena od najpogostejših oblik raka in še vedno resen problem javnega zdravja v svetu. Visoka pojavnost metastaz je še vedno eden od glavnih vzrokov za slabo preživetje bolnikov GC [4]. GSEA na TCGA CCD pokazala pridružitvi metastaz poti s USP42 izražanja v PK (slika 5A). Poleg tega in vitro invasion test je poudaril, da USP42 rasklapanje zmanjšala invazivno sposobnost imortaliziranih GC celičnih linij (slika 5b). Tako so naši podatki kažejo, da se povišana ekspresija USP42 v GC spodbujanje tumorske metastaze in je povezana s kliničnim izidom bolnikov GC. Dalje, smo poskušali raziskati osnovne mehanizme z oceno izražanje MMP in regulatorjev EMT v USP42-zatreti rakavih celic. MMP-2 [26] in MMP-9 [27], so znani za posredovanje razgradnjo ekstracelularnega matriksa in sta povezana z bezgavkah metastazami GC. EMT je vključen v kompleksni patogenezo tumorjev [28]. Tukaj, utišanje USP42 inducirane izražanje glavni dejavnik EMT (E-kadherina), vendar je zmanjšala izražanje MMP in tri znane induktorje EMT (beta catenin, Twist in Snail1) (slika 5C in 5d). Ta odkritja predlagal vlogo USP42 kot gen invazija promotorja preko vpliva na izražanje MMP in regulatorji EMT, čeprav so potrebne nadaljnje študije za pojasnitev natančne mehanizme.

Na kratko, ta študija je pokazala, da je bil USP42 izraz v GC tkivih bistveno povečala. Povečano izražanje USP42 lahko pomembna za napredovanje tumorja in metastaz GC, in lahko služi kot prognostični marker za to bolezen. Naši in vitro rezultati so pokazali, da utišanje USP42 zaviral razmnoževanje celic z indukcijo G0 /G1 aretacijo in zatreti celično invazijo preko MMP in regulatorjev EMT. Tako lahko USP42 bo nova terapevtska molekularno cilj za GC.

Priznanja

Ta študija je bila podprta z Znanstveno raziskovalni projekt Shanghai občinske komisije za zdravje in načrtovanje družine (20124321).

• Plos ONE: Zaščitna Vloga Helicobacter pylori okužbe v Prognoza želodčnega raka: Dokazi iz 2454 bolniki z razjedo Cancer
• Plos ONE: Obratna MicroRNA-26a v plazmi in njeno potencialno diagnostično vrednost želodčnega Cancer