PLoS ONE: Padidėjusi ir biologinė funkcija Ubikvitino-proteazių 42 skrandžio Cancer

Anotacija

Ubikvitino konkrečių proteazės 42 (USP42) yra deubiquitinating fermentų (Dubs) nariu. Į Dubs pakitimai yra susijęs su įvairių navikų patogenezės. Tačiau yra keletas tyrimų dėl išraiškos ir biologinės funkcijos USP42 skrandžio vėžiu (GC). Čia ekspresijos lygis USP42 buvo žymiai didesnis GC audinių nei ne tumoro audiniuose. USP42 išraiška reikšmingai koreliavo su naviko dydžiu, TNM etape, limfmazgių metastazių ir bendro išgyvenamumo pacientams, sergantiems GC. Be to, USP42 slopinimo dviem GC ląstelių linijų, AGS ir MKN-45, ypač slopinamas ląstelių proliferacijos, bet skatino G1 fazės suimti. Baltymai, skatinantys ląstelių ciklą (cikloniniai D1, cikloniniai E1 ir PCNA) buvo žemyn reguliuojama USP42-slopino ląstelių. Be to, slopinimas USP42 GC ląstelių sumažėja ląstelių invaziją per įtakos matricos metaloproteinazių (MMP) ir epitelio-mezenchiminių pereinamojo laikotarpio (EMT) reguliavimo išraiška. Taigi, USP42 raiška gali būti potencialus prognostinė žymeklis GC, reguliuoti išlikimui ir invazinių savybių GC, ir gali tapti nauju gydomąjį molekulinį taikinį šiam naviko

nurodomoji dalis:. Hou K Zhu Z Wang Y, Zhang C, J. S, Zhu Q, ir kt. (2016) Padidėjusi ir biologinė funkcija Ubikvitino-proteazių 42 skrandžio vėžiu. PLoS ONE 11 (3): e0152997. Doi: 10,1371 /journal.pone.0152997

redaktorius: Jungas Weon Lee Seulo nacionalinis universitetas, Korėjos Respublika

Įstojo: Gruodžio 29 2015; Priėmė: Kovo 22, 2016 m Paskelbta: Kovo 31, 2016

Visos teisės saugomos: © 2016 Hou ir kt. Tai atviros prieigos straipsnis platinama pagal Creative Commons Attribution licencija, kuri leidžia nevaržomai naudotis, paskirstymo ir dauginimąsi bet kokioje laikmenoje sąlygomis, su sąlyga, kad pirmasis autorius ir šaltinis įskaitomos

Duomenų prieinamumas:. Visa reikalinga duomenys neviršija popieriaus

finansavimas:. Šis tyrimas buvo paremtas moksliniais tyrimais projekto Šanchajaus savivaldybės Komisijos sveikatos ir šeimos planavimas (20124321)

konkuruojančių interesų. autoriai pareiškė, kad nėra konkuruojantys interesai egzistuoja.

Įvadas

Skrandžio vėžys (GC) yra penktoji dažniausia vėžio [1] ir trečioji pagrindinė priežastis, dėl vėžio mirties [2]. Šiuo metu žinomi pagrindiniai rizikos veiksniai GC yra Helicobacter pylori (H. pylori) infekcija, gyvenamąja aplinka, mityba, genetinius ir imuninės veiksnius, ir lėtinis skrandžio ligas [3]. Tarp pacientų, sergančių GC prognozė paprastai yra menkas, nes navikas dažnai Metastazė ir dauguma pacientų yra vyresnio amžiaus (amžiaus mediana yra virš 70 metų) tuo metu ji diagnozuota. 5 metų išgyvenamumas GC Pranešama, kad mažiau nei 25% [4]. Tai labai klinikinės svarbu nustatyti jautrius diagnostikos ir prognozavimo žymenų GC, tirti molekulinius mechanizmus GC plėtrą, ir ištirti naujas terapijos tikslus šios ligos.

Ubikvitino konkrečių proteazės 42 (USP42) yra deubiquitinating fermentas (DUB), kuri yra plačiai išreikšta įvairiose žmogaus audinių [5]. Ubiquitination, grįžtamasis potransliacinis modifikacija, dalyvauja kelių mobiliojo ryšio procesų, pavyzdžiui, ląstelės ciklo, DNR remonto ir apoptozė [6, 7]. Daugėja įrodymų, parodė, kad pakitęs dub funkcija susijęs su įvairių navikų patogenezės [8]. Padidėjusi USP9X, USP9Y, USP10 ir USP25 buvo atskleista krūties vėžio dvimatis poliakrilamido gelio elektroforezės ir proteomiką analizę [9]. Keletas tyrimų parodė, kad USP22 raiškos skatino vėžio progresavimą ir prastos prognozę glioma, kasos vėžio, gimdos kaklelio vėžio ir plaučių vėžio [10-13]. USP42 anksčiau buvo nustatyta, kad būti pertvarkyti ūmaus mieloleukemija [14]. Tačiau, mūsų žiniomis, joks tyrimas buvo atliktas dėl išraiškos modelio ir biologinių funkcijų dėl USP42 GC.

Šiame tyrime buvo rasta USP42 iRNR lygiai GC audinių būti nepaprastai aukštesnės lygių kontrolės , Daugiau klinikinių charakteristikų analizė parodė, kad išraiška lygis USP42 buvo susijęs su bendro išgyvenamumo GC pacientams. Mes tada taikomas RNR interferencijos (RNRi) technologija numušti iš USP42 išraišką dviejų GC ląstelių linijas (AGS ir MKN-45 ląstelių) ir tyrė proliferaciją, ląstelės ciklą ir invazinių gebėjimus tiek ląstelių linijų. Mūsų duomenys rodo, kad USP42 yra stiprus onkogeno GC, teikia mums ateityje tikslą GC terapija.

Medžiagos ir metodai

Audinių mėginiai

90 GC viso pacientai, kuriems atliekama operacija tuo bendrosios chirurgijos katedros Liaudies ligoninė, Pudong New District, (Šanchajus, Kinija) nuo 2007 vasario iki 2009 m buvo įtraukti į šį tyrimą. Vidutinė pacientų amžius buvo 56 metai (ribos: 34-68 metai). Visi pacientai buvo suteikta raštišką sutikimą. Tyrimas buvo patvirtinta nepriklausomų etikos komiteto Shanghai Pudong District Liaudies ligoninė (Šanchajus, Kinija). Naviko audinio mėginiai buvo imami iš visų GC pacientams. Tuo tarpu, 42 atitiko ne-navikinių mėginius, esančių > 3 cm atstumu nuo naviko buvo surinkti. Visi chirurginiai mėginiai buvo įšaldytos skystu azotu iš karto po chirurginės rezekcija, ir saugomi -80 ° C iki RNR gavyba.

Mobilaus ryšio linijos

Mobilaus ryšio linijos, pagaminti iš žmogaus skrandžio vėžio, įskaitant AGS, SGC-7901, BGC-823, MKN-28 ir MKN-45 buvo gauta iš Biochemijos instituto ir ląstelių biologijos, Kinijos mokslų akademijos (Šanchajus, Kinija). Visi ląstelių linijos ir buvo išlaikytos RPMI 1640 terpė (Gibco, Grand Island, NY, JAV), papildytoje su 10% vaisiaus galvijų serumo (FBS) ir antibiotikų 37 ° C temperatūroje drėgnoje atmosferoje su 5% CO _2.

atrinko Triukšmo slopinimo ir USP42 iki sirnr (siRNA) pervežimas

siRNA konkretaus žmogaus USP42 (5'-AUGGCCUCUGGUAUCAAAU-3 "). Nespecifinis užsiropštimas siRNR seka (Sinc) buvo naudojamas kaip neigiama kontrolė. Į siRNAs buvo laikinai perkeltų į AGS arba MKN-45 ląstelių naudojant lipofactamine 2000 (Invitrogen, Karlovi Varai, CA, JAV) pagal gamybos nurodymu. Tyrimai buvo atliekami 48 h po transfekciją.

Realaus laiko PGR

Viso RNR išskirta naudojant TRIzol reagento (Invitrogen) pagal gamintojo instrukcijas. Atvirkštinės transkripcijos reakcija buvo atliekama su atsitiktinių heksamerinių gruntų ir viršuje atvirkštinės transkriptazės Kit (Invitrogen). Gautas kDNR buvo naudojamas kaip šablonas realiojo laiko PGR atliekama naudojant standartinį SYBR Žalioji PGR rinkinys (Fisher Scientific, Rockford, IL, JAV) ABI7300 (Taikomosios Biosistem, Foster City, CA, JAV) termocikleriu. GAPDH buvo naudojamas kaip kontrolės įvesties RNR lygmeniu. Visi reakcijos buvo atliekami naudojant šiuos dviračiu parametrus, 95 ° C temperatūroje 10 min, po to 40 ciklų 95 ° C temperatūroje 15 S, 60 ° C temperatūroje 45 s. Patikrinti konkretaus produkto amplifikacija, produktai buvo pajungiamas į disociacijos kreivės analizę. Genų ekspresija buvo apskaičiuojamas naudojant Δ Ct metodą. Visi duomenys yra trijų kartotinių vidurkį. Specifinių pradmenų sekas buvo taip: USP42 iRNR priekį, 5'-ATGGAAAGCAGGGATGAC-3 ", ir USP42 iRNR-atgal, 5'-ACGCAGATTGGAACAGAG-3"; GAPDH iRNR priekį, 5'-CACCCACTCCTCCACCTTTG-3 "ir GAPDH iRNR pakeisti, 5'-CCACCACCCTGTTGCTGTAG-3".

Antikūnai ir Imunoblotingo

Antikūnai prieš CyclinD1 E-cad, β -catenin, Snail1 ir GAPDH buvo įsigytas iš ląstelių Signalizacijos technologijos (Danvers, MA, JAV). Antikūnai prieš USP42, CyclinE1, PCNA ir MMP-9 buvo iš Abcam (Cambridge, MA, JAV). Anti-MMP-2 buvo iš Epitomics (Burlingame, CA, JAV). Krienų peroksidazės-konjuguoto antriniai antikūnai buvo iš Beyotime biotechnologijos (Šanchajaus, Kinijos).

Ląstelės buvo tris kartus plaunamos PBS ir tada lizuojamos iš anksto atšaldytą radioimunoprecipitacijos (Ripa) tiriamojo buferinio tirpalo ant ledo 10 min. Pašalinus ląstelių nuolaužų centrifuguojant (12,000g, 10 min), baltymų koncentracija nuopile buvo matuojamas BCA baltymų bandymo komplektas (Thermo Fisher Scientific). Po to, kai virinant 5 min pavyzdžių buferio, vienodo dydžio baltymų įvairių grupių buvo atskirtos SDS-PAGE, ir perkeliamas ant į nitroceliuliozės membranos (Millipore ", Bredford, JAV). Po blokavimo su 5% lieso pieno, membranos buvo inkubuojamos su pirminių antikūnų, esant 4 ° C temperatūroje per naktį maišant tirpalą, po to inkubacijos su atitinkamomis antriniai antikūnai 1 val kambario temperatūroje maišant tirpalą. tada reaktyvaus baltymo buvo nustatyta naudojant ECL chemiliuminescencine sistemą (Bio-Rad, Richmond, CA, USA).

Mobilusis proliferacijos tyrimu pagal CCK-8

CCK-8 tyrimas buvo atliekamas pagal standartinius metodus 96 duobučių patiekalų. Trumpai tariant, 3 × 10 ^{3 ląstelės buvo gerai pasėjamos asm. Už nurodytą laiko taške, CCK-8 tirpalas (10 mikrol, esantys 100μl RPMI-1640 terpėje) buvo įtraukta į kiekvieną šulinėlį ir inkubuojami 1 h. Optinių 450 nm buvo aptiktas naudojant microplate skaitytuvą.}

in vivo naviko guolio nuogas pelių modelį

Gyvūnų eksperimentai buvo patvirtinta ir vykdoma pagal gyvūnų priežiūrai ir naudojimui komiteto gairių Shanghai Pudong District Liaudies ligoninė (Šanchajus, Kinija). Dvylika BALB /c nude amžius 4-5 savaičių amžiaus pelėms (SLAC Gyvūnų, Šanchajus, Kinija) buvo palaikomi tam tikromis patogenais neužkrėstų sąlygomis naudojant laminarinio oro srauto stovo ir turėjo nuolatinį nemokamą prieigą prie sterilizuoti maisto ir autoklavinio vandeniu. Eksperimentai buvo pradėti po 1 savaitės aklimatizacija. AGS ląstelės (2 × 10 ^{6) buvo po oda švirkščiamas į dešinio krašto ir nuogas pelių nustatyti svetimo naviko guolio modelį. Dešimt dienų po poodinės injekcijos, pelėms buvo atsitiktinai suskirstyti į dvi grupes (n = 6 /grupė) ir IV sušvirkšta USP42 siRNR arba Sinc, kurių sudėtyje yra formuluotes du kartus per savaitę. Trumpiausias ir ilgiausias skersmuo naviko buvo matuojamas apkabos bent 4 dienų intervalais, ir naviko tūris (mm 3) buvo apskaičiuojamas pagal šią standartinę formulę: (trumpiausias skersmens) 2 × (ilgiausias skersmuo ) × 0,5. 36 dienų po naviko vietą, pelės buvo paaukojo slankstelių dislokaciją ir augliai buvo susigrąžinta. buvo išnagrinėti Wet svoriai Kiekvieno auglio. Bandymo eigoje, visos pelės buvo stebimi kiekvieną dieną. Ne pelių mirė prieš eksperimentinio pasekmės.}

Mobilusis ciklo analizė

Ląstelės buvo tripsinizuojamos, du kartus plaunamas PBS ir fiksuoto per naktį 4 ° C temperatūroje, ledinio 70% etanolio. Po to ląstelės buvo plaunamos du kartus PBS, ir inkubuojami propidiumo jodido (PI) dažymo buferiniame tirpale (5 mikrogramai /ml PI ir 0,25 mg /ml RNaze, Sigma, St. Louis, MO, JAV) kambario temperatūroje 30 min. Ląstelės buvo analizuojami naudojant naudojant FACScan tėkmės citometrijos (BD Biosciences, San Chosė, CA, JAV). Iš ląstelių G0 /G1, S ir G2 procentai /M etapas buvo nustatytas PI dažymo.

Mobilusis invazija tyrimai

Jei išmatuoti mobilųjį invazinių ląstelių potencialą, Transwell tyrimai buvo atlikti naudojant Matrigel dengtos Boyden kamera (BD biomokslai). Ląstelės buvo serumo-alkanas per naktį, surenkamos, ir resuspenduojamos terpėje serumo neturinčioje. Ląstelės (1 × 10 ^{5) buvo tada buvo įtraukta į viršutinio kameroje. Terpę, turinčią 10% FBS buvo įtraukta į apatinę kamerą. Po to, kai ląstelės buvo inkubuojamos 37 ° C temperatūroje 24 valandų, kad ant viršutinio paviršiaus membranos ląstelės buvo visiškai pašalinti naudojant medvilnės antgalius. Migrantas ląstelės, pridedamus prie apatinio paviršiaus buvo nustatytas 4% paraformaldehido ir tamsintas su 0,5% violetinei. Iš migravo ląstelių ant apatinio paviršiaus membranos skaičius buvo skaičiuojamas pagal mikroskopu penkiose srityse esant 100 ×.}

Bioinformatikos analizė

skrandžio vėžio rinkiniai buvo atsisiųsti iš NCBI genų ekspresijos Omnibus duomenų bazėje (Prieigos ID: GSE26253) ir vėžio genomo atlasas (TCGA). Toliau tirti biologinius kelius dalyvauja skrandžio vėžio patogenezės per USP42 keliu, Genų nustatyti sodrinimo analizė (GSEA) buvo atliktas naudojant viešai prieinamą programinę įrangą iš Broad instituto MIT (http://www.broad.mit.edu/gsea/~~HEAD=pobj programinė įranga /software_index.html) kaip buvo aprašyta anksčiau [15]. Už kiekvieną genų rinkinys, GSEA apibrėžia sodrinimo rezultatą (ES), kuris atspindi tarp genų rinkinį ir imties koreliacijos.

Statistinė analizė

Kaplan-Meier išgyvenamumo analizė buvo atliekama naudojant Medcalc ( Mariakerke, Belgija). Statistikos paketo socialinių mokslų (SPSS) versija 17.0 (SPSS Inc., Čikaga, IL) buvo naudojama kita statistine analize. Rezultatai eksperimentuose išreikštas vidurkis ± SD. Stjudento t testas buvo naudojamas palyginti vertes bandymo ir kontrolinių mėginių. Chi-kvadrato testas buvo naudojami siekiant nustatyti skirtumus tarp kategorinių kintamųjų. Statistiškai reikšmingi skirtumai buvo nustatyti kaip turintys P
. ≪ 0,05

Rezultatai

išraiška USP42 skrandžio vėžio

ištirti USP42 išraiška GC, mes atlikti realaus laiko PGR analizė GC (n = 90) ir noncancerous audinio mėginiai (n = 42). Santykinis išraiška USP42 mRNR palyginti su GAPDH buvo apskaičiuotas naudojant △ Ct metodą. Aišku, USP42 iRNR raiška buvo didesnė GC audinių nei noncancerous audinių (pav 1A). Norėdami dar kartą patikrinti šią išvadą, mes vėl analizavo microarray duomenis iš TCGA nepriklausoma GC rinkinį. Pav 1B parodė akivaizdų Padidėjusi USP42 žmogiškųjų GC audinių, palyginti su sveikų audinių.

Naudojant vidutinė vertė 2 ^{-ΔCt (0,550) kaip ribinis tarp žemo lygio ir aukšto lygio USP42 iRNR raiška, 90 pacientai buvo suskirstyti į mažas (< 0,550) ir aukšto USP42 raiškos pogrupiuose (≥0.550). Kaip parodyta 1 lentelėje, USP42 buvo reikšmingai susijęs su naviko dydį ( P
= 0.0328), TNM etape ( P
= 0,0059) ir limfmazgių metastazių ( P pervežimas = 0,0184). Tačiau nebuvo reikšmingas ryšys tarp UP42 saviraiškos ir kitų pacientų charakteristikas, įskaitant pacientų lytį ir amžių, diagnostikos ir naviko vietą. Kaplan-Meier išgyvenamumo analizė parodė, kad bendras išgyvenamumas laikas buvo žymiai trumpesnis pacientams su aukštuoju USP42 išraiška, nei pacientams, sergantiems mažesnę USP42 išraiškos (pav 1C, p < 0,05), o tai dar labiau patvirtino išgyvenimo analizė ArrayExpress rinkinį (Prieigos id : GSE26253 pav 1D)}

USP42 siRNR slopino USP42 Žodžių junginys

palyginimas įvairių skrandžio vėžio ląstelių linijas parodė, kad pasakymas lygis USP42 baltymų AGS ir MKN-45 ląstelių yra didesnis nei nurodyta. iš SGC-7901, BGC-823 ir MKN-28 ląstelių (pav 2a). Todėl, AGS ir MKN-45 ląstelių buvo pasirinkta vėlesnių eksperimentų. Ištirti USP42 funkcijas GC, mes trankyti sudėjo USP42 išraišką GC ląstelių linijų siRNA transfekciją. Kaip parodyta Fig 2B, siRNR specifinis USP42 žymiai slopinamas USP42 ekspresiją AGS ir MKN-45 ląstelių su slopinimo santykis 60,4% ir 74,4%, atitinkamai. Mes tada analizuojama, ar slopinimas USP42 išraiškos pakeistų augimo tempą GC ląsteles. Kaip parodyta pav 2C, buvo reikšmingai sumažėjo augimo tempas USP42-slopino ląstelių, lyginant su Sinc-perkeltų ląstelių.

USP42 siRNR slopino naviko augimą nude pelės

Norėdami nustatyti iš USP42 siRNA poveikis tumorogeniš- in vivo, tiek pat AGS ląstelių buvo suleista po oda į nuogas pelių ir USP42-siRNR buvo IV švirkščiamas po naviko susidarymą. Navikas augimo tempas pelių sušvirkšta USP42-siRNA buvo žymiai lėtesnis negu pelių sušvirkšta valdymo siRNA (pav 3a). Tūris ir svoris USP42-siRNR navikų buvo mažesnis nei 25%, kad kontrolės navikų (pav 3b). Be to, palyginti su kontrolinės grupės navikų, USP42 ir PCNA buvo žymiai sumažėjo auglių su USP42-siRNA injekcijos (pav 3C).

Dirbtinis G0 /G1 fazės sustojimas USP42-slopino vėžinių ląstelių

Jei išsiaiškinti, kaip aukštąjį USP42 išraiška įtakos GC ląstelių proliferaciją, mes atliekame geną sodrinimas analizė (GSEA) ant TCGA rinkinį analizuojant USP42 saviraiškos ir genų ryšį, esantys Kijotas enciklopedija genų ir genomų (KEGG) ląstelių ciklo keliu. Įdomu tai, mes nustatėme, kad didesnis USP42 išraiška buvo teigiamai koreliuoja su KEGG ląstelių ciklo keliu GC pacientų pagrįstų TCGA rinkinį (pav 4A). Mes tada analizuojami ląstelės ciklo paskirstymą GC ląstelių su USP42 triuškinantis. Slopina USP42 išraiška sumažėjo S fazės ląstelių populiaciją, ir paskatino G1 arešto AGS ir MKN-45 ląstelių (pav 4b). Toliau tirti ląstelių mechanizmo, lemiančio USP42 sukeltas ląstelių proliferaciją, buvo įvertinti baltymų koncentracija ląstelės ciklo baltymus. USP42 nokdaunas gerokai sumažino cikloniniai D1, cikloniniai E1 ir PCNA (pav 4c) išraiška. Taigi, šie rezultatai parodė, kad į USP42 išraiškos "išjungti cikloniniai D1, cikloniniai E1 ir PCNA išraišką GC ląstelių lygio sumažėjimas, kuris gali sukelti G0 /G1 fazės arešto, žymiai sumažinti S fazės ląstelių skaičių ir slopina ląstelių proliferaciją.

Žemas invazinės potencialo USP42-nutylėtų vėžinės ląstelės

GSEA taip pat nurodė, kad USP42 išraiška buvo teigiamai koreliuoja su metastazių (pav 5A). Norėdami patikrinti šias išvadas in vitro tyrime, mes išnagrinėjo invazinių iš USP42-slopino ląstelių potencialą, naudojant in vitro Matrigel invazija tyrimas (pav 5b). Į USP42-slopinamas ląstelės eksponuojami žymiai mažiau invazinės potencialą nei Sinc-perkeltų ląstelių ( P
< 0,01)., O tai rodo, kad aukštos raiškos USP42 sustiprintas naviko invazinis

blogėjimo tarpląsteliniame per matricos metaloproteinazių (MMP), yra labai svarbus procesas, kurio metu ląstelės invazijos [16]. Kaip parodyta Fig 5C, triukšmo slopinimo iš USP42 downregulated, kad MMP-2 ir MMP-9 išraiška.

Be to, sudėtyje esantis baltymų lygiai epitelio-mezenchiminių perėjimas (EMT) reakcijų grandinei reguliavimo, kuris yra glaudžiai susijusios su metastazės auglio ląstelės, buvo analizuojami Western Blot (pav 5D). Transfekciją USP42 siRNA žymiai sumažino raiškos lygius beta-kateninai, pasukti ir Snail1, didinant E-cad.

Diskusijos

Keletas nariai DUB šeimos yra žinoma, kad prisidėti prie kancerogenezėje, įskaitant USP1 [17], USP2 [18], USP7 [19, 20] ir USP22 [10-12, 21], o kitos Dubs yra žemyn reguliuojama žmogaus vėžio, įskaitant USP10 [22] ir BAP1 [23]. Tačiau mažai žinoma apie išraiška modelio ir biologinių funkcijų USP42 A DUB už p53 [24] ir Histonas H2B [25], žmogaus vėžiui. Mūsų tyrime, mes parodė, pirmą kartą, kad GC audiniai išreikšti aukšto lygio USP42 mRNR, palyginti su atitinkamomis ne-navikinių audinių. Be to, USP42 išraiška buvo susijęs su naviko dydžiu, TNM etape, limfmazgių metastazių ir bendro išgyvenamumo GC pacientų (1 pav). Mūsų išvados suteikė vertingos informacijos klinikinės baigties prognozavimas sergantiems pacientams GC.

prielaida, kad USP42 gali veikti kaip onkogeninių faktorius "per GC plėtrai. Mes tada taikomas RNAi technologiją, kuri yra plačiai naudojamas vėžio tyrimus ar vėžio gydymo, kad numušti USP42 išraišką dviejų GC ląstelių linijas (pav 2b). Sumažinus USP42 išraiška efektyviai sumažėjo vėžinių ląstelių proliferaciją in vitro (pav 2C) ir vivo
(3 pav). GSEA duomenys atskleidė ląstelių ciklo keliu su USP42 išraiškos (pav 4a) asociacija. Mes tada pritaikė ląstelių ciklo analizę FACS (pav 4b) ir išraiškos analizę cikloniniai D1, cikloniniai E ir PCNA Vakarų dėmė (pav 4c). Mūsų duomenys parodė, kad USP42 siRNR turėjo slopinančio poveikio GC ląstelių augimą per skatinančius G0 /G1 suimti.

GC yra vienas iš labiausiai paplitusių vėžio formų ir toliau būti rimta visuomenės sveikatos problema visame pasaulyje. Didelis sergamumas metastazių yra dar viena iš pagrindinių priežasčių, dėl prastos išlikimo GC pacientų [4]. GSEA ant TCGA rinkinį atskleidė metastazių keliu asociacijos USP42 raiškos GC (pav 5A). Be to, in vitro, invazija tyrimas nurodė, kad USP42 nokdaunas sumažėjo invazinių gebėjimas imortalizuotų GC ląstelių linijas (pav 5B). Taigi, mūsų duomenimis, padidėjusi išraiška USP42 GC gali skatinti navikų metastazių ir yra susijęs su klinikine rezultatus GC pacientams. Be to, mes bandėme ištirti pagrindinius mechanizmus įvertinti MMP ir EMT reguliavimo išraišką USP42-slopino vėžinių ląstelių. MMP-2 [26] ir MMP-9 [27] yra žinoma, kad tarpininkauti neląstelinio matricos degradaciją ir yra susiję su su limfmazgių metastazės GC. EMT dalyvauja kompleksinės patogenezę navikų [28]. Čia triukšmo slopinimo ir USP42 paskatino pagrindinio veiksnio EMT (E-cad) išraiška, bet sumažino MMP raišką ir trys žinomi sužadinančių EMT (beta-kateninai, pasukti ir Snail1) (pav 5C ir 5d). Šie atradimai pasiūlė USP42 vaidmenį kaip invazija promotoriaus geno per įtakos MMP ir EMT reguliavimo išraišką, nors tolesni tyrimai reikalingi tiksliai išaiškinti mechanizmus.

Apibendrinant, šis tyrimas parodė, kad USP42 išraiška buvo žymiai padidėjo GC audiniuose. Padidėjęs USP42 išraiška gali būti svarbus naviko progresavimo ir metastazių GC, ir gali pasitarnauti kaip prognostinis persekiotoją šios ligos. Mūsų in vitro duomenys rodo, kad triukšmo slopinimo ir USP42 slopina ląstelių proliferaciją per skatinančius G0 /G1 suėmimą ir slopino ląstelių invaziją per MMP ir EMT reguliatoriai. Taigi, USP42 gali būti romanas terapinis molekulinės taikiniu GC.

Padėka

Šis tyrimas parėmė mokslinio tyrimo projekto Šanchajaus savivaldybės Komisijos Sveikatos ir šeimos planavimas (20124321).

• PLoS ONE: Apsauginis vaidmuo Helicobacter pylori infekcijos prognozė skrandžio vėžys: Įrodymai iš 2454 pacientai su skrandžio vėžiu
• PLoS ONE: Cirkuliacinis MicroRNA-26a plazmoje ir jo galimą diagnostinę vertę skrandžio vėžio