Plos ONE: Čezmerno Lin28 Zmanjša Chemosensitivity želodčnega raka celic v oksaliplatinu, Paclitaxel, doksorubicin in fluorouracil v delu preko microRNA-107

Povzetek

Višja Lin28 izraz je povezan s slabšimi patoloških tumorskih odzivov v lokalno napredno bolniki želodca z rakom v postopku novi dopolnilni kemoterapiji. Vendar značilnosti Lin28 in njegov mehanizem delovanja odpornosti na kemoterapije, je še vedno nejasno. V tej raziskavi smo ugotovili, da je transfekcijo Lin28 v želodčnih rakavih celic (MKN45 in MKN28) povečal odpornost na kemoterapijo drog oksaliplatinu (OXA), paclitaxel (PTX), doksorubicin (ADM), in fluorouracila (5-Fu) v primerjavi pri rakavih celicah želodca transfekciji s kontrolno vektor. Ko je rasklapanje Lin28 ekspresijo z Lin28 male interferenčne RNA (siRNA) ovrednoteni in vitro, smo ugotovili, da je odpornost proti kemo-drog zmanjša. Poleg tega smo ugotovili, da Lin28 up-ureja C-myc in P-gp in dol ureja Cylin D1. Končno smo ugotovili, da je miR-107 tarča microRNA od Lin28 in da sodeluje v mehanizmu odpornosti kemoterapije. Naši rezultati kažejo, da bi lahko bil Lin28 /miR-107 pot ena od mnogih poti signalnih ureja Lin28 in so povezani z rakom želodca kemo-odpornost

Navedba. Teng R, Hu Y, Zhou J, Seifer B, Chen Y, Shen J, et al. (2015) Čezmerno Lin28 Zmanjša Chemosensitivity želodčnega raka celic v oksaliplatinu, Paclitaxel, doksorubicin in fluorouracil v delu preko microRNA-107. PLoS ONE 10 (12): e0143716. doi: 10,1371 /journal.pone.0143716

Urednik: Natasha Kyprianou, University of Kentucky College of Medicine, UNITED STATES

Prejeto: 23. junij, 2015; Sprejeto: 8. november, 2015; Objavljeno: 4. december 2015

Copyright: © 2015 Teng et al. To je prost dostop članek razširja pod pogoji Creative Commons Attribution License, ki omogoča neomejeno uporabo, distribucijo in razmnoževanje v katerem koli mediju, pod pogojem, da prvotni avtor in vir knjižijo

Razpoložljivost podatkov: Vsi pomembni podatki so v papir in njene dodatne informacije datotek

Financiranje:. Zagotovljena je bila podpora s province Zhejiang Natural Science Foundation Kitajska: LQ13H160014 [http://www.zjnsf.gov.cn/b/home.aspx] .

nasprotujočimi si interesi:. avtorji so poročali, da ne obstajajo konkurenčni interesi

Uvod

rak želodca je pogost klinični prebavni sistem maligni tumor s stopnjo smrtnosti, da je na tretjem mestu v svetu [1]. Naša država je področje, ki je nagnjena k rakom želodca. V zadnjih letih je bil neo-adjuvantno kemoterapijo jemljejo bolniki z rakom želodca, da se podaljša preživetje. Kljub temu pa je 5-letno preživetje tistih z napredovalim rakom želodca, še vedno nižja od 30% [2]. Odpornost na kemoterapijo je glavni vzrok neuspeha raka želodca in drugih tumorskih zdravljenja. Zato mehanizem rezistence kemoterapije raka želodca trenutno velik problem v študijah raka želodca.

Lin28 je visoko ohranjen RNA-vezavni protein, ki je bilo dokazano, da sodelujejo pri induciranju pluripotentnih matičnih celic in vzdrževanje stebla celični podobne celice raka. Nedavne študije so poročali, da odklonski aktivacija Lin28 sovpada tudi z prognozo različnih vrst raka, vključno z rakom dojk, jajčnikov, pljuč, debelega črevesa in rak jeter [3-6]. Naši prejšnji študija je pokazala, da je Lin28 izraz povezana tudi s slabim preživetja bolnikov z rakom želodca [7], in druga študija je pokazala, da je izražanje Lin28 povezana z odpornostjo paklitakselom v človeških rakavih celic dojke [8]. Poleg tega je Lin28 izraz povezan s patološko odzivom tumorja pri lokalno napredovali bolnikih želodca z rakom, ki neo-adjuvantno kemoterapijo. Vendar pa je molekularni mehanizem, ki je podlaga te ugotovitve ostaja nejasno, [9].

Lin28 spodbuja tumorigeneze jih zatira zaviralnih miRNAs kot je oddajal-7 družine, ki je povezana z odpornosti na zdravila [8]. Vendar pa, kot ciljno miRNA za Lin28, miR-107 se redko omenja kot dejavnik odpornosti zdravilo raka želodca. MIR-107 ekspresijo je znižala v številnih malignih bolezni, kot je rak debelega črevesa, raka glave in vratu, raka trebušne slinavke in rak želodca [10-13]. MIR-107 ureja nadaljnjim genov, ki so vključeni v celično diferenciacijo in proliferacijo, presnovo, stresnih odzivov in nastanek krvnih žil [10-14]. V tej študiji smo raziskovali Lin28 /miR-107 pot in njeno vlogo pri odpornosti želodca rakave celice na kemoterapijo. Smo lahko določijo novo potencialno tarčo za raka želodca kemoterapije odporna.

Materiali in metode

1. Celične kulture in plazmidov transfekciji

Na želodčni rak humane celične linije MKN-28 in MKN-45 smo dobili v dar od profesorja Sung Hoon Noh (Yonsei University College of Medicine, Seoul, Koreja). Celice smo kultivirali v RPMI 1640 medija (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ZDA), dopolnjenem z 10% fetalnega govejega seruma (MP Biomedicals, Costa Mesa, CA, USA) v navlaženi atmosferi, ki vsebuje 5% CO2 pri 37 ° C. Oksaliplatin, paklitaksel, doksorubicina in fluorouracilom smo nabavili pri Sigma (St. Louis, MO). Plazmid pcDNA3.1-Lin28 je transfekciji s Xtreme GENE HP DNK transfekciji Reagent (Roche Applied Science, Mannheim, Nemčija) v skladu s protokolom proizvajalca. Stabilne Lin28 izražanje klone drugim izbranim in kultivirani z ustrezno vsebujejo neomicin RPMI 1640 medija.

2. Realnem času kvantitativne PCR

Real-time q-PCR analize so bile izvedene s sistemom za zaznavanje ABI Prism 7500 zaporedja (Applied Biosystems, Foster mesta, CA, ZDA). Na kratko, je bil 20-ul reakcijsko zmes, ki vsebuje 2 xl cDNA predloge in vsak od čutnimi in anti-čutnimi primerji (Promega Gotaq q-PCR® Master Mix sistema, Madison, WI, ZDA) 1 p dopolnjena kot sledi: denaturacijo pri 95 ° C za 10 minut in 40 ciklov 95 ° C za 30 sekund, 60 ° C za 30 sekund in 72 ° C za 40 sekund. Realnem času q-PCR reakcije smo izvedli v trojniku za vsak vzorec, in povprečna vrednost je bila uporabljena za izračun ravni mRNA. Kvantitativna analiza je bila izvedena z metodo primerjalne CT. V Lin28 in miR-107 število kopij v tumorskih tkivih so normalizirani na mRNA kopirate na vzdrževalni gen gliceraldehidne 3-fosfat dehidrogenaze (GAPDH), da dobimo vrednost 2 ^{-Δ CT. V začetnih oligonukleotidov sekvence so v tabeli na naslednji 1.}

3. Celica drog odpornost Vsebnost

celica preživetja je bila izmerjena z uporabo MTT [3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolijevega bromid] test (Amresco, Solon, OH, ZDA) po protokolu proizvajalca. Celice smo zasejali v 96 vdolbinami z gostoto 5 * 10 ^{3 celic na vdolbino. Po obdelavi smo celice inkubirali s 5 mg /ml MTT 4 h. Nato smo medij odstranili in dodali 150 ml sterilizirane raztopine DMSO, čemur sledi inkubacija pri 37 ° C 4 ure. Vrednost OD smo pridobili na valovne dolžine 570 nm in 630 nm. Vrednost OD (570 nm do 630 nm), lahko posredno odražajo število celic in delovanje v skladu z naslednjo formulo: stopnja preživetja = dozirano skupino OD570-630 /nobena skupina odmerek OD570-630. Krivulja koncentracije preživetja celic /drog je bil nato ustvarjen.}

4. Western Blot Analiza

Celične lizate smo ločili z elektroforezo na 4-15% natrijevega dodecil sulfata, poliakrilamid gradienta minigel (SDSPAGE) (Bio-Rad, Hercules, CA) in elektroforetsko prenesemo v nitrocelulozno membrano (Amersham Pharmacia , Piscataway, NJ). Western blots bilo zaznati s protitelesi proti Lin28, GAPDH (Santa Cruz Biotechnology, v Santa Cruz, CA), kaspazah in razcepljenih kaspazah, ciklin D1, NF-kB (celična signalizacija, Beverly, MA), CDK6, C-myc (Abcam Trading ( Shanghai) Company, Šanghaj, Kitajska), P-gp, in Bcl-2 (Huan Biotechnology, Peking, Kitajska). Beljakovinsko trakovi so odkrili z okrepljenim kemiluminescence (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ).

5. Flow citometrijo Vsebnost

Cells (2 * 10 ^{5 na vdolbino) smo nanesli v šestih vdolbinicami in obdelamo s paklitakselom. Po 72 urah smo celice določene v 70% etanolu in obarvamo s propidijevim jodidom (PI). Vsebina DNA smo analizirali z epov Profil II pretočnim citometrom (Beckman Coulter, Fullerton, CA) s programsko opremo multicycle (Phoenix Flow Systems, San Diego, CA). Vse poskuse smo ponovili vsaj dvakrat. PI je bila uporabljena tudi v povezavi s aneksina (BD Biosciences, San Jose, CA), da se ugotovi, ali so bile celice izvedljivo, apoptotske ali nekrotične.}

6. Mirna Transfekcija in zaznavanje

Celice smo nanesli v gojitvenih ploščah šest tudi in transfekciji s 50 nm pre-miR-107, ki so kupljeni od Applied Biosystems (Carlsbad, CA) ali nadzor predhodno Mirna po protokolu proizvajalca. Kvantitativna realnem času verižno reakcijo s polimerazo (PCR) smo izvedli s pomočjo TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit in Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, CA), v skladu s protokolom proizvajalca. Pokrovček sprememba ravni miR-107 microRNA je bila izračunana in normalizirana na HSA-MIR-423 nadzor obremenitve.

7. Živali

BALB /c miši, stari so bili 3-4 tednov, ki tehtajo 18-22 g, kupljene od SLAC podjetja laboratorijskih živalih (SCXK-2007-004, Šanghaj, Kitajska) in nameščene pet na kletko v poseben patogen brez (SPF) okolje. Živali so dovoljene na aklimatizirati na stanovanjskih objektih za 7 dni pred začetkom poskusov. Postopki za ravnanje živalih so bile izvedene v skladu z zakonodajo P. R. Kitajske na uporabo in vzdrževanje laboratorijskih živali in odobril etični odbor Eksperimentalna živali Zhejiang University (Zhejiang, Kitajska).

8. Ksenogenskega Analiza in zdravljenje

Na kratko, skupine s šestimi BALB /c miši subkutano injicirali 1 * 10 <sup>6 MKN45 /Lin28, MKN45 /Vector, ali MKN45 celice v desni bok. Volumen tumorja je bila izračunana po formuli: V = 1/2 * A
* b
2, pri čemer je A
in b
sta najdaljši in najkrajši premer mase tumorja (v milimetrih) oz. Ko je dosegel tumorji približno 80 mm 3, miši so zdravili z injekcijo ADM (50 mg /kg) in OXA (5uM /kg) vsak teden za 2 tedna. Kvantitativne spremembe v teži in tumorskega volumna telesa so bile izmerjene na vsake tri dni, ki jih posamezne osebe z uporabo ravnovesje in Vernier čeljusti. Ni anestetiki so bile uporabljene v poskusih miši.</sup>

9. Statistična analiza

Vse poskuse smo izvedli trikrat z vzorci trojnih. Analiza variance in t-test smo uporabili za primerjavo vrednosti testnih in kontrolnih vzorcev. P-vrednost manjša od 0,05 štela za statistično značilne. Statistica 6.1 programska oprema je bila uporabljena za vse statistične analize. Pomen je ocenil t-test študentov.

Rezultati

1. In vitro testiranju sprememb občutljivosti kemoterapija v želodcu rakavih celic stabilno izražajo Lin28

Dve sevi želodčnih rakavih celic z negativnim Lin28 izražanja (MKN45 in MKN28) so bili izbrani in kultivirani. Identificirali smo želodčne rakave celice s stabilno Lin28 izražanja iz odpornih transfekciji klonov (MKN45 /Lin28 /C2 in MKN28 /Lin28 /C3) z metodo Western blot in q-PCR (slika 1).

izbrano MKN45 /Lin28C2, MKN45 /Vector, MKN45, MKN28 /Lin28C3, MKN28 /Vector in MKN28 celice smo testirali na občutljivost kemoterapijo drog. Izbrali smo naslednje štiri pogosto uporabljene klinične droge kemoterapijo za zdravljenje raka želodca: OXA, PTX, ADM, in 5-FU. Zdravljenje z oksa, PTX in ADM trajala 48 ur, medtem ko zdravljenje 5-Fu trajala 72 ur. Po Lin28 transfekciji imel MKN45 in MKN28 celice zmanjšano občutljivost za OXA, PTX, ADM, in 5-Fu, ki je bil najbolj izrazit v OXA in PTX. IC50 vrednosti so bile več kot dvakrat toliko kontrolni skupini (slika 1).

Na podlagi MTT testu smo uporabili pretočna citometrija za odkrivanje razlik v apoptoze med Lin28 pozitivnih in Lin28-negativnih celic po kemoterapiji PTX izpostavljenosti. MKN45 /Lin28, MKN45 /Vector in celic skupine MKN45 prejel 0 mikrometrov in 0,1 uM zdravljenje PTX za 24 ur, in dvojno obarvanje je bila izvedena za odkrivanje apoptozo celic. Apoptoze Stopnja transfektiranih Lin28 celic je bila nižja od tiste iz netransfektiranih celic (p < 0,05). Poleg tega zahodni blots beljakovin zbrani iz celic, zdravljenih z 0,1 uM PTX pokazala, da je apoptoza zmanjšan v MKN45 /Lin28 celic, kot je prikazano z zmanjšanjem v aktivacijo kaspaza 9 in kaspaze 3 (slika 2).

prehodno transfekcija siRNA-Lin28 bi smela ovirati ravni Lin28 izražanja v MKN45 /Lin28 in MKN28 /Lin28 celic 48 ur po prenosu v skladu z eksperimentalnimi smernicami proizvajalca reagenta. je bila odkrita Lin28 protein izraz, in s tem povezana občutljivost zdravilo bil testiran. Lin28 RNA izraz v želodčnih rakavih celic, je bila odkrita s q-PCR, medtem ko je izraz beljakovina zaznal western blot (slika 3).

Q-PCR je pokazala, da Lin28 mRNA izraz v MKN45 /Lin28 /SI-Lin28 ( 48 h) in MKN45 /Lin28 /si-Lin28 (72 h) celice je bila precej nižja kot v /Lin28 /si-kontrolnih celicah MKN45 (p < 0,01). Ta transfekciji učinek je bil preverjen tudi MKN28 /Lin28 celic. Western blot je pokazala, da Lin28 si-RNA močno zavrl Lin28 beljakovin izraza v MKN45 /Lin28 in MKN28 /Lin28 celic.

MTT test smo izvedli na štirih tipov celic (MKN45 /Lin28 /si-control, MKN45 /Lin28 /si-Lin28, MKN28 /Lin28 /si-control, in MKN28 /Lin28 /si-Lin28 celice), ki so transfekciji s Lin28 siRNA za 48 ur, da ocenijo občutljivost kemoterapije. Smo se odločili za uporabo drog kemoterapijo, ki so imeli najbolj izrazita učinke na predhodno testiranje: OXA, PTX in družbe ADM. Izbrali smo gradient koncentracije od 5-6 po predhodnih rezultatih predhodnih poskusov. Poseganje siRNA zmanjšala izražanje Lin28 in Lin28 pozitivni celične linije imeli povečano občutljivost na citostatikov (slika 3).

Naslednja zaznali občutljivost celic na različnih zdravil s kemoterapijo po določitvi v skladu s predpisi o Lin28 . Celice so bile razdeljene v 4 skupine, MKN45 /Lin28 /si nadzora, MKN45 /Lin28 /si-Lin28, MKN28 /Lin28 /si nadzora in MKN28 /Lin28 /si-Lin28, in so bili testirani s kemoterapijo drog OXA in PTX oziroma . kemoterapijo koncentracija drog (OXA 3,2 mg /ml in PTX 1 um), so bili izbrani v skladu z rezultati predhodnih poskusov. Število apoptotske MKN45 /Lin28 in MKN28 /Lin28 celic je manjša od MKN45 /Lin28 /SI-Lin28 in MKN28 /Lin28 /si-Lin28 celic (p < 0,05). Ta rezultat kaže, da lahko dol-regulacija Lin28 izražanja poveča apoptozo celic (slika 3).

2. Molekularne mehanizme, s katerimi

smo zaznali drogo povezanih z odpornostjo na ravni genov z q-PCR v MKN45 /Lin28 in MKN45 /vektor cells.P-gp, in C-myc RNA bili Lin28 spremembe v občutljivosti kemoterapije izrazito povečala in so se znižale ciklin D1 ravni RNA, medtem ko drugi Bcl-2, CDK6, NF-kB, TOP II ni pokazala pomembne razlike med MKN45 /Lin28 in MKN45 /vektor cells.Also te povezane odpornosti zdravilo gena izrazi so jih preiskujejo western blot v MKN45 /Lin28 in MKN45 /Vector celic, ki so pokazale dosleden trend, da P-gp in C-myc ekspresija proteina večje, medtem ko ciklin D1 zmanjšala. Vendar Bcl-2 izraz zmanjšala, NF-kB izraz ni spremenila, in izraz ciklin D1 in proteinske kinaze CDK6 je zmanjšala (slika 4).

Po Lin28 izraz inhibira transfekciji z Lin28 siRNA, so ponovno ocenijo RNA P-gp, C-myc in ciklin D1. Po znižanju ravni RNA v Lin28, so P-gp in C-myc občutno navzdol urejeno, medtem ko je raven ciklin D1 znatno povečal. Odkrivanje P-gp, C-myc in ciklin D1 izražanja, ki ga zahodni blot je pokazala, da je bila po inhibicije Lin28 izražanja, P-gp in C-myc beljakovin izražanja občutno navzdol urejeno, medtem ko je izraz ciklin D1 bistveno molekul ( Slika 4).

3. MIR-107 je cilj microRNA od Lin28

Med testiranjem Lin28 RNA in ravni miR-107 v želodcu raka celičnih linijah, smo ugotovili medsebojno zaviranje Lin28 in miR-107 v celičnih linijah MKN45 in AGS. Poleg tega miR-107 je navzdol urejeno v MKN45 /Lin28 in MKN28 /Lin28 celic. Rasklapanje ekspresije Lin28 obrnil to inhibicijo. V naknadni poskus, Lin28-pozitivnih celic, MKN45 /Lin28 in MKN28 /Lin28, so transfekciji s pre-MIR-107 in so bili nato besedilu MKN45 /Lin28 /pre-miR-107 in MKN28 /Lin28 /pre- miR-107 celic. Transficirane pre-miR-kontrolnih celicah, so bili imenovani MKN45 /Lin28 /pre-MIR-Control in MKN28 /Lin28 /pre-MIR-Control. Anti-miR-107 ali nadzora Transfekcije v Lin28-negativnih celic, MKN45 /Vector, prinesla MKN45 /Vektor /anti-MIR-107 in MKN45 /Vektor /anti-MIR-Control celic, oz. Oseminštirideset ur po transfekciji je RNA zbrali in izpostavili q-PCR za odkrivanje razlik v miR-107 izražanja v MKN45 /Lin28, MKN28 /Lin28, MKN45 /Vector in MKN28 /Vector celic. Ocenjen je bil tudi učinek rasklapanje za Lin28 izražanja, ki ga Lin28 siRNA. Po transfekciji s Lin28, miR-107 izraz je precej navzdol urejeno, medtem ko rasklapanje za Lin28 izražanja, izraz miR-107 poveča. Oseminštirideset ur po transfekciji vnaprejšnjega miR-107, so bile vrednosti Lin28 RNA znatno zmanjšala, in 96 ur po transfekciji je Lin28 proteinski izraz vedno nižja od kontrolne skupine non-transfektirana. Ta ugotovitev kaže, da lahko miR-107 uravnavajo izražanje Lin28 (slika 5).

4. MIR-107 sodeluje pri Lin28 posredovano odpornost na kemoterapijo drog

Občutljivost kemoterapija 4 celičnih skupin, MKN45 /Lin28 /pre-miR nadzora, MKN45 /Lin28 /pre-miR-107, MKN28 /Lin28 /pre-miR-nadzor in MKN28 /Lin28 /pre-miR-107, smo testirali z uporabo metode MTT 48 ur po transfekciji s predhodno miR-107. Izbrali smo kemoterapijo zdravila, ki so imeli najbolj izrazite učinke pri predhodno testiranje, OXA, PTX in ADM, in izbrali koncentracijski gradient od 5-6 glede na predhodne rezultate iz predhodnih poskusov. Rezultati kažejo, da lahko uvedba pre-miR-107 v Lin28-pozitivnimi celicami poveča občutljivost celice za kemoterapijo. Testiranje apoptoza je pokazala, da je število apoptotskih celic MKN45 /Lin28 povečala po transfekciji s predhodno miR-107 (p 0.05). MTT testiranje MKN45 /Lin28 /anti-miR kontrolo in MKN45 /Lin28 /anti-miR-107 občutljivost kemoterapijo je pokazala, da inhibicija izražanja miR-107 v MKN45 zmanjša občutljivost za PTX (slika 5).

z zahodni s sušenjem in q-PCR, smo zaznali tudi v zvezi z uporom genov in izražanja proteina ravni drog v MKN45 /Lin28 celic, ki so bile transfektiranih s predhodnim miR-107, vključno s tistimi, C-myc, P-gp, in ciklin D1. Rezultati so pokazali, da 48 ur po transfekciji z miR-107, RNA in proteinov ekspresije C-myc in P-gp zmanjšala (P 0,01), medtem ko je izraz ciklin D1 povečali (P 0,05) (slika 5).

5. Lin28 povezana odpornost na kemoterapijo drog in vivo

Po 2 ciklusov kemoterapije, smo ugotovili, da so ksenotransplantskih tumorji MKN45 /Lin28 celic ni zmanjšala obsega in postal večji od tistih v drugih skupin (MKN45 /Vector in MKN45 ). V tako MKN45 /Lin28 in MKN45 /Vector skupin, eden od miši je umrl, tako da s kemoterapijo je bila ustavljena. Tumorji so izrezali in njihov obseg analizirati. Ugotovili smo, da so MKN45 /Lin28 ksenograftov tumorji večji od drugih tumorjev po ADM in oksa kemoterapijo (p < 0,01). (slika 6)

Diskusija

V tej študiji smo raziskovali združenje Lin28 izražanja s kemo-občutljivosti želodca rakavih celic. Ugotovili smo, da transfekciji s Lin28 zmanjšuje občutljivost želodčnega raka celičnih linij MKN45 in MKN28 do štiri vrste kemoterapevtikov reagentov (OXA, PTX, ADM, in 5-FU). Uporaba tehnologije siRNA motenj na rasklapanje Lin28 izražanja ni spremenil kemoterapijo odpornost. Prav tako smo pokazali, da lahko miR-107 navzdol urediti Lin28 izraz, medtem ko je služil tudi kot eden od možnih ciljnih microRNAs, ki ga ureja Lin28. Čezmerno Lin28 do urejene C-myc in P-gp, medtem ko dol urejene ciklin D1, bi to fenomenov povratne jih Lin28 siRNA ali transfekciji pre-pokoj-107. To je lahko kritična mehanizme, s katerimi Lin28 nižja chemosensitivity v želodčnih rakavih celic. Kolikor nam je znano, da je to prva študija, ki kaže Lin28 /miR-107 signalizacijo pot se lahko vključeni v odpornost na kemoterapijo drog raka želodca.

Kemoterapija je eden od glavnih zdravljenja pri bolnikih z rakom želodca, ampak bolj kot 50% bolnikov nadaljevalo do odpornosti kemoterapije. Možni mehanizmi za kemo-odpornost na raka želodca trenutno veljajo za vključitev trans-membrane prevoz z dne ABC prevoznikov, glutation S-transferaze, aktivnost DNA topoizomerazo, gen raka p53 mutacijo in povezanih apoptozo poti. Nedavna študija je pokazala, da ima microRNA pomembno vlogo pri kemoterapiji raka odpornosti želodca drog [15]. V modelu odpornostjo tumorske celice, je bilo ugotovljeno, da je rak matične celice prav tako igrajo pomembno vlogo pri odpornosti na kemoterapijo. gen C-myc je eden izmed površinskih markerjev rak matičnih celic, ampak tudi onkogen povezanega z nedoločeno orožja, neskončno imortalizacije in pospeševanje celične delitve [16]. Neka študija je poročala, da ima 40% bolnikov z rakom želodca C-myc gen čezmerno in da je višji C-myc izraz povezan s slabšo prognozo [16-18]. Študije so poročali tudi povezavo med genom in apoptoze C-myc. C-myc ekspresija lahko povzroči znižanje tumorskih celic apoptoze. Apoptoze Stopnja celic in občutljivost na induciranimi faktorji so odvisni od koncentracije proteina C-myc [19]. Poleg tega je C-myc prekomerno povezana s sevanjem in odpornost kemoterapijo. Poleg tega lahko C-myc reguliran P-gp, kar lahko povzroči effluxing kemoterapevtskih reagentov privedlo do upora kemoterapije [20]. Celični ciklus prijetje lahko vplivajo na odziv rakavih celic na nekaterih zdravil s kemoterapijo (kot PTX), ki igra pomembno vlogo v G2 /S faza zmanjša občutljivost drog. protein celičnega ciklusa ciklin D ima tri podtipe, D1, D2 in D3 in je celičnega ciklusa iniciacija faktor a. Njena zatiranje s preoblikovanjem rastni faktor -β1 (TGF-β1) preprečuje celice vstop celični ciklus, tako da so še vedno v stanju mirovanja, [21]. Ciklin D posebej združuje z CDK4 /6 fosforilacije ter onesposobijo retinoblastomnega beljakovin (PRB), s čimer prispeva k G1 /S prehoda in začetek sinteze DNA [21]. V trenutni študiji smo ugotovili, Lin28 niso bile pomembne z Bcl-2, NF-kB in TOPO II v želodčnih rakavih celic. Partnerstvo med Lin28 in microRNAs je bil uveljavljen, kot naj-7, miR-200C, miR-143 [4,22]. Lin28 overexpression navzdol ureja microRNA, medtem ko lahko microRNA tudi negativno vpliva na izražanje Lin28. Lin28 skupaj z TUT4 predstavlja negativni regulator, ki vpliva na zorenje in homeostazo microRNAs [4,22]. Z ureditvijo nižji stopnji gene, microRNA je vključena v celično diferenciacijo in proliferacijo, celičnega metabolizma, stresnih odzivov in nastanek krvnih žil. Cheng et al [23] ugotovljeno, da je po inhibiranje miR-107, je bila povišana rast HeLa raka materničnega vratu in rakavih celic A549 pljuč. Marijn et al [24] ugotovilo, da je izraz miR-107 v ovarijskih rakavih celic zdravila odpornih navzdol reguliran. Naša raziskava je pokazala, da lahko Lin28 omejujejo tudi dozorevanje miR-107, in uvedba miR-107 povečujejo želodčni rak celic kemoterapijo občutljivost na OXA, PTX in ADM. Po transfekciji anti-pokoj-107, zmanjšal ta občutljivost. Pre-miR-107 povzročila zmanjšanje izražanja Lin28, kar kaže, da se Lin28 /miR-107 pot lahko vpletena v chemosensitivity spremembah raka želodca.

Na kratko smo pokazali, da lahko Lin28 inhibicijo izraz miR-107, s čimer se uravnava C-myc, P-gp in down-regulacijo ciklin D1, nato povzroči kemo-odpornost želodčne rakavih celic. Lin28 /miR-107 pot se lahko služil kot eden izmed mnogih poti signalizacije, ki je povezana z rakom želodca kemo odpornosti. Naša raziskava lahko zagotovijo nova spoznanja v želodcu mehanizma raka chemoresistance. Lin28 /miR-107 je lahko nov potencialni terapevtski cilji za rakom želodca kemoterapijo odporna.

Podpora Informacije
S1 tabelo. Minimalni podatki za vse te številke
doi:. 10,1371 /journal.pone.0143716.s001
(XLSX)

• Plos ONE: Endoskopska Resekcija primerjavi z želodca za zdravljenje zgodnjih Rak želodca: sistematični pregled in metaanaliza
• Plos ONE: Pomen Serum Pepsinogens kot biološki marker želodca Rak in atrofični gastritis Screening: sistematični pregled in metaanaliza