PLoS ONE: Overexpressie van Lin28 Verlaagt de chemosensitivity van Cellen maagkanker te oxaliplatine, paclitaxel, doxorubicine, en fluorouracil in deel via microRNA-107

Abstract

Hoger Lin28 expressie wordt geassocieerd met een slechtere pathologische tumor reacties in lokaal gevorderde maagkanker patiënten die neoadjuvante chemotherapie ondergaan. De kenmerken van Lin28 en het werkingsmechanisme van resistentie tegen chemotherapie is nog onduidelijk. In deze studie hebben we vastgesteld dat transfectie van Lin28 in maagkanker cellen (MKN45 en MKN28) verhoogden hun weerstand tegen de chemo-geneesmiddelen oxaliplatin (OXA), paclitaxel (PTX), doxorubicine (ADM), en fluorouracil (5-FU) vergeleken met maagkanker cellen getransfecteerd met een controlevector. Wanneer knockdown Lin28 Lin28 expressie door kleine interfererende RNA (siRNA) in vitro werd onderzocht, bleek dat de resistentie tegen chemo-drugs gereduceerd. Verder vonden we dat Lin28 up-reguleert C-myc en P-gp en down-reguleert CYLIN D1. Uiteindelijk vonden we dat miR-107 is een doel van microRNA Lin28 en deelneemt in het mechanisme van resistentie tegen chemotherapie. Onze resultaten suggereren dat de Lin28 /miR-107 route één van vele signaalroutes geregeld Lin28 en gekoppeld aan maagkanker chemo-resistentie kon

Citation:. Teng R, Y Hu, Zhou J, Seifer B, Chen Y, Shen J, et al. (2015) Overexpressie van Lin28 Verlaagt de chemosensitivity van Gastric kankercellen oxaliplatine, paclitaxel, doxorubicine, en fluorouracil in deel via microRNA-107. PLoS ONE 10 (12): e0143716. doi: 10.1371 /journal.pone.0143716

Editor: Natasha Kyprianou, Universiteit van Kentucky College of Medicine, VERENIGDE STATEN

Ontvangen: 23 juni 2015; Aanvaard: 8 november 2015; Gepubliceerd: 4 december 2015

Copyright: © 2015 Teng et al. Dit is een open toegang Artikel gedistribueerd onder de voorwaarden van de Creative Commons Attribution License, die onbeperkt gebruik, distributie en reproductie maakt in elk medium, op voorwaarde dat de oorspronkelijke auteur en de bron worden gecrediteerd

Data Beschikbaarheid: Alle relevante gegevens zijn binnen het papier en de Ondersteunende informatie bestanden

Funding:. ondersteuning verleend door de provincie Zhejiang Natural Science Foundation of China: LQ13H160014 [http://www.zjnsf.gov.cn/b/home.aspx] .

Competing belangen. De auteurs hebben verklaard dat er geen tegenstrijdige belangen bestaan ​​

Introductie

Maagkanker is een veel voorkomende klinische spijsvertering kwaadaardige tumor met een sterftecijfer dat derde gelederen ter wereld [1]. Ons land is een gebied dat gevoelig is voor maagkanker. De laatste jaren heeft neoadjuvante chemotherapie toegediend aan patiënten met maagkanker overleving verlengen. Toch is de 5-jaars overleving van patiënten met gevorderde maagkanker is nog steeds lager dan 30% [2]. Chemotherapie weerstand is de belangrijkste oorzaak van het falen van maagkanker en andere tumorbehandelingen. Daarom is het mechanisme van resistentie tegen chemotherapie van maagkanker is momenteel een groot probleem bij maagkanker studies.

Lin28 is een sterk geconserveerd RNA-bindend eiwit dat werd aangetoond dat het induceren van pluripotente stamcellen en ter handhaving steel cel-achtige cellen in kanker. Recente studies hebben gemeld dat afwijkende activering van Lin28 goed correleert met de prognose van verschillende kankers, waaronder borst-, eierstok-, long-, colon- en leverkanker [3-6]. Onze eerdere studie toonde aan dat Lin28 expressie ook wordt geassocieerd met slechte overleving bij maagkanker kankerpatiënten [7] en een andere studie toonde aan dat de expressie van Lin28 is gecorreleerd met paclitaxel resistentie in menselijke borst kanker cellen [8]. Bovendien is Lin28 expressie geassocieerd met pathologische tumor respons bij lokaal gevorderde maagkanker patiënten die neo-adjuvante chemotherapie. Echter, het moleculaire mechanisme achter deze bevindingen onduidelijk [9].

Lin28 tumorigenese bevordert door het onderdrukken tumor suppressor miRNAs zoals de let-7 familie, die wordt geassocieerd met resistentie [8]. Aangezien een doel van miRNA Lin28, miR-107 wordt zelden genoemd als geneesmiddelresistentie factor bij maagkanker. MiR-107 expressie is verminderd bij diverse kwaadaardigheden, zoals colonkanker, hoofd- en nekkanker, pancreaskanker en maagkanker [10-13]. MiR-107 regelt downstream genen die betrokken zijn bij celdifferentiatie en proliferatie, metabolisme, stressreacties en de vorming van bloedvaten [10-14]. In deze studie onderzochten we de Lin28 /miR-107-route en de rol ervan bij maagkanker cel resistentie tegen chemotherapie. We kunnen een nieuw potentieel doelwit hebben geïdentificeerd voor chemotherapie-resistente maagkanker.

Materialen en methoden

1. Celcultuur en plasmide transfectie

De menselijke maagkanker cellijnen MKN-28 en MKN-45 werden verkregen als een geschenk van Professor Sung Hoon Noh (Yonsei University College of Medicine, Seoul, Korea). De cellen werden gekweekt in RPMI 1640 medium (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) aangevuld met 10% foetaal runderserum (MP Biomedicals, Costa Mesa, CA, USA) in een bevochtigde atmosfeer die 5% CO2 bij 37 ° C. Oxaliplatine, paclitaxel, doxorubicine, en fluorouracil werden gekocht bij Sigma (St. Louis, MO). Het plasmide pcDNA3.1-Lin28 werd getransfecteerd met Xtreme HP GENE DNA transfectiereagens (Roche Applied Science, Mannheim, Duitsland) volgens het protocol van de fabrikant. Stabiel-Lin28 tot expressie klonen werden verder geselecteerd en gekweekt met de juiste-neomycine dat RPMI 1640-medium.

2. Real-time kwantitatieve PCR

real-time Q-PCR analyses werden uitgevoerd met de ABI Prism 7500 sequentie-detectiesysteem (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). In het kort werd een 20 pl reactiemengsel dat 2 pl cDNA template en 1 pi elk van sense en anti-sense primers (Promega Gotaq q-PCR® Master Mix systeem, Madison, WI, USA) als volgt geamplificeerd: denaturatie bij 95 ° C gedurende 10 minuten en 40 cycli van 95 ° C gedurende 30 s, 60 ° C gedurende 30 s en 72 ° C gedurende 40 s. Real-time Q-PCR-reacties werden uitgevoerd in triplo voor elk monster en de gemiddelde waarde werd gebruikt om mRNA-niveaus te berekenen. Kwantitatieve analyse werd uitgevoerd met behulp van de vergelijkende werkwijze CT. De Lin28 en miR-107 kopie-aantallen in tumorweefsels werden genormaliseerd aan de mRNA kopieaantallen van het huishoud-gen glyceraldehyde 3-fosfaat dehydrogenase (GAPDH) om de waarde 2 ^{-Δ CT verkrijgen. De primersequenties zijn als volgt in Tabel 1}

3. Cel resistentie Assay

cellevensvatbaarheid gemeten onder toepassing van een MTT [3- (4,5-dimethylthiazool-2-yl) -2,5-difenyltetrazoliumbromide] assay (Amresco, Solon, OH, USA) volgens het protocol van de fabrikant. Cellen werden gezaaid in 96-well platen met een dichtheid van 5 * 10 ^{3 cellen per putje. Na behandeling werden de cellen geïncubeerd met 5 mg /ml MTT gedurende 4 uur. Vervolgens werd het medium verwijderd en 150 ml gesteriliseerde DMSO-oplossing werd toegevoegd, gevolgd door incubatie bij 37 ° C gedurende 4 uur. De OD-waarde werd verkregen bij de golflengten 570 nm en 630 nm. De OD-waarde (570 nm tot 630 nm) kan indirect weerspiegelen het aantal cellen en de activiteit volgens de volgende formule: overlevingspercentage = gedoseerde groep OD570-630 /geen dosisgroep OD570-630. Een cel survival /drug concentratie curve werd vervolgens gegenereerd.}

4. Western blotanalyse

De cellysaten werden gescheiden door elektroforese op een 4-15% natriumdodecylsulfaat-polyacrylamide gradiënt minigel (SDSPAGE) (Bio-Rad, Hercules, CA) en elektroforetisch overgebracht naar een nitrocellulosemembraan (Amersham Pharmacia , Piscataway, NJ). Western blots werden onderzocht met antilichamen tegen Lin28, GAPDH (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), caspases en gesplitste caspasen, Cycline D1, NF-kB (Cell Signaling, Beverly, MA), CDK6, C-myc (Abcam Trading ( Shanghai) Company, Shanghai, China), P-gp en Bcl-2 (Huan Biotechnologie, Beijing, China). De eiwitbanden werden gedetecteerd door versterkte chemiluminescentie (Amersham Pharmacia, Piscataway, NJ).

5. Flowcytometrische Assay

Cells (2 * 10 ^{5 per well) werden uitgeplaat in een zes-well plaat en behandeld met paclitaxel. Na 72 uur werden de cellen gefixeerd in 70% ethanol en gekleurd met propidium jodide (PI). Het DNA-gehalte werd geanalyseerd met een Epics Profile II stroomcytometer (Beckman Coulter, Fullerton, CA) met Multicycle software (Phoenix Flow Systems, San Diego, CA). Alle experimenten werden ten minste tweemaal herhaald. PI werd ook gebruikt in combinatie met Annexine V (BD Biosciences, San Jose, CA) om te bepalen of cellen levensvatbaar, apoptotische of necrotische.}

6. MiRNA Transfectie en detectie

De cellen werden uitgeplaat in zes putjes uitgeplaat en met 50 nM pre-miR-107 gekocht bij Applied Biosystems (Carlsbad, CA) of controle pre-miRNA volgens het protocol van de fabrikant. Kwantitatieve real-time polymerasekettingreactie (PCR) werd uitgevoerd met de TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Kit en Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Carlsbad, CA) volgens de protocollen van de fabrikant. De vouw verandering in miR-107 microRNA niveaus werd berekend en genormaliseerd tot een HSA-mir-423 laden controle.

7. Dieren

BALB /c-muizen in de leeftijd 3-4 weken met een gewicht van 18-22 g van SLAC proefdier bedrijf (SCXK-2007-004, Shanghai, China) werden gekocht en ondergebracht vijf per kooi in een specifiek pathogeen-vrij (SPF) omgeving. De dieren liet men acclimatiseren aan de huisvesting van 7 dagen voor de experimenten begonnen. procedures Animal handling werden uitgevoerd in overeenstemming met de P. R. China wetgeving over het gebruik en de verzorging van proefdieren en goedgekeurd door het proefdier Ethisch Comité van Zhejiang University (Zhejiang, China).

8. Xenograft analyses en behandeling

In het kort, groepen van zes BALB /c muizen werden subcutaan geïnjecteerd met 1 * 10 ^{6 MKN45 /Lin28, MKN45 /vector of MKN45 cellen in de rechter flank. De tumor volume werd berekend met de formule: V = 1/2 * een pagina Home b
2, waarbij een Kopen en b
de langste en kortste diameter van de tumormassa (in mm), respectievelijk. Wanneer de tumoren binnen ongeveer 80 mm 3, werden de muizen behandeld met injectie van ADM (50 mg /kg) en oxa (5um /kg) per week gedurende 2 weken. Kwantitatieve veranderingen in lichaamsgewicht en tumorvolume werden elke drie dagen gemeten door één persoon met een balans en Vernier calipers. Geen verdoving werden bij muizen experimenten.}

9. Statistische analyse

Alle experimenten werden drie keer uitgevoerd met monsters in drievoud. Analyse van variantie en t-test van Student werd gebruikt om de waarden van de test- en controlemonsters vergelijken. Een p-waarde van minder dan 0,05 werd geacht statistisch significant te zijn. Statistica 6.1 software werd gebruikt voor statistische analyse. Het belang werd geëvalueerd door de student t-test.

Resultaten

1. In vitro testen van de chemotherapie gevoeligheid veranderingen in maagkanker cellen stabiel tot expressie Lin28

Twee stammen van maagkanker cellen met negatieve Lin28 expressie (MKN45 en MKN28) werden geselecteerd en gekweekt. We identificeerden maagkanker cellen met stabiele expressie van Lin28 resistente getransfecteerde klonen (MKN45 /Lin28 /C2 en MKN28 /Lin28 /C3) met Western blotting en Q-PCR (figuur 1).

De gewenste MKN45 /Lin28C2, MKN45 /Vector, MKN45, MKN28 /Lin28C3, MKN28 /Vector en MKN28 cellen werden getest op chemotherapie drug gevoeligheid. Wij selecteerden de volgende vier gebruikelijke klinische chemotherapie geneesmiddelen voor de behandeling van maagkanker: oxa PTX, ADM en 5-Fu. Behandeling met OXA, PTX en ADM duurde 48 uur, terwijl 5-Fu behandeling duurde 72 uur. Na Lin28 transfectie MKN45 en MKN28 cellen hadden een verminderde gevoeligheid voor oxa PTX, ADM en 5-Fu die was het meest uitgesproken voor oxa en PTX. De IC50 waarden waren meer dan tweemaal die van de controlegroep (figuur 1).

Op basis van de MTT assay, we gebruikten flowcytometrie om de verschillen tussen apoptose-Lin28 Lin28 positieve en negatieve cellen te detecteren na chemotherapie PTX blootstelling. De MKN45 /Lin28, MKN45 /Vector en MKN45 celgroepen ontvangen 0 pM en 0,1 pM PTX behandeling van 24 uur, en dubbele kleuring werd uitgevoerd om apoptose te detecteren. De apoptotische percentage getransfecteerde cellen Lin28 lager was dan die van niet-getransfecteerde cellen (p < 0,05). Bovendien, Western blots van eiwitten verzameld uit cellen behandeld met 0,1 uM PTX aangetoond dat apoptose werd verlaagd MKN45 /Lin28 cellen zoals aangetoond door afname van de activering van caspase 9 en caspase 3 (figuur 2).

Transient transfectie van siRNA-Lin28 moet Lin28 expressie te remmen in MKN45 /Lin28 en MKN28 /Lin28 cellen 48 uur na de overdracht volgens de experimentele richtlijnen van de fabrikant reagens. Lin28 eiwitexpressie werd gedetecteerd en de bijbehorende drug gevoeligheid werd getest. Lin28 RNA expressie in maagkanker cellen werd gedetecteerd door Q-PCR, terwijl eiwitexpressie werd gedetecteerd door Western blotting (Figuur 3).

Q-PCR toonde aan dat Lin28 mRNA expressie in MKN45 /Lin28 /si-Lin28 ( 48 h) en MKN45 /Lin28 /si-Lin28 (72 h) -cellen was veel lager dan die MKN45 /Lin28 /si-controlecellen (p < 0,01). Deze transfectie effect werd ook nagegaan in MKN28 /Lin28 cellen. Western blotting openbaarde dat Lin28 si-RNA remde Lin28 eiwitexpressie in MKN45 /Lin28 en MKN28 /Lin28 cellen.

Een MTT-assay werd uitgevoerd op de vier celtypen (MKN45 /Lin28 /si-control, MKN45 /Lin28 /si-Lin28, MKN28 /Lin28 /si-controle en MKN28 /Lin28 /si-Lin28 cellen) die waren getransfecteerd met siRNA Lin28 gedurende 48 uur op chemotherapie gevoeligheid beoordelen. Wij kozen de chemotherapie geneesmiddelen die de meest uitgesproken effecten in de pre-test had gebruikt: OXA, PTX en ADM. We selecteerden een concentratiegradiënt van 5-6 volgens de voorlopige resultaten van voorafgaande experimenten. Inmenging van siRNA verminderde de expressie van Lin28 en Lin28-positieve cellijnen had een verhoogde gevoeligheid voor chemotherapeutische geneesmiddelen (figuur 3).

We merken op dat de volgende gevoeligheid van cellen voor chemotherapie verschillende stoffen na neerwaartse regulatie van Lin28 . Cellen werden verdeeld in 4 groepen, MKN45 /Lin28 /si-control, MKN45 /Lin28 /si-Lin28, MKN28 /Lin28 /si-controle en MKN28 /Lin28 /si-Lin28 en respectievelijk getest met de chemotherapeutica OXA en PTX . De chemotherapie geneesmiddelconcentraties (oxa 3,2 ug /ml PTX en 1 uM) werden geselecteerd op basis van de resultaten van voorafgaande experimenten. Het aantal apoptotische MKN45 /Lin28 en MKN28 /Lin28 cellen minder dan MKN45 /Lin28 /si-Lin28 en MKN28 /Lin28 /si-Lin28 cellen (p < 0,05). Dit resultaat geeft aan dat de down-regulatie van Lin28 expressie cel apoptose (Figuur 3) kan verhogen.

2. De moleculaire mechanismen die Lin28 veranderingen in de chemotherapie gevoeligheid

We hebben geconstateerd resistentie gerelateerde genexpressie levels door Q-PCR in MKN45 /Lin28 en MKN45 /vector cells.P-gp, en C-myc RNA-spiegels waren aanzienlijk toegenomen en Cycline D1 RNA-niveau werden verlaagd, terwijl andere Bcl-2, CDK6, NF-kB, TOP II geen significant verschil tussen MKN45 /Lin28 en MKN45 /vector tonen cells.Also deze drug resistentie-gerelateerde gen uitingen werden onderzocht door western blot in MKN45 /Lin28 en MKN45 /Vector-cellen, die consistente trend die P-gp en C-myc eiwitexpressie toegenomen, terwijl Cycline D1 afgenomen liet zien. Echter, Bcl-2 expressie daalde, heeft NF-kB expressie niet veranderen, en expressie van cycline D1 en eiwitkinase CDK6 gereduceerd (figuur 4).

Na Lin28 expressie werd geremd door transfectie met siRNA Lin28, de RNA-niveaus van P-gp, C-myc en Cycline D1 werden opnieuw beoordeeld. Na verlaging van het RNA-niveau van Lin28, P-gp en C-myc waren significant neerwaarts gereguleerd, terwijl Cycline D1 niveaus aanzienlijk toegenomen. Detectie van P-gp, C-myc en Cycline D1 expressie door western blotting toonde aan dat na remming van Lin28 meningsuiting, P-gp en C-myc eiwit expressie was significant neerwaarts gereguleerd, terwijl de expressie van Cycline D1 aanzienlijk werd opgereguleerd ( figuur 4).

3. MiR-107 is het doelwit van microRNA Lin28

Tijdens het testen van de Lin28 RNA en miR-107 levels in maagkanker cellijnen, vonden we wederzijdse remming van Lin28 en miR-107 in de MKN45 en AGS cellijnen. Bovendien, miR-107 werd down-gereguleerd in MKN45 /Lin28 en MKN28 /Lin28 cellen. Knockdown van de expressie van Lin28 omgekeerd deze remming. In een follow-up experiment, Lin28-positieve cellen, MKN45 /Lin28 en MKN28 /Lin28, werden met pre-mir-107 en werden vervolgens als MKN45 /Lin28 /pre-miR-107 en MKN28 /Lin28 /pre- genoemd miR-107 cellen. Getransfecteerde pre-miR-controle cellen werden genoemd MKN45 /Lin28 /pre-miR-Control en MKN28 /Lin28 /pre-miR-Control. Anti-miR-107 of controle transfecties in Lin28-negatieve cellen, MKN45 /Vector leverde MKN45 /vector /anti-miR-107 en MKN45 /vector /anti-miR-controle cellen. Achtenveertig uur na transfectie, werd RNA verzameld en onderworpen aan Q-PCR om de verschillen in miR-107 expressie in MKN45 /Lin28, MKN28 /Lin28, MKN45 /vector en MKN28 /Vector cellen detecteren. Het effect van knock-down van Lin28 expressie door Lin28 siRNA werd ook beoordeeld. Na transfectie met Lin28, miR-107 expressie was significant neerwaarts gereguleerd, terwijl na de knock-down van Lin28 meningsuiting, de expressie van miR-107 toegenomen. Achtenveertig uur na transfectie van pre-miR-107, Lin28 RNA niveaus waren significant verlaagd en 96 uur na transfectie, nog steeds lager dan die van de niet-getransfecteerde controlegroep Lin28 eiwitexpressie. Deze bevinding geeft aan dat miR-107 de expressie van Lin28 (figuur 5) kan reguleren.

4. MiR-107 neemt deel aan Lin28-gemedieerde resistentie tegen chemo-drug

De chemotherapie gevoeligheid van 4 celgroepen, MKN45 /Lin28 /pre-miR-control, MKN45 /Lin28 /pre-miR-107, MKN28 /Lin28 /pre-miR-controle en MKN28 /Lin28 /pre-miR-107 werd getest met de MTT methode 48 uur na transfectie met pre-miR-107. We kozen voor chemotherapie geneesmiddelen die het meest uitgesproken effecten tijdens de pre-testen, OXA, PTX en ADM had, en gekozen voor een concentratie gradiënt van 5-6 volgens de voorlopige resultaten van voorlopige experimenten. De resultaten suggereren dat de introductie van pre-miR-107 in Lin28-positieve cellen cel gevoeligheid voor chemotherapie verhogen. Apoptose testen is gebleken dat het aantal MKN45 /Lin28 apoptotische cellen verhoogd na transfectie met pre-miR-107 (p < 0,05). MTT testen van MKN45 /Lin28 /anti-miR-controle en MKN45 /Lin28 /anti-miR-107 chemotherapie gevoeligheid liet zien dat remming van de expressie van miR-107 in MKN45 verminderde de gevoeligheid voor PTX (figuur 5).

op western blotting en Q-PCR gedetecteerd we de drug-resistentie gerelateerde gen- en eiwitexpressie niveaus in MKN45 /Lin28 cellen die getransfecteerd waren met pre-miR-107, inclusief die van C-myc, P-gp en Cycline D1. De resultaten toonden aan dat 48 uren na transfectie met miR-107, het RNA en eiwit expressie van c-myc en P-gp verminderde (p < 0,01), terwijl de expressie van Cycline D1 verhoogd (p < 0,05) (Figuur 5).

5. Lin28 geassocieerd chemo-resistentie tegen geneesmiddelen in vivo

Na 2 cycli van chemotherapie, vonden we dat de xenograft tumoren van MKN45 /Lin28 cellen niet te beperken in volume en werd groter dan die van andere groepen (MKN45 /Vector en MKN45 ). In beide MKN45 /Lin28 en MKN45 /vector groepen, een van de muizen stierven, zodat chemotherapie werd gestopt. De tumoren werden uitgesneden en de volumes geanalyseerd. We vonden dat de MKN45 /Lin28 xenograft tumoren waren groter dan de andere tumoren na ADM en OXA chemotherapie (p < 0,01). (Fig 6)

Discussie

In de huidige studie hebben we onderzocht de associatie van Lin28 expressie met chemo-sensitivity bij maagkanker cellen. We vonden dat transfectie met Lin28 vermindert de gevoeligheid van de maag kankercellijnen MKN45 en MKN28 vier soorten chemotherapeutische reagentia (OXA, PTX, ADM en 5-FU). Met behulp van siRNA interferentie technologie om Lin28 expressie knockdown kon chemo-resistentie te keren. We toonden ook aan dat miR-107 kon neerwaarts reguleren Lin28 expressie, maar wordt ook als een van de potentieel doelwit microRNAs die wordt geregeld door Lin28. Overexpressie van Lin28 up-gereguleerd C-myc en P-gp, terwijl down-gereguleerd cycline D1, kan dit fenomenen te keren door Lin28 siRNA of transfectie pre-miR-107. Dit zou kunnen zijn kritische mechanismen die Lin28 afgenomen chemosensitivity bij maagkanker cellen. Voor zover wij weten is dit de eerste studie die aantoont Lin28 /miR-107 signaling pathway kan worden betrokken bij de chemo-resistentie bij maagkanker.

Chemotherapie is een van de belangrijkste behandeling voor maagkanker patiënten, maar dan 50% van de patiënten zal ontwikkelen resistentie tegen chemotherapie. De mogelijke mechanismen voor chemo-resistentie bij maagkanker momenteel beschouwd als de trans-membraantransport van ABC transporters, glutathion S transferase, de activiteit van DNA topoisomerase, kanker p53 mutatie en apoptose-gerelateerde routes omvatten. Een recente studie bleek dat microRNA een belangrijke rol speelt bij maagkanker chemotherapie resistentie tegen geneesmiddelen [15]. In een tumorcel weerstandsmodel werd waargenomen dat kanker stamcellen ook een belangrijke rol spelen bij resistentie tegen chemotherapie. De C-myc gen is één van de oppervlaktemarkers kanker stamcellen ook een oncogen geassocieerd met onbeperkte proliferatie, oneindig immortalisatie en de bevordering van celdeling [16]. Een studie rapporteerde dat 40% van de patiënten met maag kanker C-myc gen overexpressie en dat hogere C-myc-expressie is geassocieerd met een slechtere prognose [16-18]. Studies hebben ook gerapporteerd een correlatie tussen de C-myc-gen en apoptose. C-myc expressie kan tot een verlaging tumorcelapoptose. De apoptotische snelheid en gevoeligheid geïnduceerde factoren afhankelijk C-myc-eiwitniveaus [19]. Bovendien is c-myc overexpressie geassocieerd met bestraling en chemotherapie resistentie. Voorts C-myc kan opgereguleerd P-gp, die effluxing van chemotherapeutische reagentia kunnen induceren tot chemotherapie resistentie [20]. Celcyclus kan de reactie van kankercellen bepaalde chemotherapie geneesmiddelen (zoals PTX), dat een rol speelt in G2 beïnvloeden /S-fase verlaagd geneesmiddelgevoeligheid. De celcyclus eiwit Cycline D heeft drie subtypen, D1, D2 en D3 en een celcyclus initiatie factor. De onderdrukking door het transformeren van groeifactor -β1 (TGF-β1) voorkomt dat cellen uit het invoeren van de celcyclus, zodanig dat zij in een toestand van rust [21] blijven. Cycline D specifiek combineert met CDK4 /6 fosforyleert en inactiveert retinoblastoomeiwit (pRb) en daardoor tot G1 /S overgang en de initiatie van DNA-synthese [21]. In de huidige studie, vonden we Lin28 niet relevant waren met Bcl-2, NF-kB en TOPO II bij maagkanker cellen. De samenwerking tussen Lin28 en microRNAs is goed ingeburgerd, zoals de laat-7, miR-200C, miR-143 [4,22]. Lin28 overexpressie down-reguleert microRNA, terwijl microRNA kan ook negatief van de expressie van Lin28 beïnvloeden. Lin28 samen met TUT4 vormt een negatieve regulator, die rijping en homeostase van microRNAs [4,22] beïnvloedt. Door het regelen downstream genen microRNA is betrokken bij celdifferentiatie en proliferatie, celmetabolisme, stressreacties en de vorming van bloedvaten. Cheng et al [23] vonden dat na remming van miR-107, de groei van HeLa cervicale kankercellen en A549 longkankercellen werd bevorderd. Marijn et al [24] vonden dat de expressie van miR-107 in drug-resistente eierstokkanker cellen werd down-gereguleerd. Onze studie bleek dat Lin28 ook de rijping van miR-107 kan beperken, en de introductie van miR-107 te verhogen maagkanker cel chemo-gevoeligheid voor OXA, PTX en ADM. Na transfectie van anti-miR-107, deze gevoeligheid verminderd. Pre-miR-107 veroorzaakte een afname in de expressie van Lin28, illustreert dat de Lin28 /miR-107 pathway betrokken kunnen zijn bij de chemosensitivity veranderingen van maagkanker.

Samengevat, hebben we aangetoond dat Lin28 kan remmen de expressie van miR-107, waardoor opreguleren C-myc, P-gp en downregulatie van cycline D1, vervolgens leiden chemo-weerstand van maagkanker cellen. De Lin28 /miR-107 pathway kan worden bediend als een van de vele signaalroutes die is gekoppeld aan maagkanker chemo-resistentie. Ons onderzoek kan nieuwe inzichten in de maagkanker chemoresistance mechanisme. Lin28 /miR-107 kan een nieuwe potentiële therapeutische doelen voor chemotherapie-resistente maagkanker.

Ondersteunende informatie
S1 Table. Minimale gegevens voor al deze cijfers
doi:. 10.1371 /journal.pone.0143716.s001
(XLSX)

• PLoS ONE: Endoscopische resectie vergelijking met Gastrectomie te behandelen Vroege maagkanker: een systematische review en meta-analyse
• PLoS ONE: Belang van Serum Pepsinogens als een biomarker voor maagkanker en atrofische gastritis recyclen: een systematische review en meta-analyse